对外周血单个核细胞分离方法探讨
外周血单个核细胞的分离方法
外周血单个核细胞的分离方法哎呀，朋友们，今天咱们聊聊一个特别有意思的话题——外周血单个核细胞的分离方法。
你可能会问，啥玩意儿？简单来说，就是从咱们的血液里找出一种特别的细胞。
想象一下，这就像在一个巨大的水果市场里，找出你最爱的苹果那样。
1. 什么是外周血单个核细胞？1.1 首先，得跟你解释一下这东西。
外周血单个核细胞，顾名思义，就是咱们血液里的一种细胞，单核的，也就是没有太多复杂的结构。
这些细胞可是咱们身体的宝贝儿，它们能做很多重要的工作，比如免疫应答啊、修复组织啊，所以咱们得小心翼翼地对待它们。
1.2 好了，听上去有点复杂，其实操作起来也没那么难。
咱们只需要用一些科学的工具和方法，就能把这些细胞从血液里分离出来。
这个过程不仅能帮助研究人员更好地了解身体的各种反应，还能在医学上发挥大作用呢。
2. 如何进行分离？2.1 让咱们来聊聊具体的操作步骤吧。
首先，得抽取血液。
哎，这步最让人感到心慌，想象一下那根针头，还是尽量别多想了。
不过别担心，这步过了之后，就进入了最有趣的环节——分离。
血液被抽出来之后，就像把你最喜欢的食材从锅里捞出来一样，要把那些外周血单个核细胞找出来。
2.2 这个过程主要用到的工具叫做离心机。
离心机就像一个超级旋转的机器，把血液转得飞快。
在这高速旋转的过程中，血液里的各种成分会被分离开来，就像咱们在清理菜市场时，把苹果和香蕉分开一样。
离心之后，血液中的细胞就会被分成几层，最上面一层就是咱们的目标——外周血单个核细胞。
2.3 之后，拿到这些细胞，就得用到一些特殊的试剂进行进一步处理。
想象一下，你拿到了一大袋苹果，接下来要把它们洗净、切片，这样才行。
细胞也是一样，需要经过处理和清洗，才能保证它们的纯净和活力。
3. 实际应用3.1 分离出来的外周血单个核细胞可是用途广泛。
比如说，它们在医学研究中，能帮助科学家们了解各种疾病的成因，还能用来开发新的治疗方法。
就像你买了一台新玩具，得先拆开看看里面的零件一样，这些细胞就是研究中的“零件”，帮助咱们了解身体的奥秘。
外周血单个核细胞的分离方法
外周血单个核细胞的分离方法外周血单个核细胞的分离方法，听起来好像很高大上，其实咱们日常生活中也会遇到这种情况。
比如说，你想给你家小狗做个血液检查，看看它身体有没有问题，这时候就需要分离出它的外周血单个核细胞，然后送到实验室进行检测。
那么，这个过程到底是怎么实现的呢？别着急，我这就给你一一道来。
我们需要收集小狗的血液。
这个过程很简单，只需要用一根针头把小狗的静脉扎破，让它的血液流到一个容器里就可以了。
为了避免小狗疼痛，我们可以给它打一针麻醉剂，让它在睡梦中完成这个过程。
这样一来，我们就可以得到新鲜的小狗血液了。
接下来，我们需要把这些血液中的红细胞和白细胞分离出来。
这个过程叫做血液学的“洗涤”。
我们可以把小狗的血液放到一个大桶里，然后加入一些特殊的化学物质，让红细胞和白细胞自动分开。
这个过程可能需要几个小时，但是最终我们会得到两层液体：上面是淡黄色的透明液体，里面主要是血小板和各种细胞碎片；下面是深红色的血浆，里面主要是各种白细胞。
现在，我们已经得到了外周血单个核细胞。
这些细胞是一种特殊的白细胞，它们可以帮助我们了解小狗的身体状况。
但是，我们还需要把这些细胞从血浆中提取出来。
这听起来好像很难办到，但是实际上也很简单。
我们可以用一种叫做离心的方法，把血浆放在一个高速旋转的容器里，让血浆中的细胞被离心力甩到容器的壁上。
这样一来，我们就可以得到一层薄薄的血浆膜，里面包裹着各种细胞。
我们需要把这些细胞进一步分离。
这个过程叫做细胞学的“染色”。
我们可以用一种叫做吉姆萨染色液的特殊液体，给血浆膜上的细胞染上不同的颜色。
这样一来，我们就可以清楚地看到各种细胞的结构和功能了。
这个过程可能需要几小时甚至几天的时间，但是最终我们会得到一张精美的细胞图谱，上面记录着小狗身体内各种细胞的数量和状态。
通过以上步骤，我们就成功地分离出了小狗的外周血单个核细胞。
虽然这个过程看起来很复杂，但是实际上只要掌握了正确的方法和技巧，就可以轻松地完成。
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理一、前言外周血单个核细胞是指没有细胞核的血细胞，如红细胞、血小板等。
分离外周血单个核细胞是许多实验室和临床诊断中常用的一项操作。
而ficoll分离液则是分离外周血单个核细胞时常用的一种试剂。
本文将详细介绍ficoll分离液的原理及其在分离外周血单个核细胞中的应用。
二、ficoll分离液1. 概述ficoll分离液是由Ficoll（Ficoll-400）和盐水（PBS或Hanks平衡盐溶液）组成的一种密度梯度试剂。
