甲基化测序word版
亚硫酸氢盐修饰后测序法
甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）甲基化是目前的研究热点，就我所做的一点工作并其中一点心得，与大家分享。
希望能够对大家有所帮助。
第一部分基因组DNA的提取。
这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。
DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。
此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。
因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。
使用两者的细节：1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml；2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。
否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。
两者均于-20度保存。
验证提取DNA的纯度的方法有二：1：紫外分光光度计计算OD比值；2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。
我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。
1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；3：42℃水浴30min；水浴期间配制：4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）5： 3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。
这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。
PH一定要准确为5.0。
加520ul至上述水浴后溶液中。
6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
dna甲基化测序原理
dna甲基化测序原理DNA甲基化测序原理DNA甲基化测序是一种用于检测DNA分子上甲基化修饰形式的方法。
甲基化是一种常见的DNA化学修饰形式，它可以影响基因的表达和细胞分化过程。
通过测序和分析DNA中的甲基化位点，科学家能够深入研究这种修饰对基因组功能的影响。
甲基化测序的原理基于DNA甲基化位点与未甲基化位点之间的区别。
在DNA分子中，甲基化通常发生在CpG位点（即DNA的Cytosine和Guanine碱基之间的连接点）。
未甲基化的CpG位点在测序中会被处理成TpG位点，而甲基化的CpG位点则保持不变。
甲基化测序通常通过两种方法进行：1. 亚硫酸转换法（Bisulfite Conversion）：该方法通过使用亚硫酸盐将未甲基化的CpG位点转换为尿嘧啶（T），而甲基化的CpG位点则保持不变。
经过亚硫酸转换后的DNA样本可以通过测序技术直接检测出甲基化位点和未甲基化位点的差异。
2. 甲基化特异性切割（Methylation-specific cleavage）：该方法使用甲基化特异性的限制性内切酶来识别甲基化的CpG位点，并在CpG位点附近切割DNA。
未甲基化的CpG位点由于没有甲基化修饰而不被切割。
通过测序这些切割的DNA片段，可以确定DNA分子上的甲基化位点的位置。
甲基化测序技术的发展为研究DNA甲基化在基因组中的分布和功能提供了重要的工具。
科学家可以利用这些技术研究不同细胞类型、病理状态以及环境因素对甲基化模式的影响，以及通过甲基化修饰调控基因表达的机制。
这些研究对于揭示基因组调控和疾病发生机制具有重要意义。
甲基化测序原理
甲基化测序原理甲基化测序是一种用于检测DNA甲基化的方法。
DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式，在多种生物过程中发挥重要作用，如基因表达调控、细胞分化、基因组稳定性维持等。
甲基化测序已经成为研究癌症、神经退行性疾病等疾病的重要手段之一。
甲基化测序原理是基于DNA甲基化后所形成的5-甲基脱氧胞嘧啶（5-mC）与未甲基化的脱氧胞嘧啶（dC）在化学和物理性质上的不同之处。
甲基化测序主要分为两种类型：全基因组甲基化测序和目标区域甲基化测序。
全基因组甲基化测序是指将整个基因组的所有区域进行甲基化测序，而目标区域甲基化测序是指仅测序已知某些基因的甲基化状态。
在全基因组甲基化测序中，首先需要将DNA样品进行加样性处理，以消除非特异性结果。
接着通过酶切将整个基因组的DNA进行裂解，然后使用甲基化特异性的抗体来富集甲基化的DNA片段。
然后，将富集后的DNA片段进行二代测序，以获得所有DNA片段的甲基化情况。
在目标区域甲基化测序中，采用PCR扩增或捕获技术，只测序目标区域的甲基化状态。
