SNP技术
snp原理
snp原理
SNP（Single Nucleotide Polymorphism，单核苷酸多态性）是指在基因组中，一个单个核苷酸的改变而导致的遗传变异。
它是人类基因组中最常见的遗传变异形式，约占所有遗传变异的90%。
SNP的形成可以由DNA复制错误、环境因素、突变等多种原因引起。
在人类基因组中，SNP通常被广泛分布并遵循一个特定的模式。
SNP的检测可以通过多种方法进行，例如DNA测序技术。
在SNP分析中，通常会选择一小段与某个基因或疾病相关的DNA序列进行测序，然后比较不同样本之间的差异。
如果在比较样本之间发现了SNP，就可以推断某个基因组中的SNP 可能与特定的性状、疾病或药物反应相关。
SNP的研究对于了解基因组的差异、个体间的遗传变异以及疾病的发生机制都非常重要。
通过大规模SNP分析，可以发现某些SNP与特定疾病的易感性之间存在关联，从而帮助研究人员更好地了解疾病的遗传基础。
此外，SNP也可以用于个体基因组的鉴定和个性化医疗的发展。
总的来说，SNP是一种常见的遗传变异形式，可以通过多种方法进行检测。
它在基因组研究中具有重要意义，有助于揭示基因与性状、疾病、药物反应等之间的关系。
SNP技术及发展和应用
• SNP技术概述 • SNP技术的分类 • SNP技术的发展趋势 • SNP技术在生物科学研究中的应用
• SNP技术在医学诊断中的应用 • SNP技术在农业科学研究中的应用
01
SNP技术概述
定义与特点
定义
SNP，即单核苷酸多态性，是指在基 因组水平上由单个核苷酸的变异所引 起的DNA序列的遗传变异。
特点
SNP具有普遍性、稳定性、遗传性等 特点，是遗传学和基因组学研究中的 重要遗传标记。
SNP技术的历史与发展
起源
20世纪70年代，科学家开始发现 SNP的存在。
发展历程
随着基因组学和生物信息学技术 的不断进步，SNP检测技术逐渐 发展成熟，并广泛应用于遗传学、 医学和生物信息学等领域。
未来展望
随着测序技术的不断革新，SNP 检测将更加快速、准确、自动化， 有望在更多领域发挥重要作用。
精准治疗
根据个体的基因变异情况，制定个性 化的治疗方案，提高治疗效果和减少 副作用。
04
SNP技术在生物科学研究中的 应用
遗传学研究
遗传疾病关联分析
通过SNP技术分析遗传疾病与基因变 异之间的关系，有助于深入了解疾病
的发病机制和遗传基础。
人类进化研究
利用SNP技术分析不同人群的基因变 异，揭示人类进化的历史和迁徙路线。
定义
单碱基替换型SNP（也称为二等位基因型SNP）是指 基因组中单个碱基的变异引起的基因型变化。
特点
这种类型的SNP通常只涉及一个碱基的替换，导致相 应氨基酸的改变，进而可能影响蛋白质的功能。
检测方法
通过直接测序或基于Taqman探针的SNP分型技术进 行检测。
插入或缺失型SNP
基因组学中的SNP分析
基因组学中的SNP分析SNP（Single Nucleotide Polymorphism）是指基因组中的单个核苷酸突变。
SNP分析是基因组学研究中的重要分析方法之一，为了更好地了解SNP分析在基因组学中的作用，我们需要从以下几个方面进行逐步的了解。
一、SNP的特征SNP是常见的继承性遗传变异，主要发生在基因组中7-10%的位置。
它具备许多有价值的特征，例如高度多态性、共有性基因性和容易鉴定性等。
SNP的多态性使其成为研究人类及其他物种遗传标记的优良素材。
SNP基于其出现的频率可以分为高频和低频。
高频SNP在人类人群中具有普遍性，低频SNP在某些群体中出现的频率很低。
SNP在基因组中的位置也非常有规律，即位于编码区、非编码区、隐形区，以及转录因子结合区等重要区域中。
二、SNP分析的方法SNP分析的方法根据分析的目的和数据场景不同，可以分为不同的方法。
常见的SNP分析技术包括测序分析、芯片分析和PCR分析等。
测序分析是快速发展的分析技术，包括全基因组测序和目标基因测序两种。
芯片分析是目前应用比较广泛的SNP分析技术，可快速、准确地进行大规模的SNP检测。
PCR分析适用于单个SNP的检测和测序后验证，具有快速、灵敏度高、操作简单等优点。
三、SNP分析的应用SNP分析在基因组学中的应用非常广泛，主要应用于以下几个方面：1、研究遗传多样性SNP在人群中的频率不同，可以用于描述人类、动植物的遗传多样性，推断人类或种群的出现时间及演化过程等。
