毒理学实验ppt讲解
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补：毒理学动物实验基础PPT课件
重复性原则
实验应进行多次重复，以提高结果的稳定性 和可靠性。
实验设计的步骤和方法
确定研究目的
明确实验的目标和研 究问题，为后续实验 设计提供指导。
选择实验动物
根据研究目的和实验 需求选择合适的动物 种类、品系、年龄、 性别和数量。
设计实验分组
根据实验需求将实验 动物随机分为实验组 和对照组，确保两组 动物具有可比性。
实验动物福利和伦理审查
实验动物福利
关注实验动物的福利，提供适宜的生活环境和护理，尽可能减轻动 物的痛苦和不安。
伦理审查
进行实验动物伦理审查，确保实验方案符合伦理原则，审查实验的 必要性、替代方法、动物数量、痛苦程度等方面。
记录与报告
对实验过程进行详细记录，包括实验动物的基本信息、实验操作、药 物使用、动物反应等，并对实验结果进行客观、准确、及时的报告。
补毒理学动物实验基础
目 录
• 毒理学动物实验概述 • 实验动物的选择和管理 • 毒理学动物实验的设计与实施 • 毒理学动物实验的安全与防护 • 毒理学动物实验的评估和报告 • 毒理学动物实验的伦理和法规
01 毒理学动物实验概述
毒理学动物实验的定义
毒理学动物实验是指通过使用动物作为实验对象，研究外来物质对动物和人类的 毒性作用、作用机制和剂量-反应关系的实验方法。
应急处理
实验室应制定应急处理预案，确保实验人员在遇 到突发情况时能够迅速、正确地应对。
05 毒理学动物实验的评估和 报告
实验结果的评估和分析
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 描述性统计和推断性统计，以评 估实验结果的有效性和可靠性。
实验结果解读
根据实验结果，解读其对毒理学 研究的意义和潜在影响，以及其 对人类健康的潜在影响。
环境毒理学实验ppt课件
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
4、质量控制 可在实验中加入阳性对照组（氯乙酰 胺），空白组用去离子水代替受试物，实验 结束后空白对照组死亡率应不超过10%。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
五、结果及实验报告 记录不同受试物浓度对应的死亡情况， 实验报告就包括以下内容： 受试物的基本物化性质；实验动物的饲 养条件等；试验条件包括温度、湿度、光照 条件、实验介质的成分级成和制备条件；实 验结果报告。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
四、方法和步骤 1、清肠 用蒸馏水清洗蚯蚓，然后置于铺有滤纸 的磁盘上清肠24h，用去离子水冲洗后，滤纸 吸干称重，供试。 注：清肠过程用薄膜包紧磁盘，防止蚯 蚓爬出磁盘死亡。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
2、滤纸实验 在平底试管内壁衬滤纸，铺满不重叠； 设5个浓度梯度（见附表）及对照共6组 试管，每组≥10个重复，每个试管内首先移 取1ml对应浓度的受试物溶液，用洁净空气吹 干，然后每个试管加入1ml去离子水，然后加 入1条蚯蚓，用薄膜封口，在黑暗、20±2℃ 环境培养48h，每24h观察一次，记录死亡情 况，同时还有蚯蚓的病理症状和行为。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验二 有机磷农药对胆碱酯酶的抑制实验
3、各小组向2ml管加入0.5ml正常虫浆，然 后由老师帮忙加入20µl0.1%敌百虫液，放置15 分钟；
