鉴别生药中黄酮类成分的常用方法
天然药物化学-黄酮类鉴定
黄酮或黄酮醇类当有5 OH无 OH时 加入AlCl /HCl后带 向红位移35 55nm. 后带I 35～ 黄酮或黄酮醇类当有5-OH无3-OH时,加入AlCl3/HCl后带I向红位移35～55nm. 如仅向红位移17 20nm,则表示有6 含氧取代.当有3 17～ OH时 如仅向红位移17～20nm,则表示有6-含氧取代.当有3-或3-和5-OH时,加入 /HCl后 向红位移50 60nm. 50～ 环上有邻二酚羟基时, 样品+AlCl AlCl3/HCl后,带I向红位移50～60nm.当B环上有邻二酚羟基时,将"样品+AlCl3" 样品+AlCl /HCl"光谱比较 则后者带I 较前者向紫位移约30 40nm. 光谱比较, 30～ 和"样品+AlCl3/HCl"光谱比较,则后者带I 较前者向紫位移约30～40nm.如果仅 向紫位移约20nm, 20nm,则 环上有邻三羟基. 环上有邻二羟基时( 向紫位移约20nm,则B环上有邻三羟基.当A环上有邻二羟基时(不包括能产生氢键的 OH),也可由同法根据带II的位移情况作出鉴别,但没有充分的例子来说明A II的位移情况作出鉴别 5-OH),也可由同法根据带II的位移情况作出鉴别,但没有充分的例子来说明A环邻 位二羟基系统中向紫位移的范围. 位二羟基系统中向紫位移的范围.
黄酮
4'-甲氧基黄酮 甲氧基黄酮
3',4'-二甲氧基黄酮 二甲氧基黄酮
红移, 带II红移 红移 A环上取代基增加 环上取代基增加 无影响,或影响甚微 带I无影响 或影响甚微 无影响 (192页表 页表5-8) 页表
黄酮或黄酮醇的羟基 被甲基化或苷化
带I向紫位移 向紫位移
1. 3-OH (黄酮醇 甲基化或苷化使带 (328—357nm) 与黄酮的带 的波 黄酮醇)甲基化或苷化使带 与黄酮的带I 黄酮醇 甲基化或苷化使带I 长范围重叠(且光谱曲线的形状也相似 且光谱曲线的形状也相似) 长范围重叠 且光谱曲线的形状也相似 2. 5-OH甲基化使带 和带 都向紫位移 甲基化使带I和带 甲基化使带 和带II 都向紫位移5~15nm,4'-OH 甲基化或苷 , 使带I 向紫位移3~10nm 化,使带 向紫位移 3. 其他位置上的羟基取代对甲醇中的紫外光谱几乎没有影响 黄酮或黄酮醇的酚羟基被乙酰化后,原来酚羟基对紫外吸收光谱的影 黄酮或黄酮醇的酚羟基被乙酰化后, 响几乎消失.(槲皮素五乙醚化物的 光谱与黄酮很相似). 响几乎消失 槲皮素五乙醚化物的UV光谱与黄酮很相似 . 槲皮素五乙醚化物的 光谱与黄酮很相似
黄酮类化合物的检识与结构鉴定
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2019年6月16
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（三） C环质子
1. 黄酮类
O
3 H
O
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H-3, 6.3
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2. 异黄酮类
O 2H
3
O
H-2位于羰基位，同时受羰基和苯环的负屏 蔽作用，且通过碳与氧相连，故较一般芳香 质子低场，δ7.6-7.8。 若用DMSO-d6作溶剂，则δ8.5-8.7。
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3. 二氢黄酮和二氢黄酮醇
1) 二氢黄酮
O
H 2
3 H
O
H-2, dd, δ5.2,
Jtrans = 11Hz （反偶）, Jcis = 5Hz（顺偶）
两个H-3, 分别为dd峰，中心位于δ2.8 ，J = 17Hz（偕偶），5Hz（顺偶）及J = 17Hz（偕 偶），11Hz（反偶）
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2．7-OH黄酮
HO
8O
6
5 O
