嗅鞘细胞与雪旺氏细胞胞内蛋白的比较
细胞移植治疗脊髓损伤的研究概况
参 考 文 献
引起 静 脉炎 ， 尽 量 选 择 深 静 脉输 注 。
【 关键 词 】 脊髓 损 伤 ； 细胞 移 植 ； 干细 胞 ； 雪 旺细 胞 ； 嗅鞘 细 胞
【 中图分 类号 】 Ｒ ６ ５ １ ． ２
【 文献标识码 】 Ａ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｉ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ９ — ７ １ ４ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ６ ． ０ ８ ７
【 摘要】 当 今社 会 的发 展 ， 脊 髓 损 伤 的发 生 率越 来 越 高 ， 脊 髓 损 伤 的治 疗 也 成 为 临 床 和 科 研 关 注 的焦 点 ， 其 中细 胞 移 植 治 疗 是 脊 髓 损 伤 治
疗 的热 点 ． 本 文就 细胞 移 植 在 治 疗 脊 髓 损 伤 中 的研 究 概 况 进 行 综 述 。
８ 学 第 二 临 床 医学 院 （ 侯兆阳） ； 浙 江 中 医 药 大 全 能 性 。 在 体 外 可 诱 导 产 生 出 三 个 胚 层 观 察 到 在 移 植 未 分 化 的胚 胎 干 细 胞 ２
学附属第二医院（ 陈哲 ， 曹延广 ， 胡炯）
通 迅作者 ： 陈哲
官的生长 、 发育 、 形成嵌合 体 ， 特 别 是 生 表 明未 分 化 的胚 胎 干 细 胞 移 植 仍 然 存 在
多 向分 化潜 能 的 非 特 异 性 细 胞 ，它 可 以 疗 脊 髓 损 伤 是 有 效 的 ，但 这 距 临 床 应 用
多种 移植 方 法 可 用 于 促 进 损 伤 脊 髓 不 断 地 增 殖 更 新 以 维 持 自身 的数 量 ， 在 仍 有 一 段 距 离 ， 其 主要 的 问 题 有 ：④ 胚
昆虫嗅觉受体功能的研究进展
昆虫嗅觉受体功能的研究进展目录1. 内容概述 (2)1.1 昆虫嗅觉的重要性 (3)1.2 嗅觉受体的发现与研究 (3)1.3 文档的目的与结构 (5)2. 昆虫嗅觉受体的结构和功能 (6)2.1 嗅觉受体蛋白的基本结构 (7)2.2 嗅觉受体蛋白的配体结合特性 (8)2.3 昆虫嗅觉受体与化学感应能力的关系 (10)3. 嗅觉受体的多样性 (11)3.1 不同昆虫嗅觉受体的基因分析 (12)3.2 特定功能相关的嗅觉受体家族 (13)3.3 嗅觉受体基因的调控机制 (15)4. 嗅觉受体的信号转导途径 (16)4.1 昆虫嗅觉受体的传导机制 (17)4.2 视紫红质/振荡电位形成的作用 (18)4.3 神经元水平的嗅觉信号处理 (19)5. 嗅觉受体功能研究的最新发展 (20)5.1 转基因和基因突变研究的应用 (21)5.2 行为实验与嗅觉受体功能的直接关联 (22)5.3 单细胞和多基因阵列分析方法 (23)6. 嗅觉受体功能的潜在使用 (24)6.1 在昆虫害虫控制中的作用 (25)6.2 关于昆虫通讯与交流的研究 (26)6.3 嗅觉受体工程和应用前景 (27)7. 结论与今后研究方向 (29)7.1 文档的总结 (30)7.2 未来的研究趋势和挑战 (31)1. 内容概述昆虫嗅觉受体并与之相结合的蛋白质，这些受体在昆虫的嗅觉系统中起核心作用，能够感知周围环境中的气味信号，进而指导昆虫的行为。
研究昆虫嗅觉受体的功能对于深入理解昆虫行为、生态适应、遗传进化以及进行害虫管理等具有重要意义。
嗅觉受体发现与分类：介绍多种昆虫嗅觉受体的发现历程和家族分类，包括它们的进化关系以及在不同昆虫中的表达模式。
嗅觉受体分子机制：探讨嗅觉受体蛋白的结构特点、信号传导途径以及与气味分子相互作用的模式。
表达调控研究：分析嗅觉受体在不同生命周期阶段和不同组织中的表达调控机制。
功能丧失的影响：探讨嗅觉受体基因敲除或突变对昆虫嗅觉感知和行为的影响。
