稳心颗粒对心肌梗死大鼠血管内皮细胞超微结构的影响
稳心颗粒对心肌梗死大鼠模型心肌脂肪化及E6AP、CEBPα表达影响
ʌ实验研究ɔ稳心颗粒对心肌梗死大鼠模型心肌脂肪化及E6AP㊁C/EBPα表达影响❋庞㊀延1,卢健棋1ә,朱智德2,王庆高1,温志浩1,梁逸强1,林㊀浩2,唐梅玲1,许志亮2(1.广西中医药大学第一附属医院,南宁㊀530023;2.广西中医药大学,南宁㊀530000)㊀㊀摘要:目的:通过观察稳心颗粒对大鼠心肌细胞诱导分化成前脂肪细胞E相关蛋白(E6assiociated Protein,E6AP)㊁转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)表达的影响,探讨稳心颗粒对心肌脂肪化作用机制㊂方法:将大鼠心肌细胞诱导分化成前脂肪细胞,分成空白组㊁E6AP腺病毒组㊁E6AP封闭组㊁E6AP过表达组㊁胺碘酮组㊁稳心颗粒组,相应组别给予腺病毒感染及含药血清处理培养,采用RT-PCR和免疫组化检测各组E6AP㊁C/EBPα表达,同时通过油红染色对比各组前脂肪细胞脂肪化情况㊂结果: E6AP过表达组E6AP表达明显高于各组而C/EBPα表达显著低于各组,E6AP与C/EBPα表达具有负性调节关系,稳心颗粒组E6AP表达显著高于胺碘酮组但C/EBPα表达2组无明显差异,E6AP封闭组油红染色程度最深而E6AP过表达组染色明显减少,胺碘酮组和稳心颗粒组染色程度相对于空白组有较为明显的减少㊂结论:稳心颗粒可能通过上调E6AP和抑制C/EBPα表达抑制心肌脂肪化㊂㊀㊀关键词:稳心颗粒;心肌细胞;脂肪化;E6AP;C/EBPα㊀㊀中图分类号:R285.5㊀㊀文献标识码:B㊀㊀文章编号:1006-3250(2021)01-0061-04Effects of Wenxin Granule on myocardial adiposis and expression of E6AP andC/EBPαin rats with myocardial infarctionPANG Yan1,LU Jian-qi1ә,ZHU Zhi-de2,WANG Qing-gao1,WEN Zhi-hao1,LIANG Yi-qiang1,LIN Hao2,TANG Mei-ling2,XU Zhi-liang2(1.The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning,530023,China;2.Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Guangxi Nanning,530000,China)㊀㊀Abstract:Objective To observe the effect of Wenxin Granule on the expression of E-related protein(E6assiociated Protein,E6AP)and enhancer-binding protein(C/EBPα)of preadipocytes induced by rat cardiomyocytes,and to explore the mechanism of Wenxin Granule on myocardial adipogenesis.Methods Rat cardiomyocytes were induced to differentiate into preadipocytes and divided into blank group,E6AP adenovirus group,E6AP blocking group,E6AP overexpression group,amiodarone group,and Wenxin granule group.And the corresponding groups were given adenovirus infection and drug-containing Serum-treated cultures were used to detect the expression of E6AP and C/EBPαin each group by RT-PCR and immunohistochemistry.At the same time,the fat metaplasia of preadipocytes in each group was compared by oil red staining.Results The expression of E6AP in the E6AP over-expression group was significantly higher than that in each group and the expression of C/EBPαwas significantly lower than that in each group.The expression of E6AP and C/EBPαhad a negative regulatory relationship.The expression of E6AP in Wenxin Granule Group was significantly higher than the amiodarone group,but there was no significant difference in C/EBPαexpression between the two groups.The degree of oil red staining was the deepest in the E6AP blocking group,while the staining in the E6AP overexpression group was significantly reduced.And compared with the blank group,the degree of staining in the amiodarone group and Wenxin Granule group has a more obvious reduction.Conclusion Wenxin Granule may inhibit myocardial adipogenesis by up-regulating E6AP and inhibiting the expression of C/EBPα.