槲皮素,芦丁的提取
新试验一 芦丁的提取、分离与鉴定
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷, 苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度: 冷水1: 8000 热水1: 200冷乙醇1: 300 热乙醇1: 30难溶于乙酸乙酯、丙酮, 不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度: 冷乙醇1: 650 热乙醇1: 60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶, 不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质, 用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物, 可被稀酸水解成槲皮素（苷元）, 葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应, 色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容（一）提取分离和纯化l 、芦丁的提取:2.精制（重结晶）:3、芦丁的水解:OO OHOH OROH HO流程图如下:槐米（20g）研碎, 于500ml烧杯中,加350, 250ml水煮沸15min,10min棉花过滤150ml, 1%H2SO4 80倍水加热溶解, 趁热抽滤直火加热水解30min放冷抽滤, 沉淀水洗至中性不溶物（弃去）滤液放置 1-1.5h, 抽滤精品芦丁（水浴浓缩至2ml）(二)鉴定l、化学检识取芦丁和槲皮素少量, 置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解(1)盐酸—镁粉反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加浓盐酸5滴, 再加少量镁粉, 观察颜色变化。
(2)Molish反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀, 倾斜试管, 沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml, 静置, 观察二层溶液界面处颜色变化, 并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL3反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴, 观察颜色变化。
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴槐米粗粉（50g）置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8～9煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过滤液药渣用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8～9趁热滤过滤液药渣（×）合并70℃下用浓HCl调pH至4 ～5沉淀低温（80℃）干燥，称重。
槲皮素,芦丁的提取
槐米中主要成分是芦丁。
从槐米中提取芦丁可用乙醉提取法、水提取法、碱溶酸沉提取法。
碱溶酸沉提取法是依据芦丁结构中有游离的酚羟基, 显弱酸性, 遇碱成盐溶解，加酸又游离析出的原理设计的, 此法成本低、收率高, 所得产品质童好, 是实际生产中常用的方法芦丁碱溶酸沉（alkali-solution and acid-isolation）碱溶酸沉法，中药化学中常用于黄酮类、蒽醌类、酚性,内酯结构的木脂素、香豆素类提取分离等实验。
原理：利用混合物中各组分酸碱性差异而进行分离。
具体操作将总提物溶于亲脂性有机溶，用碱水提取，调节PH值后用有机溶剂萃取，还可用PH梯度法进一步分离各碱度或酸度不同的成分。
注意：提取过程中料液比、浸提碱液pH值、浸提时间等条件都对提取率及纯度有影响。
注意酸性或碱性的强度，与被加热分离成分接触的时间，加热温度和加热时间等，避免在剧烈条件下某些化合物结构发生变化或结构不能回复到原本存在于中药的状态。
1．溶剂萃取法去杂原理：利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取。
石油醚：除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。
2．碱水提酸沉淀法原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。
注意事项：①酸碱度不宜过大②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质3．炭粉吸附法适用于苷类的精制工作。
植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。
依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。
大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。
（一）常用溶剂的特点：石油醚，环己烷，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇极性：小————大亲脂性：大————小亲水性：小————大1．比水重的有机溶剂：氯仿2．与水分层的有机溶剂：环己烷 ~ 正丁醇3．能与水分层的极性最大的有机溶剂：正丁醇4．与水可以以任意比例混溶的有机溶剂：丙酮~ 甲醇5．极性最大的有机溶剂：甲醇6．极性最小的有机溶剂：环己烷7．介电常数最小的有机溶剂：石油醚8．常用来从水中萃取苷类、水溶性生物碱类成分的有机溶剂：正丁醇9．溶解范围最广的有机溶剂：乙醇。
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素一、概述植物来源：槐米系豆科植物槐树（sophora japonica L.）的花蕾（槐米），芦丁含量高达12%~20%。
荞麦中含量也较高。
含芦丁成分的植物高达70种以上。
功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素P 样作用。
在临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。
芦丁为槐米中主要有效成分。
主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（Rutin ）也称芸香苷，是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷(芸香糖为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖)。
分子式：C 27H 30O 16·3H 2O ，淡黄色针状结晶，含三分子结晶水，熔点174～178℃,无水物为188~190℃。
易溶于碱液，显橙黄色，酸化后又析出。
在冷水中的溶解度为1：10000，热水中为1：200，在冷乙醇中为1：650，在热乙醇中为1：60，在吡啶中为1：12。
微溶于乙酸乙酯和丙酮，难溶于苯、三氯甲烷、石油醚等极性小有机溶剂，可溶于硫酸和盐酸，加水稀释又可析出。
UV EtOHm ax λ：259，299，359nm 。
芦丁用20%H 2SO 4水溶液水解可得槲皮素（芦丁的苷元），呈黄色结晶，313～314℃，C 15H 10O 7·2H 2O ，在热乙醇中溶解度为1：23，冷乙醇中1：290，难溶于水和苯等极性小的有机溶剂，可溶于极性较大的有机溶剂如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。
UV EtOH m ax λ：255，269sh,301sh,370nm 。
其他成分理化性质：皂苷（saponin ）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。
白桦酯醇（betulin ）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。
芦丁槲皮素鉴定实验报告
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。
在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。
在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。