4、向1-6号管分别添加0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0、1.0ml试剂（1），再分别加入1.3、1.1、 0.9、0.7、0.5、0.5磷酸盐缓冲液，摇匀；向7 号管中分别加入0.5ml无处理的正常虫浆，向8 号管中加入0.5ml敌百虫处理过的虫浆，然后分 别向7-9号管加入1ml试剂（1），摇匀；
实验一 蚯蚓急性毒性实验
4、质量控制 可在实验中加入阳性对照组（氯乙酰 胺），空白组用去离子水代替受试物，实验 结束后空白对照组死亡率应不超过10%。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
五、结果及实验报告 记录不同受试物浓度对应的死亡情况， 实验报告就包括以下内容： 受试物的基本物化性质；实验动物的饲 养条件等；试验条件包括温度、湿度、光照 条件、实验介质的成分级成和制备条件；实 验结果报告。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
四、方法和步骤 1、清肠 用蒸馏水清洗蚯蚓，然后置于铺有滤纸 的磁盘上清肠24h，用去离子水冲洗后，滤纸 吸干称重，供试。 注：清肠过程用薄膜包紧磁盘，防止蚯 蚓爬出磁盘死亡。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验一 蚯蚓急性毒性实验
2、滤纸实验 在平底试管内壁衬滤纸，铺满不重叠； 设5个浓度梯度（见附表）及对照共6组 试管，每组≥10个重复，每个试管内首先移 取1ml对应浓度的受试物溶液，用洁净空气吹 干，然后每个试管加入1ml去离子水，然后加 入1条蚯蚓，用薄膜封口，在黑暗、20±2℃ 环境培养48h，每24h观察一次，记录死亡情 况，同时还有蚯蚓的病理症状和行为。
海南大学环境与植物保护学院 苏增建
实验二 有机磷农药对胆碱酯酶的抑制实验
3、各小组向2ml管加入0.5ml正常虫浆，然 后由老师帮忙加入20µl0.1%敌百虫液，放置15 分钟；
4、向1-6号管分别添加0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0、1.0ml试剂（1），再分别加入1.3、1.1、 0.9、0.7、0.5、0.5磷酸盐缓冲液，摇匀；向7 号管中分别加入0.5ml无处理的正常虫浆，向8 号管中加入0.5ml敌百虫处理过的虫浆，然后分 别向7-9号管加入1ml试剂（1），摇匀；
《毒理学实验基础》课件
通过统计图表（如柱状图、折线图、散点 图等）直观地展示实验数据和分析结果。
05
毒理学实验的应用与展望
毒理学实验在药物研发中的应用
药物安全性评价
毒理学实验是药物研发过程中评 估药物安全性的重要手段，通过 动物实验观察药物对机体的毒性 作用，为新药上市提供安全性依
据。
药物作用机制研究
毒理学实验可以帮助研究药物的 作用机制，了解药物在体内的代 谢、转化和毒性作用机制，为新
生态风险评估
毒理学实验可以帮助评估人类活 动对生态环境的潜在风险，预测 污染物对生物多样性和生态平衡 的影响，为环境保护和可持续发 展提供支持。
环境修复与治理
毒理学实验可以用于环境修复与 治理过程中，研究生物修复技术 的有效性，评估治理措施对环境 的影响，提高环境治理的效果。
毒理学实验的发展趋势与展望
实验动物的选择
实验动物种类
01
选择适合的实验动物种类，如小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等，以
满足实验需求。
实验动物品系
02
根据实验目的和要求，选择不同品系的实验动物，以确保实验
结果的准确性和可靠性。
实验动物年龄与性别
03
根据实验目的和要求，选择不同年龄和性别的实验动物，以确
保实验结果的准确性和可靠性。
染毒方法与途径
盲法原则
实验过程中应保持盲态，避免主观偏见对实 验结果的影响。
实验数据的收集与整理
数据记录
准确、完整地记录实验数据，包括实验对象的基本信息、实验条件、观察指标等。
数据整理
对实验数据进行分类、排序、筛选等处理，使其更易于分析和解释。
数据核对
对实验数据进行核对，确保数据的准确性和完整性。
