食品实验 食品中合成着色剂的测定 4.28
DBS52 023-2017 食品安全地方标准 食品中13 种水溶性合成着色剂的测定.pdf
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DBS52/ 023—2017 AA
附录A （资料性附录） 13 种合成着色剂的参考保留时间
13种合成着色剂的参考保留时间见表A.1。
表A.1 13 种合成着色剂的参考保留时间（按波长排序）
合成着色剂名称 柠檬黄 日落黄
喹啉黄
酸性红 2G 诱惑红 胭脂红 苋菜红 赤藓红 食用绿 S 亮蓝 亮绿 靛蓝 专利蓝 V
3.3 标准品
3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.3.5 3.3.6 3.3.7 3.3.8 3.3.9
喹啉黄（CAS：8004-92-0）。 食用绿 S（CAS：860-22-0）。 亮绿（CAS：633-03-4）。 柠檬黄（CAS：1934-21-0）。 苋菜红（CAS：915-67-3）。 胭脂红（CAS：15876-47-8）。 诱惑红（CAS：25956-17-6）。 酸性红 2G（E128）（CAS：3734-67-6）。 赤藓红（CAS：568-63-8）。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取50 g样品，用刀切成碎末，置食物粉碎机中，打碎，混匀，作为试样。
5.2 色素提取
称取试样4 g（准确至0.01 g）置100 mL容量瓶中，加提取液（3.2.4）约80 mL，至超声波中超声 30 min，取出放至室温，用提取液定容（V1），摇匀，转移至离心管中。以5000 r/min离心5 min，取 上清液滤过，弃去初滤液约10 mL，取续滤液50 mL（V2）至蒸发皿中，置水浴蒸至近干，残渣加50%乙 醇溶解，转移至10 mL（V3）量瓶，并用50%乙醇定容，摇匀转移至离心管中，5000 r/min离心5 min， 上清液，进高效液相色谱测定。
3.2 试剂配制
3.2.1 柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸（C6H8O7•H2O），加水至 100 mL，溶解混匀。 3.2.2 乙酸铵溶液（20 mmol/L）：称取 1.54 g 乙酸铵加水超声溶解定容至 1000 mL。 3.2.3 氨水：量取氨水 2 mL，加水至 100 mL，混匀。 3.2.4 提取液：95%乙醇-氨水-水（184+1+66，体积比）溶液，量取 95%乙醇 736 mL，氨水 4 mL，水 264 mL，混匀。
食品中人工合成着色剂的测定
食品中人工合成着色剂的测定序列号：DM-P1071、适用范围本方案适用于糕点、果酱、水果罐头、黑芝麻糊、果冻、冰淇淋、乳饮料、糖果和红酒中人工合成着色剂的检测；检出限：亮蓝是1.0 mg /kg，其他的是0.2 mg /kg；2、提取2.1 糕点、果酱(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(3) 将下层残留物用10mL提取液A* 按照步骤(2)重复提取一次，合并三次上清液；(4) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.2 水果罐头、黑芝麻糊(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，合并两次上清液；(3) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。
2.3 冰淇淋(1) 取1.0 g样品，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约7 mL，再加入1.5 mL甲酸混匀，待净化。
2.4 果冻取1.0 g样品，加入10 mL水，40℃水浴超声提取15 min，加入5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.5 乳饮料、糖果取1.0 g样品，加入10 mL水、5 mL甲醇和3 mL甲酸混匀，待净化。
2.6 红酒取1.0 mL样品，加入0.5 mL甲醇和0.3 mL甲酸混匀，待净化。
【VIP专享】食品中合成着色剂的测定06.07.02
食品中合成着色剂的测定1 范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。
本标准适用于食品中合成着色剂的测定。
本方法检出限：新红5ng，柠檬黄4ng,苋菜红6ng，胭脂红8ng,日落黄7ng，赤鲜红18ng，亮蓝26ng，当进样量相当0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/Kg,0.16mg/Kg,0.24mg/Kg,0.32mg/Kg,0.28mg/Kg,0.72mg/Kg,0.72mg/Kg,1.04mg/Kg.第一法高效液相色谱法2 原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或掖-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
3 试剂3.1 正己烷。
3.2 盐酸。
3.3 乙酸。
3.4 甲醇：经0.5um滤膜过滤。
3.5聚酰胺粉（尼龙6：过200目筛。
3.6 乙酸铵溶液（0.02mol/L）;称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45um滤膜过滤。
3.7 氨水：量取氨水2Ml.加水100Ml.混匀。
3.8 氨水-乙酸铵溶液（0.02,mol/L）:称取氨水0.5mL，加乙酸铵溶液（0.02mol/L）至1000mL，混匀。
3.9 甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，混匀。
3.10 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。
3.11 无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL，混匀。