在PCR扩增的情况下，可以设计特定的引物，使PCR仅扩增目标区域的DNA片段。
在捕获技术中，通常使用探针来捕获目标区域的DNA，然后进行二代测序，以获得目标区域的甲基化情况。
通过这些甲基化测序技术，可以获得DNA甲基化的高分辨率图谱，并进一步了解甲基化在基因表达调控和基因组可塑性等方面的功能和作用。
甲基化测序技术还可以用于诊断和治疗风险评估，以及个体化医疗。
DNA甲基化是一种非常重要的表观遗传修饰方式，甲基化测序技术可以帮助我们更深入地理解甲基化在基因表达调控和基因组可塑性等方面的功能和作用。
随着技术的不断更新和完善，相信甲基化测序技术将会在疾病预防、基因治疗和精准医疗等领域发挥越来越重要的作用。
甲基化测序技术的应用癌症：DNA甲基化调节基因活性，已经成为许多癌症的发病机制之一。
甲基化测序技术已被广泛应用于癌症研究中，以识别癌症相关的甲基化变化，并作为新型癌症治疗的候选靶点。
甲基化测序
DNA甲基化检测实验一、重亚硫酸盐的测序法实验流程（BSP）（Bisulfite Genomic Sequence）原理：结合重亚硫酸盐的测序法是一种灵敏的能直接检测分析基因组DNA甲基化模式的方法。
重亚硫酸盐处理后，用针对改变后的DNA序列设计特异性引物并进行聚合酶链式反应（PCR）。
PCR产物中原先非甲基化的胞嘧啶位点被胸腺嘧啶所替代，而甲基化的胞嘧啶位点保持不变。
PCR产物克隆后进行测序。
通过这个方法能得到特定位点在各个基因组DNA 分子中的甲基化状态。
该方法特点是：•特异性高，它能够提供特异性很高的分析结果，这是所有其他研究甲基化的分析方法所不能比拟的；•灵敏度高，可以用于分析少于100个细胞的检测样品。
用微量的基因组DNA进行分析就能得到各个DNA分子精确的甲基化位点分布图。
重亚硫酸盐测序法技术实验流程A．DNA制备用DNA抽提试剂盒（Promega, cat. no. A1125）抽提组织，细胞培养物，石蜡包埋组织切片样品中的基因组DNA。
B．重亚硫酸盐处理C．DNA纯化用Wizard DNA clean-up kit (Promega, cat. no. A7280)纯化重亚硫酸盐处理后的DNA样品。
D．PCR扩增E．PCR产物琼脂糖电泳后回收纯化F．PCR产物连接到pMD19-T (Takara) 载体中克隆及测序。
G．用分析软件对各样本测序结果进行甲基化程度分析二、甲基化特异性的PCR实验流程（methylation-specific PCR, MSP）原理：甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。
重亚硫酸盐处理DNA后，基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。
随后进行引物特异性的PCR。
该方法引物设计是关键。
MSP中设计两对引物，即一对结合处理后的甲基化DNA链（引物对M），另一对结合处理后的非甲基化DNA链（引物对U）。
检测MSP扩增产物，如果用引物M能扩增出片段，则说明检测位点存在甲基化；若用引物U扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化（图3）。
(完整版)甲基化检测方法(亚硫酸氢盐修饰后测序法)
甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）第一部分基因组DNA的提取。
这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。
DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。
此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。
因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。
使用两者的细节：1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml；2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。
否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。
两者均于-20度保存。
验证提取DNA的纯度的方法有二：1：紫外分光光度计计算OD比值；2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。
我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。
第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。
1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；3：42℃水浴30min；水浴期间配制：4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）5：3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。
