血凝抑制试验
血凝及血凝抑制实验
实验原理基于病毒与抗体结合 后，改变了红细胞的抗原性，
从而影响血凝过程
实验结果可用于病毒的分离、 鉴定和抗体效价测定等
实验材料
血凝抑制抗体 病毒抗原 受检血清 红细胞
实验步骤
准备试剂和器材：包括血凝试剂、抗体、离心机、试管等。 采集样本：采集待检测动物的血液样本。 抗体处理：将抗体与待检测样本混合，孵育一定时间。 离心分离：将混合液离心，分离出凝集块。 结果观察：观察凝集块的数量和大小，判断实验结果。
实验结果
添加 标题
实验原理：血凝抑制实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，通过加入抗体来抑制血凝反应的发生，从而 检测出血液中是否存在相应的抗体。
添加 标题
实验步骤：血凝抑制实验通常包括加样、加抗体、观察结果等步骤。在实验过程中，需要严格控制实验条件， 以保证实验结果的准确性和可靠性。
添加 标题
实验结果分析：根据实验结果，可以判断出被检测样本中是否存在相应的抗体。如果血凝反应被抑制，则说明被检测样本中 存在相应的抗体；如果没有出现血凝反应或者血凝反应没有被抑制，则说明被检测样本中不存在相应的抗体。
诊断试剂开发：利用 血凝及血凝抑制实验 检测血液中的病毒抗 体，辅助临床诊断
在食品科学领域的应用
食品安全：评估食品中细菌、 病毒等微生物的污染程度
食品加工：检测食品中病原 微生物的含量
食品质量控制：监测生产过程 中的卫生状况，确保产品质量
食品科学研究：为食品科学 领域的研究提供数据支持
在其他领域的应用
评估风险：对于需要进行手术或特殊治疗的患者，血凝及血凝抑制实验可以评估其出 血风险
科学研究：在医学研究中，血凝及血凝抑制实验可用于研究凝血机制、药物作用等方 面
血凝抑制试验测抗原的原理
血凝抑制试验测抗原的原理血凝抑制试验是一种用于测定血液中抗原的方法，主要用于诊断某些感染性疾病或免疫疾病。
该试验的原理是通过检测抗原与抗体结合的能力来判断血液中的抗原含量。
血凝抑制试验的操作步骤如下：1. 准备实验物质：包括抗原溶液和抗体溶液。
抗原溶液可以是疾病相关的细菌、病毒等微生物抗原，抗体溶液则是能与抗原特异结合的抗体。
2. 加入抗凝剂：将新鲜的全血加入抗凝剂，防止血液凝固。
3. 分离血细胞和血清：通过离心等方法将血液分离成血细胞层和血清层。
4. 制备稀释物：将抗原制备成一系列不同浓度的稀释物，以便检测抗体与抗原结合的最佳条件。
5. 反应抗原与抗体：将不同浓度的抗原稀释物分别与包含抗体的血清混合。
6. 观察反应：将反应混合物孵育一段时间后，观察有无凝结物的形成。
若凝结物形成较少或没有形成，则说明抗体与抗原结合，抗原含量较高；若凝结物形成较多，则说明抗体与抗原结合能力较弱，抗原含量较低。
7. 结果分析：根据凝结物的形成情况，可以定量分析血液中的抗原含量。
若血液中凝结物的形成较少，则说明抗体对抗原的结合能力较强，抗原含量较高；若血液中凝结物的形成较多，则说明抗体对抗原的结合能力较弱，抗原含量较低。
血凝抑制试验基于抗原与抗体的特异性结合原理。
当抗原与抗体相互结合时，会发生凝结反应，形成受体-抗原复合物。
凝结反应的原理是抗体与抗原结合后，抗原在血液中形成一种聚集结构，从而导致血液中的凝集物形成。
血凝抑制试验通过加入已知浓度的抗体制剂来观察对应抗原稀释物中凝结物的形成情况，以评估血液中的抗原含量。
当抗原含量较高时，抗体与抗原结合较多，凝结物形成较少；当抗原含量较低时，抗体与抗原结合较少，凝结物形成较多。
血凝抑制试验具有高度的特异性和敏感性。
它可以识别和测定血液中特定抗原的含量，从而用于诊断某些感染性疾病或免疫疾病。
同时，血凝抑制试验还可以用于研究免疫反应的机制，以及评价特定疫苗或药物的抗原活性。
总结而言，血凝抑制试验通过观察凝结物的形成情况来测定血液中特定抗原的含量。
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇实验报告一：血凝抑制药物A的实验报告摘要：本实验旨在评估血凝抑制药物A对凝血过程的影响。
通过血小板聚集检测、凝血酶时间和纤维蛋白原时间测量，我们发现药物A可有效地抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间，表明其具有明显的抗凝血作用。
引言：血凝抑制药物在医学领域具有广泛的应用，用于治疗各种凝血相关疾病。
血小板聚集、凝血酶时间和纤维蛋白原时间是评估凝血功能的重要指标。
本研究旨在探究血凝抑制药物A对这些指标的影响，为进一步研究和药物开发提供实验依据。
材料与方法：1. 实验药物：血凝抑制药物A2. 血浆样本：从健康人士收集的血浆样本3. 试剂：ADP激活剂，凝血酶试剂，纤维蛋白原试剂4. 实验仪器：光学密度计，凝血时间测定仪5. 实验组设置：将血浆样本分为对照组和药物A处理组结果：1. 血小板聚集检测：药物A处理组显示较对照组明显的血小板聚集抑制，表明药物A具有抗血小板聚集作用。
2. 凝血酶时间测量：药物A处理组凝血酶时间明显延长，表明药物A能有效延缓凝血过程。
3. 纤维蛋白原时间测量：药物A处理组纤维蛋白原时间较对照组显著增加，表明药物A可抑制纤维蛋白原合成和聚合。
讨论：本研究结果表明，血凝抑制药物A可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥抗凝血作用。
这些发现与前期研究相一致，进一步验证了药物A的抗凝血机制。
然而，需要进一步的研究来探究该药物的作用机制以及临床应用前景。
