22 微生物系列汉坦病毒
医学微生物学发展简史
1901年，美国细菌学家里德领导的黄热病委员会 证实对人致病的第一种病毒——黄热病病毒。
细菌病毒（噬菌体）分别由特沃特（1915）和埃 雷尔发现。
（二）免疫学的兴起
18世纪末，英国琴纳创用牛痘预防天花；巴斯德 成功研制出鸡霍乱、炭疽和狂犬病疫苗；德国贝 林格利用含白喉抗毒素的动物免疫血清成功治愈 一名白喉患儿。
和空气传播。 奥地利有人主张传染病的病因是活的物体，每
种传染病由独特的活物体引起。 清乾隆年间，《天愚集》中描述了当时鼠疫猖
獗流行的凄惨景象，也正确指出了鼠疫的流行 环节。
预防医学
自古以来水煮沸后饮用的习惯。
明代李时珍《本草纲目》记载：病人衣 物蒸后再穿就不会传染疾病。
预防天花的人痘接种法：明朝时期广泛 使用，并先后传至俄国、朝鲜、日本、 土耳其和英国等国家。
02
实验微生物学时期
（一）微生物的发现
首先观察到微生物的是荷兰人列文虎克。 1676年。他用自磨镜片创制了一架能放大 266倍的原始显微镜，利用其观察牙垢、雨 水、井水和植物浸液，发现了许多运动着 的“微小动物”，并记载了下来，为证明 微生物的存在提供了科学依据。
（一）微生物的发现
法国科学家巴斯德首先用实验证明有机物质的 发酵和腐败是由微生物引起的，而酒类变质是 因为污染了杂菌所致，从而推翻了当时盛行的 “自然发生说”。 巴斯德的研究，开启了微生物的生理学时代。 应用：巴氏消毒法（巴斯德）、苯酚喷洒手术 室和煮沸手术用具（英国外科医生李斯特）。
（一）微生物的发现
德国科学家科赫：琼脂固体培养基、染色方法、 实验动物感染，提出了著名的科赫法则，为发 现多种传染病的病原菌提供了理论指导。 许多病原菌相继被发现并分离成功：炭疽芽孢 杆菌、伤寒沙门氏菌、结核分枝杆菌、霍乱弧 菌、白喉棒状杆菌、葡萄球菌、破伤风梭菌、 脑膜炎奈瑟菌、鼠耶尔森氏菌、肉毒梭菌、痢 疾志贺菌等。
初级(士)卫生资格初级微生物检验技术士模拟题2021年(4)_真题-无答案
初级(士)卫生资格初级微生物检验技术士模拟题2021年(4) (总分95.96,考试时间120分钟)A1/A2题型1. EB是下列何种成分A. 溴化乙锭B. 溴酚蓝C. 甲基蓝D. 丙烯酰胺E. 碘液2. 百日咳鲍特菌在鲍-金培养基上生长的菌落颜色为A. 白色B. 银灰色C. 黑色D. 褐色E. 红色3. 耐盐菌是指A. 只能在无盐培养基上生长的细菌B. 只能在高盐培养基上生长的细菌C. 无盐培养基上均能生长的细菌D. 无盐培养基上均不能生长的细菌E. 低盐、无盐培养基上均不能生长的细菌4. 超低温冰箱箱内的温度一般是A. 0℃B. －4℃C. －20℃D. －40℃E. －70℃5. 为杀灭所有的细菌芽胞和繁殖体，高压蒸汽灭菌达到压力，需要的灭菌时间为A. 10minB. 15～25minC. 40～55minD. 1～1.5hE. 2～3h6. 诊断斑疹伤寒的特异性反应是A. 外-斐反应B. 肥达反应C. 迟发性交态反应D. 抗生素敏感性实验E. 间接血凝实验7. 血清凝集试验是A. 用未知的免疫诊断血清与分离培养出的未知纯种细菌进行凝集试验B. 用已知的免疫诊断血清与分离培养出的已知纯种细菌进行凝集试验C. 用未知的免疫诊断血清与分离培养出的已知纯种细菌进行凝集试验D. 用未知的免疫诊断血清与分离培养出的未知多种细菌进行凝集试验E. 用已知的免疫诊断血清与分离培养出的未知纯种细菌进行凝集试验8. 空斑试验可用于()。
A. 检测病毒的核酸型B. 检测病毒是否具有包膜C. 区别鼻病毒与肠道病毒D. 检测致病性病毒颗粒的多少E. 检测病毒的形态9. 对实验动物进行皮内接种不正确的操作是A. 多选择腹股沟或腹壁中线作为注射部位B. 选最小号针头，将其尖端斜面向上平刺皮肤内C. 1～0.2mlD. 以实验动物背部两侧皮肤为注射部位E. 皮肤出现小丘形隆起10. 口蹄疫病毒主要感染的动物是A. 鸟类B. 家禽C. 爬行动物D. 偶蹄动物E. 灵长类动物11. 实验室中使用的多数容量器材，其定量的标准温度为A. 10℃B. 15℃C. 20℃D. 25℃E. 28℃12. 超低温冰箱一般是指温度达到A. 4℃B. －10℃C. －20℃D. －70℃E. －30℃13. 