Ca++ Mg++- ATP 酶活性测定说明书
ATP酶活性检测试剂盒
ATP酶活性检测试剂盒（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)说明书修订日期：2019.01.22 Cat number：KGT026Store at -20 for for 6 months℃For Research Use Only（科研专用）一、试剂盒介绍ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。
本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。
二、试剂组份组份名称KGT02650tests保存条件试剂A 10mL×3试剂B 10mL×1试剂C 10mL×12-8℃试剂D 粉剂×3 -20℃试剂E 粉剂×1试剂F 粉剂×12-8℃试剂G 10mL×2 RT试剂H 粉剂×3试剂I 粉剂×12-8℃试剂J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT 试剂K：10 m mol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃试剂D：-20℃以下保存6个月。
用时每支加双蒸水至5ml，现用现配。
余下的-20℃以下可保存一周。
试剂E：用时每支加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。
试剂F：用时每支加双蒸水至10ml[注1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。
试剂H：用时每瓶加双蒸水至40ml溶解，（溶解后避光4℃可保存一周）。
试剂I：用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。
0.5umol/ml标准磷工作液配制：用时将试剂K作20倍稀释: 取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。
定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
GS和GOGAT酶活性测定
实验报告（修改中勿动）9月8日张青谷氨酰胺合成酶（GS）活性测定原理谷氨酰胺合成酶（GS）是植物体内氨同化的关键酶之一，在ATP和Mg2+存在下，它催化植物体内谷氨酸形成谷氨酰胺。
在反应体系中，谷氨酰胺转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，进而在酸性条件下与铁形成红色的络合物，该络合物在540nm 处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。
谷氨酰胺合成酶活性可用产生的γ─谷氨酰基异羟肟酸与铁络合物的生成量来表示，单位μm ol·mg﹣1protein·h﹣1。
也可间接用540nm处吸光值的大小来表示，单位A·mg﹣1 protein·h﹣1。
【仪器与用具】冷冻离心机；分光光度计；天平；研钵；恒温水浴；剪刀；移液管（2ml、1ml）。
【试剂】提取缓冲液：0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0，内含2mmol/L Mg2+，2mmol/L DTT，0.4mol/L蔗糖。
称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO4·7H2O，0.1543g DTT（二硫苏糖醇）和34.25g蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl（0.1mol/L = 1ml 的36%~38%浓盐酸加入到100ml去离子水里）调至pH8.0，最后定容至250ml；反应混合液A（0.1mol/L Tris-HCl缓冲，pH7.4）←以加入1.6ml反应混合液A的为对照。
内含80mmol/L Mg2+，20mmol/L谷氨酸钠盐，20mmol/L半胱氨酸和2mmol/L EGTA，称取3.0590g Tris，4.9795 gMgSO4·7H2O, 0.8628g谷氨酸钠盐，0.6057g 半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0.1mol/L HCl调至pH7.4，定容至250ml；反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：反应混合液A的成分再加入80mmol/L盐酸羟胺，pH7.4；显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl3和0.6mol/L HCl混合液）：3.3176g TCA（三氯乙酸），10.1021g FeCl3·6H2O，去离子水溶解后，加5ml浓盐酸，定容至100ml；40mmol/L ATP溶液：0.1210g ATP溶于5ml去离子水中（临用前配制）。
黄瓜雌核离体培养加倍技术
黄瓜雌核离体培养加倍技术2. 材料与方法2.1 黄瓜未受精子房离体培养体系的建立2.1.1 材料验采用的黄瓜材料有两种类型即光滑型和刺瘤型黄瓜，部分材料为荷兰光滑型雌性系(长、短)与中国刺瘤类型的Fl代。
2.1.2 方法雌花采集：取未开放的黄瓜雌花，去掉花冠和花柄。
表面灭菌：先用75%酒精处理子房30秒，然后用10%次氯酸钙液灭菌15分钟。
用无菌水冲洗3次。
接种：在无菌条件下，将灭过菌的予房，切成2-3mm厚的薄片，立即按种在盛有诱导培养基的三角瓶内。
诱导培养基：以N6(朱至清等，1974)，MS(Murashige and Skoog，1962)，mller(Miller，1963)培养基基本成分(详见附表2)为基础，根据试验设计做相应调褴。
培养基中的大鼍元素化合物为国产，有机、微摄元素和附加的植物牛长调节物质均购自SIGMA公司。
培养基于灭菌前用NaOH或HCI调PH至5.8，加热溶化后分装至三角瓶，25ml／瓶，在SANYO高压灭菌器120℃，1.06Kg/cm2的压力下，灭菌15min。
培养方法：接种后的三角瓶置25℃黑暗条件下培养7天，然后移至同等温度、14hr 光／l0hr黑暗条件下培养。
3~4周后即可继代。
继代培养基：1/2MS+BA 0.5mg/L+蔗糖30g/L再生植株的扩繁：自未受精子房产生的幼小胚芽，继代至1／2MS培养基15天后，形成正常小植株(根茎叶完整)，为保护其种质资源，提高种苗基数，使其更具应用价值，对形成的正常小植株进行快繁。
接种：取长至5cm左右的正常小植株，剪成2-3cm小段，每段含1或2节，插接于快繁培养基上。
快繁培养基K：MS大量、微量、有机，Fe盐KT/NAA(0.1/0.1mg/L)在K快繁培养基上，每个切段可形成芽丛，产生新枝3-4个。
再生植株驯化与移栽：“一步移栽法”：1)准备直径12cm，高15cm左右的广口玻璃瓶，内盛3-4cm深的蛭石，用除糖和琼脂的MS基本培养基浇湿，然后封口、高压灭菌；2)将三角瓶内大苗或大芽从生长点往下留2片展开叶部位下，用剪刀剪下，将枝条直接扦插在广口玻璃瓶内的蛭石上，用薄膜封口，置于组培室架上培养：3)7天后松开瓶口的薄膜。
不同发育期大通牦牛心肌、骨骼肌线粒体ATP酶活性的测定
