植物组培污染
植物组培污染的原因及防控要求
农家参谋农业研究-54-NONG JIA CAN MOU植物组培污染的原因及防控要求王鑫1闫佳2（1.河南林业职业学院，河南洛阳，471000；2.安阳市农作物良种试验示范站，河南安阳，455000）【摘 要】植物组培技术属于一门新兴技术，在科学研究及生产应用上的地位非常重要。
本文从材料带菌、实验操作和培养环境带来的污染等方面分析了植物组培污染的原因，提出了具体的防控要求。
【关键词】植物组培污染；原因；防控1 植物组培污染的原因植物组培污染，主要指组培的时候，由于培养的温度、湿度及营养条件等刚好符合微生物的生产需求，植物组织材料可能会在这个环节出现培养体系污染问题。
一般来说，植物组培污染都是在材料表面或者附近等部位，污染痕迹各不相同，是影响植物组培种苗是否能够成功的主要因素。
通常情况下，植物组培时，跟霉菌污染相比，细菌污染的比例更高一些，大约占百分之八十。
在细菌污染过程中，情况更为复杂的属于内生细菌污染。
产生污染的污染源比较多，有真菌、病毒，还有植物病原细菌等。
以真菌为例，真菌的来源是空气，当袍子在合适的环境中落下能够迅速的繁殖，从而对组培容器产生污染；以植物病原体细菌为例，一般分布在外植体的表面部门，也有分布在内部的，而病毒基本就是在植物内部，需要有传播载体，其中细菌污染最为严重。
1.1 材料带菌在植物组培污染中，一个不可避免的污染途径就是材料带菌，这跟生长环境及取样时间等都有关系，同时也跟外植体的消灭细菌的方法有一定的关联。
通过深入的分析可以发现，一般来说从一种外植体中分离出来的杂菌种类有数十种，在热带植物中表现的最为明显。
而随着植物材料年龄的增加，其健康度在减小，加剧了组培污染。
就内源菌污染来说，因为其污染的来源是外植体材料内部的微生物，一般的表面消毒是不能被消灭的，是随着材料带入从而产生危害。
1.2 实验操作和培养环境带来的污染这种污染的表现主要在四个方面：第一个方面，无菌室灭菌操作不到位，还有的是超净工作台滤出来的空气中带有细菌；第二个方面，培养基细菌消灭的不彻底；第三个方面，操作中可能导致的交叉污染；第四个方面，人员操作过程中可能产生的污染。
植物组织培养中抗污染培养基新配方研究
植物组织培养中抗污染培养基新配方研究裘晓梅（山西省桑干河杨树丰产林实验局，山西大同037006）摘要:在既往组织培养中,培养基污染问题属于行业关注的重点,本文以此展开研究,通过合理筛选不同抗生素、化学药物,配置MS培养液,并以甘薯、烟草、拟南芥种子作为培养材料,分析培养基生长以及污染情况,进一步对培养基抗污染方法进行探索。
本文研究结果表明,头孢霉素(25mg/L),代森锰锌(30mg/L)并与百菌清经1:1混合,并配合药液包衣使用,可有效降低培养基污染发生率。
关键词:植物组织;抗污染培养;配方研究中图分类号:Q943.1文献标识码:A文章编号:1005-7897(2022)08-0004-030引言就目前而言，植物组织培养技术属于生物学研究重点，并且应用十分广泛，能够在为植物学科研工作开展提供保障的基础上，有效优化植物生产。
而污染率对于应用植物组织培养技术具有重要意义。
以往行业主要通过对外植体进行消毒，并配合规范性操作，有效降低感染率，但是该方法存在耗时长的问题，并且仍无法实现对污染率的彻底控制，因此，强调行业应高度重视培养基抗污染工作，采取有效手段，在降低实验室资源浪费的同时，最大程度上降低污染率。
1实验背景既往研究显示，培养基使用常见抗生素包括青霉素、利福平、头孢霉素等，均具有一定的抗菌效果，而代森锰锌、百菌清在触杀真菌效果方面优势显著。
多菌灵属于内吸型抗菌药物，益培灵属于抗污染复合药物。
有研究表明，通过将益培灵应用在相关培养基实验中，能够起到良好的抗菌处理效果，但是在长期研究过程中发现，上述药物抗菌效果均具有一定的局限性。
例如，青霉素虽然不会对外植体产生较大的影响，但是因为其具有易分解的特性，使用后药效时间相对较短，并且使用成本较高。
多菌灵触杀功能相对较差，并且在使用药物后药物生效时间相对较晚，利福平、头孢霉素虽然具有一定的杀伤性，但是在单一使用的情况下，则需要加大剂量，并且上述药物均需要建立在严格的组织培养下，才能够取得抗菌效果。
植物组培过程中污染产生的原因及防治措施
植物组培过程中污染产生的原因及防治措施1 污染的原因污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生真菌、细菌等微生物，使培养材料不能正常生长和发育的现象。
组织培养中污染是经常发生的，常见的污染病原是细菌和真菌两大类。
细菌污染常在接种1-2d后表现，培养基表面出现黏液状菌斑。
真菌污染一般在接种后3d以后才表现，主要症状时培养基上出现绒毛状菌丝，然后形成不同颜色的孢子层。
造成污染的原因也很多，主要有(1) 培养基及各种使用器具灭菌不彻底(2) 外植体消毒不彻底(3) 接种时不严格无菌操作(4) 接种和培养环境不清洁(5) 培养容器原因，包括盖子和封口膜等。
