HPLC 仪器操作与维护
检测器的启动操作
连通流路： —色谱柱出口接检测器入口
—注意接头不要留有空隙 —连接管路要用细管(≤0.009″)
—检测器出口用适当的管路(内径,长度)通向废液瓶 连通数据线路: —IEEE 电缆(对大多数检测器)与软件busLAC/E卡连接 —手动进样器的启动信号线与检测器背板上的Inject Start 接口连接 开启电源开关后,需待检测器通过自检后,才能被软件控制(约 需5-10分钟) 通流动相平衡至少30分钟后才能正常工作
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色谱泵及系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液 30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀 清洗步骤如下: —取下色谱柱，用两通(Union)连接进样器和检测器 —用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) —用30%磷酸清洗液洗系统(1ml/min流速)45分钟 — (四元泵的A,B,C,D四路各为25%) —换成清水洗至出口水pH显中性 —用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
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液相色谱系统的清洗与钝化
色谱泵吸滤头,进出口阀及管路(包括进样器和检测池)若 被污染,应作清洗和钝化处理 一般采用30％磷酸水溶液作为清洗剂，用6M硝酸作为 钝化剂，先清洗再钝化 清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢 钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧 化膜
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自动进样器的使用
了解进样针的设计特点 —侧面开口与底部开口
侧孔吸样 底部吸样
717和2690/2695
2790/2795
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选用合适的进样瓶及密封垫
Bottom Draw
Side Draw
Bottom Draw
注:泵排气后,应输液稳定(系统压力脉动小,一般在几十 Psi以内),否则,需重做排气操作
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Waters 515 泵的前面板
电源开关
柱塞杆清洗孔
排液阀
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Waters 1525 泵
排液阀(B) 柱塞杆清洗孔
液相色谱仪器操作及维护
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启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源 —打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自 检后，打开计算机，启动色谱管理软件 准备流动相 —过滤,脱气 色谱泵排气 —用新配制的流动相灌注泵
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流动相的脱气
流动相脱气的目的 —使色谱泵的输液准确 —输液量均匀准确，并且脉动减小 —保留时间及色谱峰面积的重现性提高 —提高检测的性能 —防止气泡引起的尖峰 —基线稳定，信噪比增加 —溶剂的紫外吸收本底降低 —保护色谱柱 —减少死体积 —防止填料的氧化
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去除微粒的方法
过滤 —过滤膜/过滤装置 —有机滤膜(≤0.5 µ m)/水溶性滤膜(≤0.45 µ m) —膜片可更换 —一次性使用的膜“Cartridge” —使用方便简单，交叉污染小 —有更小内径，可用于微量样品的处理 高速离心 —大于：10,000rpm
2
启动液相色谱仪器的流程
用准备好的流动相平衡色谱系统 —可在泵的控制面板上设定流速参数(15×5泵需在软件 控制下操作) —系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作 准备样品 —用流动相溶样或重组样品 编制仪器方法,开始实验
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3
液相色谱对流动相的要求
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色谱泵的运行
排气后的色谱泵即可用于实验运行 —注意∶ —排气后，先设流速为 0 —恢复排气时断开的部分，如:进样器、色谱柱 —如需要，恢复排气时断开的控制线 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值 若使用缓冲盐流动相,用前和用后均需用水过渡(包括排 气操作)
注射器箱门 柱温箱
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2695 排气操作示意图
面板操作 :
— 打开状态(Statas)画面 — 按右下角Direct Function功能键 — 选 Dry Pime或 Wet Prime命令 — 选OK 即可进行泵的排气
注:
— 当流路中充满空气时, 按图示做Dry Prime — 若只是更新流动相时, 只须作Wet Prime
Standard
Total Recovery
Max Recovery
QSert
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自动进样器的清洗