检查病毒常用到的显微镜是A. 荧光显微镜B. 相差显微镜C. 普通光学显微镜D. 电子显微镜E. 暗视野显微镜14. 痰标本检查结核分枝杆菌，行涂片与抗酸染色，镜检，报告时“阴性”代表A. 多数视野能发现1～9个以上的抗酸杆菌B. 多数视野发现10个或10个以上的抗酸杆菌C. 全片发现3～9个的抗酸杆菌D. 全片发现10个或10个以上的抗酸杆菌E. 全片未发现抗酸杆菌15. 葡萄球菌食物中毒，动物接种的鉴别诊断中所需接种的敏感动物和接种部位是A. 豚鼠，腹股沟皮下B. 小白鼠，腹腔C. 大白鼠，腹股沟皮下D. 幼猫，口腔E. 仓鼠，口腔16. 一病人突然起病，畏冷发热，体温常在38℃以上，同时出现腹痛、腹泻，每日大便10余次。
人间传染的病原微生物目录
人间传染的病原微生物目录表1.病毒分类目录附录：朊病毒注：BSL-n/ABSL-n：不同的实验室/动物实验室生物安全防护等级。
a.病毒培养：指病毒的分离、扩增和利用活病毒培养物的相关实验操作（包括滴定、中和试验、活病毒及其蛋白纯化、核酸提取时裂解剂或灭活剂的加入、病毒冻干、利用活病毒培养物或细胞提取物进行的生化分析、血清学检测、免疫学检测等）以及产生活病毒的重组实验。
b.动物感染实验：指以活病毒感染动物以及感染动物的相关实验操作（包括感染动物的饲养、临床观察、特殊检查，动物样本采集、处理和检测，动物解剖，动物排泄物、组织、器官、尸体等废弃物处理等）。
c.未经培养的感染材料的操作：指未经培养的感染材料在采用可靠的方法灭活前进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸检测、生化分析等操作。
未经可靠灭活或固定的人和动物组织标本因含病毒量较高，其操作的防护级别应比照病毒培养。
d.灭活材料的操作：指感染性材料或活病毒采用可靠的方法灭活，但未经验证确认后进行的操作。
e.无感染性材料的操作：指针对确认无感染性的材料的各种操作，包括但不限于无感染性的病毒DNA或cDNA操作。
f.运输包装分类：按国际民航组织文件Doc9284《危险品航空安全运输技术细则》的分类包装要求，将相关病原和标本分为A、B两类，对应的联合国编号分别为UN2814（动物病毒为UN2900）和UN3373。
对于A类感染性物质，若表中未注明“仅限于病毒培养物”，则包括涉及该病毒的所有材料；对于注明“仅限于病毒培养物”的A类感染性物质，则病毒培养物按UN2814包装，其它标本按UN3373要求进行包装。
凡标明B类的病毒和相关样本均按UN3373的要求包装和空运。
通过其他交通工具运输的可参照以上标准进行包装。
g.猴痘病毒：未经培养的感染材料的操作在BSL-2实验室，个人防护应遵从国家卫生健康委的相关规定。
h.这里特指亚欧地区传播的蜱传脑炎、俄罗斯春夏脑炎和中欧型蜱传脑炎。
汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选(一)
汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选(一)【摘要】目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。
方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代，比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Vero细胞灭活疫苗，研究疫苗的免疫原性。
结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7 00～7 75LgCCID50/ml和1∶320～1∶1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6 50～7 50LgCID50/ml和1∶160～1∶768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株ZJ4与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1∶10。