数据保密
毒理学实验设计ppt课件
6
3.随机原则
为了减少个体差异这种非处理因素的干拢， 应于实验前将实验动物依统计学原则进行 随机分组，以此达到尽可能降低非处理因 素的混杂效应，从而提高每组动物间均衡 性的目的。 （1）随机分组方法： ①随机数字表法； ②计算机软件（如SPSS、SAS、Excel等）方法 。
（2）例子：将32只动物按体重每4只组成一个区组， 随机分配到4种处理中，共组成8个区组。
10
Log[Dose]
3.确定毒作用的靶器官
4.确定损害的可逆性
5.其它 毒作用的敏感检测指标和生物学标志 毒作用机制研究 受试物的毒物动力学和代谢研究 中毒的解救措施
11
三、毒理学动物实验设计内容 1. 实验动物选择： 2. 实验动物分组与剂量选择、实验期限：
12
Biological Response
毒理学动物实验设计
外推
1
一、毒理学毒性评价试验的原则
毒理学实验通常是毒性评价或安全性评价试验， 通常由权威机构规定评价程序。 在描述毒理学的试验中，有三个基本的原则:
1.外来化学物在实验动物产生的作用，可以 外推于人
基本假设为： ①人是最敏感的动物物种； ②人和实验动物的生物学过程包括化学物的 代谢，与体重（或体表面积）相关。
17
通常实验记录的项目和内容为： （1）实验名称、实验日期、实验者； （2）受试对象：动物种类、品系、编号、体重、 性别、健康状况、饲料、离体器官名称等； （3）实验药物或试剂：名称、来源（生产厂）、 剂型、批号、规格、含量、浓度、给药体积、给 药剂量、给药时间、给药间隔、疗程等； （4）实验仪器：主要仪器名称、生产厂、型号、 规格等；
09
Compute II=Uniform(1).
3.随机原则
为了减少个体差异这种非处理因素的干拢， 应于实验前将实验动物依统计学原则进行 随机分组，以此达到尽可能降低非处理因 素的混杂效应，从而提高每组动物间均衡 性的目的。 （1）随机分组方法： ①随机数字表法； ②计算机软件（如SPSS、SAS、Excel等）方法 。
（2）例子：将32只动物按体重每4只组成一个区组， 随机分配到4种处理中，共组成8个区组。
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Log[Dose]
3.确定毒作用的靶器官
4.确定损害的可逆性
5.其它 毒作用的敏感检测指标和生物学标志 毒作用机制研究 受试物的毒物动力学和代谢研究 中毒的解救措施
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三、毒理学动物实验设计内容 1. 实验动物选择： 2. 实验动物分组与剂量选择、实验期限：
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Biological Response
毒理学动物实验设计
外推
1
一、毒理学毒性评价试验的原则
毒理学实验通常是毒性评价或安全性评价试验， 通常由权威机构规定评价程序。 在描述毒理学的试验中，有三个基本的原则:
1.外来化学物在实验动物产生的作用，可以 外推于人
基本假设为： ①人是最敏感的动物物种； ②人和实验动物的生物学过程包括化学物的 代谢，与体重（或体表面积）相关。
17
通常实验记录的项目和内容为： （1）实验名称、实验日期、实验者； （2）受试对象：动物种类、品系、编号、体重、 性别、健康状况、饲料、离体器官名称等； （3）实验药物或试剂：名称、来源（生产厂）、 剂型、批号、规格、含量、浓度、给药体积、给 药剂量、给药时间、给药间隔、疗程等； （4）实验仪器：主要仪器名称、生产厂、型号、 规格等；
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Compute II=Uniform(1).
毒理学实验基础PPT课件
适当重复、盲法观察等。 结果统计分析：方法选择，可用不同方法处理.