㊀㊀Key words:Wenxin Granule;Cardiomyocyte;Adipose;E6AP;C/EBPα❋基金项目:国家地区科学基金项目(81560760)-E6AP负性调节心肌内脂肪化生对大鼠心肌梗死后室性心动过速的影响及稳心颗粒的调节作用作者简介:庞㊀延(1990-),男,广西玉林人,医师,硕士研究生,从事心血管疾病的中西医临床与研究㊂ә通讯作者:卢健棋(1963-),男,广西平南人,教授,主任医师,硕士研究生导师,从事心血管疾病的中西医结合临床与研究,Tel:139****7839,E-mail:lujianqi666@㊂㊀㊀据报告显示,中国心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)死亡率已赶超肿瘤等其他疾病居于榜首,尤其是急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)在CVD中死亡率最高[1]㊂虽然目前经皮冠状动脉腔内成形术等技术得到快速发展, AMI死亡率有所下降,但AMI后恶性心律失常仍然是引起死亡的重要因素㊂研究提示[2],接近90%的AMI有不同程度的心律失常,且发现约有32%的患者出现室性心律失常,其中室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)约占75%㊂转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPs)是脂肪细胞分化中的重要转录因子,E6AP(E6assiociated Protein)是细胞编码的一种泛素蛋白连接酶㊂Pooja Pal等团队[3]研究首次证实,E6AP能够通过降低C/EBPα的转录水平抑制心肌脂肪化,从而降低AMI后VT发生㊂西药在AMI后VT预防及终止疗效得到肯定,但因其副作用等因素在临床应用上仍存在一定的顾虑与限制㊂中医药治疗具有多靶点㊁副作用小等特点㊂既往研究表明,稳心颗粒联合西药治疗能够降低AMI患者血脂水平和降低室性期前收缩㊁非持续性室性心动过速等室性心律失常发生率,优于单用西药治疗[4]㊂本研究通过观察稳心颗粒对心肌梗死模型大鼠心肌脂肪化及E6AP㊁C/ EBPα表达影响,探讨稳心颗粒对心肌脂肪化作用机制,以期为稳心颗粒在预防和降低AMI后VT发生提供一定的科学依据㊂1㊀材料与方法1.1㊀实验动物清洁级健康雄性SD大鼠12只,1~3d龄,购自上海西普尔必凯实验动物有限公司,实验动物许可证:SCXK(沪)2013-0016㊂1.2㊀主要药物㊁试剂和仪器稳心颗粒(山东步长制药股份有限公司,国药准字Z10950026,药物组成:党参㊁黄精㊁三七㊁琥珀㊁甘松);胺碘酮(杭州赛诺菲民生健康药业有限公司,国药准字H33020581产品规格0.2g,批准日期2018-04-16);戊巴比妥钠(上海新亚药业有限公司,货号H31020502);牛血清白蛋白(Solarbio,货号A8020);胶原酶I(Gbico,货号17100-017);FBS (Gbico,货号10099148);高糖DMEM/F12液体培养基(Gbico,货号C11330500BT);胰酶(Solarbio,货号T1350);牛胰岛素(上海源叶生物科技有限公司,货号11070-73-8);E6AP一抗(santa cruz,sc-166689); C/EBPα一抗(santa cruz,sc-365318);鼠二抗(抗E6AP)(Jackson,315-035-003);鼠二抗(抗C/ EBPα)(赛默飞,62-6820);DLK蛋白一抗(Santa Cruz Biotechnology,货号sc-376755);荧光二抗:Goat anti-Mouse IgG(H+L)(molecular probes,货号Catalog#A-21206);Trizol(Takara,Cat:9109)SYBR Green mix(诺维赞,Cat:Q111-01);E6AP过表达和干扰腺病毒NC浓缩液㊁腺病毒OE初液㊁腺病毒Ube3a-3#初液均由上海锐赛生物技术有限公司提供;二氧化碳细胞培养箱(Thermo Scientific,型号Midi40);共聚焦显微镜(厂家ZEISS,型号LSM710);荧光定量PCR仪(Bio-Rad,型号: 575BR);双垂直电泳仪(北京六一,型号DYCZ-25D),半干转膜仪(Bio-Rad,型号Yrdimes+ELITE200)㊂2㊀方法2.1㊀大鼠前脂肪细胞的原代分离及培养无菌状态下取1~3d龄雄性SD健康大鼠,经戊巴比妥钠麻醉,取大鼠颈㊁背部的皮下脂肪组织剪成小块,加消化液(DMEM/F12+20g/L牛血清白蛋白,临用时加1g/L的胶原酶I)37ħ消化30~50 min,过筛并收集滤液至离心管离心弃上清,加入DMEM/F12培养液清洗再离心然后加含10%FBS 的DMEM/F12吹打混匀,制成单细胞悬液,即获得大鼠前体脂肪细胞㊂采用的前脂肪细胞基础培养基含10ml FBS㊁89ml高糖DMEM/F12液体培养基㊁1 