人鼻腔嗅粘膜嗅鞘细胞的原代培养和免疫组化观察
［ ｂｔ ｃ］ Ｏ ｊ ｃ ｖ Ｔ ｓ ｂｉ ｅ ｒ ａｙｃ ｌ ｒ ｍ￣ ｏ ｓ ｆ ｌ ｃ ｒ ｎｈ ａ ｉｇ ｅｌ ｆ ｍ ｈ ｍａ ｌ ｃ ｒ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｔ ｅ ｏｅｔ ｌｈｔ ｉ ｒ ｕ ｕｅ ｈ ｄ ｆ ｔ ｅ ｓ ｅｔ ｎ ｌ ｏ ｕ ｎｏｆ ｔ ｉ ａ ｓ ｈｐｍ ｔ ｏＯ ａｏ ｙ ｈ ｃ ｓｒ ａｏ ｙ
ｄ ｅ ｅｍｏ ｐｈ ｌ ｇｃ ｌ ｈ ｒｃ ｅｉｔｃ ｆＯＥＣｓ Ｒｅ ｕ ｔ ＯＥＣｓｃ ｎｂ ｕｔ ｅ ｏ ｈ ｉｄｔ ｒ ｏ ｏ ｉａ ａａ ｔｒｓｉｓｏ ｈ ｃ ． ｓ ｌｓ ａ ｅｃ ｌ ｕｒ ｄｆ ｍ ｕｍａ ｆｃ ｏ ｒ ｎｏｌａ ｔ ｒ ｍｕｃ ｓ ， ｐ ｅ ｒ ｙ ｏａ ａ ｐ ａ—
维普资讯
２０ 年 ０８
０ ８月
生 物 骨 科 材 料 与 临 床 研 究
０ Ｒ Ｈ Ａ Ｄ Ｃ Ｂ ＯＭＥ Ｈ Ｎ Ｃ ＭＡ Ｅ ＩＬ ＡＮ ＬＮＩ Ａ Ｔ Ｄ Ｔ ＯＰ Ｅ Ｉ Ｉ Ｃ Ａ ＩＳ Ｔ ＲＡ Ｓ Ｄ Ｃ Ｉ Ｃ ＬＳＵＹ
ｅ ｏ ｇ ｂｐｏａ ｎ ｐ ａ ｕｓｆ ｍ ｅ ｌ ｎ ｄｅ ｔｆｅ ｔ ５ａ ｄ ＧＦ ｄ ｌｎ ｉ ｌｒｏｒｕ ｂｉｏｌ ｆ ｉｏｒ ｃ ｌ ｄ ｉ ｎ ｉ ｄ ｗｉ Ｐ７ ｎ ＡＰ． ｅｐ ｉ ｓ５ ｒ ａ ｉ ｈ Ｔｈ ｕｒｔ ｉ ０％ ． Ｃｏ ｌ ｉ ｎ ＯＥＣｓ ｙ ｎｃｕｓｏ
ｃ ｎｂｅａ ｑ ｉｅ ｏ ｈ ｍ ａ ｌａ ｔｒ ｕ ｏ ａ． ｅｐ ｓｔｏ ｆｏｆ ｃ ｒ ｕ ｏｓ ｎｄｐｕ ｉ ｃ ｔｏ ｅ ｕｒ ｄｔ ｅ ｔｇ ｔｏ ． ａ ｃ ｕｒ ｄｆ ｍ ｕ ｒ ｎｏｆ ｃｏ ｍ ｃ ｓ Ｔｈ ｏ ｉｉｎｏ ｌａ ｔ ｙ ｍ ｃ ａａ ｒｆ ａｉ ｎｒ ｑ ｉｅ ｉ ｙ ｏ ｉ ｏ ｎｖ ｓｉａｉ ｎ
髓鞘解剖与生理(李峰)
导，从一个郎氏结跳到下一个郎氏结，呈
跳跃式传导。 神经纤维越长，轴突越粗，髓鞘越厚， 结间体越长，跳跃的距离也越大，传导速 度也就越快。大部分脑、脊神经属于有髓 神经纤维。
2. 中枢性髓鞘与周围性髓鞘 (1) 中枢性髓鞘 ●由少突胶质细胞突起末端的
扁平薄膜包卷轴突而形成。
●一个少突胶质细胞形成多条 髓鞘，包裹邻近多个神经元 的轴突或数个结间体。 ●髓鞘外表面没有基膜，且郎
二、神经胶质细胞
神经胶质细胞(neuroglia cell)简称神经胶质(neuroglia)。 ● 普通染色只能显示胞核，用特殊银染等方法才能显示神经 胶质细胞的整体形态。 ● 神经胶质细胞一般较神经细胞小，突起多而不规则，数量 约为神经细胞的10倍。 ● 神经胶质细胞具有支持、营养、保护、形成髓鞘及绝缘， 并有分裂增殖与再生修复等多种功能。
的运动神经元都属此型。脊髓运动神经元的长轴突
可从脊髓到达四肢。 2）高尔基II型细胞 ：神经元轴突较短，末端反复分支，
此类神经元分布在脑皮质内，如大脑皮质和小脑
皮质的颗粒细胞为高尔基II型细胞。
3. 按神经元的机能分类 1）感觉神经元或传入神经元：接受体内或体外的刺激， 将神经冲动传导到中枢神经。假单极或双极神经元皆 属于此类，如内耳的前庭神经节及螺旋神经节细胞， 脑和脊髓的神经节细胞。 2）运动神经元或传出神经元：神经冲动由胞体经轴突传 至末梢，使肌肉收缩或腺体分泌；分布在中枢神经及 植物性神经节内的多极神经元即是运动神经元。 3）中间神经元或联合神经元：皆是多极神经元，接受其 他神经元传来的神经冲动，然后再将冲动传递到另一 神经元起联络作用。中间神经元分布在脑和脊髓等中 枢神经内。
尼氏体 (Nissl body) ●胞质内的一种嗜碱性物质 ●由许多平行排列的粗面内质网 及其间的游离核糖体组成 ●分布于核周体和树突内，轴突起 始段的轴丘和轴突内无尼氏体 ●具有合成蛋白质的功能
经鼻给药防治脑血管病的机理及给药剂型研究进展
１ 经 鼻给 药与 血脑 屏 障