3.12 三正辛胺正丁醇溶液（5％）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
3.13 饱和硫酸钠溶液。
3.14 硫酸钠溶液（2g/L）。
3.15 pH6的水：水加柠檬酸溶液pH值到6。
3.16 合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100％质量的柠檬黄，日落黄，苋菜红，胭脂红,新红，赤鲜红，亮蓝，靛蓝各0.100g，置100mL容量瓶中，加Ph6水到刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。
液相色谱法测定食品中合成着色剂
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
食品中合成着色剂的测定
食品中合成着色剂的测定食品安全检验手册33~35页1.原理食品中合成着色剂用聚酰胺粉吸附或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性与峰面积定量。
2.试剂（1）正己烷 分析纯。
（2）盐酸 分析纯。
（3）甲醇 经滤膜（0.45µm）过滤。
（4）乙酸。
（5）聚酰胺粉（尼龙6） 80目。
（6）乙酸铵溶液（0.02mol/L） 称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，混匀后，经滤膜（0.45µm）过滤。
（7）氨水 量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。
（8）甲醇+甲酸（6+4）溶液 量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。
（9）柠檬酸溶液 称取20g柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至100mL，溶解混匀。
（10）无水乙醇+氨水+水（7+2+1）溶液量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。
（11）三正辛胺正丁醇溶液（5%）量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。
（12）饱和硫酸钠溶液。
（13）pH6的水水加柠檬酸溶液调pH值到6。
（14）合成着色剂标准溶液准确称取柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、诱惑红、亮蓝、靛蓝各0.1000g，置于100mL容量瓶中，加pH4水至刻度。
此溶液含着色剂1mg/mL。
（15）合成着色剂标准使用液：临用时取上述溶液2.0mL，加水稀释至100.0Ml，摇匀，配成每毫升相当20.0µg的合成着色剂。
然后稀释成2、4、6、8、10µg/ mL系列标准溶液。
3.仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器，500nm波长。
4.测定方法（1）样品处理①橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中。
含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。
②配制酒类：称取20.0～40.0g，放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，水浴加热驱除乙醇、加水30mL，温热溶解，若样品溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到4左右。
食品中合成着色剂测定
食品中合成着色剂的测定摘要:食品中合成着色剂高效液相色谱的测定。
方法采用c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱，流动相为乙酸铵+甲醇，流速1.0ml/min，检测波长254nm，柱温设为23℃，进样量20?%el。
本检测方法对gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定进一步细化，使用着色剂小柱代替gb/t5009.35-2003食品中合成着色剂的测定中色素提取，检测时间缩短，检测结果精确度提高，具有一定的实践指导作用。
关键词:食品合成着色剂1、前言食品中合成着色剂是一种已知的有害物质，其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收。
由于着色剂在人体中具有累积作用,长期过量摄入直接危害到人们的健康特别是对少年儿童的健康危害更为严重，孩子的肝脏解毒和代谢功能都比较脆弱，如果摄入过多的人工合成色素，会加重肝脏及胃肠道的负担，干扰体内正常的代谢反应，出现不同程度的食欲不振、消化不良、腹痛、腹泻等症状2、原理样品经水溶解，通过活化的着色剂小柱吸附色素，用洗脱试剂洗脱，用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3、试验部分3.1所用试剂3.1.1水：符合gb/t6682规定的一级水要求3.1.2 甲醇：色谱纯。
3.1.3 氨水：分析纯3.1.4乙酸铵溶液（0.02mol/l）：称取1.54g乙酸铵加水至1000ml 溶解，经0.45?%em滤膜过滤3.1.5标准品：柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝3.1.6氨化甲醇5%：95ml甲醇加5ml氨水3.2仪器与设备3.2.1高效液相色谱仪3.2.2色谱工作站3.2.3紫外检测器3.2.4 c18(10?%em,4.6mm??50mm)不锈钢色谱柱3.2.5固相萃取装置3.2.6着色剂小柱3.2.7氮吹仪3.2.8漩涡混合器3.2.9高速离心机3.3方法3.3.1合成着色剂标准溶液浓度的配制准确称取标准品着色剂各100mg,置于100 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度1mg/ml。
食品中人工合成着色剂的测定
