[血凝抑制实验]血凝实验操作报告
实验四血凝和血凝抑制试验
3. 0.85%生理盐水. 4. 被检血清,采自被检鸡的血清.
四、操作步骤 〔一血凝试验〔HA
1. 在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水. 2. 在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀后
〔Hemagglutination and Hemagglutination
Inhibition, HA and HI
动物病原学实验之六
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理,以及使 用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结 果判定方法.
二、实验原理
〔一血凝试验〔HA
➢ 有些病毒能够促使某些动物〔如鸡、鹅、豚鼠、 绵羊和人的红细胞发生凝集,这就是红细胞凝集 现象,称做血凝试验.
以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度 作为血凝价的终点,即一个血凝单位.
〔二血凝抑制试验〔HI
1. 在血凝板的1~12孔加入50μl生理盐水,最后一孔加 100μl.
2. 第1孔加入待检血清50μl,混匀后吸50μl至第2孔,倍比 稀释直至第10孔,混匀后弃50μl.
3. 从1~11孔,每孔加稀释好的50μl 4个血凝单位的病毒悬 液.
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
➢ 象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等,凝集红 细胞的条件很严格,对红细胞的种类有很 严格的选择,同时还要掌握反应的pH和温 度等.
〔二血凝抑制试验〔HI
➢ 当病毒悬液中加入特异性抗体时,这种红 细胞凝集的现象就被抑制,称做红细胞凝 集抑制试验,也叫血凝抑制试验.
HI试验的原理图
血凝及血凝抑制实验
实验原理基于病毒与抗体结合 后，改变了红细胞的抗原性，
从而影响血凝过程
实验结果可用于病毒的分离、 鉴定和抗体效价测定等
实验材料
血凝抑制抗体 病毒抗原 受检血清 红细胞
实验步骤
准备试剂和器材：包括血凝试剂、抗体、离心机、试管等。 采集样本：采集待检测动物的血液样本。 抗体处理：将抗体与待检测样本混合，孵育一定时间。 离心分离：将混合液离心，分离出凝集块。 结果观察：观察凝集块的数量和大小，判断实验结果。
实验结果
添加 标题
实验原理：血凝抑制实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，通过加入抗体来抑制血凝反应的发生，从而 检测出血液中是否存在相应的抗体。
添加 标题
实验步骤：血凝抑制实验通常包括加样、加抗体、观察结果等步骤。在实验过程中，需要严格控制实验条件， 以保证实验结果的准确性和可靠性。
添加 标题
实验结果分析：根据实验结果，可以判断出被检测样本中是否存在相应的抗体。如果血凝反应被抑制，则说明被检测样本中 存在相应的抗体；如果没有出现血凝反应或者血凝反应没有被抑制，则说明被检测样本中不存在相应的抗体。
诊断试剂开发：利用 血凝及血凝抑制实验 检测血液中的病毒抗 体，辅助临床诊断
在食品科学领域的应用
食品安全：评估食品中细菌、 病毒等微生物的污染程度
食品加工：检测食品中病原 微生物的含量
食品质量控制：监测生产过程 中的卫生状况，确保产品质量
食品科学研究：为食品科学 领域的研究提供数据支持
在其他领域的应用
评估风险：对于需要进行手术或特殊治疗的患者，血凝及血凝抑制实验可以评估其出 血风险
科学研究：在医学研究中，血凝及血凝抑制实验可用于研究凝血机制、药物作用等方 面
血凝实验实训报告
一、实验目的1. 掌握血凝实验的基本原理和操作步骤。
2. 学会使用血凝抑制实验检测禽流感病毒抗体水平。
3. 了解血凝实验在禽流感疫病监测和免疫抗体检测中的应用。
二、实验原理血凝实验是一种检测病毒抗原或抗体存在的方法。
禽流感病毒表面的血凝素（HA）蛋白具有识别并吸附于红细胞表面的受体，从而使红细胞发生凝集现象。
通过观察红细胞凝集情况，可以判断病毒抗原或抗体的存在。
血凝抑制实验是血凝实验的一种衍生方法，通过加入特异性抗体，抑制病毒与红细胞表面的结合，从而判断抗体水平。
三、实验材料与仪器1. 材料：禽流感病毒抗原、鸡红细胞、抗禽流感病毒抗体、生理盐水、微量移液器、酶标板等。
2. 仪器：微量振荡器、离心机、显微镜等。
四、实验步骤1. 配制病毒抗原稀释液：取禽流感病毒抗原，用生理盐水进行倍比稀释，得到一系列浓度梯度。
2. 设置实验组：取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液，然后将稀释后的病毒抗原加入第一排第1孔，混匀后依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μl。
3. 加入抗体：从第1孔吸取25μl混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μl加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μl。
第三排孔至第五排孔同上操作。
4. 加入红细胞：依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μl 1%鸡红细胞悬液。
5. 混匀：将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，使红细胞与病毒抗原充分混合。
6. 静置：室温（20-25℃）静置30分钟，观察红细胞凝集情况。
7. 结果判定：将板作45度倾斜，观察红细胞凝集情况。
若红细胞出现明显的凝集现象，则表示病毒抗原存在；若红细胞无凝集现象，则表示病毒抗原不存在。
8. 血凝抑制实验：取96孔酶标板，每孔加入25μl PBS液，然后按照血凝实验的步骤加入抗体和红细胞，观察红细胞凝集情况。
五、实验结果与分析1. 血凝实验结果：通过观察红细胞凝集情况，可以判断病毒抗原的存在与否。