717和2695进样器的清洗: —进样针是流路的组成部分,运行中一直由流动相清洗 —进样针外部由软件控制在每次进样前用洗针液清洗 —若注射器内出现气泡，用面板操作的Purge Injector功能清除之 2795进样器的清洗 —进样针是离线的,底部开口 —Wash Solvent 应用高比例的有机相水溶液 —Purge Solvent 应用低比例的有机相水溶液
在线脱气机 （in-line degasser)
— 可保持连续脱气，多用于低压梯度
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流动相的保存
有机溶剂流动相: —室温下密封,避光保存 缓冲盐流动相: —当日现配现用 —低温下密封保存,一般不超过3天 —防止微生物生长 有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: —低温密封保存 —防止有机相的挥发 选用适宜的容器
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保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
2 星期 1 星期 1天 1 小时 新鲜配制 0 5 10 分
泵B
柱塞杆清洗孔
参比阀 -到进样器 -到废液 排液阀 (A)
泵A
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Waters 600 泵的前面板
泵控制器 电源开关
柱塞杆 清洗孔
排液阀
泵体 泵灌注阀
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Waters 2695 分离单元
溶剂瓶盘 检测器接液盘 前面板显示 屏和键盘 软盘驱动器 样品室门 溶剂输送单 元进入门 溶剂配比单元 进入门
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手动进样器原理
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手动进样器的使用
7725i手动进样器的进样方式: —固定体积进样:进样量取决于Loop的体积 —可变体积进样:进样量由微量注射器量取 注意: —固定体积进样需要用超过Loop体积5-10倍的样品量 进样,以保证进样浓度不被稀释 —可变体积进样在注射器注入样品后,应尽快将进样器扳 至Inject位置,以避免样品在Loop中的扩散 进样器的清洗: —每次进样前应将微量注射器清洗干净,防止样品间交叉 污染,影响实验结果
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色谱泵及系统的钝化
钝化液用6M硝酸水溶液 6M硝酸的配制:取浓硝酸40ml与60ml水混匀 钝化步骤如下: —在清洗步骤完成后进行钝化处理 —确认清洗用的磷酸已基本洗净 —用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) —用6M硝酸水溶液钝化系统(1ml/min流速)45分钟 —换成清水洗至出口水pH显中性 —用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
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色谱泵的排气操作
色谱泵实验前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按 以下步骤排气：
— 将泵入口管吸滤头放入脱过气的流动相中 — 打开泵及在线脱气机电源开关 — 将排液阀打开，或断开与色谱柱连接的管路 — 设置流速到6-9ml/min,排液阀出口有液流连续流出 — 必要时(600泵)用10ml注射器从泵入口注入流动相 — 对于600,2695四元梯度泵,分别对所用各路溶剂进行排气操作 — 停止泵流速,关闭排液阀,恢复断开的管路,备用
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色谱泵的维护保养
流动相要过滤 常用缓冲液时，停泵前要用水清洗泵头，并用水冲洗柱塞 杆清洗孔 关闭排液阀时，不要太用力拧紧，以不渗液为准 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要 用一种中间溶剂过渡 色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯甲醇充满 泵头及管路,并保存在纯甲醇中
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进样器的使用
进样器的种类: —手动进样器－7725i —自动进样器－717Plus，2695样品管理系统 进样器与系统的连接： —进样器的入口与色谱泵的出口相连 —进样器的出口与色谱柱的入口相连 —要求：出入口方向不能接错，接头不能留有空隙 进样器的连接管路： —出口管路一定要用细管(内径≤0.009″),长度要短, 尽量减少谱带扩展
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自动进样器的使用
自动进样器(717Plus和2695样品管理系统): —样品瓶位置和进样量由软件设定 注意: —样品瓶中应有超过1／3瓶高度的样品量 —样品瓶中的样品也不要装得太满,应留有一定的空气 —使用内衬管(Insert)时应设定针高度为2mm(2695) 或75%高度(717Plus) —使用仪器生产商推荐的样品瓶
高效液相色谱仪的操作与维护指南
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
hplc高效液相色谱仪使用方法
hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。
下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。