ml青链霉素混合液,一定条件下培养2~3d换液1次㊂细胞贴壁呈梭形㊁透亮,胞质内无脂滴,长满80%时进行传代,二氧化碳培养箱中培养㊂2.2㊀大鼠心肌细胞的原代分离及培养无菌状态下取1~3d龄SD健康雄性大鼠,经戊巴比妥钠麻醉后迅速开胸取出心脏,置于4ħ二氮嗪强化Celsior液中保存㊂剪去除主动脉的一切血管及脂肪,将心脏迅速悬吊在灌流装置上,循环灌洗心脏3次,待心肌软化剪下心室肌组织,在酶液里浸泡切成碎片,置入离心管内振荡10min37ħ,用尼龙网过滤去上清液,加入酶液继续离心振摇,直到心肌组织充分消化获取心肌细胞,二氧化碳培养箱中培养㊂2.3㊀病毒转染细胞密度达到30%进行感染,感染前弃去原培养基,加入新鲜的培养基,再分别加腺病毒NC 浓缩液(10μl)㊁腺病毒OE初液(100μl)㊁腺病毒Ube3a-3#初液(100μl)混匀,放入CO2培养箱中,感染8h/过夜进行换液,在孔板中加入新鲜的完全培养基,感染24h观察荧光,感染48h/72h使荧光率达到50%以上,持续培养使细胞密度融合到100%进行诱导,诱导2d后重复1次,再继续培养4d㊂2.4㊀分组及前脂肪细胞诱导分化无药血清组(空白组)给予大鼠MI后的无药血清;E6AP腺病毒组给予E6AP腺病毒转染的大鼠MI后的无药血清;E6AP封闭组采用RNAi技术封闭E6AP,给予MI后的无药血清;E6AP过表达组采用转染野生型E6AP,使其过表达并给予MI后的无药血清;胺碘酮组给予MI后的含胺碘酮血清10%;稳心颗粒组给予MI后的含稳心颗粒血清10%㊂各组置于10%FBS的高糖DMEM培养基中,并与同来源的小鼠心肌细胞共培养,各组均加细胞诱导分化培养基Ⅰ(含10ml FBS㊁89ml DMEM/F12液体培养基㊁1ml青链霉素混合液㊁牛胰岛素1mg/L㊁IBM ˑ0.5mmol/L㊁DEˑ1.0μmol/L),2d后换成诱导分化培养基Ⅱ(含10ml FBS㊁89ml DMEM/F12液体培养基㊁1ml青链霉素混合液㊁牛胰岛素1mg/L),继续培养2d,随后换为基础培养基,1~2d换液1次,继续培养4d㊂2.5㊀油红O染色弃去培养液,10%甲醛PBS固定,0.35%油红O 母液(含0.35g油红㊁100ml异丙醇)与去离子水3ʒ2混合,滤纸过滤,静置数分钟,取上层液对细胞进行染色10min,去离子水冲洗后显微镜下观察并拍照㊂2.6㊀荧光定量(PCR)检测C/EBPα㊁E6AP的mRNA表达提取总RNA,扩增mRNA,再逆转录为cDNA,荧光定量PCR法检测C/EBPα㊁E6AP mRNA表达㊂引物合成由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,引物序列:E6AP:上游AGGGGACGTGGACACAA ATC,下游TGGATCCACTCGAGGACCTT,片段长度: 127bp;C/EBPα:上游GTCGGTGGATAAGAACAGC AACG,下游AGGCGGTCATTGTCACTGGTC,片段长度:144bp;Atcb(内参):上游GCTATGTTGCCCTA GACTTCGA,下游GATGCCACAGGATTCCATACC,片段长度:173bp㊂采用2-әәCt法进行各基因表达的相对定量㊂2.7㊀统计学方法采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析,计量结果以均数ʃ标准差( xʃs)表示,多样本间比较采用单因素方差分析,2组间比较采用Newman-keuls 检验,检验水准以α=0.05或0.01,P<0.05,P< 0.01,为差异有统计学意义㊂3㊀结果3.1㊀各组前脂肪细胞C/EBPα㊁E6AP的mRNA表达结果表1示,E6AP过表达组E6AP表达明显高于各组,除E6AP过表达组以外,稳心颗粒组E6AP表达明显高于各组(P<0.05),胺碘酮组E6AP表达明显高于空白组和E6AP腺病毒组㊁E6AP封闭组(P< 0.05);由此表同组E6AP与C/EBPα表达趋势可以看出,E6AP与C/EBPα表达成负性关系,但C/ EBPα表达中胺碘酮组与稳心颗粒组比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂表1㊀各组脂肪细胞C/EBPα和E6AP基因mRNA相对表达量比较( xʃs)组别鼠数E6AP C/EBPα空白组8 1.00ʃ0.06 1.00ʃ0.07E6AP腺病毒组8 1.08ʃ0.090.91ʃ0.31E6AP封闭组80.13ʃ0.01a 3.36ʃ0.08aB E6AP过表达组87.95ʃ0.64AbC0.33ʃ0.13abC 胺碘酮组8 2.55ʃ0.77ABCD0.68ʃ0.14aCd 稳心颗粒组8 3.68ʃ0.38ABCDE0.53ʃ0.13AbC ㊀㊀注:与空白组比较:a P<0.05,A P<0.01;与E6AP腺病毒组比较:b P<0.05,B P<0.01;与E6AP封闭组比较:C P<0.01;与E6AP过表达组比较:d P<0.05;与胺碘酮组比较:E P<0.013.2㊀各组前脂肪细胞油红染色结果图1示,油红染色的是脂肪颗粒,红染越多说明细胞内积累脂肪越多分化越明显㊂由油红染色结果可知,E6AP封闭组油红染色程度最深,而E6AP过表达组染色最浅,胺碘酮组和稳心颗粒组染色程度相对于空白组有较为明显的减少㊂图1㊀各组前脂肪细胞油红染色结果(放大200倍)㊀㊀3.3㊀各组前脂肪细胞C/EBPα㊁E6AP的蛋白表达结果表2图2示,E6AP过表达组E6AP表达明显高于空白组和E6AP腺病毒组㊁E6AP封闭组(P< 0.05),其腺病毒转染有效;稳心颗粒组E6AP蛋白表达明显高于胺碘酮组(P<0.05),但C/EBPα表达中,胺碘酮组与稳心颗粒组比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂4㊀讨论急性心肌梗死是一种冠状动脉急性㊁持续性缺注:1:空白组;2:E6AP腺病毒组;3:E6AP封闭组;4:E6AP过表达组5:胺碘酮组;6:稳心颗粒组图2㊀各组前脂肪细胞C/EBPα㊁E6AP蛋白Western