2. 血凝抑制实验结果：通过观察红细胞凝集情况，可以判断抗体水平。
血凝实验报告作业
一、实验目的本实验旨在了解病毒血凝现象及其抑制原理，通过观察和记录病毒对动物红细胞的凝集作用，以及通过加入特异性抗体来抑制这种凝集作用，从而探讨病毒与抗体的相互作用。
二、实验原理1. 病毒血凝现象：某些病毒能够吸附在红细胞表面，导致红细胞发生凝集现象。
这种现象称为病毒血凝。
血凝现象可用于检测病毒的存在和鉴定病毒。
2. 血凝抑制试验：通过加入特异性抗体来阻断病毒与红细胞表面的结合，从而抑制血凝现象。
血凝抑制试验可用于检测病毒抗体水平和鉴定病毒。
三、实验材料1. 试剂：病毒悬液、鸡红细胞、生理盐水、抗体、PBS缓冲液、1%鸡红细胞悬液。
2. 仪器：微量移液器、酶标板、振荡器、显微镜。
四、实验方法1. 病毒血凝试验：（1）取96孔酶标板，每孔加入25μl生理盐水。
（2）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后，从第一孔吸取25μl加到第二孔，以此类推，进行倍比稀释至第二排最后一孔。
（3）弃去最后一孔的25μl。
（4）向每孔中加入25μl 1%鸡红细胞悬液。
（5）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30分钟。
（6）观察红细胞凝集现象。
2. 血凝抑制试验：（1）取96孔酶标板，每孔加入25μl生理盐水。
（2）在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后，从第一孔吸取25μl加到第二孔，以此类推，进行倍比稀释至第二排最后一孔。
（3）弃去最后一孔的25μl。
（4）向每孔中加入25μl抗体，混匀后，在第一孔中加入25μl病毒悬液，混匀后，从第一孔吸取25μl加到第二孔，以此类推，进行倍比稀释至第二排最后一孔。
（5）弃去最后一孔的25μl。
（6）向每孔中加入25μl 1%鸡红细胞悬液。
（7）将酶标板置于振荡器上振荡10秒，室温静置30分钟。
（8）观察红细胞凝集现象。
五、实验结果1. 病毒血凝试验：根据红细胞凝集程度，记录每个孔的凝集结果。
2. 血凝抑制试验：根据红细胞凝集程度，记录每个孔的凝集结果。
六、实验分析1. 病毒血凝试验：通过观察红细胞凝集现象，判断病毒的存在和鉴定病毒。
血凝及血凝抑制实验
1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄色，之后直至清亮为清洗干净）。 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸取干净。
血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、红细胞制备
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。
病毒颗粒
红细胞
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；
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血凝抑制实验实训报告
一、实验目的1. 掌握血凝抑制实验的基本原理和操作方法。
2. 了解血凝抑制实验在禽流感抗体检测中的应用。
3. 培养实验操作技能和结果分析能力。
二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测禽流感病毒抗体水平的方法。
该实验原理是利用禽流感病毒对鸡红细胞具有血凝活性，当病毒与鸡红细胞接触时，红细胞会发生凝集现象。
如果血清中含有禽流感病毒特异性抗体，则抗体与病毒结合后，会抑制病毒与红细胞的凝集作用。
三、实验材料1. 实验动物：鸡红细胞。
2. 实验试剂：禽流感病毒抗原、标准阳性血清、标准阴性血清、血清样品、PBS 缓冲液、1%鸡红细胞悬液、微量移液器、酶标板、振荡器、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备96孔酶标板，用微量移液器在每孔加入25μL PBS缓冲液。
2. 将标准阳性血清、标准阴性血清、血清样品分别进行倍比稀释，从高浓度到低浓度依次加入孔中，每孔25μL。
3. 在每个孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后室温静置30分钟。
4. 在每个孔中加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后室温静置30分钟。
5. 将酶标板置于振荡器上振荡10秒，使红细胞充分混合。
6. 室温静置30分钟后，观察红细胞凝集情况。
7. 根据红细胞凝集程度，判断血清样品中禽流感病毒抗体水平。
五、结果与分析1. 阳性对照：红细胞凝集，表明禽流感病毒抗原具有血凝活性。
2. 阴性对照：红细胞未凝集，表明标准阴性血清不含有禽流感病毒抗体。
3. 标准阳性血清：红细胞凝集，表明标准阳性血清含有禽流感病毒抗体。
4. 血清样品：根据红细胞凝集程度，判断血清样品中禽流感病毒抗体水平。
六、实验讨论1. 本实验通过血凝抑制实验检测了血清样品中禽流感病毒抗体水平，为禽流感疫病监测和免疫抗体检测提供了有力手段。
2. 在实验过程中，应注意以下几点：（1）严格遵守实验操作规程，避免人为误差；（2）保证实验材料的质量，如鸡红细胞、禽流感病毒抗原等；（3）控制实验条件，如温度、振荡时间等；（4）观察结果时，注意红细胞的凝集程度，以便准确判断抗体水平。
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇实验报告一：血凝抑制药物A的实验报告摘要：本实验旨在评估血凝抑制药物A对凝血过程的影响。
通过血小板聚集检测、凝血酶时间和纤维蛋白原时间测量，我们发现药物A可有效地抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间，表明其具有明显的抗凝血作用。
引言：血凝抑制药物在医学领域具有广泛的应用，用于治疗各种凝血相关疾病。
血小板聚集、凝血酶时间和纤维蛋白原时间是评估凝血功能的重要指标。