食品中人工合成着色剂的测定摘要：在日常试验用HPLC测定食品品中人工合成着色剂的国家标准GB/T5009.35- 2003时，我们发现该方法测定高蛋白质油脂等固态样品的前处理方法以及梯度洗脱程序存在一定的不足，因此，对该方法的前处理以及梯度洗脱程序加以改进，使得样品前处理简便快捷，六种色素回收率均在90%以上，而且延长了色谱柱的寿命。
关键词：人工合成着色剂 HPLC 食品前处理Through daily test with HPLC determination food products in the artificial synthesis colors agent of national standard GB/T5009.35-2003， we found law determination high protein oil，solid samples of processing method and gradient wash program exists must of insufficient， therefore， on the method of processing and gradient wash program be improved， makes samples processing easy shortcut， six kind of pigment recovery are in 90% above， and extended the spectrum column of life人工合成着色剂作为一种添加剂广泛用于食品中，GB2760-2011对其使用有明确的限量标准，但在市场上却时有发现这些人工合成着色剂被滥用，如染色馒头，所以对它的检测监管是相当重要的，测定这些人工合成着色剂方法有高效液相色谱法、薄层色谱法等[1] ，但无论哪一种方法都涉及样品前处理。
国标法第一法是用HPLC测定合成着色剂，将食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和峰面积比较进行定量[1] 。
浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法
浅谈食品检测中合成着色剂的测定方法俗话说“人是铁，饭是钢，一顿不吃饿得慌”，可见食品对于人类的重要性。
随着全球经济的高速发展，食品安全成了民众关心的大事，如何才能确保食品安全则成为热点问题，其中作为食品安全的一种监控手段，食品检测的重要性就在过程中凸显出来了。
食品中的着色剂的检测是食品检测中的一项重要检测项目，受到了相关部门的高度关注。
鉴于此，作者全面分析了食品检测中合成着色剂的检测方法，以期提高食品检测的效率，保障食品安全。
标签：食品检测；合成着色剂；测定方法与食品安全相对的就是食品安全危害，食品安全危害可以大致分为生物危害、化学危害和物理危害。
食品添加剂就是化学危害的一个重要来源。
按照国家食品添加剂的管理规定，对允许使用的添加剂按照规定量添加使用不会对人产生危害，但是对于在食品添加剂名单上明确规定不可以添加或是超量添加允许添加的添加剂，都会产生食品安全危害。
合成着色剂目前的使用范围广、用量大，长期过量摄入会对人体产生很大的危害。
但是要想对为数繁多的食品进行是否含有合成着色剂的检测，则需要采取适宜的测定方法，方可提高检测效率，提高监管力度和监管的有效性，从而打击违法添加有害物质的行为，保障人民的生命安全。
1 合成着色剂概述着色剂作为食品添加剂使用的主要作用就是改变食品的色彩，是一种相对传统的食品色彩调节方法。
根据市场调查分析，消费者在购买食品时，一般会考虑食品的色、香、味、形情况，同时，根据研究显示，食品的色彩对于人的食欲有刺激作用，可以勾起消费者的购买欲。
因此，食品生产商为了所生产食品的销量，在食品色彩上大下功夫，着色剂也就被广泛的应用开来。
近年来，国际国内的食品安全事故频发，其中不乏着色剂的滥用导致的食品安全事故。
事故频发导致了民众对于着色剂产生了怀疑与强力排斥，同时也受到了国家相关部门的关注与大力监督治理，在消费者的排斥与国家部门的监管下，着色剂滥用的情况得到了一定的遏制。
但是一些不法商家为了经济利益，不惜冒着触犯法律的风险，试图通过食品检测的漏洞来避免不法行径被发现。
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2. 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的
一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
检测器：二极管阵列检测器
高效、高速、高灵敏度、高自动化
现状：超量使用，使用工业色素、染料色素
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方便、快速、准确地检测食品中合成着色 剂，是对其进行有效管理的必要手段。
测定手段（GB/T 5009.35-2003）： 1. 高效液相色谱法 2. 薄层色谱法 3. 示波极谱法 4. 其他：纸上层析、分光光度法
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亮蓝、柠檬黄、日落黄
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合成着色剂在饮料中的最大使用量
合成着色剂：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
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合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（GB2760-2011）。
PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 加热
调PH 洗涤
甲醇-甲酸溶液
60mL甲醇+40mL甲酸
洗涤
无水乙醇-氨水-水 70mL乙醇+20mL氨水+10mL水 解吸附
乙酸铵溶液
合成着色剂标准溶 液
1.54g乙酸铵，纯水定容至 1000mL，乙酸调PH至4
浓度0.05mg/mL
流动相 定量分析