材料带菌或培养基灭菌不彻底会造成成批接种材料被细菌污染，操作人员不严格遵守无菌操作规程也是造成细菌污染的重要原因。
培养环境不清洁、超净工作台的过滤装置失效、培养容器的口径过大以及封口膜破损等主要引起真菌污染。
2 污染的预防措施2.1灭菌要彻底在组培生产中，各种培养基以及接种过程中使用的各种器具都要严格灭菌。
首先是培养基的灭菌，耐高温的培养基需要在121-123℃条件下灭菌20-30min。
若出现灭菌时间不足或温度不够，培养一段时间后就会在培养基表面产生细菌性的污染。
一些不耐高温的物质，可采取细菌过滤器除去其中的微生物。
其次，接种用的器具除了经过高温霉菌外，在接种的过程中，每使用1次后，都要蘸酒精在酒精灯火焰上灼烧灭菌，特别是在不慎接触到污染物时，极易由于器具引起污染。
第三，对于被污染的培养瓶和器皿要单独浸泡，单独清洗，有条件的灭菌后再清洗。
2.2选择适当的外植体要认真地选择外植体，减少外植体上的带菌量。
一般多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌多；老的材料比幼嫩的材料带菌多；田间生长的材料比温室生长的材料带菌多；带泥土的材料比不带泥土的材料带菌多。
用茎尖作外植体时，应在室内或无菌条件下对枝条进行预培养。
将枝条用水冲洗干净后插入无糖的营养液或自来水中，使其发枝。
植物组培内生菌污染的防治措施
染 。 [7] 方 丽 等 [9] 发 现 组 培 中 细 菌 污 染 占 52.13%, 分属于9 个 种,主 要 有 芽 孢 杆 菌 属 (Bacillus)和 假 单胞菌属(Pseudomonas);真 菌 污 染 占 43.87%,分 属于18个种,其中芽枝霉(Cladosporium spp.)、黑 曲 霉 (Aspergillusniger)、青 霉 (Penicillum spp.) 和酵母为 主 要 污 染 真 菌。 沈 瑞 清 等 [10] 发 现 污 染 马 铃薯组培苗的真菌 分 属 6 属,至 少 12 种,分 别 为 镰 刀菌属的5个种,毛霉菌属的2个 种,链 格 孢 属 的 2 个种等。
内生细菌不能被一般的表面消毒方法所清除, 随材料带入培养过 程 引 起 的 污 染,称 为 内 生 细 菌 污
收 稿 日 期 :2019-11-16 作者简介:温璐华(1988-),女,河北邢台 人,硕 士,从 事 果 树 栽 培 生 理 生 态 研 究 ,Email:wenluhua@
Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
84
防护林科技
2020 年
选 择 幼 嫩 的 茎 尖 、胚 ,并 选 择 清 洁 环 境 下 的 植 物 材 料 作为外植体。 2.2 材料预处理 2.2.1 采用栽培手 段 降 低 材 料 带 菌 量 减 少 外 植 体带菌量的栽培手 段 主 要 包 括 促 发 新 枝、暗 培 养 和 水培等。侯喜 林 发 [17] 现 在 黑 暗 条 件 下 黄 化 培 养 仙 客 来 实 生 苗 ,能 够 消 除 内 生 菌 污 染 。 2.2.2 用杀菌剂或 抗 生 素 对 母 株 进 行 预 处 理 采 用杀菌剂或抗生素对母株进行连续多日消毒处理, 可降低带菌量。例如,每 2~3 天 喷 洒 1 次 消 毒 液, 浓 度 不 宜 过 高 ,半 个 月 到 1 个 月 之 后 ,可 以 有 效 控 制 母株的内生菌量 。 [18] 同时,为 防 止 内 生 菌 产 生 耐 药 性 ,抗 生 素 和 杀 菌 剂 应 复 合 使 用 。 2.2.3 其 他 方 法 采 用 特 殊 的 灭 菌 方 法。 周 俊 辉 等 [19] 利用减 压 方 法,抽 去 植 物 组 织 中 的 气 体,使 消 毒 剂 更 易 进 入 组 织 内 部 ,增 强 杀 菌 效 果 ,污 染 率 相 比 对 照 降 低 43.3% 。
组织培养中产生污染的原因
植物组织培养中产生污染的原因1、外植体①年龄、种类和大小。
成年植株带菌多；生理年龄老的材料带菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染；室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多[1-2]。
②取材时期和部位。
雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳光最强时紫外线较强，杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多。
③灭菌效果。
外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差，使外植体带菌。