实验步骤如下：1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。
2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。
3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C24.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。
5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。
6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。
7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。
8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。
需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。
在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。
同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。
芦丁的提取与鉴定
实验现象 芦丁分层上层呈浅 黄色，下层出现紫 红色环。槲皮素分 层上层为浅黄色， 下层为无色
芦丁，槲皮素溶液 都变成紫红色
芦丁，槲皮素溶液 都出现荧光
解析 Molish 反应是鉴定 糖的反应。芦丁含 有葡萄糖和鼠李 糖，所以出现紫环 反应，槲皮素没有 糖结构，所以没反 应。 盐酸镁粉反应是检 查是否有黄酮类化 合物的最常用方 法。芦丁，槲皮素 都含有黄酮结构， 所以出现紫红色。 芦丁，槲皮素都含 有黄酮结构。
所以可以认为 a 为葡萄糖，b 为鼠李糖。糖试液中含有葡萄糖和鼠李糖。芦丁样品中含有 芦丁，槲皮素样品中含有槲皮素。 （4）薄层色谱
Rf（A）=0.46 Rf（B）=0.40 Rf（C）=0.10 Rf（D）=0.07 因为 Rf（A）≈ Rf（B） Rf（C）≈ Rf（D）
所以可以认为 B 为芦丁，D 为槲皮素。 五．实验结果与讨论
二. 实验原理
芦丁为双糖苷，具有较大极性，对热水和冷水具有较大的溶解差异，故用水对其进行提取 精制。
芦丁可被稀水解，生成槲皮素及葡萄糖，鼠李糖，并通过薄层层析，纸层析鉴定。芦丁 及槲皮素还可以通过化学反应及紫外及红外光谱鉴定。
OH OH
OH OH
HO
O
HO
O
+
H
+
O
OH
OH O Glc O
OH O
芦丁粗品
重结晶
芦丁纯品
原理：黄酮苷难溶于酸水，易溶于碱水。
2 芦丁及槲皮素的纸层析和聚酰胺薄膜层析的结果如何？为什么不同？
在纸层析中 Rf 槲皮素>Rf 芦丁，在聚酰胺薄膜层析中 Rf 槲皮素<Rf 芦丁
芦丁的提取
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O O 4'
芦丁的提取与定性反应
槲皮素
OH OH
OAc OAc
AcO
HO O
O
O
O
OAc
OH OHቤተ መጻሕፍቲ ባይዱO OH OH OH OH OH O CH2O
O CH2O O OAc OAc
OAc
O
O
OAc OAc
OAc
芦丁
芦丁十乙酰化物
实验原理
提取原理---芦丁分子中有酚羟基，呈弱酸性。在碱水 中成盐而增大其溶解度。然后，在酸中不溶而沉淀析 出，从而进行提取。 精制原理---利用芦丁易溶于热水或热甲醇，而较难溶 于冷水或冷甲醇，由此进行重结晶而精制。 芦丁— 槲皮素—
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O H2O Zr O Cl O 4'
稳定性： 稳定性： 3-OH络合物〉5-OH络合物 OH络合物〉 OH络合物 络合物
芦丁的提取与定性反应
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细， 芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的， 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除 去槐花米中含有的大量多糖类粘液质， 去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过 值不能过 高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出 pH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最 值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（ 值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解 值为5） 佳pH值为 ） 值为
芦丁的提取与定性反应
糖 的 纸 色 谱 鉴 定
标准品：葡萄糖乙醇液、鼠李糖乙醇液 标准品：葡萄糖乙醇液、 展开剂：正丁醇：醋酸： 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5，上层） 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105℃烘 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105℃烘 箱加热10min, 10min,显棕色斑点 箱加热10min,显棕色斑点
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
槐米中主要成分是芦丁。
从槐米中提取芦丁可用乙醉提取法、水提取法、碱溶酸沉提取法。
碱溶酸沉提取法是依据芦丁结构中有游离的酚羟基, 显弱酸性, 遇碱成盐溶解，加酸又游离析出的原理设计的, 此法成本低、收率高, 所得产品质童好, 是实际生产中常用的方法
芦丁
碱溶酸沉（alkali-solution and acid-isolation）碱溶酸沉法，中药化学中常用于黄酮类、蒽醌类、酚性,内酯结构的木脂素、香豆素类提取分离等实验。
原理：利用混合物中各组分酸碱性差异而进行分离。
具体操作将总提物溶于亲脂性有机溶，用碱水提取，调节PH值后用有机溶剂萃取，还可用PH梯度法进一步分离各碱度或酸度不同的成分。
注意：提取过程中料液比、浸提碱液pH值、浸提时间等条件都对提取率及纯度有影响。
注意酸性或碱性的强度，与被加热分离成分接触的时间，加热温度和加热时间等，避免在剧烈条件下某些化合物结构发生变化或结构不能回复到原本存在于中药的状态。
1．溶剂萃取法去杂
原理：利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取。
石油醚：除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素
水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质
逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚
在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。
2．碱水提酸沉淀法
原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。
注意事项：
①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质
3．炭粉吸附法
适用于苷类的精制工作。
植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。
依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。
大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。
（一）常用溶剂的特点：
石油醚，环己烷，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇
极性：小————大
亲脂性：大————小
亲水性：小————大
1．比水重的有机溶剂：氯仿
2．与水分层的有机溶剂：环己烷 ~ 正丁醇
3．能与水分层的极性最大的有机溶剂：正丁醇
4．与水可以以任意比例混溶的有机溶剂：丙酮~ 甲醇
5．极性最大的有机溶剂：甲醇
6．极性最小的有机溶剂：环己烷
7．介电常数最小的有机溶剂：石油醚
8．常用来从水中萃取苷类、水溶性生物碱类成分的有机溶剂：正丁醇
9．溶解范围最广的有机溶剂：乙醇。