这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。
PH一定要准确为5.0。
加520ul至上述水浴后溶液中。
6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
8：50℃避光水浴16h。
一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am 以后收，时间上很合适。
甲基化-亚硫酸氢盐修饰后测序法
DNA 甲基化（英语：DNA methylation ）为DNA 化学修饰的一种形式，能在不改变DNA 序列的前提下，改变遗传表现。
为序列的前提下，改变遗传表现。
为外遗传编码外遗传编码（epigenetic code ）的一部分，是一种）的一部分，是一种外遗传外遗传机制。
DNA 甲基化过程会使甲基化过程会使甲基甲基添加到DNA 分子上，例如在分子上，例如在胞嘧啶胞嘧啶环的5'碳上：这种5'方向的DNA 甲基化方式可见于所有脊椎动物。
甲基化方式可见于所有脊椎动物。
在人类细胞内，大约有1%的DNA 碱基受到了受到了甲基化甲基化。
在成熟在成熟体细胞组织体细胞组织中，DNA 甲基化一般发生于CpG 双核苷酸（CpG dinucleotide ）部位；而非CpG 甲基化则于甲基化则于胚胎干细胞胚胎干细胞中较为常见[1] [2]。
植物体内胞嘧啶的甲基化则可分为对称的CpG （或CpNpG ），或是不对称的CpNpNp 形式（C 与G 是碱基；p 是磷酸根；N 指的是任意的核苷酸）。
指的是任意的核苷酸）。
特定胞嘧碇受甲基化的情形，可利用特定胞嘧碇受甲基化的情形，可利用亚硫酸盐定序亚硫酸盐定序（bisulfite sequencing ）方式测定。
DNA 甲基化可能使基因沉默化，进而使其失去功能。
此外，也有一些生物体内不存在DNA 甲基化作用。
甲基化作用。
参考文献1.Dodge, Jonathan E.; Bernard H. Ramsahoyeb, Z. Galen Woa, Masaki Okanoa, En Li. 1.Dodge, Jonathan E.; Bernard H. Ramsahoyeb, Z. Galen Woa, Masaki Okanoa, En Li. De novo methylation of MMLV provirus in embryonic stem cells: De novo methylation of MMLV provirus in embryonic stem cells: CpG versus non-CpG methylation . Science Direct. 2002.May.2.Haines, Thomas R.; Rodenhiser, David I.; Ainsworth, Peter J. J. Allele-Specific Allele-Specific Non-CpG Methylation of the Nf1 Gene during Early Mouse Development . Science Direct. 2001.Dec.DNA 甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA 甲基化转移酶（DNMTs ）的作用下使CpG 二核苷酸5’5’--端的胞嘧啶转变为5’5’--甲基胞嘧啶。
甲基化测序
甲基化测序
甲基化测序是当今生命技术发展的一个重要方向，也是当前热门的研究领域之一。
甲基化测序（Methylation Sequencing，MS）技术被用于研究 DNA 甲基化的
结构和功能，旨在理解一个物种或个体的基因组动态变化过程。
甲基化是基因组中一种重要的组成部分，它会影响基因转录过程和蛋白质活性，甲基化水平也会影响器官发育、病理变化和凋亡等重要的生物功能。
因此，甲基化测序能够为发现相关基因调控提供紧密、精准的信息，为临床治疗提供有效的策略。
甲基化测序技术比传统的基因组测序及转录组测序更精确，因为甲基化的位点
不易随着环境和药物的变化而发生变化，从而获得更为准确可靠的信息。
此外，由于甲基化测序不仅具有高通量性，还可以获得深度信息，因此被广泛应用于医学研究、分子生物学研究和发育生物学研究等。
甲基化测序技术的应用越来越广泛，从原始的DNA抽提，到实验研究，分析结
果的呈现，互联网技术都发挥了重要作用。
单个实验室把所有的实验流程和工具整合在一个地方，实现一站式的实验，大大降低了实验技术的施工难度，同时互联网技术让交叉比较、数据解读和结果分析变得更加便捷高效。
甲基化测序作为一种重要的生命技术，已经得到了田野中的广泛应用，在科学
研究和临床应用中扮演者重要角色，为科学研究提供新的思路，为临床治疗提供新的技术支持。
未来，由于互联网技术的不断成熟，甲基化测序技术将进一步发展及完善，以提供更加有效的实验、分析和解读服务。
甲基化检测方法精编WORD版