H-5 7.7-8.2 (d, J=9Hz) H-6 6.4-7.1(dd, J=9, 2.5Hz) H-8 6.8-7.0 (d, J=2.5Hz)
H-5较H-6、H-8低场，是由于羰基的负屏蔽 效应的影响。
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2. 薄层层析(TLC)
１）硅胶薄层 用于弱极性黄酮较好。 常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）； 苯：甲醇（95：5）或苯：甲醇：冰醋酸 （35：5：5）等。
分析化学检识鉴别（黄酮）
分析化学检识鉴别（黄酮）黄酮类显色鉴别反应还原反应盐酸-镁粉反应1、多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇显红~紫红色2、少数显蓝、绿色，B环上有-OH或-OCH3颜色随之加深3、查耳酮、橙酮等无该显色反应；花色素引起假阳性反应钠汞齐还原反应1、黄酮、异黄酮、二氢黄酮、二氢异黄酮类显红色2、黄酮醇类显黄色~淡红色；二氢黄酮醇显棕黄色四氢硼钠还原反应1、二氢黄酮、二氢黄酮醇被还原显红~紫红色2、A环与B环上有一个以上-OH或-OCH3取代颜色加深络合反应AlCl3反应1、络合物多呈黄色，紫外灯显鲜黄色荧光2、4’-羟基黄酮醇或7，4’-二羟基显天蓝色荧光锆盐-杞橼酸反应1、鉴别黄酮类化合物中3-或5-OH的存在与否，加锆盐生成黄色络合物；2、加入杞橼酸，黄色不减退，有3-OH或3，5-OH；3、黄色减退，无3-OH但有5-OHFeCl3反应1、黄酮类化合物含有酚羟基2、酚羟基数目位置不同呈现紫、绿、蓝等颜色碱性试剂反应1、黄酮类在氢氧化钠水溶液产生黄~橙色1、查耳酮、橙酮在碱液产生红或紫红色；2、二氢黄酮在冷碱液中呈黄色~橙色，放置或加热则呈深红或紫红色；3、以上均是二氢黄酮类在碱性条件下开环的原因1、黄酮醇类在碱液先呈黄色，通空气3-OH被氧化，溶液转为棕色苯丙素类化合物鉴别显色反应羟基污酸铁反应1、内酯结构碱性开环，与盐酸羟胺缩合生成异羟污酸，在酸性条件下与F e3+络合显红色酚羟基反应1、与FeCl3溶液反应产生绿色至墨绿色沉淀2、若取代酚羟基的邻，对位无取代，可与重氮化试剂显红色至紫红色Gibb’s反应（2，6--二氯苯醌氯亚胺）1、碱性条件下内酯水解生成酚羟基，如其对位（6位）无取代与Gibb’s试剂反应显蓝色，判断C6位是否有取代基Emerson反应（4--氨基安替比林和铁氰化钾）1、碱性条件下内酯水解生成酚羟基，如其对位（6位）无取代与Emerson试剂反应显红色，判断C6位是否有取代基醌类化合物颜色鉴别反应Feigl反应1、醌类衍生物在碱性条件下加热能迅速与醛类及二硝基苯反应生成紫色化合物无色亚甲蓝显色反应1、为苯醌类及萘醌类专用试剂，样品在PC 或TLC上呈蓝色斑点，可与蒽醌类化合物相区别Borntrager反应1、羟基醌类在碱性溶液中颜色改变，加深。
中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法常用的有以下几种：
1. 酸碱比色法：先将中药样品提取，然后加入酸性试剂，使黄酮化合物转化为黄色络合物，再通过比色法测定黄色染色的强度，从而计算出黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：中药样品经过适当溶剂提取后，利用高效液相色谱仪对黄酮进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准品进行比较计算黄酮的含量。
3. 紫外分光光度法：根据黄酮化合物在紫外可见光区域的吸收特性，在一定波长范围内测定样品的吸光度，通过比较吸光度与标准曲线计算黄酮的含量。
4. 荧光法：将黄酮溶液与适当溶剂混合后，在特定波长下激发，并测定荧光强度，通过标准曲线计算黄酮的含量。
以上方法可根据实际研究需求和条件选择适合的方案进行测定。
值得注意的是，不同的中药样品可能有不同的成分和浓度，因此在具体测定过程中需根据样品特点进行方法优化和验证。
黄酮常用的鉴定方法
黄酮常用的鉴定方法黄酮是一类天然存在于植物中的化合物，广泛应用于药物、保健品和食品等领域。