2组织培养过程中各技术环节操作不规范①培养基。
使用长菌的母液配制培养基；培养基pH值高、添加的有机成分均可导致细菌污染；培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器使培养基污染；封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；橡皮筋长时间在日光灯照射下也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入培养容器；灭菌方法不当导致培养基污染；灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；灭菌时间达到后立即打开灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部杂菌有可能被倒吸入容器中；过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入培养基后造成污染。
②培养容器和接种器具。
培养容器不清洁；培养容器被污染后灭菌不彻底，再次使用时导致污染；高压灭菌锅或烘箱内培养容器、接种器具装得过满，影响灭菌效果；培养容器、接种器具灭菌时间过短导致灭菌不彻底；灭菌结束后立即打开高压灭菌锅或烘箱，强烈的冷热对流会导致冷空气被吸入包扎层内而重新造成污染带菌。
③接种人员。
过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩；不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污染；培养容器中接种的培养物过多；超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭菌效果差；接种时说话或咳嗽会呼出大量细菌；操作时手超出工作台面；手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生物落入培养容器中；打开培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘；接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污染了材料；没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中[3]；中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿。
组培中常见问题分析
组培苗在培养过程中常见问题分析一、植物褐化A、原因可能有：1、植物本身含有较多的酚类物质，在切割外植体时，从伤口渗透出来，直接渗入培养基中，或在继代培养时不断形成并渗出。
2、（1）外植体的取材部位及季节（2）培养基成分，浓度过高的无机盐和高浓度6-BA、KT 等容易加重褐化。
（3）培养条件不当，温度过高培养时间过长、光照过强，均可以提高多酚氧化酶的活性。
B、防止措施：1、选择合适的外植体：选取幼龄材料，选合适部位，时间一般在初冬或初春2、暗培养或勤转瓶3、弱光培养、低温培养4、添加活性炭或抗氧化剂等5、可以降低无机盐含量，由全量降为半量，减少铵态氮的含量。
二、玻璃化现象A、原因可能有：1、培养温度高2、生长素种类及其配制比例不合适。
铵态氮及碳源对某些植物培养不适宜。
B、防止措施：1、降低培养瓶内的湿度，增加琼脂量，每瓶接种量减少三分之一2、降低培养温度3、增加光照4、降低培养温度5、降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。
也可以降低或去除铵态氮。
6、在培养基中加入1.0~5.0g/L活性炭。
三、黄化现象A、原因可能有：1、培养基中铁元素含量不足，激素配比不当，糖用量不足。
2、培养瓶温度不适，光照不足。
3、pH值有问题。
（培养基配置不正确）B、防止措施：1、检查培养基配置过程，保证培养基成分正确添加2、调节培养基的成分和pH值3、控制培养室温度，增加光照，用透气盖改善瓶内通气情况四、污染现象A、原因可能有：1、原瓶苗有污染2、接种工具灭菌不彻底3、操作时认为带入菌4、接种环境不干净5、原瓶苗细菌性污染（浑浊水渍状、或泡沫发酵状）常由于灭菌锅未排尽冷空气、灭菌锅压力温度不够，计时不准确造成。
6、原瓶苗真菌性污染（出现各种颜色的孢子），可能是由于空气、瓶口及瓶盖真菌孢子引起。
B、防止措施：1、正确使用灭菌锅2、接种工具每次使用完后要消毒灭菌，接种时，手不要碰盘子的任何地方，用镊子夹盘子。
3、污染的原瓶苗要及时淘汰，如果原瓶苗数量少要进行灭菌4、接种时，要保证接种环境的干净卫生，台内工具不宜放太多。