2、研究遗传病理学SNP分析也可用于研究不同类型的疾病和病态的发生机制，便于快速准确地识别和分析疾病易感性基因。
3、研究药理学SNP分析也可以帮助研究药物代谢方面的基因，寻找药物作用机制、筛选新药等。
4、研究育种学SNP不仅可应用于人类、动植物的遗传多样性研究中，还可以帮助育种与遗传改良中研究重要基因资源。
四、SNP分析的未来SNP分析虽然已经在基因组学研究中得到了广泛的应用，但随着科技的不断进步，SNP分析的应用范围将会更广泛。
SNP检测原理和应用
SNP检测原理和应用SNP（单核苷酸多态性）是指在基因组中存在的单个核苷酸变异，也是造成个体之间遗传差异的主要形式之一、SNP检测原理是通过不同的技术手段检测基因组的SNP位点，并将不同个体之间的SNP变异与疾病、药物反应等进行关联分析，从而用于研究和预测人类复杂疾病的发生机制和个体化治疗。
SNP检测的主要技术包括基于凝胶电泳的限制片段长度多态性（RFLP）、聚合酶链反应（PCR）扩增测序、DNA芯片技术和基因测序等。
其中，RFLP是早期应用最广的技术，主要通过特定限制酶酶切目标DNA片段，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，根据不同基因型的片段长度差异进行分型和分析。
PCR扩增测序技术则通过特定引物扩增目标DNA片段，再通过测序技术获得具体的SNP位点信息。
DNA芯片技术则通过固相杂交将DNA片段与特定的SNP探针结合，然后通过荧光标记的信号检测技术获得SNP位点信息。
而基因测序技术则是目前应用最广泛和高通量的SNP检测技术，通过测序获得整个基因组的SNP信息。
SNP检测的应用非常广泛。
首先，SNP检测可用于研究人类复杂疾病的发病机制。
复杂疾病的发生不仅受到环境因素的影响，还与多个基因的相互作用有关。
通过SNP检测，可以发现与复杂疾病相关的SNP位点，并进一步研究这些位点与疾病的关联关系以及其在疾病发生发展过程中的作用。
这为疾病预防、治疗和个体化医疗提供了重要的依据。
其次，SNP检测可用于预测个体对药物的反应和副作用。
由于个体对药物的反应存在巨大的差异，因此通过SNP检测可以发现与药物代谢、药物作用靶点相关的SNP位点，并据此预测个体对药物的反应。
这样可以实现个体化的用药方案，提高药物疗效，减少副作用。
此外，SNP检测还可以用于亲子鉴定、法医学鉴定、种群遗传学研究、植物和动物遗传改良等领域。
例如，通过SNP检测可以判断是否为亲生子女，鉴定遗传疾病的患者或罪犯，追溯人类的遗传演化历程，以及选择适应环境的作物和动物品种。
SNP分型技术简介
原理
质谱法是一种基于质谱技术的SNP分型方法。通过对PCR扩增产物进行
质谱分析，可以准确地确定SNP位点的碱基类型。
02
优点
质谱法具有高分辨率、高准确性和无需荧光标记的优点。该方法可以检
测多种类型的SNP，包括单核苷酸变异、插入/缺失等。
03
缺点
质谱法需要使用昂贵的质谱仪器，且对样本的纯度和质量要求较高。此
优点
TaqMan探针法具有高灵敏度、高特异性和可定量分析的 优点。同时，该方法可以实现高通量SNP分型，适用于大 规模样本的筛查和研究。
缺点
TaqMan探针法需要使用特定的荧光标记探针，成本较高。 此外，对于某些复杂的SNP位点或多态性区域，可能需要 设计多个探针以覆盖所有可能的变异类型。
质谱法
01
实验对照
设置合适的实验对照，以验证实验结果的可 靠性和准确性。
重复实验
进行必要的重复实验，以确保结果的稳定性 和可重复性。
质量控制
在实验过程中实施严格的质量控制措施，包 括试剂、仪器和实验操作等方面。
数据分析流程和方法选择
数据预处理
对原始数据进行清洗、整理和标准化 处理，以便于后续分析。
统计分析
采用适当的统计方法对数据进行分析， 如描述性统计、假设检验和方差分析 等。
亲子关系鉴定
通过分析被鉴定人的SNP信息，可以确定亲子关系，为家庭纠纷、 遗产继承等问题提供解决方案。
法医物证分析
SNP分型技术可以用于法医物证的分析和鉴定，如血迹、毛发等生 物样本的基因分型，为刑事案件的侦破提供证据。
05
实验设计与数据分
析方法论述
实验设计原则及注意事项
样本选择
确保样本具有代表性，避免选择偏差，同时 考虑样本量和多样性。
snp技术
0.3
0.4
6
10
10
12