毒理学实验结果评价
• 结果评价需要解决的问题
– 是否具有统计学意义 统计学意义和生物学意 – 是否具有生物学意义 义的相关p131表6-6 – 是否具有毒理学意义
具有统计学意义是判断生物学意义的必要条件之一； 判断生物学意义时要：（1）纵向比较：剂量-反应关系；
• 阳性对照：剂量反应的直线部分 • 重复：可疑结果要重复，但非简单重复
七、实验动物染毒和处置
• 尽可能模拟人接触毒物的方式 • 不同途径的吸收速率为：静注＞吸入
＞ 肌注＞ 腹腔注射＞ 皮下注射＞ 经 口＞ 皮内注射＞ 其他
实验动物染毒和处置
一、染毒
• 经口染毒：（1）喂饲、（2）灌胃、（3） 吞咽胶囊；
（四）、个体选择
• 性别：初次试验雌雄同用；存在差异分开统 计；选敏感性别。
• 年龄和体重：动物年龄依实验类型选择，取 成年期数据。体重可作为判断年龄的指标。
• 生理状态：避免激素影响，雌雄分开饲养； 繁殖实验、致畸试验适时合笼交配。
• 健康状况：用健康动物，提前观察确认。
（五）实验动物管理
• 动物管理：动物的接受、适应、饲养、鉴 别和记录（动物来源、处理、其它资料）.
• refinement优化：必须 使用动物时，减少非人道 程序的影响
四、实验动物的选择
实验动物：指经人工培育，对其携带微 生物实行控制，遗传背景明确，来源 清楚，可用于科学研究的动物。
（一）物种选择
基本原则： • 对外源化学物的毒性反应及代谢特点
与常人规类实接验近选的择物两种个（物很种难，满分足属）：； • 自然寿命不太•长啮的齿物类种； • 易于饲养和实•非验啮操齿作类的物种； 1. 经济并易于获得的物种。
毒理学实验结果评价
• 结果评价需要解决的问题
– 是否具有统计学意义 统计学意义和生物学意 – 是否具有生物学意义 义的相关p131表6-6 – 是否具有毒理学意义
具有统计学意义是判断生物学意义的必要条件之一； 判断生物学意义时要：（1）纵向比较：剂量-反应关系；
• 阳性对照：剂量反应的直线部分 • 重复：可疑结果要重复，但非简单重复
七、实验动物染毒和处置
• 尽可能模拟人接触毒物的方式 • 不同途径的吸收速率为：静注＞吸入
＞ 肌注＞ 腹腔注射＞ 皮下注射＞ 经 口＞ 皮内注射＞ 其他
实验动物染毒和处置
一、染毒
• 经口染毒：（1）喂饲、（2）灌胃、（3） 吞咽胶囊；
（四）、个体选择
• 性别：初次试验雌雄同用；存在差异分开统 计；选敏感性别。
• 年龄和体重：动物年龄依实验类型选择，取 成年期数据。体重可作为判断年龄的指标。
• 生理状态：避免激素影响，雌雄分开饲养； 繁殖实验、致畸试验适时合笼交配。
• 健康状况：用健康动物，提前观察确认。
（五）实验动物管理
• 动物管理：动物的接受、适应、饲养、鉴 别和记录（动物来源、处理、其它资料）.