Blot结果血缺氧引起心肌坏死的临床综合征㊂Katia Orvin等团队[5]研究7669例AMI患者发现,伴有室性心律失常发生率为3.8%(早期(ɤ48h)2.1%,晚期(ȡ48h)1.7%),出现快速室性心律失常患者住院率及1年死亡率显著高于非快速室性心律失常患者㊂以往研究认为[6-7],AMI后VT发生主要与梗死心肌纤维化㊁存活心肌细胞和胶原沉积等瘢痕区域形成了折返性VT底层基质改变心电电传导密切相关,而心肌脂肪化是瘢痕介导VT的底层基质,提示心肌脂肪化在影响AMI后VT发生重要地位㊂综上所述,预防和降低VT发生在降低AMI死亡风险中具有重大意义㊂Pooja Pal团队[3]已证实,E6AP能够通过降低C/EBPα的转录能力和心肌脂肪化从而AMI后VT发生,提示上调E6AP抑制C/EBPα转录可能是预防和降低AMI发生VT的重要靶点㊂表2㊀各组脂肪细胞C/EBPα和E6AP蛋白相对表达量比较( xʃs)组别鼠数E6AP C/EBPα空白组80.46ʃ0.020.44ʃ0.04E6AP腺病毒组80.448ʃ0.040.43ʃ0.03 E6AP封闭组80.29ʃ0.02AB0.84ʃ0.04AB E6AP过表达组80.65ʃ0.03ABC0.18ʃ0.00ABC 胺碘酮组80.52ʃ0.01ABCD0.27ʃ0.01ABCD 稳心颗粒组80.58ʃ0.01ABCDe0.29ʃ0.01ABCD ㊀㊀注:与空白组比较:A P<0.01;与E6AP腺病毒组比较:B P<0.01;与E6AP封闭组比较:C P<0.01;与E6AP过表达组比较:D P<0.01;与胺碘酮组比较:e P<0.05心梗后心律失常属于中医学 胸痹 怔忡 惊悸 等范畴㊂结合众多医家对本病的认识,认为本病多为本虚标实,以气血阴阳亏虚为本,瘀血㊁痰浊㊁寒凝㊁气滞等多种因素为标[8]㊂稳心颗粒以党参为君补中益气;黄精益气养阴为臣;三七㊁琥珀活血化瘀㊁镇静安神为佐药;甘松理气加强活血为使药,共奏安神定悸㊁益气养阴㊁活血祛瘀功效,临床常用于治疗心律失常㊂研究提示[9-11],稳心颗粒在治疗心梗后室性心律失常具有良好疗效,得到多名国内著名专家认可并成为共识,可能与稳心颗粒能够改善冠脉供血,改善微循环延缓心室重构和抑制钠通道及L-钙通道,稳定心肌膜电位等机制有关㊂胺碘酮作为III类广谱抗心律失常药物,能够有效抑制心房及心肌传导纤维的快钠离子内流,降低心肌细胞自律性和传导速度,发挥抗心律失常作用㊂但胺碘酮具有扩张外周血管降低血压㊁影响甲状腺功能等副作用,临床应用存在一定缺陷[12]㊂本研究结果提示,稳心颗粒组和胺碘酮组都能明显上调前脂肪细胞E6AP表达和抑制C/EBPα表达㊂结合各组前脂肪细胞油红染色结果可知,E6AP 水平上调能够抑制前脂肪细胞分化,这与C/EBPα表达对前脂肪细胞的分化作用相反㊂由此可推测,胺碘酮和稳心颗粒可能通过上调E6AP水平及负性调节C/EBPα表达抑制心肌细胞脂肪化,但结果显示稳心颗粒E6APmRNA及蛋白表达明显高于胺碘酮组,但在C/EBPα表达中2组无明显差异㊂考虑本研究所检测基因较单一,其检测基因所涉及上游下游相关因子和相关通路影响尚不明确,其是否存在多通路多蛋白参与E6AP调控尚不得知,且细胞离开复杂的体内内环境调控,研究结果不能完全反映药物在体内的影响,未来仍需进行多通路㊁多蛋白组学的研究,同时对干预药物最佳浓度及安全性进行探索,进一步实施体内试验进行疗效验证㊂参考文献:[1]㊀马丽媛,吴亚哲,王文,等.‘中国心血管病报告2017“要点解读[J].中国心血管杂志,2018,23(1):3-6.[2]㊀朱习俊,赵继义.急性心肌梗死后心律失常的研究进展[J].心脏杂志,2018,30(4):482-485.[3]㊀PAL P,LOCHAB S,KANAUJIYA J K,et al.E3ubiquitinligase E6AP negatively regulates adipogenesis by downregulatingproadipogenic factor C/EBPalpha[J].PloS one,2013,8(6):e65330.[4]㊀王云鹏,张云,孙一荣,等.稳心颗粒联合前列地尔对急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊经皮冠状动脉介入治疗后室性心律失常的影响[J].实用心脑肺血管病杂志,2018,26(2):83-87.[5]㊀ORVIN K,EISEN A,GOLDENBERG I,et al.Outcome ofcontemporary acute coronary syndrome complicated by ventriculartachyarrhythmias[J].Ep Europace,2015,18(2):219-226.[6]㊀LEÓN D G,LÓPEZ-YUNTA M,ALFONSO-ALMAZÀN J M,etal.Three-dimensional cardiac fibre disorganization as a novelparameter for ventricular arrhythmia stratification after myocardialinfarction[J].EP Europace,2019,21(5):822-832.[7]㊀PEREZ J J,D'AVILA A,ARYANA A,et al.Can fat depositionafter myocardial infarction alter the performance of RF catheterablation of scar‐related ventricular tachycardia?:Results froma computer modeling study[J].Journal of cardiovascularelectrophysiology,2016,27(8):947-952.[8]㊀庞延,黄舒培.中医药治疗心肌梗死后心律失常的机制探讨[J].辽宁中医杂志,2018,45(1):60-62.[9]㊀尹红霞.稳心颗粒对心肌梗死后心律失常和心率变异性的影响[J].辽宁中医杂志,2011,38(4):668-669.[10]㊀叶平.稳心颗粒在急性心肌梗死后心律失常治疗中的应用[J].中国中医急症,2013,22(6):1048-1049.[11]㊀张广有.稳心颗粒疗效安全获认可:‘稳心颗粒治疗心律失常专家共识“在京发布[J].中华医学信息导报,2015,30(9):6-8. [12]㊀王玉贤.胺碘酮注射液治疗急性心肌梗死后室性心律失常的疗效及安全性分析[J].中国医药指南,2018,16(1):107-108.收稿日期:2020-03-27。