花卉组织培养中污染的发生与防范治疗措施
2014年第5期现代园艺1花卉组织培养的污染源分析1.1分析污染的传播方式及来源在进行花卉组织的培养时，对于导致污染威胁的菌类通常称作培养菌类。
造成污染后，往往导致培养基料的pH 值呈酸性，使培养材料无法正常生长或生长过程中分泌有毒物质，甚至一些污染源直接生长在培养材料上。
常见的污染源有以下3类：一是真菌，在适宜的条件下，真菌产生大量孢子，这些孢子就将成为一个菌落，产生污染。
污染源大多分布在外植体的表层，通过气流、水流、人力以及昆虫的传播。
二是病毒以及类病毒，这大多存在于植物的内部，依靠机械及载体进行传播。
三是螨或蓟，其具备良好的活性，喜欢吞噬菌丝。
其主要的来源是培养间的角落及墙壁，这类问题常出现在使用较旧的组织培养室。
1.2导致污染形成的原因分析导致污染形成大多有以下原因：（1）外来污染源。
大多是由于螨或其它微生物导致污染，表现方式较为散乱，污染不集中，污染的百分比也存在一定的几率性。
这种污染通常在外植体本身携带，也有可能是操作携带。
即在进行无菌操作时，未经过过滤的空气携带大量微生物，伴随着操作过程进入到培养瓶中，进而使培养材料受到污染。
因此，在进行组织培养繁殖时，需注意加强外植体的消毒处理，寻求最佳消毒处理措施，同时加强操作间空气清洁度的控制也相当重要。
应定期对操作间进行消毒处理，及时清除有害微生物。
（2）灭菌技术及设备不健全。
由于目前的灭菌设备及技术的缺陷导致组织受到污染，通常表现为带状性污染。
即同一培养材料、容器或灭菌技术所培养的植株都受到相同的污染情况。
（3）操作人员。
实际上在整个组织培养操作中，最大的带菌者就是操作人员。
人类的毛发、衣服及手等都携带了大量的细菌，因此，操作人员在进入操作间时，应进行严格的清洁处理。
（4）操作间存在细缝。
存在的细缝将导致外界的空气流入室内，导致空气中的菌量增加。
（5）无菌操作台问题。
操作台的滤网可能存在长久失修或保养不合理，进而导致滤网受到破坏，或工作台的风速及电压未能满足实际要求，以致造成更多污染。
百合组培苗的污染成因及其预防措施
百合组培苗的污染成因及其预防措施摘要百合寓意美好，花型美丽，是重要的观赏花卉，尤其在切花市场和庭院绿化中需求量较大。
除了可以用于观赏，有些品种的百合还具有药用和食用价值，有广阔的市场前景。
目前主要是通过百合组培苗的方法来大量繁殖，该方法相对于传统的鳞茎包埋法大大提高了繁殖效率，但是百合组培苗常因为培养材料或是培养环境灭菌不达标而导致污染，严重影响了组培苗的生产效率，本文设计了多组对照实验探讨了导致百合组培苗污染的成因，并在此基础上提出了一些预防的措施。
关键词百合组培污染灭菌预防Abstract Lilium is a genus of herbaceous flowering plants growing from bulbs, all with large prominent flowers, which are large, often fragrant, and come in a range of colours. Lilies are often grown for the garden , also they form important cut flower crops and are very useful as food, as well as herb.Tissue culture is the most popular methods to breed Lilium. It is more effective and less infected .Several control experiments are performed in this paper to investigate the causes of infection ，at the base of which we include some feasible precautions.Key words Lilium Tissue culture infection sterilization precautions百合是百合科百合属所有种的总称，属于多年生具有地下鳞茎的草本植物，主要分布在亚洲的东部、欧洲和北美洲等北半球的温带地区。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
防治措施
1. 外植体的采集 2. 材料的表面消毒
1.外植体的采集
• 为了防止材料带菌，我们在采集 外植体时，应注意以下几点：在 生长健壮的无病虫害的植株上选 取发育正常的组织或器官；或将 嫩梢采集回来，放在洁净的空气 中水培抽芽，然后 • 用这种新生组织培养，也可以避 免污染。在晴天中午采集外植体。 采集易于消毒和灭菌的组织部位 进行培养，也可以降低污染率。
2.材料的表面消毒