结论：血凝抑制药物A具有明显的抗凝血作用，可通过抑制血小板聚集、延长凝血酶时间和纤维蛋白原时间发挥其作用。
这些发现为该药物的临床应用提供了实验基础，并为进一步相关研究提供了方向。
实验报告二：血凝抑制药物B的实验报告摘要：本实验旨在研究血凝抑制药物B对凝血通路的影响。
通过活化部分凝血活酶时间和凝血因子测定，我们发现药物B可显著延长活化部分凝血活酶时间，同时对凝血因子Xa和IIa具有明显的抑制作用。
血凝抑制试验
血凝抑制（HI）试验简介（以禽流感病毒为例）一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA 蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml超纯水），101kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
血凝与血凝抑制试验原理
血凝与血凝抑制试验原理
血凝与血凝抑制试验是一种常用的血液凝血功能检测方法，用于评估体内凝血系统的功能状态。
血凝试验原理：
血凝试验通常采用活化部分凝血时间（APTT）或凝血酶时间（TT）来衡量血液凝血的能力。
在血凝试验中，通过向血浆中加入一定量的凝血酶原激活体（如凝血酶），观察血浆在特定条件下形成凝块的时间。
正常血液凝固功能良好的人，凝血时间较短，血浆在凝血酶原激活体的作用下能很快形成凝块。
血凝抑制试验原理：
血凝抑制试验是为了检测某些抗凝物质（如抗凝血酶、抗凝血酶原等）对凝血系统的抑制作用。
在血凝抑制试验中，首先向血浆中加入一定量的凝血酶原激活体，观察血浆在特定条件下形成凝块的时间。
然后再加入待测的血凝抑制物质，在不同浓度下观察凝血时间的变化。
如果抗凝物质的浓度越高，凝血时间延长的程度越大，则说明该抗凝物质对凝血系统的抑制作用越强。
血凝与血凝抑制试验的原理即通过衡量血浆的凝血时间来评估凝血系统的功能状态或抑制物质的抑制能力。
血凝和血凝抑制实验
实验三血凝和血凝抑制实验一、实验目的与要求掌握血凝和血凝抑制实验操作及应用二、实验内容H5亚型猪流感抗体检测与分析三、实验步骤（一）血凝（HA）试验1、用微量移液枪在微量反应板的第一排1-12孔均加入50μLPBS，换枪头；2、吸取50μL抗原，加入第一孔，反复吹打5次混匀；3、从第一孔吸取50μL加入第二孔，吹打混匀吸取50μL加入第三孔，如此稀释至第11孔，从第11孔吸取50μL丢弃，第12孔作为红细胞对照；4、各孔均加入50μL0.5%鸡红细胞悬液（已充分摇匀）；5、轻轻混匀，室温25℃静置20min观察结果；（二）血凝抑制（HI）试验1、血清样品处理：先加150μL胰酶溶液于300μL血清中，56℃水浴灭活30min 后冷却至室温；加900μL高碘酸钾，混合，室温孵育15min；加900μL丙三醇盐溶液，混合，室温孵育15min；加750μL生理盐水混合，4℃保存；2、根据HA试验中测定的HI抗原效价配制4单位抗原；3、在微量反应板第5-8排的2-11孔加入25μLPBS，第12孔加入50μLPBS；4、吸取50μL血清（编号为2-4血清、阳性血清、编号为1-4血清、阴性血清）加入第1孔，混匀后吸取25μL于第二孔，混匀后吸25μL于第三孔，依次稀释至第11孔，第11孔混匀后弃去25μL；5、各排前11孔均加入4单位抗原25μL，第12孔作为红细胞对照，室温下25℃静置30min；6、各孔均加入50μL0.5%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻摇匀，室温下25℃静置30min。
四、实验结果及分析血凝（HA）试验，从第三个孔开始显示“滴泪”第一排为阳性对照第二排为阴性对照第三排，血清5-6第四排，血清6-6参考文献[1]GB/T 27535-2011，猪流感HI抗体检测方法[S].。
血凝与血凝抑制试验
• 2、试验原理
三、血凝抑制试验（HI）
：病毒优先与血清中的抗体结合，然后才与红细胞结合
三、血凝抑制试验（HI）
结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应 全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价 ，用2n表示。通常能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全被抑制的血清最高稀 释倍数，称为抗体的血凝抑制价（HI效价）。只有阴性对照孔血清滴度不大于21g2， 阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效
四、注意事项
• 1、1%红细胞配制 • 2、四单位配制 • 3、样品稀释操作过程
欢迎各位提出宝贵意见！
Thank You!
血凝及血凝抑制试验 2012 年
目录
1 2 3 4 试验材料 血凝实验 血凝抑制试验 注意事项
一、试验试剂
血清抗体
病毒抗原
1%红血球
PBS
一、试验材料
V形板/血凝板
振荡器 移液枪
二、血凝试验（HA）
• 1、试验目的
•
•
检பைடு நூலகம்病毒抗原血凝效价
许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或 人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病 毒。
• 2、试验原理
二、血凝试验（HA）
二、血凝试验（HA）
