常用荧光染料探针列表.doc
常见细胞核荧光染料
细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。
透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。
EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。
DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。
DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。
这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。
与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。
RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。
RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。
RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。
不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。
EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。
荧光检测方法
荧光检测方法荧光检测是一种常用的分析方法，通过检测样品发出的荧光信号来获取样品的信息。
荧光检测方法广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍荧光检测的原理、常用的荧光探针和荧光检测技术。
一、荧光检测原理。
荧光检测原理是基于样品在受激光照射后发出荧光信号的特性。
当样品受到特定波长的激发光照射后，样品中的荧光探针会吸收光能并发生激发态跃迁，随后再释放出荧光光子。
荧光光子的强度和波长可以提供样品的信息，如浓度、纯度、活性等。
荧光检测原理简单、灵敏度高，因此被广泛应用于科学研究和工业生产中。
二、常用的荧光探针。
1. 荧光染料。
荧光染料是最常用的荧光探针之一，它可以与样品中的特定分子结合并发出荧光信号。
荧光染料具有多种颜色和波长的荧光光子，适用于不同样品的检测需求。
常见的荧光染料有荧光素、罗丹明、FITC等。
2. 荧光蛋白。
荧光蛋白是一类来源于生物体的荧光探针，它可以在特定条件下发出荧光信号。
荧光蛋白具有天然的荧光特性，被广泛用于细胞标记、蛋白质定位、蛋白质相互作用等研究领域。
3. 量子点。
量子点是一种新型的荧光探针，具有窄的荧光发射峰和宽的激发光谱，可以同时发出多种颜色的荧光信号。
量子点具有优异的光学性能和化学稳定性，适用于多种样品的荧光检测。
三、常用的荧光检测技术。
1. 荧光光谱法。
荧光光谱法是最常用的荧光检测技术之一，通过记录样品在不同激发波长下的荧光发射光谱，可以获取样品的荧光特性和信息。
荧光光谱法具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的优点，被广泛应用于生物医学、环境监测等领域。
2. 荧光显微镜。
荧光显微镜是一种利用荧光探针标记样品后进行观察和分析的技术。
荧光显微镜可以实现对生物细胞、组织的高分辨率成像，被广泛用于生物医学研究和临床诊断。
3. 荧光免疫分析法。
荧光免疫分析法是一种利用荧光标记的抗体或抗原对特定分子进行检测的技术。
荧光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性和高通量的优点，被广泛应用于临床诊断和生物医学研究中。
荧光染料参数表
荧光染料参数表荧光染料参数表（下图举例）能够让您查看某一选定荧光染料的性能参数，并确定其是否适合于您的实验，以及最适合的实验方法。
参数表将提供染料关键特性的介绍——更为详细的资料可到相应产品页面查看。
•初始亮度是指示荧光染料的相对亮度，该值由摩尔消光系数和量子产率得出，这两个参数对于每一单个荧光染料来说都是特异性的。
具有较高初始亮度的荧光染料适用于检测较低丰度的靶标。
•缓冲液中的光稳定性是初始荧光强度在经过30秒连续照明后残留比率的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察置于磷酸盐缓冲液中的样本获得。
缓冲体系中光稳定性较高的染料将更适合于活细胞成像和检测等相关应用。
•抗淬灭剂中的光稳定性是初始荧光强度在经历30秒连续照明后残留强度的相对百分比，该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下，通过观察ProLong® Gold或SlowFade® Gold抗淬灭剂中的样本获得。
抗淬灭试剂中光稳定性较高的染料更适合于固定细胞样本的成像和检测实验。
•染色指数是一个归一化数值，可用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光亮度的差异；该值通过使用阳性区域的平均荧光强度（MFI）减去阴性区域的平均荧光强度得到的差值，再除以两倍的阴性区域标准差获得。
•激光束表示流式细胞检测中常用的激光束•通用检测通道表示能够生成最佳成像结果的标准显微镜滤光片设置•最大激发波长表示获得峰值的激发波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）•最大发射波长表示获得峰值的发射波长（参见荧光光谱查看器以了解完整光谱）荧光染料参数表样例初始亮度摘要部分突出强调荧光染料的关键属性及其典型应用和多通道兼容性。
缓冲液中的光稳定性抗淬灭剂中的光稳定性92 488 FITC 490 525染色指数激光束通用检测通道最大激发波长最大发射波长荧光光谱查看器。
DiI (细胞膜红色荧光探针)说明书
DiI (细胞膜红色荧光探针)产品编号 产品名称包装 C1036DiI (细胞膜红色荧光探针)10mg产品简介：DiI 即DiIC 18(3)，全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate ，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。
DiI 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。
DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。
其中，最大激发波长为549nm ，最大发射波长为565nm 。
DiI 的分子式为C 59H 97ClN 2O 4，分子量为933.88，CAS number 为41085-99-8。
DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和DMF ，其中在DMSO 中的溶解度大于10mg/ml 。
发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
DiI 被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。
DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。
被DiI 标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。
DiI 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day ，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day 。
DiI 除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时，DiI 的常用浓度为1-25µM ，最常用的浓度为5-10µM 。
免疫分析中常用的荧光染料与标记染色
（⼀）免疫荧光标记最常⽤的荧光染料
最常⽤的染料有FITC和藻红蛋⽩类（PE）及罗丹明等。
FITC（异硫氰酸荧光素）：绿⾊530nm
PE（藻红蛋⽩）：橙黄⾊575nm
PerCP（多甲藻黄素叶绿素蛋⽩）：深红⾊675nm
PI（碘化丙啶）：橙红⾊620nm
488nm波长的氩离⼦激光激发
APC（别藻青蛋⽩）：红⾊660nm
630nm波长的氦氖激光或红⾊⼆极管激光激发
（⼆）免疫荧光标记
常⽤的标记染⾊为直接免疫荧光染⾊和间接免疫荧光染⾊。
在进⾏双参数或多参数分析时，常常需要进⾏荧光抗体的组合标记，⽬前已经有双⾊、三⾊以及四⾊标记。
（三）细胞⾃发荧光
⾃发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会⼲扰对特异荧光信号的分辨和测量。
在免疫细胞化学等测量中，对于结合⽔平不⾼的荧光抗体来说，如何提⾼信噪⽐是个关键。
⼀般说来，细胞成分中能够产⽣⾃发荧光的分⼦（例如核黄素、细胞⾊素等）的含量越⾼，⾃发荧光越强；培养细胞中死细胞／活细胞⽐例越⾼，⾃发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的⽐例越⾼，⾃发荧光越强。
常见的小分子荧光探针种类
常见的小分子荧光探针种类1.引言1.1 概述小分子荧光探针是一类被广泛应用于生物领域的化学工具，通过其具有的荧光性质，可以用于生物成像、药物传递、疾病诊断等方面。
小分子荧光探针具有分子结构简单、稳定性好、探测灵敏度高等特点，在生物学研究中起着重要的作用。
小分子荧光探针的种类繁多，根据其不同的结构和功能特点，可以分为许多不同的类别。
常见的小分子荧光探针包括有机荧光探针、金属配合物荧光探针、聚合物荧光探针等。
有机荧光探针是指由有机化合物构成的荧光探针，其分子结构多样，可以通过调整结构来实现特定的探测目标。
常见的有机荧光探针包括荧光染料、荧光蛋白等。
荧光染料具有较强的荧光强度和良好的化学稳定性，可以用于细胞成像、生物传感等领域。
荧光蛋白是一类来源于特定生物体的蛋白质，其具有自身天然的荧光性质，可以通过基因工程技术进行改造和调整，广泛应用于生物研究中。
金属配合物荧光探针是指由金属离子与配体形成的荧光探针，其具有较强的荧光性能和较长的寿命。
金属配合物荧光探针具有选择性较高的特点，可以用于特定金属离子的探测和诊断。
常见的金属配合物荧光探针包括铜离子、锌离子、铁离子等的配合物。
聚合物荧光探针是指由高分子聚合物构成的荧光探针，其具有较好的溶解性和稳定性。
聚合物荧光探针可以通过调整聚合物的结构和链长来实现特定的探测需求。
常见的聚合物荧光探针包括聚合物分子探针、聚合物纳米探针等。
总之，常见的小分子荧光探针种类繁多，具有不同的结构和功能特点，可以根据具体的研究需求选择适合的荧光探针进行应用。
这些小分子荧光探针为生物学研究提供了有力的工具，有助于深入理解生命的基本过程和疾病的发生机制。
未来，随着技术的不断发展和突破，相信小分子荧光探针在生物领域的应用会得到更广泛的推广和应用。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要围绕"常见的小分子荧光探针种类"展开讨论。
文章分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将进行概述、文章结构和目的的介绍。
流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有多种,他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也各异,选择荧光染料时必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长(如氩离子气体激光管,它的发射光波488ηm,氦氖离子气体激光管发射光波长633ηm）。
488ηm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE （藻红蛋白）、PI（碘化丙啶）、CY5（化青素）、preCP(叶绿素蛋白)、ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
他们的激发光和发射光波长分别是：
激发光波长（ηm）发射光峰值（ηm）
FITC 488 525（绿）
PE 488 575（橙红）
PI 488 630（橙红）
ECD 488 610（红）
CY5 488 675（深红）
PreCP 488 675（深红。
常用荧光探针小结
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视频：The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation
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三、异硫氰酸罗丹明（TMRITC）
四甲基异硫氰酸罗达明，它是一种紫红色粉末，较稳定。其最 大吸收光谱为550nm，最大发射光谱620nm，呈橙红色荧光，与FITC 的黄绿色荧光对比清晰，与蛋白质结合方式同TITC。它可用于双标记 示踪研究。
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Endothelial cells under the microscope. Nuclei are stained blue with DAPI, microtubles are marked green by an antibody and actin filaments are labelled red with phalloidin.