稳心颗粒对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
稳心颗粒对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
靳利利;周瑞玲;陈玉兴;曾晓会;王清海
【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》
【年(卷),期】2006(4)8
【摘要】目的研究稳心颗粒对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用心肌缺血再灌注方法建立大鼠心律失常模型,记录再灌注开始后3 min内室性心动过速(VT)和心室颤动(VF),并测定血清心肌酶的含量.结果稳心颗粒有明显降低VT、VF的发生率和缩短VT、VF的持续时间;与模型组相比,稳心颗粒高、中、低剂量组和阳性药物组均能显著降低血清心肌酶含量(P＜0.05或P＜0.001).结论稳心颗粒对大鼠心律失常模型的心肌缺血损伤有保护作用.
【总页数】2页(P698-699)
【作者】靳利利;周瑞玲;陈玉兴;曾晓会;王清海
【作者单位】广东省第二中医院,510095;广东省中医研究所;广东省中医研究所;广东省中医研究所;广东省第二中医院,510095
【正文语种】中文
【中图分类】R542.2;R289.5
【相关文献】
1.稳心颗粒剂在大鼠心肌缺血再灌注损伤时对心肌细胞的影响 [J], 王多;刘全
2.稳心颗粒剂在大鼠心肌缺血再灌注损伤时对冠脉内皮细胞的影响 [J], 王多;刘艳萍;刘全
3.心肌缺血预处理联合后处理在大鼠心肌缺血-再灌注损伤过程中的保护作用 [J], 罗晨光;张顺业
4.三种鼠尾草注射液对大鼠急性心肌缺血血流动力学的影响和对心肌缺血再灌注损伤的保护作用(摘要) [J], 秦剑;李惠兰;张荣平
5.大鼠心肌缺血预适应对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用及ATP敏感钾通道的作用 [J], 欧阳伟;钱学贤;付向阳;李志梁;王素华
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稳心颗粒对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43和内质网应激通路基因表达的影响
稳心颗粒对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43和内质网应激通路基因表达的影响吕梦;纪晓迪;刘珂珂;娄利霞;聂波;赵久丽;吴爱明【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2022(24)4【摘要】目的:探讨稳心颗粒调节缝隙连接蛋白43(CX43)和内质网应激通路基因表达的心脏保护机制。
方法:建立心肌梗死大鼠模型,术后第2天根据心电图筛选入组,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组,另设平行操作不结扎的假手术组,药物治疗2周。
腹腔注射异丙肾上腺素记录心律失常发生率;心脏血流动力学检测各组大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左心室内压最大下降速率(–dp/dt_(max));苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏病理改变;Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原容积分数;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组大鼠CX43、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求激酶1(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA的相对表达量;蛋白免疫印迹法检测CX43的表达。
结果:与假手术组相比,模型组大鼠心律失常发生率明显上升(P<0.01),LVSP、+dp/dt_(max)、–dp/dt_(max)均显著降低(P<0.01),LVEDP显著增高(P<0.01),心肌组织病理性改变明显,心肌胶原容积分数明显增加(P<0.01),CX43 mRNA相对表达量明显下调(P<0.01),IRE1 mRNA相对表达量增高(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP1 mRNA相对表达量明显增高(P<0.01),CX43蛋白表达明显降低(P<0.01);稳心颗粒及美托洛尔治疗2周后,给药组大鼠心律失常发生率下降(P<0.05),LVSP增加(P<0.05),+dp/dt_(max)、–dp/dt_(max)显著增加(P<0.01),心肌组织病理性变化显著改善,心肌胶原容积分数明显降低(P<0.01),CX43mRNA表达量上调(P<0.05),GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA 表达量下调(P<0.05),CX43蛋白表达升高(P<0.05)。