一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。
2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。
一般要求预热时间为30分钟到1小时。
二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。
根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。
2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。
可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。
3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。
设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。
4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。
一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。
5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。
柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。
三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。
2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。
3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。
进样过程中要确保无气泡进入柱。
四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。
监控色谱图，观察峰的形状和分离度。
根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。
2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。
进行数据处理和结果分析。
五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。
2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。
柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。
3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。
实验室仪器设备维护保养记录
实验室仪器设备维护保养记录日期：2024年7月1日仪器名称：高性能液相色谱仪（HPLC）编号：HPLC-001保养和维护记录：1.清洁工作-使用软布蘸取少量去离子水，轻轻擦拭外壳和显示屏，并仔细清洁键盘上的按键；-使用尖端朝下的棉棒蘸取少量去离子水，轻轻清洁样品口和进样口；-检查柱箱内是否有残留物，如有需要清除；-定期清洗进样器和检测器。
2.清除堵塞-定期检查进样器的注射针是否堵塞，必要时用洗涤溶液清洗；-定期检查流动相管道是否堵塞，必要时进行冲洗。
3.校准和调试-每个月进行一次浓度检测器的灵敏度校准和波长校准；-每次使用前进行流动相泵的流量校准；-定期校准流量检测器。
4.零部件更换-定期更换进样针，一般每6个月更换一次；-定期更换柱以及滤膜。
5.定期检查-检查仪器是否有松动或异响现象；-检查仪器的电源线和各种连线是否完好；-检查压力表和流速表的读数是否正常。
备注：该仪器的维护和保养工作由实验室技术人员负责，定期维护记录由实验室主管负责保留和管理。
日期：2024年7月15日仪器名称：生物安全柜编号：BSC-001保养和维护记录：1.清洁工作-使用清洁布蘸取消毒液，擦拭工作台面和操作窗口；-使用吸尘器清理过滤器和内部灯具；-定期消毒垃圾桶。
2.滤芯更换-每6个月更换一次初效过滤器和高效过滤器；-每12个月更换一次超高效过滤器。
3.检查-定期检查电源线和插座是否完好，如有损坏及时更换；-检查压力表和气密性指示器，确保正常工作；-检查紫外灯和工作台灯是否正常发光。
备注：该生物安全柜由实验室安全管理员负责维护和保养，定期维护记录由实验室主管保留和管理。
通过对仪器设备的维护保养，可以确保其性能稳定，工作效率高，并延长仪器的使用寿命，从而减少因故障和损耗导致的经济损失。
同时，定期的维护保养记录也有助于实验室对仪器设备的管理和绩效评估，为后续的采购和更新提供依据。
因此，实验室仪器设备的维护保养工作是非常重要的，需要全体实验室成员的共同努力和关注。
高效液相色谱仪安全操作及保养规程
高效液相色谱仪安全操作及保养规程前言高效液相色谱仪（HPLC）是一种用于化学分析和检测的重要工具。
为了确保高效液相色谱仪的安全运行和最佳性能，需要遵守一系列的安全操作和保养规程。
本文档提供了详细的操作和保养步骤，以协助用户正确地使用和保护高效液相色谱仪。
安全操作规程操作前1.确保操作人员已经接受了高效液相色谱仪的操作培训并掌握了正确的操作方法。
2.在操作前检查仪器的电源是否正常，仪器的机械结构是否稳定，是否有明显损坏或松动的部件。
3.确保试剂和溶剂的选择和准备符合分析要求，并遵守相关安全规程，如使用防护手套和护目镜。
4.加载样品前必须确定样品的性质和浓度，并根据需要适当稀释和过滤。
操作时1.操作人员应当始终注意安全。
在操作过程中避免直接接触样品和溶剂，避免口误和吞咽样品或溶剂。
2.操作过程中，若发现异常状况，如机器停滞或跑偏、压力急剧增高等，应立即停止操作并检查仪器或相关部件。
3.调整某些参数时，如流速、温度、压力等，应尽量保持小幅度调整，避免快速快速调整。
4.操作结束后，必须关闭仪器并注销相关操作，清理工作区域和操作台面，清洗使用的管道、器皿和附件，并将物品归位。