为了确保黄酮的质量和纯度，在鉴定黄酮时需要使用一系列常用的分析方法。
本文将介绍其中常用的几种鉴定方法。
首先，色谱分析是一种常见的鉴定黄酮的方法。
色谱分析是利用不同物质在固定相上的分配作用和吸附作用的差异，将混合物中的化合物分离和定量的方法。
在黄酮的鉴定中，常用的色谱分析方法有高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
高效液相色谱通过将样品溶解在流动相中，利用不同化合物在固定相上的分配系数差异，实现黄酮的分离和定量分析。
气相色谱则是将样品蒸发成气体，通过在固定相上的分配系数和描记质谱数据的基础上，确定黄酮的组成。
其次，质谱分析是鉴定黄酮的另一种重要方法。
质谱分析是利用化合物在质谱仪中的质量和荷电量差异，通过质量光谱图谱进行鉴定的方法。
在黄酮的鉴定中，常用的质谱分析方法有质谱仪和质谱联用仪等。
质谱仪是通过将样品蒸发成气态，然后在电场中进行加速和扫描，最后通过检测离子流来测定黄酮的质量。
而质谱联用仪则将质谱和色谱等分离方法相结合，可以实现对复杂样品中黄酮含量和成分的高效分析。
此外，红外光谱分析是一种辅助鉴定黄酮的重要方法。
红外光谱分析利用化合物分子的振动和旋转引起的能级差异，通过对样品吸收、散射和透射红外光的测定，来确定样品的分子结构和化学键的信息。
在黄酮的鉴定中，红外光谱分析可以通过检测黄酮所特有的红外光吸收峰，来确定黄酮的存在和结构。
最后，核磁共振谱分析也是一种常用的鉴定黄酮的方法。
核磁共振谱分析是利用核自旋和外磁场间相互作用的原理进行的。
在黄酮的鉴定中，核磁共振谱分析可以通过检测黄酮分子中特定原子核的信号，来确定黄酮的结构和组成。
综上所述，黄酮的鉴定方法包括色谱分析、质谱分析、红外光谱分析和核磁共振谱分析等。
这些方法在鉴定黄酮的结构、组成和纯度时起到了重要的作用。
通过合理运用这些鉴定方法，可以提高黄酮的质量和纯度，确保其在医药和食品等领域的应用效果。
黄酮类化合物区分方法
黄酮类化合物区分方法黄酮类化合物是一类具有广泛生物活性的天然产物，广泛存在于植物中，包括蔬菜、水果、茶叶等。
由于其具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性，黄酮类化合物在药物研究和食品保健品开发中备受关注。
然而，黄酮类化合物种类繁多，结构复杂，因此如何进行有效的区分和鉴定成为了研究人员面临的挑战之一。
黄酮类化合物的区分方法多种多样，可以从不同的角度进行考虑。
下面将介绍一些常用的黄酮类化合物区分方法。
一、色谱法色谱法是一种常用的化学分析方法，包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）等。
通过色谱法可以将复杂的混合物分离出各个成分，并通过检测器进行定性和定量分析。
在黄酮类化合物的区分中，可以根据色谱图谱的峰形、保留时间等特征进行分析和判断。
二、质谱法质谱法是一种可以确定物质分子结构和分子量的技术。
在黄酮类化合物的区分中，可以利用质谱法对其分子结构进行分析。
常用的质谱技术包括质谱仪、电喷雾离子源、飞行时间质谱等。
通过质谱法的应用，可以在黄酮类化合物中快速准确地确定目标成分。
三、红外光谱法红外光谱法是一种常见的分析方法，可用于研究物质的结构和组成。
黄酮类化合物的红外光谱特征主要包括吸收峰的位置和强度，通过对比样品的红外光谱图谱，可以确定黄酮类化合物的种类和结构。
四、核磁共振法核磁共振（NMR）是一种常用的分析技术，可以确定物质的分子结构和组成。
通过核磁共振谱图的分析，可以确定黄酮类化合物的种类和结构。
常见的核磁共振技术包括质子核磁共振（1H-NMR）、碳-13核磁共振（13C-NMR）等。
五、紫外-可见吸收光谱法紫外-可见吸收光谱法是一种常用的分析方法，通过测量物质在紫外-可见光谱范围内的吸收特性，可以判断黄酮类化合物的存在和浓度。
通过比对样品和参考物质的吸收光谱图谱，可以区分不同的黄酮类化合物。
除了以上几种常用的区分方法，还可以采用质谱成像技术、X射线晶体衍射分析等方法来对黄酮类化合物进行区分和鉴定。
检测黄酮类化合物的方法