酶 、 抖－ Ｐ酶 、 ａ ＡＴＰ酶 和 Ｃ 一 计一 Ｐ酶 活性 在 年龄 组 间 差异 均 不 显 著 （ Ｍｇ ＡＴ Ｃ － ａ Ｍｇ ＡＴ Ｐ＞０ ０ ） ． ５ 。表 明大 通牦 牛在 生 长发 育阶段 心肌 、 骨骼肌 线 粒体 ＡＴＰ酶在 物 质运输 、 能量转 换及 信 息传递 等方 面发 挥 着稳 定的
１ 材 料 与方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试 验 用 动 物 青 海 省 大 通 种 牛 场 （ 拔 ．． 海 ３３０ｒ左右 ） 牛 ， ０ ｎ 牦 按照出生年龄分 为 １３ 、８ 、０ １ ０日龄 和成年组 ， ４组 ， 共 每组各 ５头 。 １ １２ 仪 器及 试 剂 Ｕ －６ １紫 外 线分 光 光 度 计 ． ． Ｖ １０ （ ＨＩ Ｄ Ｕ公 司） 电子 天平 （ 士产 ＡＢ ０一 ） 普 Ｓ ＭＡ Ｚ ； 瑞 ２ ４Ｅ ； 通离心机 （ 北京 医用 离心 机厂 ＬＮ一） 低 温高 速离 心 Ｉ ２；
体优 势 ， 因其育成于青 海省大 通种 牛场 而得名 。线粒
体是 真核生物细胞 内的一种重 要而独 特 的细胞 器 ， 是
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 样 品 采 集 与 处 理 ．．
氧 化 磷 酸 化 和 形 成 三 磷 酸 腺 苷 （ｄｎ ｓ ｅｔ ｐ ｏ— ａｅｏｉ ｒ ｈ ｓ ｎ ｉ
机（ 上海 安 亭 ） 超 声 波 ； 温 水 浴 锅 （ ６ ８ 。Ａ Ｐ ； 恒 ＫＳ ４ ） Ｔ 酶； 考马斯 亮蓝 测定 试 剂盒 （ 京建 成 生物 工程 研 究 南
所 ） 。
引入野牦 牛血液培育 的牦牛新 品种 ， 同等 饲养 பைடு நூலகம்理 在
条件下 ， 良后 代 牦犊 牛 生长 发育 快 ， 改 具有 明 显 的个
海藻糖类抗冻保水剂对冻藏南美白对虾(Litopenaeus vannamei)品质的影响
海藻糖类抗冻保水剂对冻藏南美白对虾(Litopenaeusvannamei)品质的影响白冬;郑炜;梁佳;俞群娣;黄菊;谢超【摘要】以冻藏南美白对虾(Litopenaeus vannamei)虾仁为研究对象,0.5％和1.0％ (w/v)海藻糖、海藻酸钠、海藻酸钠寡糖溶液作为抗冻保水剂,蒸馏水、0.5％和1.0％ (w/v)焦磷酸钠分别为阴性对照组和阳性对照组,于-18 ℃下贮藏6周,通过对冻藏南美白对虾仁的解冻损失、颜色、肌原纤维蛋白含量、Ca2+-ATPase活性以及微观结构等指标进行分析,评价海藻糖类等对冻藏虾仁品质的影响.结果表明,与对照组相比,海藻糖、海藻酸钠寡糖、焦磷酸钠处理组虾仁的解冻损失显著降低(p ＜0.05) 海藻糖类提高了南美白对虾冻藏期间颜色的稳定性.海藻糖和海藻酸钠寡糖处理有效地保持了冻藏虾仁中肌原纤维蛋白含量和Ca2-ATP酶活性,其中肌原纤维含量分别为104.2、103.2 mg/g,Ca2+-ATP酶活性分别为0.141、0.142 μmol Pi/mg·min.染色实验和电泳实验结果表明,海藻糖类对冻藏后肌肉蛋白质的降解和肌肉组织结构的损伤具有减缓作用,虾仁肌肉肌纤维结构完整,肌肉间无较大空隙形成,较好地保持了冻藏虾仁组织完整性,副肌球蛋白和肌动蛋白条带的强度都没有明显的降低.研究表明:在南美白对虾的冻藏过程中,海藻糖和海藻酸钠寡糖抗冻剂起到了良好的抗冻效果,能够更好地保证冻藏虾仁的质量和品质,得到一种冻藏水产品复合磷酸盐保水剂的较好替代品.%The effects of trehalose on peeledshrimp(Litopenaeus vannamei)during frozen storage was investigated by monitoring thawing loss,color,myoflbrillar protein content,Ca2+-ATPase activity and performing microscopic structural analysis.0.5％ and 1.0％(w/v)trehalose,sodium alginate and alginate oligosaccharide solutions were used as antifreeze water retention agent,distilled water and 0.5％ and1.0％ (w/v) sodium pyrophosphate were negative control group and positive control group,respectively,and stored at-18 ℃ for 6 weeks.The results showed that trehalose,alginate oligosaccharide and sodium pyrophosphate had significant inhibitory effect on the thawing loss of shrimp (p ＜ 0.05) compared with the control group.L* values revealed that these saccharides had a positive effect on color stability during frozen storage.In addition,the results of chemical analyses showed that trehalose and alginate oligosaccharide treatments effectively maintained an increased myofibrillar protein content and Ca2+-ATPase activity in frozen shrimp.The content of myofibril reached 104.2 and 103.2 ng/g,and Ca2+-ATPase activity reached 0.141 μmol Pi/mg· min and 0.142 μmolPi/mg· min,respectively.In addition,hematoxylin and eosin staining and SDS-PAGE confirmed that these cryoprotective saccharides slowed the degradation of muscle proteins and the damage to muscle tissue structures.The muscle fibers of shrimp muscle were intact,and there was no large gap between the muscles.The tissue integrity of the frozen shrimp was better maintained,and the strength of the myosin and actin bands were not significantly reduced.The results of comprehensive study showed that trehalose and alginate oligosaccharide antifreeze had good antifreeze effect during the freezing process of Litopenaeus van namei,which could better guarantee the quality and quality of frozen shrimp and gained as a better alternative to the phosphatepreserving agent of frozen aquatic products.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】6页(P286-290,307)【关键词】南美白对虾;海藻糖;海藻酸钠;抗冻效果【作者】白冬;郑炜;梁佳;俞群娣;黄菊;谢超【作者单位】浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000【正文语种】中文【中图分类】TS254.4南美白对虾(Litopenaeus vannamei)肉质鲜美,营养丰富,富含氨基酸、多肽、多不饱和脂肪酸等多种营养成分。