பைடு நூலகம்10
16
通量（Gb）
0.1
0.5
2
9
50
2
8
32
Solexa和SOLiD配对末端测序所需时间和产出是单末端的两倍，454的配对末端和单末端 差异在于建库方法，所需时间和测序量不变。
ABI SOLiD包含两张芯片，这里的数据是一张芯片的量。
特点：使用高效液相色谱检测SNPs具有检测效率高，便于自 动 化 的 优 点 ， 对 未 知 SNPs 的 准 确 率 可 达 95% 以 上 。 但 DHPLC检测对所用试剂和环境要求较高,容易产生误差, 不 能检测出纯合突变。
MassARRAY
• SNP分型的方法多种多样，MassARRAY分子量阵列技术 是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具，通过 引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDITOF质谱技术相 结合，实现基因分型检测。 • 基于MassARRAY® 分子量阵列平台的iPLEX GOLD技术 可以设计最高多达40重PCR反应和基因型检测，实验设计非 常灵活，分型结果准确性高。特别适合于对全基因组研究发 现的结果进行验证，或者是有限数量的研究位点已经确定的 情况。
特点：由于该方法简单快速，因而被广泛运用于未知基因突 变的检测。这种方法的弊端在于不能确定突变类型和具体 位置。
变性梯度凝胶电泳（DGGE）
• 原理：是利用长度相同的双链 DNA片段解链温 度不同的原理,通过梯度变性胶将 DNA片段分开 的电泳技术。
电泳开始时,DNA 在胶中的迁移速率仅与分 子大小有关, 而一旦DNA 泳动到某一点时, 即到 达该DNA 变性浓度位置时, 使得DNA 双链开始 分开,从而大大降低了迁移速率。当迁移阻力与电 场力平衡时, DNA 片段在凝胶中基本停止迁移。 由于不同的DNA 片段的碱基组成有差异, 使得其 变性条件产生差异, 从而在凝胶上形成不同的条 带。
SNP分析原理方法及其应用
SNP分析原理方法及其应用SNP（Single Nucleotide Polymorphism，单核苷酸多态性）是指在基因组中的一些位置上，不同个体之间存在的碱基差异，是常见的遗传变异形式之一、SNP分析是研究SNP在基因与表型之间关联性的方法，用于揭示SNP与遗传疾病、药物反应性等的关系。
本文将介绍SNP分析的原理、方法以及其应用。
一、SNP分析原理1.SNP检测技术：SNP检测技术包括基于DNA芯片的方法、测序技术、实时荧光PCR等。
其中，高通量测序技术是最常用的SNP检测方法，可以同时检测数千个SNP位点。
2.数据分析与统计学方法：通过SNP检测技术获得的数据可以分为基因型数据（AA、AB、BB等）和等位基因频率数据（A频率、B频率等）。
统计学方法常用的有卡方检验、线性回归、逻辑回归等，用于研究SNP与表型之间的关联性。
二、SNP分析方法1.关联分析：关联分析是研究SNP与表型之间关联性的基本方法。
常用的关联分析方法包括单基因型分析、单SNP分析、基因组关联分析（GWAS）等。
单基因型分析主要是比较单个SNP的基因型在表型不同组之间的差异；单SNP分析是研究单个SNP是否与表型相关；GWAS是通过分析数万个SNP与表型之间的关系来找到与表型相关的SNP。
2. 基因型预测：基因型预测是根据已有的SNP数据，通过统计模型来预测个体的基因型。
常用的基因型预测方法有HapMap、PLINK等。
3. 功能注释：功能注释是研究SNP位点的生物学功能，揭示SNP与基因功能、表达水平之间的关系。
常用的功能注释工具有Ensembl、RegulomeDB等。
三、SNP分析应用1.遗传疾病研究：SNP与遗传疾病之间存在着密切的关系。
通过SNP分析可以发现与遗传疾病相关的SNP位点，进一步揭示疾病发生的机制，为疾病的诊断、治疗提供依据。
2.药物反应性研究：个体对药物的反应性往往存在较大差异，这与个体的遗传背景密切相关。
SNP单核苷酸多态性检测技术
1定义：单核苷酸多态性（ single nucleotide polymorphism，SNP），主若是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所惹起的 DNA 序列多态性。
它是人类可遗传的变异中最常有的一种。