稳心颗粒剂治疗冠心病心绞痛的动物实验总结
稳心颗粒剂治疗冠心病心绞痛的动物实验总结
冯玲;王彦云
【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》
【年(卷),期】2000(006)011
【摘要】目的：通过心肌缺血实验观察稳心颗粒剂对冠心病心绞痛的治疗作用。
方法：用垂体后叶素与结扎冠状动脉分别制造大鼠急性心肌缺血模型，观察稳心颗粒剂对缺血大鼠的心电图、心率、心肌酶及心肌梗塞范围的影响。
结果：稳心颗粒剂可显著对抗垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血心电图T波及S—T段的抬高(P<0．001)，但对其心率无明显影响；对结扎大鼠冠状动脉所致的急性心肌缺血模型，稳心颗粒剂能显著减少其心律失常的发生率，明显缩小其心肌梗塞的范围，降低其血清CPK和LDH的含量，且稳心颗粒大剂量组与普萘洛尔作用相似(P>0．05)。
结论：实验研究证明，稳心颗粒剂具有抗心肌缺血作用。
【总页数】1页(P45)
【作者】冯玲;王彦云
【作者单位】中国中医研究院广安门医院，北京100053
【正文语种】中文
【中图分类】R541
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1.稳心颗粒剂治疗高粘血症38例临床观察 [J], 谢志勇
2.稳心颗粒剂治疗期前收缩的疗效观察 [J], 贾卫红;蔡慧;周庆
3.稳心颗粒剂治疗高粘血症的临床观察 [J], 谢志勇
4.稳心颗粒剂治疗高粘血症的临床观察 [J], 谢志勇
5.稳心颗粒剂治疗冠心病心绞痛34例临床观察 [J], 冯玲;韩涛
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参松养心胶囊和稳心颗粒对大鼠心肌纤维化的影响及其抗心律失常的机制研究
参松养心胶囊和稳心颗粒对大鼠心肌纤维化的影响及其抗心律失常的机制研究吴艳婷;陈云;刘海亭;吴莹莹;吴伟;刘新灿【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2017(015)008【摘要】目的探讨参松养心胶囊和稳心颗粒对大鼠心肌纤维化的影响及其抗心律失常的机制.方法选取自发性高血压大鼠(SHR)40只随机分为4组,每组10只,对照组(C组,正常饲料喂养),缬沙坦组(VAL组,缬沙坦胶囊内容物混合饲料喂养),参松养心胶囊组(SHEN组,参松养心胶囊内容物混合饲料喂养),稳心颗粒组(WEN组,稳心颗粒混合饲料喂养).喂养2个月后,进行心室内快速刺激,记录心律失常发生.之后处死大鼠,进行左心室组织切片,染色处理,观察各组切片纤维化程度,并采用免疫组化测定心肌细胞缝隙连接蛋白(Cx43)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达程度,进行比较.结果喂养2个月后,VAL组、SHEN组及WEN组心律失常诱发次数均较C组明显减少(P<0.05);图像定量分析显示VAL组、SHEN组及WEN组Cx43增高,MMP-2和组织金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)和荧光信号的面积百分比及积分光密度值较C组明显降低(P<0.05),且排列相对清晰.结论参松养心胶囊及稳心颗粒具有改善心肌重构的作用,能延缓心肌纤维化发展,降低致命性心律失常的发生率;其机制可能与增加Cx43及MMP-2的表达有关.%Objective To study the effect of Shensong Yangxin capsule (SYC) and Wenxin granule (WXG) on myocardial fibrosis in rats and its antiarrhythmic mechanism.Methods Forty spontaneously hypertensive rats (SHR) were randomly divided into 4 groups: control group (n= 10) fed with normal feed, valsartan group (n=10) fed with valsartan capsule content mixed feed, SYC group (n= 10) fed with SYC contents mixed feed, WXG group (n= 10) fed with WXG contents mixed feed for 2 months.After 2 months of feeding, rapid ventricular stimulation was performed, and the occurrence of arrhythmia was recorded.After the rats were killed, the left ventricular tissue sections were stained, the degree of fibrosis was observed.The expression of connexin 43 (Cx43), matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor of matrix-metalloproteinase-2 (TIMP-2) in cardiac muscle cells was measured by