本研究旨在探究血凝抑制药物A对这些指标的影响，为进一步研究和药物开发提供实验依据。
材料与方法：1. 实验药物：血凝抑制药物A2. 血浆样本：从健康人士收集的血浆样本3. 试剂：ADP激活剂，凝血酶试剂，纤维蛋白原试剂4. 实验仪器：光学密度计，凝血时间测定仪5. 实验组设置：将血浆样本分为对照组和药物A处理组结果：1. 血小板聚集检测：药物A处理组显示较对照组明显的血小板聚集抑制，表明药物A具有抗血小板聚集作用。
2. 凝血酶时间测量：药物A处理组凝血酶时间明显延长，表明药物A能有效延缓凝血过程。
3. 纤维蛋白原时间测量：药物A处理组纤维蛋白原时间较对照组显著增加，表明药物A可抑制纤维蛋白原合成和聚合。
讨论：本研究结果表明，血凝抑制药物A可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥抗凝血作用。
这些发现与前期研究相一致，进一步验证了药物A的抗凝血机制。
然而，需要进一步的研究来探究该药物的作用机制以及临床应用前景。
结论：血凝抑制药物A具有明显的抗凝血作用，可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥其作用。
这些发现为该药物的临床应用提供了实验基础，并为进一步相关研究提供了方向。
实验报告二：血凝抑制药物B的实验报告摘要：本实验旨在研究血凝抑制药物B对凝血通路的影响。
通过活化部分凝血活酶时间和凝血因子测定，我们发现药物B可显著延长活化部分凝血活酶时间，同时对凝血因子Xa和IIa具有明显的抑制作用。
血凝抑制实验_实验报告
一、实验目的1. 了解血凝抑制实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握血凝抑制实验在禽流感病毒检测中的应用。
3. 学会通过血凝抑制实验结果判断禽流感病毒的感染情况。
二、实验原理血凝抑制实验（Hemagglutination Inhibition Test，HIT）是一种检测病毒感染的方法，通过检测血清中病毒特异性抗体的存在和效价，来判断动物是否感染过某种病毒。
在禽流感病毒检测中，该实验主要用于检测血清中的禽流感病毒抗体水平，从而判断禽流感病毒感染状态。
实验原理：当禽流感病毒与含有抗体的血清混合后，病毒表面的血凝素（HA）与抗体结合，导致病毒颗粒聚集，血凝素活性降低，从而使红细胞不发生凝集。
通过观察红细胞是否发生凝集，可以判断血清中是否含有禽流感病毒抗体。
三、实验材料1. 禽流感病毒抗原2. 1%鸡红细胞悬液3. 0.5%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）4. PBS缓冲液5. 96孔V型酶标板6. 微量移液器7. 振荡器8. 恒温培养箱9. 移液器吸头四、实验方法1. 准备工作（1）将禽流感病毒抗原用PBS缓冲液稀释至适当浓度。
（2）将鸡红细胞悬液用PBS缓冲液稀释至1%。
（3）将PVP用PBS缓冲液溶解，浓度为0.5%。
2. 血凝抑制实验（1）取96孔V型酶标板，每孔加入25μL PBS缓冲液。
（2）在第一排第1孔中加入25μL禽流感病毒抗原，混匀后，从第1孔吸取25μL加入第2孔，依次进行倍比稀释至第24孔，最后弃去25μL。
（3）向每孔加入25μL 1%鸡红细胞悬液，混匀后置于振荡器上振荡10秒。
（4）将酶标板置于室温（20-25℃）下静置30分钟。
（5）观察红细胞是否发生凝集，记录结果。
3. 结果判定（1）完全抑制：红细胞不发生凝集。
（2）部分抑制：红细胞发生凝集，但凝集程度较轻。
（3）未抑制：红细胞发生凝集，凝集程度明显。
五、实验结果与分析1. 结果记录根据实验结果，记录每孔红细胞凝集情况，并计算抑制率。
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[血凝抑制实验]血凝实验操作报告篇一：禽流感血凝和血凝抑制试验禽流感血凝-血凝抑制试验操作方法及注意事项禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。
该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。
但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。
一、血凝试验操作程序1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。
2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。
第三排孔至第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。
以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）二、血凝抑制试验操作程序1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。
（即1HAU抗原除以4）2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。
3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。
5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。
6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。
置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。
当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。
三、试验过程中的注意事项1样品的保存及试验前处理1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。
1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。
1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。