它主要用于体外培养、淋巴细胞和其他白细胞的分离。
2. 原理ficoll分离液利用了不同密度的细胞在密度梯度中沉降速度不同的原理。
在密度梯度中，密度大的物质沉降速度快，而密度小的物质沉降速度慢。
当样品加入到ficoll分离液中时，样品中含有不同密度的各种成分，如红细胞、白细胞、淋巴细胞等。
这些成分会在密度梯度中沉降，最终形成一个由不同密度的层次组成的梯度。
在ficoll分离液中，Ficoll-400的密度大于外周血单个核细胞，但小于红细胞和粒细胞。
当样品经过离心后，外周血单个核细胞会沉降到ficoll分离液中的某一层次中，并被分离出来。
而其他成分则会沉降到不同的层次中。
3. 优点ficoll分离液具有以下优点：（1）样品处理方便：只需要将样品加入到ficoll分离液中进行离心即可。
（2）操作简单：只需要进行一次离心即可将外周血单个核细胞从其他成分中分离出来。
（3）高效：能够快速、高效地将外周血单个核细胞分离出来。
三、操作原理1. 实验材料（1）ficoll分离液；（2）外周血样本；（3）PBS或Hanks平衡盐溶液；（4）15ml或50ml的锥形试管；（5）离心机。
2. 操作步骤（1）将外周血样本加入到15ml或50ml的锥形试管中；（2）加入等体积的PBS或Hanks平衡盐溶液，轻轻混合；（3）将ficoll分离液缓慢加入到试管中，使其与样品充分混合；（4）将试管放入离心机中，以800~1000g的速度离心30分钟；（5）离心后，可以看到样品被分成了不同层次。
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）的采集、分离和保存是在医学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
PBMCs是一类具有免疫功能的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和浆细胞，能够在机体的免疫应答中发挥重要作用。
为了保证试验结果的准确性和可靠性，对PBMCs的采集、分离和保存必须按照相应的标准进行操作。
一、采集1. 选择合适的采集方法：一般常用的采集方法包括静脉抽血和手指取血等，静脉抽血常用于采集较多血液量的情况，手指取血则适用于采集少量血液的情况。
2. 确保采集操作标准化：在采集PBMCs的过程中，应该遵守严格的消毒和无菌操作规程，以防止细菌和病毒的污染。
3. 采集完整的血液样本：为了确保PBMCs的纯度和稳定性，应该尽量避免气泡和血细胞破损导致的RNA降解等情况。
二、分离1. 使用适当的分离方法：一般常用的PBMCs分离方法包括密度梯度离心和磁珠分选等，密度梯度离心适用于分离较大量的PBMCs，磁珠分选则适用于分离特定类型的细胞。
2. 选择合适的分离液：密度梯度离心中一般使用的分离液包括Ficoll和Percoll等，磁珠分选中则需要选择特定的磁珠标记物。
3. 保证分离效率和纯度：在PBMCs的分离过程中，应该确保细胞的分离效率和纯度，避免细胞的损失和杂质的混入。
三、保存1. 选择合适的保存条件：PBMCs的保存条件包括温度、储存液和容器等要素，应该选择适合PBMCs存活的条件进行保存。
2. 快速冻存PBMCs：为了避免细胞的降解和失活，应该在采集和分离PBMCs后尽快将其冻存。
3. 定期监测保存效果：在存储PBMCs的过程中，应该定期监测PBMCs的存活率和纯度，以确保PBMCs的质量和稳定性。
对于人外周血单个核细胞的采集、分离和保存，在操作的过程中应该严格按照相应的标准进行，以确保PBMCs的质量和稳定性，为后续的研究和临床应用提供可靠的基础。
人外周血流式细胞学分离单核细胞的方法
人外周血流式细胞学分离单核细胞的方法我折腾了好久人外周血流式细胞学分离单核细胞的方法，总算找到点门道。
咱就说刚开始的时候，我真是瞎摸索。
我知道有密度梯度离心这一步，但具体怎么操作完全没底。
我就按着人家书上说得大概做做看。
比如说，我拿了那个外周血样本，就跟捧着个宝贝似的，不敢乱动乱晃，因为觉得稍微有点差错可能就全完了。
第一次做的时候啊，那个离心的转速我就没设置对。
我就随便设了个看起来比较合理的值，可出来的结果那叫一个惨不忍睹，根本就没看到像样的单核细胞层。
当时我就懵了，这咋回事儿啊这是。
后来我就去查各种资料，发现转速这个事儿大有讲究。
就好比开车一样，快了慢了都不行，离心转速快了，细胞可能就被破坏了，慢了呢，各种细胞又分不开。
还有这个样本采集到开始离心的时间也很关键。
有一次我采集了样本之后，没有立刻处理，在旁边放了好一会儿才开始离心。