• refinement优化：必须 使用动物时，减少非人道 程序的影响
四、实验动物的选择
实验动物：指经人工培育，对其携带微 生物实行控制，遗传背景明确，来源 清楚，可用于科学研究的动物。
（一）物种选择
基本原则： • 对外源化学物的毒性反应及代谢特点
与常人规类实接验近选的择物两种个（物很种难，满分足属）：； • 自然寿命不太•长啮的齿物类种； • 易于饲养和实•非验啮操齿作类的物种； 1. 经济并易于获得的物种。
毒理学实验基本技术与方法.ppt
18 2021年3月22日星期一6时41分42秒
(二)动物实验设计的主要方法
1.配对设计：将受试动物按一定条件配成对子，再随机分配每 对中的两个受试动物到不同的处理组。 2.随机区组设计：将受试动物按一定的特征划分为若干配伍组 或区组，再将机每一配伍组中的各受试动物随机分配到不同的 处理组。 3.完全随机设计：将受试动物随机地分配不同的处理组。 4.拉丁方设计：按拉丁方阵型将受试动物随机的分配到各个处 理组（涉及多个因素，且各个因素无交互作用、水平数相等）。
7 2021年3月22日星期一6时41分41秒
3 .动物实验的局限性
➢种属外推的不确定性 ➢高剂量向低剂量外推的不确定性 ➢样本量到大样本外推的不确定性 ➢无法观察主观指标
8 2021年3月22日星期一6时41分41秒
二、 动物实验的职业道德-3R原则
实验动物在人类认识生命、预防与治疗疾病的医学发展
5
6
7
8 9 10 11 12
随机数字 07 81 63 77 86 82 74 64 40 42 23 71
除3余数
1
0
02
2
1
2
01
0
2
2
组别
A C CB B A B CA C B B
随机数字表
以3除各随机数字，若余数为1，即该鼠归A组；余数为2，归人B组；余数 为0，归人C组。随机分组结果如下：
4 2021年3月22日星期一6时41分41秒
一、动物实验的目的、要求、局限性
实验动物(Laboratory animals)是专门培育供实验用的动物，主 要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医 疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、 育成的动物。
(二)动物实验设计的主要方法
1.配对设计：将受试动物按一定条件配成对子，再随机分配每 对中的两个受试动物到不同的处理组。 2.随机区组设计：将受试动物按一定的特征划分为若干配伍组 或区组，再将机每一配伍组中的各受试动物随机分配到不同的 处理组。 3.完全随机设计：将受试动物随机地分配不同的处理组。 4.拉丁方设计：按拉丁方阵型将受试动物随机的分配到各个处 理组（涉及多个因素，且各个因素无交互作用、水平数相等）。
7 2021年3月22日星期一6时41分41秒
3 .动物实验的局限性
➢种属外推的不确定性 ➢高剂量向低剂量外推的不确定性 ➢样本量到大样本外推的不确定性 ➢无法观察主观指标
8 2021年3月22日星期一6时41分41秒
二、 动物实验的职业道德-3R原则
实验动物在人类认识生命、预防与治疗疾病的医学发展
5
6
7
8 9 10 11 12
随机数字 07 81 63 77 86 82 74 64 40 42 23 71
除3余数
1
0
02
2
1
2
01
0
2
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组别
A C CB B A B CA C B B
随机数字表
以3除各随机数字，若余数为1，即该鼠归A组；余数为2，归人B组；余数 为0，归人C组。随机分组结果如下：
4 2021年3月22日星期一6时41分41秒
一、动物实验的目的、要求、局限性
实验动物(Laboratory animals)是专门培育供实验用的动物，主 要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医 疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、 育成的动物。
药物毒理学实验演示课件
350 ~ 1050克 >1050克
6. 注意事项
6.1 正确捉拿小白鼠，防止咬伤；
6.2 注意肌肉注射方法，给药剂量力求准确；
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法， 根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一 次或24h后，观察动物所产生的警醒毒性反应及其严 重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计 算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
表2：结果记录表
组别
注射浓度（mg/kg）
Hale Waihona Puke 动物数 死亡数 死亡率备注
1
1000
4
2
850
4
3
720
4
4
660
4
5
520
4
4. 计算LD50
4.1计算方法：目测机率单位法、加权机率单 位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法。