操作恢复1.若长时间未使用高效液相色谱仪，请在使用前仔细检查机器各部位是否存在异常。
2.重新启动仪器时，请按照操作手册上的步骤重新进行仪器的初始化和调试。
废物处理高效液相色谱仪所使用的溶剂和其他化学废物，必须按照当地的环保规定进行处理和处置。
在处理前应该咨询相关专业人员。
保养规程日常检查和保养1.每天开始操作前，检查仪器的所有零部件是否齐全，零部件是否完整，清洁状态如何。
2.操作后，每天对样品室、管路等部位进行清洁，确保无污物堆积和管路没有堵塞现象。
3.每周对色谱柱进行洗涤和清洁，可以使用去离子水和乙醇为主要清洗溶剂，以确保柱子的性能和使用寿命。
4.定期对机械结构和电子部件进行检查和保养，保证设备运行的稳定性。
液路检查和保养1.定期检查操作中常温箱的工作状态和温度。
HPLC的正确使用和科学保养
HPLC的正确使用和科学保养1、保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。
2、定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。
3、使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤）。
对流动相一定要脱气。
4、每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
5、珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。
如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。
6、采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。
如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰形变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
7、避免超负荷进样，对250×4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100μg。
在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措之一。
8、经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。
反相柱用异丙醇--二氯甲烷（1：1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。
9、做完试验，及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀，尤其是对过夜的柱子和进样阀，一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液，再用甲醇或乙腈冲洗，并保存在乙腈中。
正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。
10、以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。
11、尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。
12、对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。
保养维护高效液相色谱仪的要点
保养维护高效液相色谱仪的要点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量分析仪器。
为了保证其正常运行和延长使用寿命，需要进行定期的保养和维护。
下面是保养维护高效液相色谱仪的主要要点：1.保持色谱仪周围环境清洁干燥：色谱仪应该放置在无尘、无水、无振动、无干扰的环境下。
养成定期清理仪器外壳和工作台面的习惯，防止灰尘和异物进入仪器内部。
2.定期检查和更换耗材：液相色谱柱是色谱仪的核心部件，需要定期检查柱子的状况，包括柱液的流量、背压、峰形等参数。
当出现异常时，需要及时检查和更换柱子。
此外，溶剂瓶、垫片、接头和密封件等耗材也需要定期检查和更换。
3.保持良好的进样系统：进样系统是色谱仪样品进入柱子的关键部件。
需要注意致样器、进样针和进样管的清洁和灵敏度。
定期检查进样系统的各个部件，保证样品进入柱子的准确性和稳定性。
4.注意溶剂和流速的选择：溶剂和流速的选择对色谱分离的质量和分析结果有很大的影响。
应该选择优质的溶剂，在使用过程中定期更换，并注意保持合理的流速。
在使用有机溶剂时，要避免过高浓度的有机溶剂对仪器造成损害。
5.定期校准和质控：定期校准色谱仪可以保证分析结果的准确性和可靠性。
常见的校准包括柱液流量校准、波长和检测灵敏度的校准等。
此外，在样品分析过程中应该加入合适的质控标准品，并定期检查质控品的回收率和重复性。
6.注意样品的准备和处理：样品的准备和处理对HPLC分析结果有直接影响。
样品准备过程中应注意去除杂质和颗粒，避免对色谱柱和检测器造成污染或损坏。
对有机样品，要避免过高浓度的有机溶剂对进样系统造成损害。
7.定期维护仪器：除了日常保养，还应定期对仪器进行维护和检修。
定期检查和更换仪器中的各种装置、阀门、泵、检测器等关键部件。
根据仪器厂家的推荐，进行润滑和清洗等维护工作，保持仪器的正常运行。
8.进行严格的记录和文档管理：在使用和维护过程中应该做好记录和文档管理。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
HPLC 仪器操作与维护
流动相脱气的方法
加热
— 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成的 变化
抽真空
— 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波振荡
— 简单，但效果不够理想；超声时间不要太长(1分钟左右即可)
通惰性气体（一般用氦气）