甲基化检测方法精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】甲基化检测（d e t e c t i o n o f m e t h y l a t i o n）概念：DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶。
DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。
这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。
脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关，比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降。
现有检测方法1.甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。
通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化; 反之，说明被检测的位点不存在甲基化。
2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。
随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶，最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。
将PCR 产物克隆至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为BSP-克隆测序法。
3.高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melting，HRM)在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DNA甲基化检测实验
一、重亚硫酸盐的测序法实验流程（BSP）
（Bisulfite Genomic Sequence）
原理：结合重亚硫酸盐的测序法是一种灵敏的能直接检测分析基因组DNA甲基化模式的方法。
重亚硫酸盐处理后，用针对改变后的DNA序列设计特异性引物并进行聚合酶链式反应（PCR）。
PCR产物中原先非甲基化的胞嘧啶位点被胸腺嘧啶所替代，而甲基化的胞嘧啶位点保持不变。
PCR产物克隆后进行测序。
通过这个方法能得到特定位点在各个基因组DNA分子中的甲基化状态。
该方法特点是：
•特异性高，它能够提供特异性很高的分析结果，这是所有其他研究甲基化的分析方法所不能比拟的；
•灵敏度高，可以用于分析少于100个细胞的检测样品。
用微量的基因组DNA进行分析就能得到各个DNA分子精确的甲基化位点分布图。
重亚硫酸盐测序法技术实验流程
A． DNA制备
用DNA抽提试剂盒（Promega, cat. no. A1125）抽提组织，细胞培养物，石蜡包埋组织切片样品中的基因组DNA。
B．重亚硫酸盐处理
C． DNA纯化
用Wizard DNA clean-up kit (Promega, cat. no. A7280)纯化重亚硫酸盐处理后的DNA样品。
D． PCR扩增
E． PCR产物琼脂糖电泳后回收纯化
F． PCR产物连接到pMD19-T (Takara) 载体中克隆及测序。
G．用分析软件对各样本测序结果进行甲基化程度分析
二、甲基化特异性的PCR实验流程
（methylation-specific PCR, MSP）
原理：甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。
重亚硫酸盐
处理
DNA后，基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。
随后进行引物特异性的PCR。
该方法引物设计是关键。
MSP中设计两对引物，即一对结合处理后的甲基化DNA链（引物对M），另一对结合处理后的非甲基化DNA链（引物对U）。
检测MSP扩增产物，如果用引物M能扩增出片段，则说明检测位点存在甲基化；若用引物U扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化（图3）。
该方法优点是：
1、检测灵敏度高，样品消耗少，仅需1μg的基因组DNA，可用于石蜡包埋样本；
2、快速、简单，省时；
3、如果结合Real-time定量PCR技术（Taqman 探针）则能对样品中检测位点的甲基化水平进行定量检测(Methylight)。
MSP技术实验流程
A．DNA抽提
用DNA抽提试剂盒（Promega, cat. no. A1125）抽提组织，细胞培养物，石蜡包埋组织切片样品中的基因组DNA。
B. 重亚硫酸盐处理
C．DNA纯化
用Wizard DNA clean-up kit (Promega, cat. no. A7280)纯化重亚硫酸盐处理后的DNA样品。
D．DNA脱磺基反应
E．甲基化特异性的PCR反应
针对改变后的DNA序列设计两对引物（M，U），进行PCR反应。