immunohistochemistry.Results After feeding for 2 months, the occurrence of arrhythmia in valsartan group,SYC group,and WXG group were significantly less than that in control group (P<0.05).Quantitative image analysis showed that the expressions of Cx43 in valsartan group,SYC group,and WXG group were higher than that in control group(P<0.05) ,while the expressions of MMP-2 and TIMP-2 in valsartan group,SYC group,and WXG group were lower than that in control group (P<0.05).Conclusion SYC and WXG has the effects on myocardial remodeling, can delay the development of myocardial fibrosis, thereby reducing the incidence of fatal arrhythmia.The mechanism may be related to the increased expression of Cx43 and MMP-2.【总页数】4页(P924-927)【作者】吴艳婷;陈云;刘海亭;吴莹莹;吴伟;刘新灿【作者单位】河南中医药大学第一附属医院郑州 450000;河南中医药大学第一附属医院郑州 450000;河南中医药大学第一附属医院郑州 450000;河南中医药大学第一附属医院郑州 450000;河南中医药大学第一附属医院郑州 450000;河南中医药大学第一附属医院郑州 450000【正文语种】中文【中图分类】R541.7;R289.5【相关文献】1.姜黄素对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及机制研究 [J], 李香波;薛长春;吴震宇;李洁超;张赟峰;赵维纳2.参松养心胶囊抗心律失常作用机制研究进展 [J], 刘志超;唐倩;王保和3.稳心颗粒抗心律失常药理机制研究进展 [J], 高晟玮;王振兴;刘志超;王保和4.抑制HMGB1对心肌梗死大鼠模型心肌纤维化的影响及机制研究 [J], 张妍;田立群;冯莹;张盈盈;王代宗;易春峰5.中药稳心颗粒抗心律失常的离子通道作用机制研究 [J], 赵涛;赵步长;伍海勤;张媛;宋琳琳;吴红丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
稳心颗粒干预心肌缺血大鼠电生理重构的系统评价
稳心颗粒干预心肌缺血大鼠电生理重构的系统评价黄涯; 何天麦; 吴爱明; 商洪才【期刊名称】《《世界中医药》》【年(卷),期】2019(014)010【总页数】6页(P2557-2562)【关键词】稳心颗粒; 电生理重构; 心肌缺血; 系统评价; 动物实验偏倚风险评估; 心律失常; 缝隙连接; 动作电位【作者】黄涯; 何天麦; 吴爱明; 商洪才【作者单位】北京中医药大学东直门医院北京 100700【正文语种】中文【中图分类】R242心脏应对损伤刺激时的应激反应不仅包括结构重构，还包括电生理重构，结构重构是电重构的微观基础之一。
在心脏中，以实现细胞间电信号和化学信号的通讯联系从而完成群体细胞间的合作和协调的通讯连接分布于位于Z线水平的闰盘，闰盘横向连接的部分有中间连接和桥粒，加强了细胞间连接的牢固性，纵向连接的部分有缝隙连接(Gap Junction)，便于细胞间信息的直接传导，保证心肌纤维整体同步收缩[1]。
心肌的正常电生理建立在心肌细胞间通讯机制完整的基础之上，心肌缝隙连接蛋白的表达情况是最直观的观察指标之一。
心电重构主要表现为心肌的自律性、兴奋性和传导性异常[2]，实验中常常检测有效不应期、QT间期时长，检测心肌细胞动作电位时相MAP、EADs等指标来反映心肌电生理的变化[3-5]。
电生理重构在疾病水平易表现为心律失常，而中药复方稳心颗粒被研究证实为广谱抗心律失常药物[6]，对房早、室早的有效率高达80%以上，改善心悸、胸闷、乏力症状作用明显，其主治心悸病的主要病机为气阴两虚、心脉不畅，并气血亏虚，心脉不充，为典型的虚中有瘀之证。
中医对心病的认识和治疗传承两千年有余，传统医学对“心悸”病机的判断与现代医学对心肌梗死后心律失常的认识相吻合。
稳心颗粒是临床实践多年的药物，不良反应少。
研究证明，稳心颗粒能调节心肌细胞钙离子平衡，抑制心肌梗死后的细胞凋亡，并且能够干预缝隙连接蛋白的表达，改善心室重构和缝隙连接等心律失常的发生基质[7]。
稳心颗粒干预心肌缺血大鼠电生理重构的系统评价
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稳心颗粒干预心肌缺血大鼠电生理重构的系统评价
黄 涯 何天麦 吴爱明 商洪才
（北京中医药大学东直门医院，北京，１００７００）