— 可保持在线连续脱气，多用于低压梯度
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色谱泵及系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液 30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀 清洗步骤如下: —取下色谱柱，用两通(Union)连接进样器和检测器 —用纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%) —用30%磷酸清洗液洗系统(1ml/min流速)45分钟 — (四元泵的A,B,C,D四路各为25%) —换成清水洗至出口水pH显中性 —用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
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色谱泵的维护保养
流动相要过滤 常用缓冲液时，停泵前要用水清洗泵头，并用水冲洗柱塞 杆清洗孔 关闭排液阀时，不要太用力拧紧，以不渗液为准 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要 用一种中间溶剂过渡 色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯甲醇充满 泵头及管路,并保存在纯甲醇中
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流动相的脱气
流动相脱气的目的 —使色谱泵的输液准确 —输液量均匀准确，并且脉动减小 —保留时间及色谱峰面积的重现性提高 —提高检测的性能 —防止气泡引起的尖峰 —基线稳定，信噪比增加 —溶剂的紫外吸收本底降低 —保护色谱柱 —减少死体积 —防止填料的氧化
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测等领域。
为了确保HPLC仪器的正常运行和分析结果的准确性，保养和维护工作是至关重要的。
下面将从各个方面浅谈HPLC仪器的保养与维护。
一、日常清洁HPLC仪器在长时间使用后，会有一些污垢积聚在各个部件上，为了保证正常运行，需要经常进行仪器的清洁工作。
需要对仪器外壳进行清洁，可用棉布蘸取少量的乙醇进行擦拭，注意不要使用含有颗粒的清洁剂，以免划伤表面。
对移液器、注射器等部件进行清洁，可以用纯水或乙醇进行清洗，并用吹气枪将部件表面的水分吹干。
需对进样针、柱和检测器进行清洁，确保各个部件的表面保持干净。
二、流路清洗HPLC仪器的流路是非常关键的部件，需要经常进行清洗以保证分析结果的准确性。
需要使用纯水对流路进行冲洗，然后使用一定比例的甲醇和水混合液进行清洗，最后再用纯水进行冲洗，以确保流路内没有残留的有机溶剂。
还需要注意定期更换流路上的过滤膜和密封圈，确保流路畅通，避免堵塞和泄漏的情况发生。
三、柱的保养HPLC柱是色谱分析的核心部件，需要经常进行保养和维护以确保分析结果的准确性。
需要在柱使用前对其进行条件耐用性测试，以确定柱的性能是否符合要求。
在使用过程中，要注意避免超压和超温，避免对柱产生损害。
需要及时更换柱前的过滤器，避免杂质进入柱内影响分析结果。
需要注意柱的存放条件，避免受到光照和高温的影响，导致柱的性能降低。
四、检测器的调试HPLC仪器的检测器对分析结果的准确性有着重要影响，需要定期进行调试和校准工作。
需要对检测器进行零点漂移的校准，以确保检测器读数的准确性。
需要对检测器的灵敏度进行调节，以确保检测器对样品的响应能力。
需要注意避免检测器的震动和碰撞，避免损坏检测器内部的光学组件。
五、维护记录对HPLC仪器进行日常保养和维护工作时，需要及时记录下关键数据和操作情况，以便日后进行分析和查找问题。
高效液相色谱仪器的维护与保养—HPLC的维护
图77—04—01 手动进样器的清洗示意图 1-阀清洗接头2—注射器3—进样口
一、气相色谱仪的维护保养
2．经常使用湿润的软布擦拭进样器，特别是进样口周围。 3．若观察到进样后从进样口或排空管有液体冒出、长期压力不稳定、峰面积不稳定、 保留时间不稳定和残留严重等现象，表明手动进样器的密封圈泄漏，应进行更换。
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色谱柱的日常维护和保养
四、色谱柱的日常维护和保养
色谱柱不能碰撞、强烈震动和弯曲；连接上色谱系统前，管路和阀件一定要清洗干净；流动 相和样液要进行处理；每天分析工作完成后要用适当的溶剂冲洗柱子。 当色谱柱长时间不使用时，存放前，应在其柱内充满溶剂，两端封死。反相色谱柱一般使
用乙腈或甲醇保存，正相色谱柱应使用有机相保存。注意一定不能用水保存，因为水易长 菌，污染色谱柱。 可在色谱柱前添加预柱，起到保护色谱柱的作用。
《色谱分析及操作》
高效液相色谱仪的维护与保养
CONTENT
01 手动进样器的日常维护和保养 02 贮液器的日常维护和保养 03 泵的日常维护和保养 04 色谱柱的日常维护和保养 05 小结 06 思考题
学习目标 TARGET
完成了本单元的学习之后，能够了解 高效液相色谱仪的维护与保养知识。
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贮液器的日常维护和保养
二、贮液器的日常维护和保养
1．流动相和样液 流动相和样液使用前必须过滤，否则溶剂和样品中细小的颗粒会堵塞色谱柱、堵塞和 磨损进样阀或磨损泵内的活塞和活塞杆。不能使用存放多日的蒸馏水，因为易长菌， 进入色谱系统后会造成污染。流动相在使用前应进行脱气处理，避免增加基线的噪音， 导致灵敏度下降。
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泵的日常维护和保养
三、泵的日常维护和保养
定期检查排液阀的滤芯。检查方法为拧开排液阀，以水作 流动相，流速控制在5mL/min，若压力大于10bar，则须立 即更换（如图77—04—02）。操作方法是用工具拧下排液 阀，用镊子将脏的滤芯夹出，换上新滤芯，复原，即可。