性状多年不变，室温下也能保存两年以上。异构体I、II均 能与蛋白质良好结合，但异构体I的荧光效率更高，与蛋白 质的结合也更稳定。 FITC的最大吸收光谱为490----495纳 米，最大发射光谱为520-530nm，呈明亮的黄绿色荧光。 FITC含有异硫氰基 ， 在碱性条件下能与IgG的自由氨基 （主要是赖氨酸的-氨基）形成荧光抗体结合物。
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五、溴化乙锭
详见第四节“应用于核酸检测的荧光探针技术”
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六、DAPI （ 4‘,6-diamidino-2-phenylindole）
DAPI was first synthesised in as part of a search for drugs to treat trypanosomiasis. Although it was unsuccessful as a drug, further investigation indicated it bound strongly to DNA and became more fluorescent when bound.
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这是来自于 Salk 的一个比较全的荧光染料列表，这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术，汇集了各种荧光染料的特性，方便大家查找。
可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的荧光染料用于实验。
请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同，他们只是一个与实际颜色的近似值。
染料名称Excitation(n Emission(分子量备注信息m) nm)Reactive and conjugated probesHydroxycoumarin 325 386 331 Succinimidyl ester Aminocoumarin 350 445 330 Succinimidyl ester Methoxycoumarin 360 410 317 Succinimidyl ester Cascade Blue (375);401 423 596 Hydrazide Pacific Blue 403 455 406 Maleimide Pacific Orange 403 551Lucifer yellow 425 528NBD 466 539 294 NBD-XR-Phycoerythrin (PE) 480;565 578 240 kPE-Cy5 conjugates 480;565;650 670 aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum RedPE-Cy7 conjugates 480;565;743 767Red 613 480;565 613 PE-Texas RedPerCP 490 675 Peridinin chlorphyll protein TruRed 490,675 695 conjugateFluorX 494 520 587 GE Healthcare Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512TRITC 547 572 444 TRITCX-Rhodamine 570 576 548 XRITCLissamine Rhodamine570 590BTexas Red 589 615 625 Sulfonyl chloride Allophycocyanin (APC)650 660 104 kAPC-Cy7 conjugates 650;755 767 PharRedAlexa Fluor 系列荧光染料Alexa Fluor 350 343 442 410Alexa Fluor 405 401 421 1028Alexa Fluor 430 434 540 702Alexa Fluor 488 499 519 643 QYAlexa Fluor 500 503 525 700Alexa Fluor 514 517 542 714Alexa Fluor 532 530 555 724 QYAlexa Fluor 546 561 572 1079 QYAlexa Fluor 555 553 568 1250 QYAlexa Fluor 568 579 603 792 QYAlexa Fluor 594 591 618 820 QYAlexa Fluor 610 610 629 1285Alexa Fluor 633 632 648 1200Alexa Fluor 647 652 668 1300 QYAlexa Fluor 660 663 691 1100Alexa Fluor 680 680 702 1150Alexa Fluor 700 696 719 1400Alexa Fluor 750 752 776 1300Alexa Fluor 790 782 804 1750Cy 系列荧光染料Cy2 489 506 714 QYCy3 (512);550 570;(615)767 QYCy3B 558 572;(620)658 QY581 594;(640)1102 QYCy5 (625);650 670 792 QY675 694 1128 QYCy7 743 767 818 QY核酸相关探针染料Hoechst 33342 343 483 616 AT-selectiveDAPI 345 455 AT-selectiveHoechst 33258 345 478 624 AT-selectiveSYTOX Blue 431 480 ~400 DNAChromomycin A3 445 575 CG-selective Mithramycin 445 575YOYO-1 491 509 