占全部已知多态性的 90%以上。
SNP 在人类基因组中宽泛存在，平均每 500～1000 个碱基对中就有1 个，预计其总数可达 300 万个甚至更多。
SNP 所表现的多态性只波及到单个碱基的变异，这类变异可由单个碱基的变换（transition）或颠换（transversion）所惹起，也可由碱基的插入或缺失所致。
但平时所说的 SNP 其实不包括后两种情况。
单核苷酸多态性（ SNP）是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括置换、颠换、缺失和插入。
所谓变换是指同型碱基之间的变换 ,如嘌呤与嘌呤 ( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的取代 ;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶 (A2T 、A2C 、C2G、G2T) 之间的取代。
从理论上来看每一个 SNP 位点都能够有 4 种不同的变异形式，但实质上发生的只有两种，即变换和颠换，两者之比为 2：1。
SNP 在 CG 序列上出现最为频频，而且多是C 变换为 T ，原因是 CG 中的 C 常为甲基化的，自觉地脱氨后即成为胸腺嘧啶。
一般而言， SNP 是指变异频率大于 1 %的单核苷酸变异。
在人类基因组中大体每 1000 个碱基就有一个 SNP ，人类基因组上的 SNP 总量大体是 3 ×106个。
依照排列组合原理 ,SNP 一共能够有 6 种取代情况,即 A/ G、 A/ T 、A/ C 、C/ G、C/ T 和 G/ T ,但事实上 ,变换的发生频率占多数 ,而且是 C2T 变换为主 ,其原因是 Cp G 的 C 是甲基化的 ,简单自觉脱氨基形成胸腺嘧啶T , Cp G 也所以变为突变热点。
理论上讲，SNP 既可能是二等位多态性，也可能是3 个或4 个等位多态性，但实质上，后两者特别少见，几乎能够忽略。
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二、双脱氧链终止法
DNA核苷酸序列分析
Sanger 双 脱 氧 链 终 止 法
三、DNA自动测序
采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA 序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四 种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反
应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，
通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光 分子，使之发射出四种不同波长荧光，检测器采 集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。
基因芯片(gene chip)
•DNA芯片(DNA chip) •cDNA芯片(cDNA chip) 是指将许多特定的DNA片段或cDNA片 段作为探针，有规律地紧密排列固定于单位
面积的支持物上 。
蛋白质芯片
蛋白质芯片(protein chip)
是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点 阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反
DNA自动测序结果举例
遗传修饰动物模型的建立 及应用
The Establishment and Application of Heredity-Modified Animal Model
一、转基因技术
转基因技术
采用基因转移技术使目的基因整合入受精 卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子 宫，使之发育成个体。 转基因——被导入的目的基因 转基因动物(transgenic animal)