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3. 除杂质 组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤； PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）； 甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）； 400mL PH4的水洗涤至PH为4。
4. 解吸附 更换抽滤瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗涤三次至无色（5mL、
10mL、5mL），收集解吸液。
一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
检测器：二极管阵列检测器
高效、高速、高灵敏度、高自动化
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高效液相色谱仪
四大系统：
1．高压输液系统（高压泵：
（GB2760-2011）
着色剂
柠檬黄 日落黄
亮蓝
最大使用量（g/kg） 0.1 0.1 0.025
同一功能的食品添加剂（相同色泽着色剂、防腐剂、 抗氧化剂）在混合使用时，各自用量占其最大使用 量的比例之和不应超过1
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一、实验原理
1.聚酰胺吸附法提取合成着色剂 聚酰胺（尼龙）通过氢键吸附着色剂，天
使流动相连续不断地送入色 谱柱）
2．进样系统（可同时进120个
样，标记每个进样孔所放的 样品）A、B泵
3．分离系统：色谱柱
4．检测系统：光电二极管阵
列检测器，一次进样可得不 同波长下的色谱图
辅助装置：
5.梯度洗脱装置等：适于分
析极性差别较大的复杂组分
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3.结果分析 保留时间（定性）：组分从进样到出现信号最大值 时的时间；根据样品中各物质被洗脱至检测器的时 间差异来进行定性分析； 峰面积（定量）：峰与峰底之间的面积，反映组分 含量；根据样品峰面积与标准品峰面积的比较来进 行定量分析。
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二、试剂与器材
试剂
配方
作用
聚酰胺粉
吸附
柠檬酸溶液
20g柠檬酸，100mL水溶解
50%乙醇 其他
定容样品
乙酸、甲醇、氨水、蒸馏水水
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二、试剂与器材
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热或超声 除去二氧化碳。（已脱气）。
2. 色素吸附 称取聚酰胺3g(约3平勺)，用少许PH4的水（70℃）调成糊 状，加入待测样品，搅拌5min。
然着色剂（影响测定）在酸性条件下被洗脱去 除，合成着色剂在碱性条件下被洗脱收集，浓 缩后上机测定。
吸附——洗涤——解吸附——浓缩——上机 理化测定一般步骤：除杂质、收集目标物、 调整浓度、上机
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2.1 色谱法基本原理 色谱法（又层析法）：是一种物理或物理化 学的分离分析方法。是利用混合物中各组分 在两相（固定相和流动相）中吸附、分配、 离子交换、亲和力、分子尺寸等差异，使固 定相各组分的保留作用不同，当两相做相对 运动时，不同组分产生反复多次的差速迁移 从而分离分析。
食品中合成着色剂的测定
——色素提取
2014.4.28
1
课程目的：
1. 掌握食品中合成着色剂的测定原理； 2. 了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。
2
着色剂：通过使食品着色后改善其感官性状，增进食欲的 一类物质，这类食品本身具有色泽，因此又称为色素。
天然着色剂：辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱 红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可 可色素、焦糖色素等等。
抽滤过程注意 搅拌、倒废液
70℃ PH4水，20mL，洗3次
目标物
甲醇-甲酸，20mL，洗3次 70℃ PH4水，400mL洗涤
更换抽滤瓶
直至漏斗下水滴 PH为4
直至漏斗下水滴 为无色
乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL
收集滤液，80℃水浴至2mL
清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水
乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，4℃冰箱保存
5. 样品浓缩及保存
解吸液倒入蒸发皿中，80℃水浴蒸发至约2mL，以乙酸 （一小滴）调节PH至6。收集样品至离心管，加水定容至5mL。 4000转离心8min。标记并保存于4℃冰箱，以备下次课上机测 定。
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3g聚酰胺
20g饮料
70℃ PH4水，糊状
加热脱气
混合搅拌5min
G3漏斗抽滤
注意密 封性！
1小滴
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2.1 色谱法基本原理 色谱法（又层析法）：是一种物理或物理化 学的分离分析方法。是利用混合物中各组分 在两相（固定相和流动相）中吸附、分配、 离子交换、亲和力、分子尺寸等差异，使固 定相各组分的保留作用不同，当两相做相对 运动时，不同组分产生反复多次的差速迁移 从而分离分析。
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2. 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的