摘要 目的：运用系统评价方法评价中成药稳心颗粒对心肌缺血后心肌电生理重构的影响。方法：以“稳心”的中英文检 索式为主题词检索 ＣＮＫＩ、ＣＢＭ、万方、维普、ＥＢｂａｓｅ、Ｐｕｂｍｅｄ、Ｃｏｃｈｒａｎｅ、Ｗｅｂｏｆｓｃｉｅｎｃｅ数据库中的期刊学术论文，筛选出符 合纳入排除标准的动物实验研究，运用 ＳＹＲＣＬＥ动物实验偏倚风险评估工具对文献质量进行评估并分析结局指标。结 果：共纳入 ７篇有效动物实验研究，评估后认为质量均较低。主要结局指标是心电图、缝隙连接结构、缝隙连接蛋白及其 ｍＲＮＡ，ＣａＭ／ＣａＭＫＩＩ信号转导通路相关蛋白，相关 ｍｉＲＮＡｓ以及心肌细胞动作电位，由于纳入研究中结局指标均缺少具 体数值，无法量化，故使用描述性系统评价对结局指标进行总结性评价；结论：稳心颗粒能改善不同类型的心律失常并且 直观地反映在心电图上，同时能够改善缝隙连接超微结构，改变缝隙连接蛋白及其 ｍＲＮＡ、ＣａＭ／ＣａＭＫＩＩ信号转导通路相 关蛋白、相关 ｍｉＲＮＡｓ的表达水平，调节心肌细胞离子通道以维持正常的心肌细胞动作电位，从而发挥改善大鼠缺血心肌 电生理重构的作用，但纳入评价研究质量均较低，还需要方法学更完善的高质量实验研究进行相关机制的深入探索。 关键词 稳心颗粒；电生理重构；心肌缺血；系统评价；动物实验偏倚风险评估；心律失常；缝隙连接；动作电位
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＲｅｖｉｅｗ ｏｎＩｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｏｆＷｅｎｘｉｎＧｒａｎｕｌｅｓｉｎＥｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＲｅｍｏｄｅｌｉｎｇｏｆＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｓｃｈｅｍｉｃａｌＲａｔｓ
14-稳心颗粒对慢性心力衰竭大鼠血流动_省略__血浆内皮素及心肌细胞结构的影响_刘爱东
稳心颗粒对慢性心力衰竭大鼠血流动力学、血浆内皮素及心肌细胞结构的影响刘爱东,代娜,王秀华摘要:目的观察稳心颗粒对慢性心力衰竭大鼠血流动力学、血浆内皮素(ET)及心肌细胞结构的影响。
方法用腹腔注射阿霉素(ADR)法复制慢性充血性心力衰竭(CHF)大鼠模型,采用手术、电镜、放免法,评价稳心颗粒对慢性心力衰竭模型大鼠血流动力学、血浆内皮素及心肌细胞结构的影响。
结果稳心颗粒能改善血流动力学各项指标,提高左室内压分值(L VSP)、+dp/dt,降低(L VEDP)、-dp/dt,减少大鼠血浆内皮素的水平,改善心肌细胞的结构,其稳心颗粒高剂量组的作用同地高辛对照组相当。
结论稳心颗粒是防治心力衰竭的有效药物。
关键词:稳心颗粒;心力衰竭充血性;阿霉素;血流动力学;血浆内皮素;心肌细胞中图分类号:R541.6R789.5文献标识码:A文章编号:1672-1349(2006)12-1069-02充血性心力衰竭(CHF)是严重威胁人类健康的一类疾病,是各种心脏疾病的中末阶段。
稳心颗粒由党参、黄精、三七、琥珀、甘松等药物组成[1]。
临床研究提示本方具有改善心功能,提高病人生活质量的作用。
本研究欲通过对阿霉素所致CHF大鼠的实验研究,从血流动力学、神经内分泌、心肌细胞结构等方面探讨其生理、生化和病理形态学改变,并对稳心颗粒的治疗作用作出结论。
1材料与方法1.1实验动物和分组健康Wistar大鼠66只,为雌、雄各半,体重(180~220)g,由长春高新医学动物实验研究中心提供。
饲料为标准合成大鼠饲料,亦由长春高新医学动物实验研究中心提供。
自由饮用自来水。
随机分为正常对照组,模型对照组,稳心颗粒低、中、高剂量组,阳性对照组,每组11只。
1.2药品和试剂稳心颗粒,山东步长制药有限公司生产;盐酸阿霉素(ADR)每支10mg,由汕头经济特区明治医药有限公司提供;地高辛,上海信谊药业有限公司提供;血浆内皮素(ET)试剂盒,解放军总医院科技开发中心放免研究所提供。
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死大鼠血管 内皮细胞超微结构具有保护作 用，这种保护作用与稳 心颗粒使 ＮＯ 及 Ｅ 一 Ｔ １的含 量发 生变化有关。
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【 关键词 】 稳心颗粒；超微结构 ；Ｎ Ｏ；Ｅ 一 Ｔ １
中图 分 类号 ：Ｒ ８． ２５ ５ 文 献 标 识 码 ：Ａ ｄｉ ０３ ３￣ｉ ｎ１７— ６９２ １．２ １ １ ｏ： ． ６ ．ｓ． ４ ４ ５ ．０ １ ． ９ １ ９ ｓ ６ ００
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变。 结 果 与 对 照 组 比较 ，心 肌 梗 死 模 型 组 大 鼠血 浆 Ｅ １ 量 明 显增 加 （ ０ １ ，血 浆 ＮＯ 含 量 明 显 减 少 （ Ｏ １ ，线 粒体 Ｔ一 含 Ｐ＜ ， ） ０ Ｐ＜ ． ） ０
肿 胀 ，肌 浆 网扩 张 ， 内皮 脱 落 。 与 心 肌 梗 死 模 型 组 比 较 ，心肌 梗 死模 型 ＋ 心 颗 粒 组 大 鼠 血 浆 Ｅ 一 稳 Ｔ １的含 量 明 显 降低 （ Ｏ １ ， 尸＜ ． ） ０
南 昌市第三医院 心内科 ，江西 南昌 ３０ ０ ； ３ ０９
中 山大 学附 属第一 医 院 心 内科 ，广 东 广 州 ５０ ８ ） １０ ０
【 摘要 】 目的 观察稳 心颗粒 对心肌梗 死大鼠内皮细胞超微 结构 的影响 。方法 将 ３ ０只 Ｓ 大鼠随机分为对照组 ，心肌梗 死 Ｄ
模 型 组 ，心 肌 梗 死 模 型 ＋ 心 颗 粒 组 ，每 组 １ 大 鼠 。 测 定 大 鼠血 浆 ＮＯ 及 Ｅ 一１ 量 变化 ．观 察 血 管 内皮 细 胞 超 微 结 构 的 改 稳 ０只 Ｔ 含
临京医学工 ２１年２ 第１卷 期 程 ０１ 月 ８ 第２ ・ Nhomakorabea・
１ ９ｌ・
论著 ・
（ 实验研 究 ）
响 稳心颗粒对心肌梗死大鼠血管内皮细胞超微结构的影
关信 民 ’ ，蒙荣森 ，陈思伟 ，金伟 。 蝉 。 兆辉 。 ，马虹 。 一 ，漆 ，裴 一
（广 州市 红十字 会 医院 心 内科 ，广东 广州 ５０ ２ ； 。 １２０
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