4.2 Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对 剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和 100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。
安全范围 是指药物的最小有效量与最小中毒量之间的范围，它表示药 物的安全性，一般安全范围越大，用药越安全。药理学用上95%有效剂量 （ED95）到5%中毒剂量（LD5）的距离来表示。
实验一 急性毒性试验
• （一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒; （2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
亚慢性毒性 是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出 现的中毒效应。所谓较大剂量，是指小于急性LD50的剂量。“多日”的确 切天数，至今尚无完全统一的认识。一般认为在环境毒理学与食品毒理学 中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为1～3月即可。
6. 注意事项
6.1 正确捉拿小白鼠，防止咬伤；
6.2 注意肌肉注射方法，给药剂量力求准确；
二. 实验原理
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组方法， 根据LD50计算的设计原则将动物分成数个染毒组。一 次或24h后，观察动物所产生的警醒毒性反应及其严 重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计 算半数致死量（LD50）。据此分析受试动物毒性反应 与剂量的关系，并根据LD50值对药物进行毒性分级。
表2：结果记录表
组别
注射浓度（mg/kg）
Hale Waihona Puke 动物数 死亡数 死亡率备注
1
1000
4
2
850
4
3
720
4
4
660
4
5
520
4
4. 计算LD50
4.1计算方法：目测机率单位法、加权机率单 位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法。
4.2 Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对 剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和 100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。
安全范围 是指药物的最小有效量与最小中毒量之间的范围，它表示药 物的安全性，一般安全范围越大，用药越安全。药理学用上95%有效剂量 （ED95）到5%中毒剂量（LD5）的距离来表示。
实验一 急性毒性试验
• （一） 药物LD50的测定
一、实验目的
（1）理念——是药三分毒; （2）了解一些常规药物毒理学的试验方法， 及评价指标; （3）掌握药物急性毒性试验的试验设计方 法、LD50的测定及计算方法。
亚慢性毒性 是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出 现的中毒效应。所谓较大剂量，是指小于急性LD50的剂量。“多日”的确 切天数，至今尚无完全统一的认识。一般认为在环境毒理学与食品毒理学 中所要求的连续接触为3～6个月，而在工业毒理学中认为1～3月即可。
毒理学实验ppt讲解共73页文档
•
30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
毒理学实验ppt讲解
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
•
26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
•
27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
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• 敌敌畏原液浓度：1400mg/ml • 稀释成10mg/ml，81.53ml的母液 • 1400mg/ml*Vx=10mg/ml*81.53ml Vx=0.582ml V水=81.53-0.582 第1组 20ml 第2组 剩余母液+20ml水→混匀后取20ml 以此类推
受试物名称： 动物来源及合格证号： 剂量组别 动 物 （mg/kg） 编号 性 别
计算公式
• m=Xk-i(∑p-0.5)
pq Sm= i n
m：lgLD50 i:相邻两剂量组对数值的差 Xk：最大剂量的对数值 P：死亡率 q:存活率 n：每组动物数 ∑p=各剂量组死亡率总和
五、评价：毒性分级、毒性特征
六、讨论：
实验二 皮肤刺激性/腐蚀性试验 （豚鼠）
试验目的
• 确定化学物对哺乳动物皮肤局部是否有刺 激作用或腐蚀作用及其程度，为制定防护 化学物对皮肤的刺激保护措施提供依据。
代与子代之间交配培育而成的动物
② 杂交群：F1代，两个不同近交系之间进行有计划的交配.杂
交所产生的第一代动物，即F1代动物