结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero 细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。
【关键词】汉坦病毒肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。
在各种预防HFRS的措施中，疫苗是一种最特异和最有效的预防手段。
迄今为止，本实验室已经研究出HFRSⅠ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗并已投入规模生产。
经现场流行病学调查，疫区人群的保护率在95%以上，为预防HFRS起到了重要的作用〔1，2〕。
但疫苗的毒种Z10野鼠型(HTN)和Z37家鼠型(SEO)均为20世纪80年代分离，距今已将近20年，随着时间的推移，HFRS 的流行及临床症状有较大的变化，这预示着引起该病的病毒有可能发生变异。
因此，必须选择疫苗的后备毒株，一旦发生目前疫苗保护率不高或不能保护时，即可用后备毒株生产疫苗。
2001～2002年，我们从浙江省的HFRS疫区鼠肺中分离到了9株汉坦病毒，筛选出病毒滴度较高、抗原性较好的4株毒株〔3〕，再将4株毒株在Vero细胞中的增殖特性、抗原性和免疫原性进行研究，从中筛选出ZJ4与ZJ5毒株为汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗理想的候选毒株。
包膜病毒样颗粒疫苗研究进展_仇书兴
流感病毒
包膜
A / Brisbane /10 /07 ， B / Florida /04 /06 （ H3N2 ） 血凝素，神经氨酸酶
Ⅱa 期临床 试验
Inflexal V
Crucell
肌肉注射 （ 无佐剂） 肌肉注射 （ 无佐剂）Fra bibliotek体外制备法
流感类病 毒样颗粒 流感类病 毒样颗粒
包膜
A （ H1N1 ） ，A （ H3N2 ） ，B， 血凝素，神经氨酸酶 恶性疟原虫环子孢子蛋白 ， 1 顶端膜抗原-
［8 ］ 可以在 sf9 细胞内自我组装成 VLPs 。除了单价流 感 VLPs 疫 苗， 可 制 备 含 HA 抗 原 双 价 VLPs 疫 ［7 ］
VLPs， SINV ） 相 形态和辛德毕斯病毒 （ Sindbis virus， 似， 肌注免疫小鼠和恒河猴， 诱导高滴度中和抗体的 产生
［23 ］
Progress in research on enveloped VLP vaccines
QIU Shuxing1 ， HUO Yuqi1 ， HUANG Xiaoyuan1 ， YANG Xiaoming2 Wuhan Institute of Biological Products Co． ， Ltd． ， Wuhan 430207 ，Hubei Province， China ming，Email： yangxiaoming@ cnbg． com． cn Corresponding author： YANG XiaoAbstract ： Viruslike particles （ VLPs） consist of one or more viral coat proteins that spontaneously selfassemble into particles that are antigenically indistinguishable from infectious virus or subviral particles． VLPs are noninfective and nonreplicating，since they are essentially devoid of infectious genetic material． Based on the structure of their parental viruses， VLPs can be divided into two major categories： nonenveloped VLPs and enveloped VLPs． Enveloped VLPs are shells assembled from the capsid