结果呢，细胞的状态就已经发生变化了。
那感觉就像你买了新鲜的水果想做水果沙拉，但是放了半天，水果都开始坏了，最后做出来的沙拉肯定也不好吃。
我就吃过这个亏，后来我采集了样本就麻溜儿地开始操作。
在密度梯度离心的时候呢，分层液的比例也很重要。
我试过不同的比例，乱调的时候基本就没有成功过。
正确的比例就像是魔法配方一样，稍微错一点都不行。
这个我是经过了好多好多的试验才确定下来，而且每次配分层液的时候我都小心翼翼的，跟做化学实验那种小心的程度差不多，各种量具都得洗干净，量要精确。
再就是收获单核细胞的时候，这个操作可得轻柔。
我有一回下手太重了，像个大老粗似的，那细胞估计都被我弄伤不少，在显微镜下一看啊，好多细胞都变形不成样子了。
所以在这个步骤上一定要耐心细致，就像从棉花堆里抽丝线一样，得缓缓地、轻轻地把单核细胞给分出来。
再说说洗涤细胞。
这个就像洗菜似的，你得把那些杂质什么的都给冲掉，但是又不能太用力，把菜都冲破了。
我以前洗涤细胞老不彻底，导致最后分析细胞的时候，总是有一些不明不白的东西干扰，背景不干净。
外周血单个核细胞的分离
外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。
通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。
本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。
方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。
3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。
4.以 400g 的速度离心 40 分钟。
在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。
5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。
6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。
磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。
3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。
4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。
5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。
密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。
这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。
外周血单个核细胞的分离方法
外周血单个核细胞的分离方法嘿，伙计们，你们有没有想过，为啥我们身体里的那个小不点——单核细胞，能帮我们搞定那么多问题？今天咱们就来聊聊这个“超级英雄”——外周血单个核细胞是怎么被我们驯服，变成治疗战场上的得力助手的。
咱们得了解单核细胞是什么。
它就像是个小卫士，专门负责保护我们的血液不受细菌和病毒的侵害。
想象一下，如果单核细胞是个战士，那它们肯定是那种冲锋在前、不畏艰险的勇士。
不过，这些勇士可不是随便就能招募的哦！你得先让它们从血液中跳出来，这就像是一个魔法咒语——那就是分离技术。
那么，如何让这些勇士跳出来呢？这就要靠咱们的分离技术了。
简单来说，就是通过一些巧妙的方法，把单核细胞从其他细胞中“揪”出来。
这个过程就像是在玩捉迷藏，你藏好了，我找到了你。
这里的“藏”和“找”可不是真的躲猫猫哦，而是利用物理或化学的方法，让单核细胞乖乖地待在一个地方，而其他细胞则四处游荡。
接下来，咱们来谈谈分离技术的几种常见方式。
第一种是密度梯度离心法，就像是一个神奇的过滤器，根据不同密度的物质沉降速度不同，让单核细胞“跳”到最上层。
第二种是免疫磁珠法，就像是一个聪明的小助手，用一种特殊的磁性物质吸引那些带有特定标记的单核细胞。
第三种则是流式细胞分选技术，就像一个魔法师，通过观察细胞表面的标记，精准地“召唤”出我们需要的单核细胞。
这些方法各有千秋，但最终的目的都是为了让我们能够轻松地找到那些勇敢的单核细胞战士们。
想象一下，如果我们的身体里有一支训练有素的军队，随时准备为我们排忧解难，那该有多好！当然啦，虽然我们现在有了这些分离技术，但要想真正成为治疗战场上的得力助手，还需要不断地学习和进步。