③ 封闭群：5年内，随机交配。一个种群动物位于固定地
点，5年以上不从外部引进任何新种,仅在群内随机交配繁殖
遗传均一性：
一种毒物固定使用同种品系
3、微生物学和寄生虫控制的选择 Ⅰ级：普通动物，开放系统饲养 Ⅱ级：清洁动物，屏障系统饲养 Ⅲ级：SPF动动，屏障/隔离系统饲养 Ⅳ级：无菌动物，隔离系统饲养
• 对化妆品产品而言，可根据人的实际使用 和产品类型，延长或缩短敷用时间。 • 对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2 h敷用 试验。 • 试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残 留受试物。
• 如怀疑受试样品可能引起严重刺激或腐蚀 作用，可采用分段试验，将三个涂布受试 样品的纱布块同时或先后敷贴于一只家兔 背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、 60min和4h取下一块纱布，皮肤涂敷部 位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止 试验。
• 皮肤刺激性(Dermal Irritation)：皮 肤涂敷受试样品后局部产生的可逆性炎性 变化。 • 皮肤腐蚀性(Dermal Corrosion)：皮肤 涂敷受试样品后局部引起的不可逆组织损 伤。
试验的基本原则
• 将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的 皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物 皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 • 采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺 激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应 足以评价该作用的可逆性或不可逆性。
尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉注射架或 粗的玻璃试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作,如进行 解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。
(2)大鼠：大鼠的抓取基本同小鼠，只是大 鼠比小鼠性情凶猛，不易用袭击方法抓取。 为避免咬伤，可带上帆布或棉纱手套。采 用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳， 余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中。
三、材料与试剂
• 动物：昆明种小白鼠 • 器材：注射器、灌胃针、见到、镊子、试 剂瓶、标签笔、移液枪等（课下交还）
• 试剂：敌敌畏，苦味酸
四、步骤
1. 2. 3. 4. 5. 6. 动物选择 剂量设计：5-8个剂量（一般不设对照组） 动物称重、编号、标记 受试物配制 灌胃：0.1-0.2ml/10g体重 观察：急性毒性试验原始记录
• 强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5， 由于可预见其腐蚀特性，不必做本试验；
• 若已知受试样品有很强的经皮吸收毒性 （LD50≤200mg/kg bw）的物质不必 进行本试验；
试验方法
1、受试样品 • 液态受试样品采用原液或人类实际应用浓度 • 固体受试样品经研磨，过100目筛后用水或 适当的赋形剂（如凡士林、阿拉伯树胶、乙 醇和水、羧甲基纤维素、聚乙二醇、丙三醇、 植物油和矿物油等）按一定比例调制，以保 证与皮肤充分接触。
急性毒性试验原始记录 受试物性状： 受试物来源： 染毒途径： 体重 （ g） 染毒量 （ml） 染 毒 时间 室温：
动物种属品系： 日期： 死 亡 时间 体重 记录
体征及出现时间
试验操作者：
实验记录者：
5. LD50计算：LD50及95%可信区间
敌敌畏小鼠经口染毒死亡情况 组别 1 2 3 4 5 i= ∑p= 剂量 mg/kg 对数 动物数 （n） 死亡数 (只) 死亡率 (p) 存活率 (q) p·q
2、实验动物和饲养环境
• 首选健康成年白色家兔，其次为白色豚鼠。 • 至少需要4只健康成年动物（雄性和/或雌性均可）。
• 每只动物相邻的未处理的皮肤可作为对照。
• 每只单笼饲养，试验前动物要在实验室中适应3d。
• 常规饲料喂养，自由饮水
3、剂量设计
• 受试样品0.5ml(g)，均匀涂布于受试部 位。如受试样品难以获得，或易产生全身 毒性等原因，用量可适当减少。但为了试 验的一致性，测试面积应力求相等。
项圈
耳缘孔口标记：
染色法：苦味酸、品红
耳缘孔口标记：
用耳号钳在耳上打洞或者用剪刀在耳边缘剪缺口，左耳为十位，右耳为个位。
（五）动物随机分组：随机数字表
（六）染毒途径和方法 1. 经口（胃肠道）染毒
① 喂饲：不易挥发、不易水解、无异味、不影响营养