1271Ethidium Bromide 493 620 394Acridine Orange 503 530/640 DNA/RNASYTOX Green 504 523 ~600 DNAVital stain, TOTO: Cyanine TOTO-1, TO-PRO-1 509 533 DimerTO-PRO: Cyanine Monomer Thiazole Orange 510 530Propidium Iodide (PI) 536 617LDS 751 543;590 712;607 472 DNA (543ex/712em), RNA (590ex/607em)7-AAD 546 647 7-aminoactinomycin D, CG-selectiveSYTOX Orange 547 570 ~500 DNA TOTO-3, TO-PRO-3 642 661DRAQ5 647 681,697 413 usable excitation down to 488细胞功能探针Indo-1 361/330 490/405 1010 AM ester. Low/High Ca++, Fluo-3 506 526 855 AM ester. pH > 6DCFH 505 535 529 2'7'Dichorodihydrofluoresce in, oxidized form Dihydrorhodamine 123,DHR 505 534 346 oxidized form,light catalyzes oxidation SNARF 548/579 587/635 pH 6/9荧光蛋白QY BR PSY66H 360 442Y66F 360 508EBFP 380 440 monome rEBFP2 383 448 20 monome rAzurite 383 447 15 monome rGFPuv 385 508T-Sapphire 399 511 26 25 weak dimerCerulean 433 475 27 36 weak dimermCFP 433 475 13 64 monome rECFP 434 477 3CyPet 435 477 18 59 weak dimerY66W 436 485mKeima-Red 440 620 3 monome rTagCFP 458 480 29 dimer AmCyan1 458 489 29 tetramer mTFP1 462 492 54 dimerS65A 471 504Midoriishi Cyan 472 495 25 dimer Wild Type GFP 396,475 508 26kS65C 479 507TurboGFP 482 502 26 k 37 dimerTagGFP 482 505 34 monome rS65L 484 510weakEmerald 487 509 39 dimer; (Invitroge n)S65T 488 511EGFP 488 507 26k 34 174 weak dimerAzami Green 492 505 41 monome rZsGreen1 493 505 105k 40 tetramerTagYFP 508 524 47 monome rEYFP 514 527 26k 51 60 weak dimerTopaz 514 527 57 monome rVenus 515 528 53 15 weak dimermCitrine 516 529 59 49 monome rYPet 517 530 80 49 weak dimerTurboYFP 525 538 26 k dimer ZsYellow1 529 539 13 tetramerKusabira Orange 548 559 31 monome rmOrange 548 562 49 9 monome rmKO 548 559 31 122 monomer TurboRFP 553 574 26 k 62 dimertdTomato 554 581 95 98 tandem dimerTagRFP 555 584 50 monome rDsRed monomer 556 586 ~28k 16 monomer DsRed2 ("RFP") 563 582 ~110k 24mStrawberry 574 596 26 15 monome rTurboFP602 574 602 26 k 26 dimer AsRed2 576 592 ~110k 13 tetramermRFP1 584 607 ~30k monome rJ-Red 584 610 13 dimermCherry 587 610 16 96 monome rHcRed1 588 618 ~52k dimer Katusha 588 635 23 dimermKate (TagFP635) 588 635 15 monome rTurboFP635 588 635 26 k 22 dimer mPlum 590 649 53monomer; faster mRaspberry 598 625 13 photobleach thanmPlum 其他探针Monochlorobimane 380 461 226 Glutathione probe Calcein 496 517 623 pH > 5Ex: Peak excitation wavelength (nm)Em: Peak emission wavelength (nm)QY: Quantum yieldBR: Brightness; Extinction coefficient * Quantum yield / 1000PS: Photostability; time to 50% brightness (sec)光色波长λ(nm)代表波长红（ Red） 780 ～ 630700橙（ Orange） 630 ～ 600620黄（ Yellow ） 600 ～ 570580绿（ Green） 570 ～ 500550青（ Cyan） 500～ 470500蓝（ Blue） 470～ 420470紫（ Violet ） 420～ 380420。