ACC检测方法
Acetyl-CoA Carboxylase from Rat LiverEC 6.4.1.2 Acetyl-CoA: carbon-dioxide ligase (ADP-forming)By TADASHI TANABE, SHIGETADA NAKANISHI, TAKASHI HASHIMOTO, HIDEO OGIWARA, JUN-ICHI NIKAWA, and SHOSAKU NUMAATP+HCO3-+acetyl-CoA ADP+Pi+malonyl-CoAAssay MethodsThe principles underlying the various assays of acetyl-CoA carboxylase have been described in previous articles in this series.1-4Most conveniently, the enzyme activity is determined by 14CO2—fixation assay or by the spectrophotometric assay in combination with the pyruvate kinase and lactate dehydrogenase reactions. The 14CO2—fixation assay can be used for enzyme preparations from all steps, whereas the spectrophotometric assay is applicable to preparation from the DEAE-cellulose chromatography step and subsequent steps.—Fixation Method14CO2ReagentsTris-HCl buffer, 0.5M, PH 7.5Potassium citrate, 0.1MMgCl2, 0.1MReduced glutathione, 0.1M, PH 7.5Bovine serum albumin, 3%ATP, 0.5MAcetyl-CoA, 10mMKH14CO3(0.25μCi/μmol), 0.2MHCl, 5MScintillator solution: 4g of 2,5-diphenyloxazole and 0.1g of 1,4-bis [2-(4-methyl-5-phenyloxazolyl)]benzene in 1 liter of toluene plus o.5 liter of Triton X-100 Procedure: When the crude extract is assayed, it is passed through a Sephadex G-5 column to remove endogenous substrates. Because rat liver acetyl-CoA carboxylase requires preincubation with citrate to attain its full activation,5the enzyme is first preincubated at 37℃ for 30 min in a mixture containing 50mM Tris-HCl buffer, PH 7.5, 10mM potassium citrate, 10mM MgCl2, 3.75mM glutathione, and 0.75mg of bovine serum albumin per milliliter. The reaction is then initiated by adding an aliquot of the preincubated enzyme (up to 0.2mU) to an assay mixture (final volume, 0.8ml) containing 50mM Tris-HCl buffer, PH 7.5, 10mM postassium citrate, 10mM MgCl2, 3.75mM ATP, 0.125mM acetyl-CoA, and 12.5mM KH14CO3(0.25μCi/μmol). After incubation at 37℃for 10 min, the reaction isterminated with 0.2ml of 5M HCl. The reaction mixture is allowed to stand in a vacuum desiccator for 30 min to remove the unreacted H14CO3—and is centrifuged at 1500g for 10 min to eliminate the insoluble material. A 0.5-ml aliquot of the supernatant is taken to dryness at 60℃ in a counting vial in a vacuum desiccator. After addition of 0.5ml of distilled water and 10 ml of the scintillator solution, the radioactivity is determined with the use of a liquid scintillation spectrometer. Under the assay conditions described the reaction follows Zero-order kinetics, and the initial rate of reaction is proportional to enzyme concentration.Spectrophotometric MethodReagentsKHCO3, 1MPotassium phosphoenolpyruvate, 40mMNADH, 5mM, PH 8Pyruvate kinase (rabbit muscle; Boehringer), 10mg/mlLactate dehydrogenase (rabbit muscle; Boehringer), 5mg/mlOther reagents, as for the 