and / or envelope protein（ s） of enveloped viruses surrounded with a lipid membrane known as the viral envelope． This envelope is derived from the host cell plasma membrane in a process termed “budding ” ． This paper mainly illustrates the progress on enveloped VLPs，including structure，expression system and immunogenicity． Key words： Envelop； Viruslike particles（ VLPs） ； Expression system； Immunogenicity； Adjuvant
细菌学：第二章 细菌的分类形态和进化
免疫学技术
• 2、酶免疫技术 • 利用抗原、抗体反应高度特异性和酶
促反应高度敏感性，通过肉眼或显微 镜观察及分光光度计测定，达到在细 胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体部 位，及对其进行定量目的。
免疫学技术
• 3、免疫印迹技术
↓ cDNA序列测定
↓ 反推rRNA序列 – 细菌基因组16S rDNA 可以直接以PCR 放大，然后测序
Eubacteria （真细菌界）
Archaebacteria （古细菌界）
Eukarya （真核生物界）
利用16SrRNA建立分子进化树
• 同一菌种的各个细菌，在某些方面仍有一定的差异， 可再分成亚种（subspecies）
☆分类是根据微生物的相似性和亲缘关系，将微生物归入不同的分类类群。 ☆鉴定是确定一个新的分离物属于已经确认的分类单元的过程。
☆命名是根据国际命名法规给微生物分类单元以科学的名称。
5 界 论
6 界 论
8 界 论
三域学说
古古生生菌菌
– 系统分类学Phylogenetic Classification
• 亚种以下的分类等级为型（type），以区别某些特殊 的特征。
• 例如：抗原结构不同而分的血清型（serotype）；对 噬菌体敏感性不同的噬菌体型（phagetype）；对细菌 素敏感性不同的细菌素型（bacteriocin-type），生化 反应和某些生物学性状不同的生物型（biotype）。
4）rRNA在细胞中含量大(约占细胞中RNA的90%)，也易于提取；
5）16SrRNA普遍存在于真核生物和原核生物中(真核生物中其同 源分子是18SrRNA)。因此它可以作为测量各类生物进化的工具。
微生物与免疫学基础。名词解释
1.虫媒病毒：是指一大类以节肢动物为媒介在人、家畜及野生动物间传播疾病的病毒。
2.流行性乙型脑炎，是由流行性乙性脑炎病毒引起的中枢神经系统炎症。
3.汉坦病毒：即肾综合征山血热病毒，为—ssRNA病毒。
汉坦病毒主要有汉滩型和汉城型4.逆转录病毒:它是一组含逆转录酶，具有包膜的RNA病毒。
可引起人和动物白血病和AIDS等疾病5.内基小体:它是狂犬病病毒在易感动物或人的中枢神经细胞的胞浆内增殖而成的—种圆形或卵圆形的嗜酸性包涵体,称内基小体。
6.Dane颗粒：大球形颗粒，具有感染性的HBV完整颗粒，直径42nm，具有双层衣壳。
含HBV的表面抗原、核心抗原和e抗原，以及病毒的DNA和DNA多聚酶。
7.无症状HBsAg携带者：特指血液中携带HBsAg半年以上，无肝炎症状和体征，肝功能亦正常的慢性携带HBsAg的人，由亚临床型或临床型的患者发展而来。
由于其人数多，作为传染源的意义重大。
8.缺陷病毒：带有不完整基因组的病毒体，称为缺陷病毒。
丁型肝炎病毒即为缺陷病毒，本身不能复制，必须在HBV或其它嗜肝DNA病毒辅助下才能复制。
9.微生物：微生物是指自然界存在的一大群种类繁多的微小生物，它们结构简单、体积微小，不能用肉眼直接观察到，必须借助光学或电子显微镜放大数百倍或数千倍以上才能观察到的微小生物。
10.病原微生物：对人类和动物、植物具有致病性的微生物称病原微生物。