血脑屏障的存在 限制 了中枢神经药 物开发 ，超过９ ％的 ８ 候 选药物无法通过血脑屏障 。 有研究表 明［ 种作用 于脑部 ５ 将３
２ 喷 雾剂 喷雾 剂吸收快 、 物利用度 高 ， 十分广 泛。 ． １ 生 应用 它不含抛射剂 ，仅通过雾化装置将药物喷于患处 。喷雾 给药 时 ， 液沉 积在鼻腔 的前部 ， 药 以小滴分散 ， 除速 率 比纤毛 其清 运动慢 ， 时还逆 向转运 ， 有 局部刺激小 。采用 喷雾剂经鼻 给药
重要 ， 选择恰 当的剂 型有 助于药物发挥作用 ， 中药 经鼻 给药 是 防治脑血管病的重点难点问题。
给药能使得某些药物透过血脑屏 障发挥作用 ，同时具有生 物 利用度高 、 吸收快 、 给药方便等优点 。因此 ， 新制剂 的研 究
成为热点 ，因其能有效透过血脑屏 障亦成 为中西 医临床 防治 脑 血管病的新热点 。本文就近年来经鼻 给药 防治 脑血 管病 的 机理及给药剂型研究进展作一综述 。
２ 经鼻 给 药 的药物 剂型研 究
目前经 鼻给药在 防治脑血管病 中已得到一定 的运用 ， 并
积累了一些临床经验 ， 到了一些研究成果 。 还存在一 些亟 得 但 待解决的问题 ： 经鼻给药治疗脑血管 的疗效机制是什么？ ① 是 经鼻腔给药 ， 开Ｂ Ｂ 避 Ｂ 充分发挥疗效 ， 还是具有更多 的治疗作 用。② 经鼻给药 防治脑血管病如何选 择药物 ， 如何选择剂型。
的应用研究 较多 ， 如孙 寒静等 ［ 过测定川 芎嗪在 大 鼠脑 中 ９ 通 的药动学参数 ， 认为 芎冰 喷雾剂经鼻腔给药后即达峰浓度 ， 可 发挥即时疗 效 ， 缓解脑 缺血症状 ； 除迅速 ， 清 药后 ３ｈ 脑组织 ，
家畜解剖及组织胚胎学复习题
家畜解剖学及组织胚胎学复习题一、单选题1.在畜体方位中，远离正中矢状面的一侧为外侧。
2.猪的脊柱式为7 14+5 6-7 20-23。
3.下面跗关节是后肢的关节。
4.隔为一大圆形板状肌，构成胸腔和腹腔的隔肌。
5.羊的肝管和胰管均开口于十二指肠。
6.马升结肠特别发达，排列成双层马蹄铁形肠袢。
7.贮存精子和精子进一步成熟的场所是附睾。
8.牛的心脏基部约位于肩关节水平线上，心尖位于最后胸骨尾背侧，距隔约2-5cm与3-6肋骨相对。
9.公禽的睾丸位于腹腔。
10.视觉的传导径是大部分视网膜的感光-接受光刺激，经视神经至间脑，更换神经后到大脑皮质感光区。
11.在间脑中丘脑下部形体虽小，但他是主要的生命活动中枢，与多种释放H和抑制H的器官。
12.N元是NS构造和功能的基本单位，N元间借突触彼此相连。
13.间期的细胞核，由核膜、核仁、核质和染色质构成。
14.参与外周NS有髓Nf髓鞘形成的细胞是雪旺氏细胞。
15.具有典型“车轮状”偏位核的是浆细胞。
16.消化管的潘氏细胞分布在小肠腺。
17.家畜刚排出的卵子，除了卵母细胞，透明带，还有放射冠。
双选题18.髂骨关节为复关节，包括股胫关节和股膑关节。
19.腹股沟管为腹内斜肌和腹外斜肌之间的斜行裂隙。
20.牛羊的肺分叶很明显，左右肺分别为3、4叶。
21.家畜体内淋巴器官包括胸腺、脾脏、淋巴结和扁桃体等。
22.脊髓呈圆柱形各段粗细不同，有两个较粗的部分，称之为颈膨大和腰膨大。
23.眼球壁的中层是血管膜，由后向前由脉络膜、睫状体和虹膜三部分组成。
24.电镜下细胞膜的结构为内中外三层和两暗夹一明。
25.下列属于横纹肌的有骨骼肌和心肌。
多选26.有味觉功能的舌乳头有菌状乳头、叶状乳头和轮廓乳头。
27.单核细胞的形态特点有血细胞中体积最大、核呈肾形或马蹄形、有吞噬能力、胞质染成淡灰色和胞质颗粒含有氧化酶。
28.成纤维细胞的特点有数量多、扁平多突、能形成基质和纤维。
29.肺泡和血液间的气体交换必须经过的结构有肺泡上皮、上皮下基膜、血管内皮基膜和血管内皮。
膀胱肉瘤样癌术后切口复发1例报告并文献复习