一个SNP表示在基因组某个位点上一个核 苷酸的变化，可以是转换，也可是颠换。 具有转换型变异的SNP约占SNP总量的2/3， 这是因为胞嘧啶是人类基因组中最易发生 突变的位点，其中大多数是甲基化，可自 发脱氨基形成T。 位于染色体上某些区域的一组相关联的 SNP等位位点称为单倍型，相邻SNPs的等 位位点倾向于以一个整体遗传给后代。
应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统
对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。
3、Taqman技术
在PCR反应系统中加入2种不同荧光标记的探针，它们分别 与两个等位基因完全配对。探针的5’端和3’分别用特殊染料 标记，称为供体－受体染料对或引爆－猝灭染料对。 正常情况下，由于探针5’端荧光基团和3’端猝灭基团紧邻在 一起，供体所发荧光由于其光谱在空间上接近受体染料而被 猝灭，只有当两者分离时才能检测到供体所发出的荧光。 随着PCR的进行，与模板完全配对的探针逐步被TaqDNA聚 合酶的5－3外切活性所切割，致使探针5’端上的荧光基团与 3’端的猝灭基团分离，猝灭效应解除，供体的荧光基团被激 活； 而与模板不能完全配对的探针（代表另一种等位基因）不能 被有效切割，供体荧光基团依然被猝灭。通过相应仪器检测 荧光值的变化，便可进行基因分型。
——目的基因的受体动物
二、核转移技术
核转移技术
即动物整体克隆技术，将动物体细胞
核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，
使之发育成个体，即克隆(clone)。
三、基因剔除技术
基因剔除技术
也称基因靶向(gene targeting)灭活， 有目的去除动物体内某种基因的技术。
四、基因转Leabharlann 和基因剔除技术在 医学中的应用 目前很多机构都在检测SNP，做SNP图，建 立SNP与各种疾病之间的联系，如果得出 某些SNP或某些SNP的特定组合与特定疾病、 特定地区发病人群乃至个别患者有明显相 关性，疾病的诊断和治疗将可以更有针对 性，甚至做到个体化。
SNP的检测技术
传统的SNP检测方法可采用RFLP、PCR－单链 构象多态性(PCR-SSCP)、毛细管电泳及变性高 效液相色谱(DHPLC），但它们只能判断有无， 不能确切知道碱基类型。 基因分型（genotyping）是指利用数据库中已 有的SNP进行特定人群的序列和发生频率的研究， 主要包括基因芯片技术、taqman技术、分子信 标（molecular beacon）技术和焦磷酸测序法 （pyrosequencing）。
建立疾病动物模型
① 单基因决定疾病模型 基因剔除 获得性突变(gain-of-function mutation)
② 多基因决定疾病模型
单核苷酸多态性
single nucleotide polymorphism，SNP
概述
单核苷酸多态性（SNP） 是继限制性酶切片断长 度多态性（RFLP）之后的新一代多态性遗传标记， 自从1994年第一次被提出之后，它渐渐成为与分 子标记有关各领域研究的焦点。
根据分布位臵差异，SNP可分为三类： 基因编码区SNP（cSNP）、基因调控区 SNP（pSNP）、基因间随机非编码区SNP （rSNP） 大多数SNP位于基因组的非编码区，并且 有些位于基因组编码区的SNP所致编码序 列的改变并不影响翻译后的氨基酸序列， 这种SNP对个体的表现型是无影响的。
基因芯片
采用寡核苷酸原位合成或显微打印手段将大量的 DNA片段有序地固定排列在固相支持物如尼龙膜， 玻片等表面形成探针阵列，然后与标记的样品进 行杂交，通过对杂交信号的检测实现快速、高效、 并行的多态信息分析。利用基因芯片技术筛查 SNP是随着近几年芯片技术的快速发展、应用、 普及而建立的一种高度并行性、高通量、微型化 和自动化的检测手段，应用该方法可以寻找新的 SNP位点，并实现SNP位点在基因组中的精确定 位.
SNP的筛查方法
1、PCR-RFLP方法
利用限制性内切酶的酶切位点的特异性，用两种 或两种以上的限制性内切酶作用于同一DNA片断， 如果存在SNP位点，酶切片断的长度和数量则会 出现差异，根据电泳的结果就可以判断是否有 SNP位点以及出现的碱基替换的类型。该技术应 用的前提是SNP的位点必须含有该限制内切酶的 识别位点，它是SNP筛查中最经典的方法之一.