1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。
胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。
不建议直接吸取其中少量的清亮血清。
1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。
具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。
2器材的选择2.1 酶标板的选择：建议使用96孔90°V型板进行试验，通过反复试验证明：90°V型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。
2.2 移液枪的选择及使用：①单道、多道可调微量移液枪应选择合适的量程，以便精确度的提高。
②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。
吸取液体时，枪头要深入液下缓慢平稳吸液。
加缓冲液时应加在板孔底部。
倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。
加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。
③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。
3试剂的保存及配置3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。
抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。
3.2 PH7.2、0.01mol/L的PBS液的制备①应尽量现用现配②每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。
③由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。
④全部试验均采用同一种稀释液。
3.3 1%红细胞的制备①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。
当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。
②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。
③经2000~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。
⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。
3.4抗原液的配制①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。
②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。
③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。
具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。
从第2至第8孔补25微升PBS，以保持75微升总量不变，另一排同样。
两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。
静置30分钟观察结果。
这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。
如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。
因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。
所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。
4结果的判定每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。
判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。
5试验器具的清洗每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%NaOH中4小时，清水反复冲净，再放入3%Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。
实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。
以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。
四、小结在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。
篇二：血凝抑制试验血凝抑制（HI）试验简介（以禽流感病毒为例）一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
（此步可省略，直接配制1%红细胞）2.4 1%鸡红细胞液取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mL生理盐水，混合均匀即可。
（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）3 抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl PBS（生理盐水），换滴头。
3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。
3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。
3.4每孔再加入25μl PBS（生理盐水）。