结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生 完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。
三、血凝抑制试验（HI）
• 1、试验目的
•
•
检测血清抗体效价
血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称 为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血 清学试验，称为血凝抑制试验。
实验四血凝及血凝抑制试验护理课件
实验结论的总结与归纳
结论的明确性
总结实验结论时，应确保 结论明确、具体，能够准 确反映实验的核心发现。
归纳与分类
将多个观察结果进行分类 和归纳，找出其中的共性 和差异，为后续研究提供 依据。
对比与关联
将本次实验结论与其他相 关研究进行对比，找出关 联性和差异性，为完善理 论体系提供支持。
实验结果的推广与应用
根据实验需要，准备好所需的实验试剂，如抗凝剂、缓冲液、酶等。确保试剂的有效期、纯度和浓度符合实验要求，避免使 用过期或变质的试剂。
实验动物的准备
选择合适的动物模型
选择适合实验的动物模型，如小鼠、大鼠、兔子等。确保动物健康、无传染病，并按照实验要求进行 饲养和护理，以保证实验结果的可靠性和准确性。
03
实际应用价值评估
潜在应用领域探索
评估实验结果的实用性和可操作性， 判断其是否能够在实际工作中得到应 用。
探讨实验结果在其他领域的应用可能 性，为未来研究提供新的思路和方向 。
推广策略制定
根据实验结果的特点和实际需求，制 定相应的推广策略，促进实验成果的 广泛应用。
05
实验后的处理
实验器材的清洗与整理
实验操作过程
实验样品的采集与处理
血液采集
选择合适的静脉，消毒后使用真空采 血管采集血液，注意避免溶血和凝血 。
样品处理
将采集的血液在室温下静置15-20分 钟，然后以3000rpm离心10分钟，分 离出血浆பைடு நூலகம்红细胞。
实验样品的检测与记录
血凝检测
取适量血浆，加入凝血酶溶液，观察并记录血浆凝固时间。
04
实验结果与结论
实验结果的分析与解释
实验结果与预期结果的比较
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血凝抑制（HI）试验简介
（以禽流感病毒为例）
一、原理
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA 蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用
该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点
只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤
1 阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，
69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml超纯水），101kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备
2.1采血
用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞
将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液
取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
（此步
可省略，直接配制1%红细胞）
2.4 1%鸡红细胞液
取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mL生理盐水，混合均匀即可。
（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）
3 抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）
3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25µl PBS（生理盐水），换滴头。
3.2吸取25µl抗原加入第l孔，混匀。
3.3从第1孔吸取25µl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25µl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25µl弃之，换滴头。
3.4每孔再加入25µl PBS（生理盐水）。
3.5每孔均加入25µl体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。
对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
3.7结果判定将板倾斜，观察血凝板，判读结果（见下表）。
表1：血凝试验结果判读标准
能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。
注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。
4 血凝抑制（HI）试验（微量法）