左输 尿 管 再 植 术 。 术 中见 肿 物 位 于 膀 胱 若 双 向分 化 完 全 ．则 分 别 对 上 皮 及 间 叶 膀 胱 部 分 切 除术 ＋ 侧 输 尿 管植 入 术 ， 单 根 代 左 后 壁 输 尿 管 开 口 处 ．０ ｍｘ ０ ｍ× 标 记 表 达 ，分 别形 成 肉瘤 样 癌 和 癌 肉瘤 治 性 全 膀 胱 切 除 术 ＋ 盲 升 结 肠 可 控 膀 ４ ｍ ３ｍ ２ ｍ 大 小 ， 花 状 ， 向膀 胱 。双 侧 输 ０ｍ 菜 突
残 率 、 耗 费 、 病 死 率 及 多 见 于 青 壮 年 嗅 鞘 细 胞 高 低
嗅 鞘 细 胞 （ Ｅ ｓ 是 一 种 特 殊 类 型 Ｏ Ｃ）
（ ｆｃｏｙ ｎ ｈ ａｈｎ ｅｌ 的 神 经 胶 质 细 胞 。 它 起 源 于 胚 胎 的 嗅 基 Ｏｌ ｔｒ ｅ ｓ ｅ ｔｉｇ ｃ ｌ ａ ｓ
术 。术 后 病 检 示 ： 胱 肉瘤 样 癌 （ 移 等 症 状 。后 期 肿 瘤 巨 大 可压 迫双 侧 输 尿 其 中 １例 行 术 后 放 疗 生 存 期 达 ５ 膀 转 ２个 ５ ＿ 灶） 。患 者 再 次 术 后恢 复 良好 ， 排 尿 困 管 可 致 急性 梗 阻 性 肾衰 。压 迫直 肠 出现 月 ＿ 对 于 不 能耐 受 或 不愿 接 受 膀胱 全 无
难 ， 尿 消失 ， 血 目前 在 随 访 中 。 可 全 排便 困难 、 完 全 性 肠 梗 阻 ． 可 以 向腹 切 术 的患 者 ． 采 用新 辅 助 化 疗 （ 身 化 不 还
部突起在耻骨上膀 胱区可触及 肿块 ， 双 疗 或 和局 部 动 脉 灌 注 化 疗 ） 加膀 胱 部 分
浙 江 创 伤外 科 ２ １ 年 ２月 第 １ ０１ ６卷 第 １期
7神经组织
• 二．神经元的分类
• 1．根据突起的数目，可把神经元分为三类： • （1）多极神经元 具有两个以上的突起，其中只有 一个是轴突，其余的都是树突；例如，大脑皮质中 的锥体细胞、脊髓腹角的运动神经元和交感神经节 细胞等。 • （2）双极神经元 从胞体两端各发出一个突起，一 个是树突，另一个是轴突；例如，嗅觉细胞、视网 膜的双极细胞和耳蜗神经节的双极神经元等。
• 2．少突胶质细胞（oligodendrocyte）突起
少，分支也少，细胞核呈卵圆形。细胞突起缠绕 在神经元轴突的表面上，其中有的形成髓鞘。
• 3．小胶质细胞（microglial cell）胞体小，
有许多带有小棘的树枝状突起；核小，呈三角 形，。小胶质细胞可做变形运动，具有很强的吞 噬能力，属于单核吞噬细胞系统的成员。
不包裹轴索的全长，而是每隔一定距离就出现间断。
间断处叫朗飞氏结（Ranvier’s node），结之间的部 分称结间段。
• 髓鞘是绝缘的，可防止神经冲动在相邻轴突间的
传递。在电镜下，可见到外周神经纤维的每一个
结间段都为一个雪旺细胞所包裹。
• 朗飞氏结实际上是两雪旺细胞之间的间隙，髓鞘 实际上是雪旺细胞膜包着轴索向内凹陷后并旋转 缠绕而形成的板层状结构。缠绕后剩余的扁平雪 旺细胞便是所谓的神经膜（neurolemma）。
• 根据髓鞘的有无，可把神经纤维分为有髓和无髓 的两种。
一．有髓神经纤维
• 有髓神经纤维（myelinated nerve fiber）是由轴索外 包髓鞘和神经膜而构成的，除嗅神经、视神经和植 物性神经外，动物体内绝大多数的神经纤维都属于 有髓神经纤维。 • 髓鞘（myelin sheath）的主要成分是脂蛋白，它并
突触电镜结构示意图
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嗅鞘细胞与雪旺氏细胞胞内蛋白的比较王晋，朱悦中国医科大学附属第一医院，沈阳（110001）E-mail：Kingwung@，zhuyuedr@摘要：【目的】利用蛋白质组学双向电泳的实验方法,比较嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells , OECs) 与雪旺氏细胞（Schwann’s cells,SC）胞内蛋白的差异.【方法】以原代培养的方法分离、培养、纯化成年大鼠嗅球OECs及SC。