• 此外，如果在继代培养中发现污染，我们可 以采用抗生素(如青霉素、氮苄青霉素等)和 杀菌剂(如多菌灵、代森锌等)处理结合常规 消毒，重新得到无菌苗。 • 再者，在一些快繁体系连续多次继代后， 部分试管苗插入培养基的切口处会出现云雾 状污染苗。对于这种污染，我们也可以采取 在继代培养基中加入适量抗生素(如青霉素、 氨苄青霉素、四环素等)来替代抑菌。但是随 着继代次数的增多，抗生素对污染苗的抑菌 作用可能会降低，一方面是由于抗生素的消 耗，另一方面可能是由于菌类对抗生素产生 了耐药性。
防治措施
1. 在进入实验室内，必须穿指定拖鞋； 2. 员工进入实验室时，将自己的鞋放入鞋柜，换上指定实验室拖鞋方可进入实 验室内上岗。 3. 员工上班不能着艳装，不能穿挂带式衣服，不能穿短裤、裙子上班，上班不 能裸脚。 4. 全体员工在进入实验室前应自觉做好自检是否携带禁品（如：与无作无关的 东西或食品 等），并按规范穿好防静电衣、裤、鞋、帽后方可进入生产实 验室内 。 5. 每天上班操作前必须确认有按作业指导书要求或本规范做好防尘措施，有戴 手套或指套。 检查周期：每天2次上午下午各1次。 6. 除操作员外，相关人员要进实验室必须经过主管审批后，方可进入实验室；
二、实验人员的污染
1.过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接 种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩 2.不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污 染 3.超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭 菌效果差 4.接种时说话或咳嗽会呼出大量细菌； 5.操作时手超出工作台面； 6.手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生 物落入培养容器中；
• 10.过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入 培养基后造成污染。
防治措施
分装后的培养基封口后应尽快进行高温高压灭菌。灭菌不 及时，会造成杂菌大量繁殖，使培养基失去效用。为了保证培 养基灭菌彻底，降低污染，在灭菌过程中需注意以下几个环节： （1）灭菌加热过程中应使灭菌锅内的冷空气放尽，以保证灭 菌彻底； （2）锅内灭菌物不能堆放过满，否则，将阻碍蒸汽的流通和 热交换，使容器内升温减慢，造成物体内部杀菌不完全； （3）灭菌后，应切断电源，使灭菌锅内的压力缓慢降下来， 接近“0”时，才可打开放气阀，排出剩余蒸汽后，打开锅盖 取出培养基。 注意：千万别急于取出培养基而打开放气阀，这样会造成降压 过快，使容器内外压差过大，液体溢出，造成浪费、污染，甚 至危机人身安全。
防治措施
• 可以采取在培养基中加入抗生素和杀 菌剂的方法抑菌或杀菌。
植物组培中易被污染，为了避免各种污 染，我们应尽量操作规范，同时应预测 过程中可能会出现的微生物污染，提前 防治，以便后期能达到培养目的。
四、外植体的污染
• ①年龄、种类和大小。成年植株带菌多；生理年龄老的材料带 菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染； 室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌 多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多。
• ②取材时期和部位。雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳
光最强时紫外线较强，杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取
2.材料的表面消毒
• 外植体在接种之前，须经严格的灭菌。由于灭菌剂的种类不同，杀菌力不 同，因此选择消毒剂，既要考虑具有良好的消毒、杀菌作用，同时又易被蒸 馏水冲洗掉或能自行分解的物质，而且不会损伤或轻微损伤组织材料，而不 影响生长。植物种类不同，外植体不同，处理也不同。 • 为了获取无菌材料，对室外采集来的外植体，先用自来水冲洗干净，然后 根据材料的不同，选用不同种类的灭菌剂，进行不同时间的表面灭菌。 • 选择适宜的消毒剂处理时，为了使其消毒效果更为彻底，有时还需与黏着剂 或润湿剂如吐温及抽气减压方法、磁力搅拌、超生振动等方法配合使用，使 消毒剂能更好地渗入外植体内部，达到理想的消毒效果。如在芳香植物唇萼 薄荷组织培养中，由于腋芽密生绒毛且部位通常较隐蔽，似很难与消毒液彻 底接触，致使消毒效果不理想，于是在饱和漂白粉溶液中加入0．1％Tween －80混合均匀，并采用软毛刷轻轻刷洗材料，尤其是腋芽部位，这样可以使 消毒液与材料充分接触，使消毒效果明显提高。