为了避免非特异性扩增用TaKaRa 的hotstart酶。
随后对PCR产物的凝胶电泳图进行分析。
实例：
检测肝癌细胞株Bel7405，Bel7404中SFRP1基因启动子甲基化。
重亚硫酸盐处理后，针对改变的DAN序列设计两对引物
M: (forward: AGTTAGTGTCGCGCGTTC; reversal: CCGATACCCATACCGACTC) 299 bp
U：(forward:GGAGTTGGGGTGTATTTAGTTTG; reversal: CCAATACCCATACCAACTCTACA) 247 bp PCR扩增结果图
三、高分辨率熔解曲线（HRM）法
高分辨率熔解曲线分析技术（High Resolution Melting ），简称HRM，是近年来兴起的一种检测基因突变、进行基因分型而及甲基化检测的新方法。
基本原理是基于核酸分子由于片段长短、GC含量、GC分布及单个碱基差异等物理性质不同而造成DNA分子在加热变性时都会有不同的熔解曲线的形状和位置，并配合运用高浓度的饱和荧光染料，可以迅速的检测出核酸片段中GC含量和单碱基的突变。
近年来，公司引进了RocheLightCycler® 480 II 和ABI VIIA7 全自动荧光定量PCR系统，为客户提供专业化、个性化的甲基化HRM检测服务。
操作流程：
﹡待测基因序列片段或位点甲基化引物设计（300bp以内）。
﹡利用甲基化转移酶修饰的DNA和非甲基化修饰的DNA制备标准品（0％，1％，5％，10％，20％，50％，100％梯度HRM标准曲线）
﹡亚硫酸氢盐处理样品DNA
﹡上机检测
﹡数据处理，形成报告（包括实验过程、试剂耗材、荧光PCR仪原始文件、测序文件等）。
实验实例：
对2个病例的某基因20个CG位点进行检测，分析出不同的甲基化程度。
四、焦磷酸测序法
焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术是由4种酶（DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)、荧光素酶(luciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。
每一轮测序反应体系中只加入一种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。
如果该dNTP与模板配对，则会在DNA聚合酶的作用下，添加到测序引物的3'末端，同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi)。
掺入的dNTP和释放的PPi是等量的。
CpG 甲基化焦磷酸测序检测法基于引物延伸的Pyrosequencing技术，通过将链合成过程中释放出的焦磷酸(PPi)转化成光信号来监测链的合成过程。
通过检测CpG对应位点上C/T渗入的比例对目标位点的甲基化程度进行定量分析方法。
操作流程：
﹡DNA亚硫酸盐处理
﹡用焦磷酸测序专门引物设计软件设计甲基化引物﹡进行PCR扩增预实验及正式实验
﹡PCR产物上焦磷酸测序仪检测
实验实例：
各种方案比较
检测方法 检测基因位置 定量情况 位点信息
亚硫酸氢盐修饰后测序法（BSP ） ≤350bp 精确，但要大量克隆测序。
精确了解每一位点甲基化程度 甲基化特异性的PCR 法（MSP ） 引物设计位置 只能定性、定量不精确
待测位点甲基化程度不能了解 结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（COBRA ） 单CG 位点 只能定性、定量不精确
待测位点甲基化程度大致了解 高分辨率熔解曲线法（HRM ） ≤200bp 精确检测待测片段甲基化程度
待测每一位点甲基化程度不能了解 焦磷酸测序法（Pyrosequencing ） ≤60bp 精确检测待测片段甲基化程度
精确了解每一位点甲基化程度
服务说明
①样品要求：
﹡血液样品：样品为EDTA 抗凝或枸椽酸钠抗凝，样品量大于0.5 ml ，样品采集后于-20℃或-80℃保存，低温（≤-4℃）运输。
﹡组织样品：样品可以为新鲜组织（最好-80℃保存）或石蜡包埋的组织，也可以是95%乙醇中固定的组织，组织量大于100 mg 。
﹡DNA 样品：纯度OD260/280 比值为1.8-1.9，浓度≥50ng/ul，体积≥50ul。
②提供详细的基因信息
BSP 方法要求待测序列≤300bp，HRM 待测序列≤200bp，HRM 待测序列≤200bp，焦磷酸测序待测序列≤60bp，且上下游保留200bp 用于引物设计；MS 方法要求提供待测序列的CG 侯选位点。
我们会根据客户的基因序列信息选择不同的检测方法，并在方案实验过程中随时与客户沟通。
③提供结果
实验报告（实验步骤，包括BSP 法的5个克隆统计结果等)、PCR 电泳照片、测序彩色波形图、HRM 标准曲线图、焦磷酸测序原始文件、基因芯片的原始文件等。
关键词：DNA 甲基化检 测实验
（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。
请预览后才下载，期待您的好评与关注！）。