将这4种探针分别与四种模板链（中央位点 处分别为A、G、T、C）互补配对结合，未 结合时探针均不发荧光（通过荧光共振能 量传递作用），只有探针与模板链完全互 补配对时构象才会由U型变为直线型，从而 发出大量荧光，即便只存在一个碱基的错 配也不会发出荧光，可以通过荧光的颜色 不同，识别出该位点的碱基种类。
5、焦磷酸测序法
由4种酶催化同一反应体系中的酶级联反应， 包括DNA聚合酶、硫酸化酶、荧光素酶、 双磷酸酶，反应底物为APS和荧光素。反应 体系还包括待测序的DNA单链和测序引物。 在每一轮测序反应中，加入一种dNTP，如 该dNTP与模板配对，聚合酶就可以催化该 dNTP掺入到引物链中并释放焦磷酸基团 （ppi）。 掺入的dNTP和释放的焦磷酸的量相等。
从遗传影响，SNP分2种：同义SNP，SNP 所导致的编码序列改变并不影响其所翻译 的蛋白质的氨基酸序列，突变碱基与未突 变碱基的含义相同；非同义SNP，碱基序 列的改变可使蛋白质序列发生改变，影响 蛋白质的功能。这种改变常常是导致生物 性状改变的直接原因。
但有的SNP位于基因启动子中，导致基因转 录活性的上升或下降，造成该蛋白的表达 量上升或下降，进一步影响其生物学活性。 有些位于蛋白质编码区的SNP可能影响翻译 后关键的功能基团的氨基酸序列，从而影 响蛋白质的功能，最终导致对特定环境或 病因的反应敏感性变化。
强度，使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同
分子在不同位点断裂，从而获得一系列大小不同
的DNA片段，将这些片段经电泳分离。 分析前，用同位素标记DNA的5´末端，经放
射自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。
该反应的关键在于使DNA的4种核苷酸中，只有 1-2种发生特异性的化学切割反应： 专门用来对核苷酸作化学修饰，并打断磷酸二酯 键的化学试剂有硫酸二甲酯(dimethylsulphate)和肼 (hydrazine)。 硫酸二甲酯是碱性化学试剂，能使DNA链中鸟嘌 呤的N7和腺嘌呤的N6位发生甲基化，在中性PH 环境中就能使糖苷键发生水解，并引起DNA链的 断裂。在碱性条件下，肼能特异性切割C和T。如 果加入1 mol/L的NaCl，那么，只有C被特异性切 割。
4、分子信标（molecular beacons）法
分子信标 （molecular beacons）法由Tyagi 于1998 年建立。 构建4种分子U型探针，其核苷酸序列除中央位点 处分别为T、C、A、G外，其它完全相同，探针 的5′端分别用四种荧光物质标记:香豆素（发蓝 光）-T，荧光素（发绿光）-C，4甲基蕊香红（发 桔红色光）-A，德州红（发红光）-G，探针的3′ 端均结合4-安息香酸（DABCYL，可淬灭很多荧 光物质发出的荧光，可作为一种常用的淬灭物 质）。
SNP作为第三代遗传诊断标记，近几年被广泛应 用于生物以及医学研究的诸多领域。
单核苷酸多态性是指基因组DNA序列中由 于单个核苷酸（A，G，C，T）的突变而引 起多态性，它是一种单核苷酸的变异。
SNP是基因组中最简单、最常见的多态性形 式，具有很高的遗传稳定性。 SNP在人类的发生频率为1％，估计每300～ 1000bp就有一个SNP，人类大概携带300 万～1000万个SNPs。SNP在基因组中具有高 密度和高保守的特点。
二、双脱氧链终止法
Cambridge的F. Sanger在1977年发明用双脱氧链终 止法测定单链DNA的序列，其基本原理如下： ①DNA聚合酶能够用单链DNA作为模板，合成准 确的DNA互补链；②该酶能够用2'，3'--双脱氧核 苷三磷酸作底物并将其聚合到新生寡核苷酸链的 3'-末端，从而终止其延伸反应。在DNA测序反应 中，加入模板DNA，引物（特异性引物，如T7， T3，M13等），DNA聚合酶，dA，dT，dG，dC 和一种ddNTP。
核 酸 序 列 分 析
Nucleic Acid Sequence Analysis
核酸序列分析的基本原理
化学裂解法 (Maxam-Gillbert法)
DNA链的末端合成终止法 (sanger法)
一、化学裂解法(Maxam-Gillbert法)