分别提取两种细胞胞内蛋白,双向电泳分析蛋白差异点。
结果 (1)原代培养OECs 纯度可达90 %以上,SC的纯度可达95%以上。
(2) OECs和SC的胞内蛋白存在多个蛋白点的表达差异。
【结论】两种细胞都达到了一定的高纯度，OECs和SC胞内蛋白的差异比较明显，差异的蛋白点可能是决定了两种细胞在脊髓损伤时不同功用的关键。
关键词：嗅鞘细胞，雪旺氏细胞，双向电泳，胞内蛋白嗅神经系统在一生中都在进行嗅觉感受器神经元的神经再生[1]，嗅鞘细胞同时具有周围神经系统雪旺氏细胞和中枢神经系统星形胶质细胞的特性[2]，轴突横断后嗅上皮层新生的嗅觉感受器神经元增量增殖其轴突到中枢神经系统的嗅球小球层[3]，嗅鞘细胞能够包绕从嗅上皮层延伸到嗅球小球层的新生轴突成鞘。
它通过分泌各种促进神经轴突再生的物质提供允许轴突再生延长的微环境，使轴突较容易的进入中枢神经系统。
研究证明嗅感受神经元轴突的延长和向嗅球的靶向运动主要受嗅鞘细胞的支持[4]。
另外，一些报道提出嗅神经层内层的幼稚嗅鞘细胞在再生和发育的过程中可以改变他们的形状和增殖数量并且可以调控重排嗅感受神经到达嗅球[5] [6]。
同时它又有雪旺氏细胞所不具备的特点：嗅鞘细胞能够沿着宿主神经通路在胶质细胞的校直下移行的更远；嗅鞘细胞能够抑制轴突分支和游走，诱导轴突快速直线生长穿过损伤区域直达通路远端[7]。
大量的试验证明了嗅鞘细胞成功的促进体内[8] [9]，和体外[10] [11] [12]的轴突再生。
其中嗅鞘细胞能够分泌各种促进神经轴突再生延伸的物质提供有利的微环境在它促进轴突再生的能力中扮演一个重要的角色。
Boruch等的研究发现嗅鞘细胞的单克隆细胞系表达神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养素（NT-4/5）和neu基因调节剂（neuregulins）的mRNA。
但是不表达NT-3和睫状神经营养因子（CNTF）的mRNA[13] [14]。
Woodhall等研究发现嗅鞘细胞表达NGF、 BDNF、GDNF和NTN的mRNA。
[15] Adam和Lipson等则对不同发育阶段的嗅鞘细胞表达的神经再生相关蛋白进行了研究，结果发现不同时期的嗅鞘细胞表达的情况也不相同[16]。
除了神经营养分子，研究还发现嗅鞘细胞可以分泌大量的诸如N-CAM和层粘连蛋白等细胞外基质分子[17] [18]。
N-CAM基因缺乏的小鼠嗅球显著的小于正常的小鼠[19]。
同时嗅鞘细胞还表达一些对轴突再生起抑制作用的蛋白，诸如GFAP、CSPGs、Nogo等[20] [21]。
另外, Au E等人发现了OEC中表达SPARC,可以促进SC的生长,并且能够促进脊髓损伤的修复[22] [23]。
OEC和SC中蛋白质的表达具有一定的差异，可能决定了良种细胞在脊髓损伤修复中的功能差异[24]。
对于嗅鞘细胞表达的神经营养因子及其他因子仍存在许多争议。
1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 使用的仪器动物手术器械一套、细胞培养常用仪器、高压消毒锅、深冻冰箱、显微解剖镜、电热恒温鼓风干燥箱、离心机、显微解剖器械一套、倒置显微镜、二氧化碳孵箱、水平单向流净化工作台、电热恒温水浴箱。
DMEM培养基、F-12培养基、胰酶、小牛血清，多聚左旋赖氨酸、P75,二维凝胶电泳设备、图像采集系统、图像分析软件及计算机设备。
