纤维素酶活力的测定(sdu)

纤维素酶活力的测定

高熹 168615140001

一、实验原理

纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3、5-二销基水杨酸中销基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。

酶活力也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。

二、实验试剂

1、3、5—二销基水杨酸显色液：称取10克3、5-二销基水杨酸，溶入蒸馏水中，加入20克分析纯氢氧化钠，200克酒石酸钾钠，加水500毫升，升温溶解后，加入重蒸酚2克，无水亚硫酸钠0.5克。加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000毫升。存于棕色瓶中，放置一周后使用。

2、0.1摩尔PH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

3、0．5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。使用前摇匀。

4、标准葡萄糖溶液：称取干燥至恒重的葡萄糖100毫克，溶解后定容至100毫升，此溶液含葡萄糖1.00毫克/毫升。

三、实验器材

1、紫外可见分光光度计

2、胶头滴管

3、水浴锅

4、试管

5、移液管

四、实验步骤

1、标准曲线的绘制：分别吸取0.

2、0.4、0.6 、0.8.0、1.0毫升的葡萄糖于5支试管中,均用蒸馏水稀释至1毫升,加3.5-二销基水杨酸显色剂3毫升,在沸水浴中煮沸显色10分钟,冷却,加蒸馏水21毫升,摇匀.以1毫升蒸馏水代替糖作空白管,在550nm处比色。以光密度为纵坐标，以葡萄糖微克数为横坐标，绘出标准曲线。

2、样品的测定：取0.5%羧甲基纤维素钠溶液3毫升，酶液1毫升,于50度水浴中糖化30分钟,取出,立即于沸水浴中煮沸10分钟使酶失活,得糖化液。取糖化液１毫升，按制标准曲线时一样加显色液比色。同时以１毫升煮沸的酶液代替酶做一空白对照。

五、实验结果

0.467+0.463）/2=0.465

550

六、实验分析

则，当y=0.465时，x=0.67mg=670ug

酶活力单位=（100*670）/（30*1）=2233.3

每克酶活力单位=2233.3*1000=2233300

七、结果讨论

1、通过本次实验的测定，可以看出纤维素酶可以水解纤维素，生成葡萄糖等还原糖。

2、本实验中，一定要注意控制好时间，严格实验操作。样品管在水浴锅中50度保温30min后，应取出后立即用沸水浴10min，使酶失活，这一步一定要保证各样品管的反应时间相同。

3、要用保鲜膜封住管口，充分摇匀后再测其OD值。