② 吞咽胶囊： ③ 灌胃：灌前禁食空腹，不饮水，灌胃容积0.1～ 0.2ml/10g – 小鼠、大鼠或豚鼠：左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动 物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿 咽后壁徐徐插入食管。针插入时应无阻力，若感到阻 力或动物挣扎，应立即停止进针或将针拔出，以免损 伤或穿破食管及误入气管。
4、试验步骤
1）试验前准备 • 试验前24h，将实验动物脊柱两侧毛剪去 或剃掉，不可损伤表皮，去毛范围左右各 3cm×3cm。24h后，选择皮肤健康完整 无损的动物进行试验。不应在长有浓密岛 状毛的部位进行受试样品试验。
2） 染毒
• 受试样品0.5ml(g)直接涂布在皮肤上， 用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻 璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和 绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采 用封闭试验，敷用时间为4h。
– (2)耳，耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。
– (3)鼻：无喷嚏，无浆性粘液分泌物。 – (4)皮肤：无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。
– (5)颈部：要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不
应选作实验动物。 – (6)消化道：无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。
– (7)神经系统：无震颤、麻痹。若 年龄：急性、慢性
以体重估计：组内、组间差异
③ 生理状态：雌--未产未孕，避免妊娠、激 素影响
④ 健康状况：健康动物
健康动物辨认：
健康动物辨认：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼 睛明亮，行动迅速、反应灵活，食欲及营养状况良好。 – (1)眼：明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。
(3)豚鼠：豚鼠胆小易惊，在抓取时要稳、 准、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其 肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一 只手托住臀部即可。 (4)兔：用右手抓住兔颈部的毛皮提起，然 后左手托住其臀部或腹部，让其体重的大 部分重量集中在左手上。注意不要抓取双 耳或抓提腹部。
（四）实验动物称重、编号、标记
3）观察期限
• 观察时间的确定应足以观察到可逆和不可逆刺激 作用的全过程，一般不超过14d。
• 于清除受试样品后的1、24、48、72h分别观 察给予受试样品部位的皮肤反应，按表1进行皮 肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合 评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分 均值，按表2判定皮肤刺激强度。
• 改良寇氏法：计算简便，准确率高，常用 • 霍恩法 • 序贯法 • Bliss法
改良寇氏法要求
• 每组动物数相等 • 各剂量组组距呈等比级数
• 死亡呈正态分布
• 最低剂量组死亡<20%
• 最高剂量组死亡>80%
二、原理
• 健康动物按体重随机分组一次或多次 经口给药观察中毒特征或死亡剂量-反 应关系求出LD50 毒性分级
2. 经呼吸道染毒
① 静式吸入
② 动式吸入
③ 气管内注入
3. 经皮肤染毒
① 斑贴法（家兔）
被毛的去除：剪毛、拔毛、脱毛
② 浸尾法（大、小鼠）
4. 注射染毒：静脉注射、肌肉注射、腹腔注 射、皮下注射、皮内注射
（七）生物标本采集
1.血液采集：
① 大、小鼠鼠尾采血法
② 眼眶静脉丛采血法
③ 腹主动脉或股动(静)脉采血法
④ 断头采血法
⑤ 家兔耳缘静脉采血法 ⑥ 心脏采血法
实验动物安全采血量
动物品种 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml) 小鼠 0.1 0.3
大鼠 豚鼠 家兔
1.0 5.0 10.0
2.0 10.0 40.0
2.尿液、粪便收集：代谢笼 （八）动物处死
1. 脊椎脱臼法 6.麻醉后急性放血法
2. 断头法
1：k系列稀释法
• 最大剂量组浓度C1 （母液浓度） C1=200mg/kg=2mg/10g 0.2ml/10g→2mg/0.2ml=10mg/ml
• 每组最大体积m=20ml（设每只鼠需2ml）
• k：相邻两组剂量之比=64.89/85.981=0.75
• V总=m/（1-k）=81.53ml（各组母液和）
3. 急性大失血法
7.空气栓塞法
8.化学药物致死法
4. 击打法
5. 麻醉致死法
9.开放性气胸法
微核实验动物染毒
• 阴性对照组：生理盐水 • 阳性对照组：环磷酰胺40-60mg/kg • 高剂量组：敌敌畏20mg/kg • 中剂量组：敌敌畏10mg/kg • 低剂量组：敌敌畏5mg/kg
实验二 急性经口毒性试验