dna提取的各种方法介绍
提取dna方法
提取dna方法
DNA提取的方法主要有以下几种：
1. 物理法：包括机械粉碎、超声波处理和玻璃片研磨等。
这些方法可以破坏细胞结构，释放出DNA。
2. 化学法：包括碱变性法和尿素变性法等。
这些方法通过改变DNA的理化性质使其解链，从而易于被提取出来。
3. 生物酶法：包括蛋白酶K法和纤维素酶法等。
这些方法利用特定的酶来降解蛋白质和纤维素等物质，从而释放出DNA。
4. 基因工程法：通过构建表达载体并导入宿主细胞中，使目的基因在宿主细胞内得到表达，从而产生可溶性或不可溶性的DNA片段。
5. 其他方法：包括电泳分离法和超速离心法等。
这些方法可以通过分离和纯化DNA片段来实现对DNA的提取。
需要注意的是，不同的方法和材料可能存在不同的风险和注意事项，因此在提取DNA时应该遵循正确的操作规程，确保安全和有效。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法是从一种物质中检索出DNA分子的过程，包括酶切、基因工程等。
DNA提取方法有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法、实验室提取法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1、核酸沉淀法：核酸沉淀法是一种常用的DNA提取方法，它的原理是通过pH调节使DNA沉淀，然后将DNA从溶液中收集。
步骤如下：首先，将样品用盐水或蛋白酶/胰蛋白酶消化；其次，加入超纯水、EDTA缓冲液和NaCl，调节pH至5.5；然后，加入乙醇，溶解DNA并沉淀；最后，在0℃-4℃维持1小时，收集沉淀的DNA。
2、缓冲溶液法：缓冲溶液法是通过改变溶液的pH值来提取DNA的一种方法，它利用DNA的结合能力和电性作用力，将DNA结合到某种特定的溶剂上，然后从溶剂中提取出来。
步骤如下：首先，将样品加入缓冲溶液，消化；其次，加入非离子表面活性剂，使DNA脱水；然后，加入离子表面活性剂，将DNA与其他组分分离；最后，用低温冷藏保存，以便收集DNA。
3、植物提取法：植物提取法是通过一系列物理和化学步骤，从植物细胞中提取DNA的一种方法。
步骤如下：首先，将植物细胞磨碎，用盐水悬浮；其次，加入碱性溶液，使细胞膜脱落；然后，加入非离子表面活性剂，溶解脱落的细胞膜，将DNA沉淀；最后，加入乙醇，将DNA沉淀，冷却保存，然后收集DNA。
4、实验室提取法：实验室提取法是一种基于细菌的实验室方法，它利用发酵的细菌细胞中的DNA进行提取。
步骤如下：首先，将细菌细胞加入特定的溶剂液中，使细胞膜脱落；其次，加入特定的酶和蛋白酶，将细胞内的DNA 溶解；然后，加入非离子表面活性剂，将溶解的DNA沉淀；最后，用乙醇沉淀DNA，将沉淀的DNA精细收集。
以上就是提取DNA的方法，主要有核酸沉淀法、缓冲溶液法、植物提取法和实验室提取法四种方法，它们都具有不同的优点和缺点，因此，在实际应用中，应该根据样品的不同，选择适当的提取方法。
各种DNA提取方法
各种DNA提取方法提取方法提取方法提取方法一，基因组DNA提取方法制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。
2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。
根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤：1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。
加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。
7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10min。
2500rpm离心10min。
弃上清。
8、加入倍体积3mol/L乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃20min。
9、12000r/min室温离心5min。
弃上清。
将DNA 溶于适量TE中。
二，外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm 离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤一、常见的DNA提取方法：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：通过使用酚/氯仿等有机溶剂来分离DNA分子。
2. 盐水法（Salting out）：通过使用高盐浓度来析出DNA分子。
3. 硅胶柱法（Silica-based purification）：通过与硅胶矩阵相互作用，从混合溶液中纯化DNA。
4. 高盐法（High salt method）：通过使用高盐浓度来沉淀DNA。
5. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide method）：通过使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）来分离DNA。
二、通用的DNA提取步骤：1.样本收集：从所需生物体（如植物组织、动物组织、血液等）中收集样本。
样本的品质对提取后的DNA质量影响很大，因此需要保证样本的新鲜度和完整性。
2.细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA从细胞的内部释放出来。
这可以通过机械方法（搅拌、刮擦等）、溶解酶或离心等方法来实现。
3. 除去蛋白质和RNA：加入蛋白酶等酶解蛋白质，使其降解分解。
同时，也可以加入RNase酶降解RNA，以免在提取过程中受到污染。
4.DNA沉淀：加入盐溶液以增加DNA的溶解性，然后加入酒精来沉淀DNA分子。
酒精的加入可以调节盐溶液中Na+和DNA的酒精沉淀剂（如异丙醇或乙醇）的比例，从而沉淀出DNA。
5.洗涤：将沉淀下的DNA溶于适当的缓冲液中，以去除沉淀剂、盐等杂质。
6. 保存：最后，将DNA保存在适当的缓冲液中，如TE缓冲液（Tris-EDTA），并在低温下存储。
三、酚/氯仿法DNA提取步骤：1.细胞破碎：将细胞或组织加入到含有裂解缓冲液的试管中，使用机械方法（高速离心、搅拌等）或酶解来破碎细胞膜。
2.调整pH值：加入适量的酚/氯仿溶液，并快速倒转试管数次，使试管中的溶液充分混合。
酚会与细胞残渣中的蛋白质结合形成亲水性复合物，而氯仿可以帮助去除蛋白质。
DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.(2).阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.(3).苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。
此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.(4).水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%٠；80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
常见的dna提取方法及优缺点
常见的DNA提取方法及优缺点1. 概述DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一个重要步骤。
通过提取DNA，可以进一步研究细胞或生物个体的基因组组成和遗传信息。
本文将介绍三种常见的DNA提取方法，并分析它们的优缺点。
2. 酚-氯仿法（Phenol-Chloroform Extraction）酚-氯仿法是DNA提取的传统方法之一。
其主要步骤包括细胞或组织的裂解、DNA与酚-氯仿混合、离心分离DNA上层水相、以异丙醇沉淀DNA等。
优点•能够提取高质量的DNA，适用于进一步的分子生物学实验和定量分析。
•可以从各种生物样品（如细胞、组织、血液等）中提取DNA。
•提取的DNA可以长期保存，并可用于构建DNA文库。
•操作复杂，需要多个步骤和化学试剂。
•酚-氯仿是一种有毒物质，对操作人员和环境有一定的危害。
•提取时间较长，通常需要几小时。
3. 硅胶柱法（Silica Membrane DNA Extraction）硅胶柱法是一种快速和高效的DNA提取方法，使用了硅胶膜作为DNA的吸附载体。
其主要步骤包括裂解细胞或组织、与硅胶柱上的硅胶膜相互作用、洗脱纯化DNA等。
优点•提供高品质和高纯度的DNA，适用于PCR、测序等高灵敏度实验。
•操作简便，减少了操作步骤和所需的化学试剂。
•提取时间短，通常只需要几十分钟。
•对于某些样品，如血液、组织较多的样品，硅胶柱法可能会出现DNA吸附容量不足的问题。
•需要购买硅胶柱等专业设备和试剂。
4. 盐溶液法（Salt Precipitation）盐溶液法是一种简单和经济的DNA提取方法，利用高盐溶液沉淀DNA。
其主要步骤包括细胞或组织裂解、加入盐溶液、离心沉淀DNA、洗脱纯化DNA等。
优点•操作简单，只需要少量的化学试剂和设备。
•节约时间，通常只需要30分钟左右。
•适用于小规模和初级实验室。
缺点•提取的DNA质量和纯度较低，不适用于一些高灵敏度的实验。
•不适用于样品量较大的情况，容易出现沉淀量不足的问题。
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天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存 在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP 抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。 DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而 不同。DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在 0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度 的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L 氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。 RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在 0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时， 常用此法分离这两种核蛋白。
1.为什么在低温下进行？
2.分别加柠檬酸钠和EDTA的作用 ?
3.加SDS的作用？
4.加NaCL的作用，为什么要加到1mol/L?
5.加入异戊醇有什么作用？
待测液中测得的核酸μg数 待测液中制品的μg数
×100
二苯胺显色法测定DNA含量
强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与 脱氧核糖间的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧 核糖与嘧啶核苷酸。其中2ˊ脱氧核糖在酸性环境中 成为 ω― 羟基 ―γ― 酮基戊醛，此物与二苯胺反应生 成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。DNA在40400μg范围内光密度与DNA浓度成正比。在反应液中 加入少量乙醛可提高灵敏度，而且其他化合物的干 扰也显著降低。当样品含少量 RNA 时不影响测定， 而蛋白质、多种糖及其衍生物芳香，羟基醛都能与 二苯胺形成各种有色物质，干扰测定。
操作方法： 1. DNA标准曲线的制定： 取10支试管，分成2组，依次加入0.4、0.8、1.2、1.6 和2.0mlDNA标准溶液。添加蒸馏水，使之都成为2ml。另 取2只试管，各加2ml蒸馏水作为对照。然后各加入4ml二 苯胺试剂，混匀。于60 恒温水浴中保温1h，冷却后于 595nm处进行比色测定。取两管平均值，以DNA浓度为横 坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 制品的测定： 取2支试管，各加2ml待测液（内含DNA应在标准曲 线的可范围之内）和4ml二苯胺试剂，摇匀。其于操作同 标准曲线的制作。 3. 根据测得的光吸收值，从标准曲线待测上查出相应 该光吸收值DNA的含量，计算出制品中的百分含量。
（ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低 盐溶液除去RNA，然后将化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌 法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗 涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA 中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加 以改良,在提取过程中加入SDS.