就像那些单核细胞战士们一样，我们要不断学习新的技能，提高自己的战斗力，才能更好地保护我们的健康。
我想说，单核细胞战士们虽然只是身体里的一小部分，但他们却承担着保卫我们健康的重任。
我们应该珍惜他们，爱护他们，同时也要感谢那些伟大的分离技术，让我们能够更加便捷地接触到这些英勇的战士。
外周血单个核细胞分离实验报告
外周血单个核细胞分离实验报告一、实验目的本实验旨在通过外周血单个核细胞分离实验，掌握外周血单个核细胞的分离方法及相关技术。
二、实验原理外周血单个核细胞分离是利用密度梯度离心法，将外周血中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分离出来。
具体步骤如下：1. 取外周血3ml，加入等体积的PBS缓冲液中，轻轻混合后放入无菌离心管中。
2. 将无菌离心管放入冰箱中静置30min。
3. 从冰箱取出后，将上清液吸取出来丢弃。
留下沉淀物。
4. 加入等体积的PBS缓冲液，轻轻混合后放入无菌离心管中。
5. 将无菌离心管放入密度梯度离心管中进行离心。
由于不同种类细胞密度不同，在经过密度梯度离心后会形成不同层次的沉淀物。
6. 取出沉淀物最上层液体，即为单个核细胞。
三、实验步骤1. 取外周血3ml，加入等体积的PBS缓冲液中，轻轻混合后放入无菌离心管中。
2. 将无菌离心管放入冰箱中静置30min。
3. 从冰箱取出后，将上清液吸取出来丢弃。
留下沉淀物。
4. 加入等体积的PBS缓冲液，轻轻混合后放入无菌离心管中。
5. 将无菌离心管放入密度梯度离心管中进行离心。
离心条件为2000rpm，20min。
6. 取出沉淀物最上层液体，即为单个核细胞。
四、实验结果经过实验操作后，得到了外周血单个核细胞。
观察镜下可见细胞形态完整、染色质均匀分布、核仁清晰。
五、实验注意事项1. 实验前应认真阅读操作步骤和注意事项，并做好充分准备工作。
2. 操作过程中应保持无菌操作环境，并使用消毒好的器材和试剂。
3. 离心时应注意转速和时间的控制，以避免对细胞造成不必要的损伤。
4. 实验结束后应及时清理实验台和器材，并妥善处理实验废弃物。
六、实验总结本实验通过密度梯度离心法，成功地将外周血中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分离出来，得到了单个核细胞。
在操作过程中，需要注意无菌操作环境和离心条件的控制。
通过本次实验，我们掌握了外周血单个核细胞的分离方法及相关技术，为后续的研究提供了基础。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
对外周血单个核细胞分离方法探讨韩亚萍刘源章莉莉刘婷李军黄祖瑚 2004-7-24 17:06:00 中华现代临床医学杂志 2003年11月第1卷第9期【摘要】目的探讨外周血单个核细胞（PBMC）的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。
方法取肝素抗凝血，分别用羟乙基淀粉（hydrixyethylstarch，HES）自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞，直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer，CIK）培养。
结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll 密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86.4%、86.0%、85.1%。
结论羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。
关键词羟乙基淀粉淋巴细胞分离液单核细胞Study on the methods of separating peripheral blood mononuclear cellsHanYaping，Liu Yuan，Zhang Lili，et al.Deparment of Infectious Diseases，The First Affiliated Hospital of Nanjing M edical University，Nanjing210029.