14CO2—-fixation methodProcedure: The assay mixture contains 50mM Tris-HCl buffer, PH 7.5, 10mM potassium citrate, 10mM MgCl2, 3.75mM glutathione, 0.75mg of bovine serum albumin per milliliter, 3.75mM ATP, 0.125mM acetyl-CoA, 25mM KHCO3, 0.5mM potassium phosphoenolpyruvate, 0.125mM NADH, 15μg or pyruvate kinase and 6μg of lactate dehydrogenase per milliliter, and enzyme (up to 5 mU) in a final volume of 0.8ml. A mixture (0.76ml) containing all ingredients except ATP and KHCO3 is preincubated at 37℃ for 10 min in a cuvette with 1cm light path. The oxidation of NADH is followed at 37℃with a recording spectrophotometer at 340nm (or at 334nm). After addition of ATP, the consumption of NADH is followed for 1 min, and the reaction is then started by addition of KHCO3. Initial velocities are obtained from the initial slopes of the recorder traces. Under the assay conditions described, the reaction follows zero-order kinetics for at least 3 min, and the initial rate of reaction is proportional to enzyme concentration.Units: One unit of ccetyl-CoA carboxylase activity is defined as that amount which catalyzes the formation of 1μmol of malonyl-CoA or ADP per minute under the assay conditions described. Essentially identical activities are measured by the 14CO2-fixation method and by the spectrophotometric method. Specific activity is expressed as units per milligram of protein. Protein is determined by the method of Lowry et al.6 with crystalline bovine serum albumin as a standard or, for the purified enzyme, by absorbance at 280nm. The relation×0.7=milligrams of protein per milliliter. between both values for the purified enzyme is A1cm280nm分光光度计法检测ACC 活性【原理】Acetyl-CoA+ATP+HCO -3 Malonyl-CoA+ADP+Pi 该催化反应过程会消耗NADH 、HCO - 3、ATP ，生成NAD +、Malonyl-CoA 、ADP 等。
索莱宝BC0300ATP含量检测试剂盒说明书
ATP 含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0300规格：50T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体50 mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体8 mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×3支-20℃保存试剂五粉剂×1瓶2-8℃保存试剂六粉剂×3支-20℃保存标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1．提取液低温条件下，可能有结晶析出，放于60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。
2．试剂二：临用前加入7 mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；3．试剂四：临用前取1支加入0.2mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；4．试剂五：临用前加入3.2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；5．试剂六：临用前取1支加入0.25 mL 蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；6．标准品：5 mg ATP 。
临用前加入0.826 mL 蒸馏水配成10 μmol /mL的ATP 标准溶液，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；7．工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1的比例配制（2.6mL ，约10T 的量），现配现用。
产品说明：ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。
测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH ，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，NADPH 和ATP 含量成正比，以此反应ATP 含量。
测定Nampt酶活性的方法及其试剂盒[发明专利]
![测定Nampt酶活性的方法及其试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/548c120b366baf1ffc4ffe4733687e21af45ff25.png)
(10)申请公布号 CN 101914614 A(43)申请公布日 2010.12.15C N 101914614 A*CN101914614A*(21)申请号 201010249924.7(22)申请日 2010.08.10C12Q 1/48(2006.01)G01N 21/64(2006.01)(71)申请人中国人民解放军第二军医大学地址200433 上海市翔殷路800号(72)发明人缪朝玉 张偌瑜 管云枫 王培徐添颖 徐学文(74)专利代理机构上海智信专利代理有限公司31002代理人薛琦 钟华(54)发明名称测定Nampt 酶活性的方法及其试剂盒(57)摘要本发明公开了一种测定烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的方法及其试剂盒。