• 5.封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导 致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；
三、培养基的污染
• 6.橡皮筋长时间在日光灯照射下也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入 培养容器；
• 7.灭菌方法不当导致培养基污染；
• 8.灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；
• 9.灭菌时间达到后立即打开灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部 杂菌有可能被倒吸入容器中；
五、接种过程中的污染
• 在外植体接种的过程中，接种人员没有在无菌条件下进行操作，
接种过程中没有使用无菌器械，没有在酒精灯下进行，都会使外
植体受到污染。
防治措施
• 在接种中，为了降低污染，应注意以下几项事宜： • 接种室保持干净整洁，应定期对接种室进行喷雾降尘和熏蒸灭菌，并在每次 接种前对接种室进行20～30 min的紫外灭菌。 • 接种过程中操作人员应及时用75％酒精擦拭双手和超净工作台台面。接种器 械应及时在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，或在接种器械杀菌器中及时灭菌。 • 尽量少说话或咳嗽，避免呼吸污染。 • 超净工作台上应保持气流畅通，使操作区空气不断净化。当打开培养瓶接种 时，培养瓶应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中。
植物组培过程中的 污染及预防措施
PPT制作：李郑慧、杨文娇 PPT演示：劳梦
组培过程中的污染
• 一、实验器皿和无菌操作室 • 二、实验人员的污染 • 三、培养基的污染
• 四、外植体的污染
• 五、接种过程中的污染
• 六、继代培养产生的污染
一、实验器皿和无菌操作室
• 接种室和培养室： • 1.人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌， 尤其是接种过程中非工作人员的进出； • 2.接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多； • 3.超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不 当造成失效； • 4.组培室、接种室门窗封闭不严，苍蝇等趁机飞入，利于杂菌传 播； • 5.培养室面积大易污染，室内温度高、空气湿度大，菌类繁殖旺 盛也会加重污染。
了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多。
四、外植体的污染
• ③灭菌效果。外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定 了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差， 使外植体带菌。 • 如消毒剂消毒效果不够，或者灭菌时间太短，使得微生物没有被 完全杀死。另外消毒步骤不正确，不能达到最佳的灭菌效果，也 可能导致细.打开培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘； • 8.接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污 染了材料； • 9.没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中； • 10.中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿 入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿； • 11.服装、帽子、口罩、拖鞋长期穿戴后较脏，表面有大量灰尘，未经 清洗反复穿戴后造成污染。
三、培养基的污染
• 1.在培养基配置的过程中，会加入糖、水、无机盐、维生素、植物生 长调节物质等物质。使用长菌的母液配制培养基；
• 2.培养基pH值高、添加的有机成分均可导致细菌污染；
• 3.培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；
• 4.培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器 使培养基污染；