【Abstract】 Objective To investigate the difference among three protocols o f isolating peripheral blood mononuclear cells（PBMCs）through observing the re covery rate，t he adherent ability and lymphocytes proliferation acˉtivity of t he isolated PBMCs.Methods Use three different isolation protocols，HES（hydrixy ethylstarch）sedimentation method，HES centrifugation method and Ficoll density gradient centrifugation，to isolate PBMCs from healthy donors.Then compare these isolation protocols through observing the recovery rate of PBMCs，the number of plastic-adherent cells and the cytokine-induced killer cells proliferation.Resul ts The recovery rate of PBMCs is86.4%by HES sedimentation method，83.7%by HES c entrifugation and sedimentation method and85.1%by Ficoll density gradient centr ifugation［method］ separately.Conclusion Our observation provide evidence that HEScentrifugation method could efficiently isolate PBMCs from human peripheral blood.Key words hetastarch ficoll monocyte外周血单个核细胞分离效果直接影响细胞培养结果，经典的Ficoll密度梯度常用于少量血液分离，而在血液较多时则须分成许多离心管，重复地开放操作增加了污染机会。
为此，我们用HES离心沉淀法代替Ficoll密度梯度离心法分离PBMC，对不同方法获取PBMC的贴壁能力和CIK细胞增殖活性等作一较为系统的探讨。
1 材料和方法1.1 材料外周血:健康成人外周血10份。
Ficoll:上海试剂二厂，分子量400000。
6%H ES:DUPONT公司生产，分子量480000。
1.2 方法1.2.1 外周血单个核细胞的分离 HES自然沉降法［1］ :即肝素抗凝血与6%HES按5:1混合，自然沉降60min，取上层液400×g离心10min，以RPMI1640洗两遍备用。
HES离心沉淀法:分别将抗凝血与HES12:1、7:1、6:1、5:1、3:1、2:1，使HES终浓度为0.5%、0.85%、1.0%、1.2%、2.0%和3.0%条件下20℃60×g离心10min，取上层液400×g 离心10min，以RPMI1640洗两次备用。
Ficoll密度梯度离心法［2］ :肝素抗凝血先与RPMI1640培养液1:1混合，再加等量淋巴细胞分离液600×g离心20min，小心吸取单个核细胞层，以RPMI1640洗两遍备用。
1.2.2 PBMC的处理将不同分离方法获取的PBMC计数后重悬于完全培养基中，分别加入24孔培养板，每孔4×10 6细胞，37℃，5%CO 2 培养2h后吸取培养上清，用RPMI1640轻轻洗涤培养孔3次以去除非贴壁细胞。
收集贴壁细胞计数并用荧光素标记的单克隆抗体通过荧光激活细胞分离器（FACS Vantage SE）鉴定。
悬浮细胞用完全培养基调整细胞浓度至1×10 6 /ml，补充适量的CD3单抗、rh-IFN、IL-2等，共同培养多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK），每3天换液1次并计数，第10天收获细胞，计算增殖倍数，同时以荧光素标记的单克隆抗体鉴定细胞类型。
1.2.3 统计学方法应用SAS6.12统计软件进行方差分析、t检验。
数值以平均数±标准差表示。
2 结果2.1 不同分离方法PBMC回收率 HES终浓度在0.5%、0.85%、1.0%、1.2%、2.0%和3.0%条件下进行离心沉淀和自然沉降，结果显示HES终浓度≥1.0%时PBMC回收率最高，为此我们确定HES终浓度1.2%为最后实验浓度。
用HES离心沉淀法和自然沉降法分离的PBMC总数相近，与传统的Ficoll密度梯度离心法比较也无统计学差异（P>0.05），结果见表1。