检测黄酮类化合物的方法
一、检测黄酮类化合物的方法
1、化学色谱法
黄酮类化合物的检测采用HPLC色谱法，可以对多种黄酮类化合物的检测采用同一条件，它采用层析系统，该系统有固定相和流动相。
固定相一般采用柱状固定相，填充物。
流动相一般采用乙腈-水溶液，该系统与检测比较具有灵敏度，且检测过程相对简单。
2、比色法
比色法是用酸性比色液的pH值与黄酮类化合物的浸渍液的pH值相比，比色液呈现的色泽斑纹变化来检测黄酮类化合物的一种检测方法。
该方法的优点是简单，快速，检测准确性高，容易操作，容易辨识，容易操作，且费用低。
3、UV可见分光光度法
采用UV可见分光光度法可以检测黄酮类化合物。
如果比较分光光度法，则可以获得比较准确的结果。
该方法采用可见光照射样品，然后测量其紫外光，通过测量的紫外吸收光谱峰来判断样品中含有的黄酮类化合物种类及含量。
该方法检测结果准确、灵敏，操作简单、快速，结果可靠。
4、抗坏血酸抑制法
抗坏血酸抑制法是用抗坏血酸在某一pH条件下，与样品中的黄酮类化合物发生反应，从而抑制黄酮类化合物的吸收，从而判定黄酮类化合物种类及其含量。
该方法检测结果准确、灵敏，操作简便，节
省实验物质量，检测效果良好。
含黄芩制剂中黄酮类化合物的测定方法概述
含黄芩制剂中黄酮类化合物的测定方法概述
含黄芩制剂中黄酮类化合物的测定方法主要包括以下几种：
1. 高效液相色谱法：采用高效液相色谱仪对含黄芩制剂中的黄酮类化合物进行分离和测定。
该方法具有测定速度快、准确度高、重复性好等优点。
2. 毛细管电泳法：采用毛细管电泳仪对黄酮类化合物进行分离和测定。
该方法操作简便，检测灵敏度高，对于样品数量较少的含黄芩制剂测定比较适合。
3. 气相色谱法：将样品进行提取，然后采用气相色谱仪进行分离和测定。
该方法对于易挥发性较好的化合物测定比较适合，但需要对样品进行预处理，操作较为繁琐。
4. 薄层色谱法：将样品进行提取，然后在硅胶或者其他吸附性固相上进行分离和测定。
该方法对于含量较少的黄酮类化合物测定比较适合，但分离效果不如其他方法理想。
综合而言，高效液相色谱法和毛细管电泳法是目前较为常用的含黄芩制剂中黄酮类化合物的测定方法。
黄酮类成分的鉴别
黄酮类成分的鉴别
黄酮类成分的鉴别主要有以下几种方法：
1.显色反应：黄酮类化合物可与某些试剂反应，表现出颜色变化。
例如，铝盐与黄酮类化合物生成黄色络合物；氯化锶与黄酮类化合物生成绿色~棕色~黑色沉淀；硼酸与黄酮类化合物生成亮黄色；草酸与黄酮类化合物生成黄色并有绿荧光；枸橼酸与黄酮类化合物只显黄色。
2.还原试验：镁粉和浓盐酸与黄酮类化合物反应，可生成紫-蓝-红色。
3.金属盐络合反应：某些金属盐，如AlCl3、Pb(OAc)2、Mg(OAc)2，可与黄酮类化合物生成络合物，表现出颜色变化。
4.荧光分析法：在紫外光的激发下，黄酮类化合物可发出荧光，表现出颜色变化。
5.高效液相色谱法：通过高效液相色谱法可以分离和测定黄酮类化合物的含量和组成。
6.质谱法：质谱法可用于鉴定黄酮类化合物的分子结构和化学成分。
黄酮类化合物--鉴定
Rf值( )＞( )＞( )＞( ) (2)聚酰胺TLC(条件60%甲醇—水展开),
Rf值( )＞( )＞( )＞( ) (3)纸色谱(条件8%醋酸水展开),
感谢下 载
感谢下 载
第6章 黄酮类化合物
----黄酮类的鉴定
鉴
定
一、薄层色谱法（TLC） 二、 纸色谱法（PC)
一、 薄层色谱法
一般采用吸附薄层，吸附剂大多用硅胶和聚 酰胺。
（1）硅胶薄层色谱: 用于分离与鉴定弱极性黄酮类化合物 分离苷元常用展开剂：甲苯-甲酸甲酯-甲酸；氯仿-甲
醇等。 （2）聚酰胺薄层色谱：分离含游离酚羟基的黄酮苷与苷元。
TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1 水饱和n-BuOH 层析行为: Rf值: 苷元>单糖苷>双糖苷 一般:苷元在0.70以上，而苷则小于0.7。
纸色谱
A
苷元B
D
C
第二相展开采用水性展开剂
B
C
如：2~6% HOAc水溶液
3% NaCl 水溶液
HOAc:浓HCl:H2O= 30: 3 : 10
苷元