1.1.2 主要试剂D-Hanks，Bovine Pituitary Extract（BPE），多聚左旋赖氨酸（Sigma），胎牛血清，DMEM （Gibco），mouse anti rat mAb P75、S100（Chemicon），胰酶（Invitrogen），蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5 µl蛋白酶抑制剂混合液，5 µl PMSF和5 µl磷酸酶混合液），双向电泳相关试剂（详见下文）1.1.3 实验动物两月龄成年Wistar大鼠：中国医科大学动物部提供1.2 方法1.2.1 OECs和SC的分离、培养和纯化及两种细胞的鉴定①取18天大Wistar大鼠，麻醉，断头，取嗅球及双侧坐骨神经，解剖显微镜下分离所需细胞，胰酶消化，离心，用DF—10S培养所得细胞；②用改良Nash法纯化嗅神经鞘细胞,用Morrissey法纯化雪旺氏细胞；③P75抗体鉴定所得的嗅鞘细胞纯度；S100抗体鉴定所得的雪旺氏细胞纯度；1.2.2 OECs和SC胞内蛋白的提取从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。
预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。
配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂。
细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂），轻轻摇动5分钟。
用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动15分钟进行裂解。
裂解液于预冷的离心机中14,000xg离心15分钟。
弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
1.2.3 双向电泳及图像分析第一向等电聚焦：从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。
在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。
从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。
从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室温中放置10分钟。
加入样品用镊子轻轻的去除预制IPG胶条上的保护层。
分清胶条的正负极，轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上，使得胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正极。
在每根胶条上覆盖2-3ml矿物油，防止胶条水化过程中液体的蒸发。
对好正、负极，盖上盖子。
设置等电聚焦程序。
聚焦结束的胶条。
立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳，否则将胶条置于样品水化盘中，-20℃冰箱保存。
第二向SDS-PAGE电泳：配制10%的丙烯酰胺凝胶两块。
配80ml凝胶溶液，每块凝胶40ml，将溶液分别注入玻璃板夹层中，上部留1cm 的空间，用MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇封面，保持胶面平整。
聚合30分钟。
一般凝胶与上方液体分层后，表明凝胶已基本聚合。
待凝胶凝固后，倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇，用MilliQ水冲洗。
从-20℃冰箱中取出的胶条，先于室温放置10分钟，使其溶解。
配制胶条平衡缓冲液I。
聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。
将另一份厚滤纸用MilliQ水浸湿，挤去多余水分，然后直接置于胶条上，轻轻吸干胶条上的矿物油及多余样品。
将胶条转移至溶涨盘中，每个槽一根胶条，在有胶条的槽中加入5ml胶条平衡缓冲液I。
将样品水化盘放在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。