2.2 不同分离方法PBMC贴壁能力 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll分离法其CD14 +细胞FACS检测平均百分率分别为38.69%、68.70%、64.54%，HES自然沉降法明显低于后两法（P<0.01），HES自然沉降法中含有较多的CD3、CD19、CD56细胞见图1。
2.3 不同分离方法PBMC增殖活性 HES自然沉降法、HES离心沉淀法和Ficoll分离法所获得PBMC，其CIK细胞增殖能力接近，第10天略有差别但无统计学差异（P>0.05）。
见图2。
图1 不同分离方法PBMC的贴壁能力略图2 不同分离方法CIK细胞增殖能力的比较略表1 不同分离方法PBMC回收率略3 讨论分离PBMC是一项常规工作，传统的是采用Ficoll密度梯度离心法，Ficoll是一种粘性强的液体，其比重为1.077，在一定离心力的作用下，比重大于淋巴细胞的红细胞及多核粒细胞等沉淀于分离液的底层，单个核细胞在分离液的界面上。
操作时需将抗凝血作适当稀释，比较适用于少量血液的分离，在血量较多时要分成数管进行离心，十分不便，而且重复多次地开放性操作也增加了污染机会。
HES是一种血浆代用品［3］，原料来自于天然绿色植物玉米，由高分子量支链淀粉经降解、羟乙基化并进一步加工处理后制成。
HES与红细胞膜上的负电荷结合，使红细胞彼此以凹面相贴，重叠在一起的红细胞下沉阻力减少，红细胞与血浆及单个核细胞形成清晰的界面。
抗凝血与终浓度为1%～2%的HES混合后经低速离心可加快红细胞的下沉，便于吸取含单核细胞的血浆层，使PBMC的分离过程简单化，有利缩短工作时间，提高工作效率。
此外，用HES分离PBMC也可在封闭系统中即血袋中进行［1］，非开放性操作可减少污染机会。
与F icoll法相比HES离心沉淀法除简化了操作外，也减少了耗材，降低了试验成本［4］。
Denning ［5］等用HES沉降法分离脐血单个核细胞发现，脐血单个核细胞的回收率可受分离前脐血放置时间和温度的影响。
我们将新鲜采集的血液与HES混匀后常温（22℃～25℃）静置60min获取的PBMC，其细胞活率及贴壁能力都低于HES离心沉淀法，不规则细胞形态增加，是否与细胞在相对高浓度的HES中浸泡时间过长有关，还有待于观察。
将肝素抗凝血与HES在离心管中按最适比例混匀后直接60×g离心10min，所得到的细胞数量与其他方法相近（见表1），无统计学差异，而形态学和贴壁能力明显好于HES自然沉降法（P<0.01）。
HES有高、中、低三种分子量，不同的分子量其分离效果各有差异［6］。
因此，选择合适的HES浓度和分子量可以确保分离效果。
总之，在获取PBMC时应根据血量多少和实验室的条件来选择不同的分离方法。
本实验室用6%HES离心沉淀法分离的外周血单个核细胞回收率为86.0%，活细胞在97%以上。
在综合细胞纯度、细胞回收率、细胞活力以及操作的难易程度等因素，笔者认为HES离心沉淀法不失为分离PBMC首选的方法之一。
参考文献1 Rubinsten P，Taylor PE，Scaradavou A，et al.Unrelated placental blood for bone marrow reconstitution:organization of the placental blood proˉgram.Blood Cells，1994，20:587-600.2 北京医学院微生物学教研组编.实验免疫学.北京:人民卫生出版社，1980，435-436.3 Forster H.Physical and chemical properties of hydroxyethylstarch.Plasˉma Volume Expansion，1992，105-121.4 Rubinstein P，Dobrila L，Rosenfield RE，et al.Processing and cryopˉreserv ation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitutio n.Proc Natl Acad Sci，1995，92:10119-10122.5 Denning-kendall P，Donaldson C，Nicol A，et al.Optimal processing of human umbilical cord blood for clinical banking.Exp Hematol，1996，24:1394-1401.6 Kenichi S，Mikitomo Y，Ryo S，et al.Cell processing for。