该方法包括以下步骤：(1)建立Nampt 酶催化底物烟酰胺(NAM)转化成产物烟酰胺单核苷酸(NMN)的反应；(2)加热法终止酶反应；(3)加入苯乙酮和强碱充分反应；(4)再加入甲酸充分反应；和(5)检测激发波长326～426nm ，发射波长410～520nm 处的荧光强度。
本发明还提供一种Nampt 酶抑制剂或激活剂的高通量筛选方法及其筛选系统。
该筛选方法包括在微孔板中将候选化合物和除底物NAM 以外的Nampt 酶反应体系孵育；然后按前述步骤测定Nampt 酶活力。
本发明方法操作简单，反应条件温和，可实现高通量操作。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 2 页 说明书 11 页 附图 8 页1.一种测定烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立Nampt酶催化底物烟酰胺(NAM)转化成产物烟酰胺单核苷酸(NMN)的反应；(2)加热法终止酶反应；(3)加入苯乙酮和强碱充分反应；(4)再加入甲酸充分反应；和(5)检测激发波长326～426nm，发射波长410～520nm处的荧光强度。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述反应的反应体系包括：烟酰、BSA、DTT和DMSO，所述反应的反应胺磷酸核糖转移酶、底物NAM、ATP、PRPP、缓冲液、MgCl2条件是室温～37℃，10～60分钟；步骤(2)中所述的加热法是95℃加热1分钟；步骤(3)中所述的反应是0～25℃，5～30分钟，苯乙酮和强碱的反应浓度分别为0.222M、2.2％；步骤(4)中所述的反应是70～90℃反应5～15分钟，甲酸的反应浓度为44％。
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货号：QS1701 规格：50管/24样
Ca++ Mg++-ATP 酶活性测定说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
测定原理：
根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体50mL ×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体5ml×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×3 支，-20℃保存。
用时每支加1mL蒸馏水，现用现配；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入3mL蒸馏水，4℃保存。
试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂八：粉剂×1瓶, 4℃保存。
用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。
试剂九：液体25mL×1 瓶，室温保存。
试剂十：10mmol/L 标准磷贮备液10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂十 20倍稀释，即取 0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水充分混匀。
O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为定磷剂的配制：按H
2
浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
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加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
操作步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
注意事项：
1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒50管只能测 24份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。
所以对测定所用试管要求严格无磷。
避免磷污染是检测成败的关键。
3、空白管和标准管只要做一管。
计算公式：
1、血清（浆）Ca++ Mg++- ATPase活力的计算:
定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力（μmol /h/ mL）=[ C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷V样÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
组织中Ca++ Mg++- ATPase的计算：
2、组织、细菌或细胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的计算：
（1）按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
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Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/mg)=[C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A 空白管）÷（V样×Cpr）÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织中Ca++Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/g)= [C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A 空白管）÷(W× V样÷V样总)÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W （3）按细菌或细胞密度计算：
定义：规定每小时每1万个细菌或细胞中Ca++Mg++-ATP 酶分解ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104)= [C标准管×V总]×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(500×V样÷V样总)÷T=0.015×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.2mL ；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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