配制胶条平衡缓冲液II。
第一次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液I。
并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。
再加入胶条平衡缓冲液II，继续在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。
用滤纸吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上方玻璃板间多余的液体。
将琼脂糖封胶液进行加热溶解。
将10×电泳缓冲液，用量筒稀释10倍，成1×电泳缓冲液。
赶去缓冲液表面的气泡。
第二次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液II。
并用滤纸吸取多余的平衡液。
将IPG胶条从样品水化盘中移出，用镊子夹住胶条的一端使胶面完全浸末在1×电泳缓冲液中。
将放有胶条的SDS-PAGE凝胶转移到灌胶架上，短玻璃板一面对着自己。
在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液。
放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。
在低熔点琼脂糖封胶液完全凝固后。
将凝胶转移至电泳槽中。
在电泳槽加入电泳缓冲液后，接通电源，起始时用的低电流（5mA/gel/17cm）或低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，再加大电流（或电压）（20-30mA/gel/17cm），待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。
电泳结束后，轻轻撬开两层玻璃，取出凝胶，并切角以作记号（戴手套，防止污染胶面）。
进行染色。
考马斯良蓝染色：0.1%R250 +450ML 甲醇 +100ML 冰醋酸加双蒸水至终体积为1000ML 30min,脱色液：450ML 甲醇 +100ML 冰醋酸加双蒸水至终体积为1000ML 3×30Min。
2. 结果与讨论本实验采用改良Nash法纯化嗅神经鞘细胞,采用Morrissey法纯化雪旺氏细胞，原代培养嗅神经鞘细胞纯度可达90 %以上, 雪旺氏细胞的纯度可达95%以上。
通过对两种细胞的蛋白质进行双向电泳和图像分析，结果发现在嗅鞘细胞中有四个表达明显高于雪旺氏细胞的蛋白质，在雪旺氏细胞中存在两个表达高于嗅鞘细胞的蛋白质（图一所示）。
图1 嗅鞘细胞和雪旺氏细胞蛋白质双向电泳比较，▲箭头所示为差异表达的蛋白质。
目前对于嗅鞘细胞和雪旺氏细胞的蛋白及离子通道有很多相关的研究。
特别是由于嗅鞘细胞独特的中枢神经修复功能使得对嗅鞘细胞的研究较为丰富。
2.1 嗅鞘细胞分泌神经营养因子的种类促轴突再生延伸的两类物质：神经营养蛋白和粘附蛋白。
神经营养蛋白主要包括：神经生长因子基因家族(Nerve growth factor gene family)：NGF、BDNF、NT-3、4、5；成纤维细胞生长因子家族(Fibroblast growth factor family)：FGF-1~9；胶质细胞源性神经营养因子(Glial-derived neurotrophin factor)：GDNF-1、-2、Neurturin（NTN）等；转化生长因子家族(Transforming growth factor family)；生神经因子家族(Neuropoietic factor family)：CNTF等；表皮生长因子家族(Epidermal growth factor family)： ErbB等。
血小板源性生长因子家族（Platelet-derived growth factors）；胰岛素样生长因子；OEC中表达SPARC [12]。