层析行为: 连接糖链越长, Rf 越大(>0.5);
A
D
苷元Rf较小，有的留在原点。
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双相色谱
第I向 醇性展开剂 II向 水性展开剂
（BAW、TBA、水饱和正丁醇）
第
（2~8%HAc、3%NaCl、1%HCl）
正相色谱 反相色谱 Rf固规定律相：（极水性）小极的性化合> 物流R动f大相 附原理） 苷元>单糖苷>双糖苷 规律与左边相反 母核相同，二-OH>三-OH>四-OH>五-OH黄酮
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鉴别生药中黄酮类成分的常用方法
一、引言
生药中含有丰富的化学成分，其中黄酮类成分是其中一类重要的活性成分。
黄酮类成分具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等作用，因此对于鉴别生药中黄酮类成分的常用方法的了解，对于生药的分析和质量评价至关重要。
本文将从简单到复杂，逐步介绍鉴别生药中黄酮类成分的常用方法，帮助读者深入理解并掌握相关知识。
二、物理性质鉴别法
1.1 外观特征
我们可以通过观察生药的外观特征来初步判断是否含有黄酮类成分。
黄酮类化合物多为黄色结晶物质，具有明显的颜色特征。
如果生药呈现明显的黄色或黄褐色，那么很可能含有黄酮类成分。
1.2 紫外可见光谱法
紫外可见光谱法是一种常用的物理性质鉴别方法。
黄酮类化合物在紫外可见光谱中有较为明显的特征吸收峰，常在220-400nm波长范围内出现。
通过与标准品进行对比，可以确定生药中黄酮类成分的存在与含量。
三、化学性质鉴别法
2.1 化学反应法
化学反应法是一种常用的化学性质鉴别方法。
黄酮类化合物通常具有特有的化学反应，如与酸性溶液产生颜色变化、与碱性溶液生成盐类等。
通过与已知的黄酮类标准品进行反应比对，可以鉴别生药中是否存在黄酮类成分。
2.2 薄层色谱法
薄层色谱法是一种常用的化学性质鉴别和定性定量分析方法。
通过将生药样品与标准品一同进行薄层色谱分离，比对色谱图的相对位置、色带的颜色和Rf值等，可以确定生药中黄酮类成分的类型和含量。
四、仪器分析法
3.1 高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种常用的仪器分析法，用于分离、鉴定和定量生
药中的黄酮类成分。
通过高效液相色谱仪的分离柱和检测器，可以得
到黄酮类化合物的保留时间和峰面积，从而确定其存在与含量。
3.2 气相色谱法-质谱联用
气相色谱法-质谱联用是一种高级的仪器分析方法，用于分离、鉴定和定量复杂化合物。
通过气相色谱仪和质谱仪的联用，可以得到黄酮类
成分的质谱图和质谱峰，进一步确认其分子结构和碎片。
结语：
通过物理性质鉴别法、化学性质鉴别法和仪器分析法，我们可以对生
药中的黄酮类成分进行多层次、多角度的分析。
其中，紫外可见光谱、薄层色谱和高效液相色谱法是最常用的方法。
通过综合运用这些方法，并结合已有的标准品，我们可以准确鉴别生药中黄酮类成分的存在与
含量。
个人观点和理解：
黄酮类成分作为一类重要的生物活性物质，在药物研究和质量控制中
具有举足轻重的地位。
通过鉴别生药中黄酮类成分的常用方法，可以
保证药材的质量和疗效的稳定性，同时为药物研发提供参考和依据。
然而，目前鉴别生药中黄酮类成分的方法还有一定的局限性，如仪器设备的昂贵和复杂性，标准品的缺乏等。
我们需要进一步不断改进和完善这些方法，提高其灵敏度、准确性和可操作性，为药物研发和质量控制提供更好的支持。
参考文献：
1. 李大伟, 吴晓燕, 芦卫红. 鉴别浙门冬中黄酮的化学方法及质量评价[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2012(03):338-343.
2. 袁兴友, 王小松, 曹丽丽. 黄酮类化合物的提取、分离和鉴定方法[J]. 山西化工, 2017(01):112-114.
3. 韦贵兴, 范鹏, 国艳红. 高效液相色谱法鉴定黄酮类成分[J]. 湖南农业科学, 2018(11):144-145.。