4.1 根据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。
以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。
例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25µl PBS（生理盐水），第12孔加入50µl PBS（生理盐水）。
4.3 吸取25µl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25µl 于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25µl 弃去。
4.4 1孔～11孔均加入含4HAU抗原25µl，室温（约20℃）静置至少30min。
4.5 每孔加入25µl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件
下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。
4.6 结果判定
试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价大于或等于41og2为阳性。
五、HI试验注意事项
1、合理选择抗原和对照阳性血清。
针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。
同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。
一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高。
2、合理使用和保存抗原。
反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。
要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。
为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。
3、反应温度不能太高。
若在37℃（如温箱）下进行，
会影响检测结果。
4、掌握好孵育时间。
本操作中HA和HI试验中加入红细胞后的作用时间均为40分钟，主要是参照OIE标准，在一些病毒株中可见红细胞从病毒中解脱，如果有这种情况的发生，要提前判定(约25～30分钟)或4℃下孵育。
一般来讲，主要看红细胞对照孔，对照完全沉淀时要迅速判读。
5、标准抗原稀释液浓度必须为4个HA单位，必须每天制备并在试验前滴定。
抗原标定方法
血凝板 1 2 3 4
1、稀释液（µl）25 25 25 25
2、4单位抗原25
3、从第2孔开始倍比稀释到第4孔，最后一孔弃去
说明1：稀释度1:2 1:4 1:8 1：16
说明2：抗原滴度2倍1倍0.5倍0.25倍
4、1%红细胞（µl）25 25 25 25
微量振荡器混匀，室温放置40min,观察
6、红细胞悬液要始终符合标准，使用时应随时振荡。
7、反应体系为75µl。
8、每次试验时均应设2个阳性血清对照、1个阴性对照。
阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
阳性血清的标定：具体操作可在购进一批标准阳性血清以后，取几瓶血清，溶解到一起，分成小包装，-70℃(无条件者可用-20℃)保存备用，每次用时取一小管。
标定时取冻存血清1支，由几个操作人或分几次(红细胞等最好是分别配制)测定阳性血清效价，取平均值作为最终的标准阳性血清效价。
大量检测时不需每板均做阳性对照，一般可在试验前、中、后分别设阳性对照。
9、注意非特异性凝集素的消除。
禽类血清中，尤其是水禽血清，往往含有非特异性血凝抑制因子，在做禽流感血凝抑制试验时会出现2-3孔有凝集现象。
因此，在利用血凝抑制试验进行血清抗体测定之前，有必要对血清中非特异性因子进行排除。
可采用被调查的同种家禽的红细胞。
也可采取56℃水浴30min，加入等体积的1%鸡红细胞，混匀，室温静置30min,1500-1800rpm,离心5-10min,取上清检测，结果判定时增加一个滴度。
10、容易出现的错误。
在进行试验操作时很容易出现错误，所以进行实验时一定要严格操作，每次测定应有严格的温度范围和作用时间，出现错误时要认真查找原因，以免类似错误再次出现。
以下是容易出现的错误：
•（1）对照孔凝集
•盐类凝集：所谓盐类凝集即稀释液中氯化钠达至一定高浓度时，即使没有血清抗体也能发生凝集反应。
•当生理盐水被细菌污染时也可出现对照孔凝集。
•血清变质或受细菌污染。
•（2）全部凝集
•当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。
•抗原滴加时出现失误，工作抗原效价过高。
•生理盐水受细菌污染或其它因素。
•（3）红细胞全部下滑
•①当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。
•②加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现全部下滑现象。
•（4）温度对实验结果也有影响，一般要求在室温下进行实验，当实验温度低于4℃时红细胞有时会发生自凝现象。
•（5）抗原与抗体作用时间过长或过短对结果影响较大：过短出现凝集不完全；过长出现洗脱现象。