11.非细胞型微生物：没有细胞结构，由核酸和蛋白质组成，只能在活细胞内生长繁殖的最小的一类微生物。
12.原核细胞型微生物：仅有原始核质，无核膜和核仁，细胞器不发达的微生物。
13.真核细胞型微生物：细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器完整的微生物。
14.正常菌群：是指正常人体体表及与外界相通的腔道中存在着多种微生物，正常情况下它们与宿主间以及它们之间保持相对平衡，通常对人体有益无害，称为正常菌群。
15.菌群失调：是指在原微生境或其他有菌微生境内正常微生物群发生的定量和定性的异常变化。
实验动物学基础复习资料
实验动物学基础复习资料1、实验动物学（Laboratory animal science，LAS）是以实验动物为主要研究对象，并将培育的实验动物应用于生命科学等研究的一门综合性学科。
2、实验动物（Laboratory animal，LA）指由人工培育，来源清楚，遗传背景明确，对其携带的微生物和寄生虫实行监控，用于生命科学研究、药品与生物制品生产和检定，以及其他科学研究的动物。
3、普通级动物（Conventional，CV）animal）是微生物和寄生虫控制级别最低的实验动物；要求不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性传染病病原，以及人兽共患寄生虫。
4、清洁动物（Clean animal）是根据我国国情而设立的等级动物，除普通级动物应排除的病原和寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原和寄生虫。
5、无特定病原体动物（specific pathogen free（SPF）animal）通常被称为SPF动物，除清洁动物应排除的病原和寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原和寄生虫。
6、“AEIR”是进行生命科学实验研究所必需的四个基本条件。
“A”即Animal（实验动物），“E”系Equipment（设备），“I”为Information （信息），“R”是Reagent（试剂）。
7、动物福利的基本出发点是让动物在康乐的状态下生存，也就是为了使动物能够健康、快乐、舒适而采取的一系列行为和给动物提供的相应外部条件。
8、实施动物福利，必须让动物享有5大自由：（1）享有不受饥饿的自由。
（2）享有生活舒适的自由。
（3）享有不受痛苦伤害和疾病威胁的自由。
（4）享有生活无恐惧和悲伤感的自由。
（5）享有表达天性的自由。
9、“3R”原则（3个原则英文第1个字母均为“R”）：替代（Replacement）原则：要求尽可能采用低等实验动物或非实验动物，以替代高等实验动物进行实验。
减少（Reduction）原则：要求尽可能减少实验动物的用量，甚至可以降低统计学要求。
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汉坦病毒 电镜下形态
二、致病性和免疫性
1、传 染 源： 啮齿动物 黑线姬鼠, 褐家鼠 2、传播途经： 呼吸道，消化道，
直接接触病动物的排泄物 3、临床特点
潜伏期：2W 三大主症：发热，出血，肾脏损害 三痛，三红 病死率10%~30%。 如果发病为汉坦病毒肺综合征, 病死率高达50%~70%。 4、免疫性
汉坦病毒
Hantavirus, HV
汉坦病毒 Hantavirus, HV
肾综合症出血热病毒 ，流行性出血热病毒
引起的肾综合症出血热（HFRS)和汉坦病毒肺 综合征（HPS） ： 为致死性疾病和人畜共患疾病（自然 疫源性疾病）。
一、生物学性状
1、形态和结构 布尼雅病毒科，汉坦病毒属 球形，有包膜：刺突：血凝素 -ssRNA，L、M、S三个片段 分型：20多种抗原型和亚型， 我国HTNV(9) , SEOV(6)
三、微生物学检查
1. 血清学：ELISA。
2. PCR方法：基因诊断 四、防治原则
防鼠灭鼠及个人防护 本病以支持疗法为主，采用“三早一 就近”原则。即早发现，早休息，早治疗 和就地治疗，可降低病死率。
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