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常 需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA 分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适 当的材料提取DNA。 动植物中，小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子，植 物种子的胚中都含有丰富的DNA。 微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母 含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。
二. 从猪脾中提取DNA
1. 操作步骤: 取鲜猪脾,去脂、血,称取10g,用预冷的1×SSC溶液洗2次，剪碎。 按睥：1×SSC=1; 5W/V 加入50ml预冷的1×SSC，用高速组织 捣碎机破碎8次,每次5秒,中间间隔30秒。 将匀浆液放在烧杯中， 于冰盐浴中冷却30分钟。4000转/分钟 离心10分钟。充掉上清。沉淀物中再加2倍体积的1×SSC搅匀，离 心，弃上清，重复2次。 将所得沉淀悬于5倍体积的PH8.0、0.15MNaCL—0.1Na2MEDTA 溶液中。边搅拌边漫漫滴加5%SDS最终浓度达1%为止。然后加入 固体氯化钠使其最终浓度达1mol/L，继续搅60分钟，以确保氯化钠 全溶。所得混合液倒入磨口塞的锥形瓶中，加入同体积氯仿—异戊 醇，激烈振荡20分钟，4000r离心20分钟，上层水相取出后倒入烧杯， 以同积氯仿—异戊醇重复去蛋白2次。 取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍体积95%乙醇，玻棒搅动， DNA纤维绕于璃玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA纤维2次，用 95%乙醇洗一次，再用乙醚洗一次，取出并挤干。
3.DNA提取的几种方法 (1).浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常 用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少 量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质 凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍 体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
１、二苯胺试剂：使用前称取 0.8g 二苯胺（需在70% 乙醇试 剂中重结晶 2 次 ) ，溶于 180 ml 冰乙酸中，再加入 8ml 过氯酸 （60%以上），混匀待用，临用前加入0.8ml 1.6%乙醛溶液，所 配试剂应为无色。 每组需56ml 共需2800ml ２、DNA标准溶液：（须经定磷法确定其浓度）取标准DNA 以0.01N NAOH配成200微克／毫升的标准液。 每组需12ml 共需600ml ３、1.6% 乙醛：取 47% 乙醛 3.4ml，加重蒸水定容至 100ml （放于冰箱中，一周之内可以使用）。 共需70ml ４、 ( 测样品液：准确称取猪脾 DNA 或用紫外分光法中剩下 的DNA液配成10微克／毫升的溶液。 每组需4ml 共需200ml
1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则 为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有 鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于 水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中， DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的 难易程度也不同。 对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容 易，多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保 持其结构完整性。 从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。 细菌DNA 分子量较大，一般达2×10 道尔顿。 因 此 易 被 机 械 张 力 剪 断 。 细 菌 DNA， 除 核 DNA 外，还有质粒DNA 等。
（2）.阴离子去污剂法: 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直 接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之 间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够 破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA. （3）.苯酚抽提法: 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用. 用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白 分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分 子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层， 多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶 于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠 的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是 使提取的DNA保持天然状态 .
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方
法有三种： ①机械方法：超声波处理法、研磨法、 匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞；
③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可
使细胞壁破碎。
由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体 中，所以提取时有两个困难（高等植物与此类 似）： ①破碎细胞难；从处死动物۰分离组织器宫到 破碎细胞费时长。在此时期间DNA 可能会被DN ase降解，而动物组织：特别是肌肉组织很难破碎, 即使是较易破碎的肝۰肾等组织也往往使用组织 匀浆器，易造成DNA 断裂。 ②分子量大，一般比细菌的大2—3个数量级， 比病毒的大4—5个数量。对不同生物材料，要根 据具体情况选择适当的分离提取方法。
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以 1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于 蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对 DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子 的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取 DNA.
2. 实验材料，仪器和试剂： （1） 实验材料：新鲜猪脾： （2）仪器：量筒：1×10、3×100烧杯：2×100，2×250；磨 口锥形瓶：1×250、1×500；吸管：1×1、1×10；滴管、玻棒 离心机、电动搅拌器、台秤、剪刀、镊子。 （3） 试剂： ① 20×SSC：175.2gNaCL，88.2g柠檬酸钠•2H2O，PH=7.0加 水至1000ml； ② 1×SSC，0.1×SSC由①做相应的稀释得来； ③ NaCL-Na2EDTA液：8.77gNaCL，3.72gNa2EDTA溶于 800ml蒸馏水中，用固体NaOH调PH=8后定容至1000； ④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙醇中； ⑤ 氯仿-异戊醇=24：1（体积比） ⑥ 其他:95%乙醇，盐冰. 数据:DNA重,产率: DNA%=