基因工程药物的质量控制
生物医药技术生物制药质量控制体系建设
生物医药技术生物制药质量控制体系建设生物医药技术生物制药质量控制体系建设生物制药是指利用基因工程技术生产的药物，广泛应用于治疗多种疾病。
生物制药类药物的研发和生产过程较为复杂，需要建立完善的质量控制体系，以确保产品的质量和安全性。
本文将从质量控制的重要性、生物制药的质量控制要求以及建设质量控制体系的关键点进行论述。
质量控制是确保产品质量的重要环节。
对于生物制药类药物而言，质量控制更为重要，因为这类药物往往具有复杂的分子结构和生物活性特性。
一旦质量控制不到位，可能会对患者的生命造成威胁。
例如，生物制药类药物中的蛋白质药物，其纯度和杂质含量直接影响药物的疗效和安全性，任何细微的变化都可能导致药物的失效或者产生毒副作用。
因此，建立一个严格的质量控制体系是非常必要和重要的。
生物制药类药物的质量控制要求也比较复杂。
首先，对于生物制药类药物的研发和生产，需要遵循一系列的质量规范和法规要求，如GMP（Good Manufacturing Practice）等。
其次，对于生物制药类药物的每一个生产环节，都需要有相应的质量控制措施。
例如，原辅料的选择和检验，生产过程的监控和调控，产品的质量检验和验证，以及药物的稳定性研究等。
最后，生物制药类药物还需要建立合理的贮存条件和配送链，以确保药物在使用期限内保持原有的质量和稳定性。
建设质量控制体系的关键点主要包括以下几个方面。
首先，需要明确质量控制的目标和要求。
不同的产品可能有不同的质量控制标准，需要根据产品的特点和用途来确定相应的质量控制标准。
其次，需要建立一套完整的质量控制流程，包括原辅料的检验，生产过程的监控，产品的质量检验和验证等。
这些流程需要明确并标准化，以确保每一个环节都能得到有效的控制。
同时，还需要建立一系列的质量控制指标和方法，以便能够对产品的质量进行有效的检测和评估。
最后，还需要进行持续的质量监督和改进。
质量控制是一个动态的过程，需要不断地进行监督和改进，以适应不断变化的市场需求和科技进步。
生物药物的制备和质量控制
生物药物的制备和质量控制随着现代医学的发展，生物药物的制备和质量控制成为制药行业的重要领域。
生物药物是通过基因工程技术生产的，具有高度的特异性和生物活性。
与传统药物相比，生物药物更加安全有效，能够治疗许多难治性疾病。
一、生物药物的制备生物药物的制备包括基因克隆、重组蛋白表达、纯化和后续处理等环节。
以重组人胰岛素为例，它的基因序列被插入到细菌的质粒中，经过复制扩增，表达了胰岛素的前体蛋白。
在胰岛素前体蛋白中，存在一个肽链需要切除才能得到成熟的胰岛素分子。
重组胰岛素在表达后，需要通过纯化过程得到纯品。
纯化的过程中，采用了多次离子交换、凝胶过滤和亲和层析等技术，将重组胰岛素从细胞破碎物中提取并纯化。
最后，经过乙酸钠等化学处理，得到成熟的胰岛素。
生物药物的制备需要考虑许多问题。
如何最大限度地利用表达体系的产能？如何保持生物药物的稳定性和活性？如何选择合适的纯化方法，最大限度地去除杂质？这些问题需要制药厂商进行综合考虑和分析，确保生产出高质量的生物药物。
二、生物药物的质量控制药物的质量控制是制药过程中的重要环节。
传统药物的质量控制主要关注活性成分的纯度、含量和稳定性等指标。
而生物药物的质量控制涉及到更多的方面，比如结构特征、生物活性、溶解性、聚集性等因素。
以下为几个生物药物的质量控制指标。
1.脱氧核糖核酸(DNA)含量DNA是生物药物制备过程中常见的杂质。
在制备过程中，DNA可能来源于感染的细胞、原料、细菌等。
高含量的DNA会影响生物药物的质量和安全性。
因此，对于一些基因工程制备的生物药物，制药商需要关注和控制DNA的含量。
2.内毒素(endotoxin)含量内毒素是细菌细胞壁中的一种成分，对人体有强烈的毒性。
在生物药物纯化过程中，细菌残留物可能导致内毒素污染。
内毒素的含量应该低于一定限度，严格控制内毒素的含量是保证生物药物质量和安全性的重要手段。
3.生物活性生物活性是生物药物的生物学特性之一，也是药物的关键质量指标。
基因工程药物的质量控制
建立严格的安全性监管体系，对基因工程药 物的生产、储存、运输和使用进行全程监管 ，确保安全可控。
保证药物的稳定性
稳定性评估
对基因工程药物的物理、化学和生物学稳定性进行评 估，确保药物在储存和使用过程中保持稳定。
稳定性检测
定期对基因工程药物进行稳定性检测，包括效期稳定 性、温度敏感性等方面的检测。
02
蛋白质表达水平检 测
利用免疫学和质谱技术，检测基 因工程药物中蛋白质的表达水平 ，评估其生物活性。
03
杂质与污染物检测
通过色谱、质谱和其他生化技术 ，对基因工程药物中的杂质、污 染物和残留物进行检测和控制。
分析技术
生物信息学分析
利用生物信息学方法，对基因工程药物的基因序列、蛋白质结构和 功能进行深入分析，预测其药理和毒理作用。
质量管理体系建立
建立完善的质量管理体系，确保基因工程药物的生产、质控和分析过程符合质量标准和 法规要求。
持续改进与优化
通过对生产和分析过程的监控与评估，持续改进和优化基因工程药物的质量保证体系。
06
CATALOGUE
基因工程药物质量控制的发展趋势与展望
质量控制技术的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的进步，基因工程 药物的质量控制正逐步实现 自动化和智能化，提高检测
VS
质量控制部门
负责制定和执行质量控制计划，对基因工 程药物的生产过程和产品进行全面监控， 确保符合国家法规和标准以及企业内部标 准和规范的要求。
05
CATALOGUE
基因工程药物质量控制的方法与技术
检测方法
01
基因序列检测
通过DNA测序技术，对基因工程 药物的基因序列进行准确检测， 确保其与预期序列一致。
人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则
一、引言 (1)二、研究内容和制品质量控制 (2)1治疗用的目的基因 (2)2．载体 (2)3．DNA 重组体 (2)4．基因导入系统构建包括病毒载体与非病毒载体基因导入系统。
(3)(二)细胞库及工程菌库的建立和检定 (3)1.细胞库 (3)2．工程菌库 (3)(三)基因治疗制品制备和生产工艺 (4)1.普通要求 (4)2．以重组病毒作为基因治疗制品者，要求必须建立种子病毒库和工作病毒库。
(4)3．非病毒型重组质粒 DNA 复(混)合物作为最终制品者，要求需详述。
(4)4．以基因工程化的细胞为最终制品者，包括 exvivo 及其它形式的基因治疗。
(4)(四)制品的质量控制 (5)1. 重组病毒作为基因治疗制品的质量控制 (5)2．非病毒型重组 DNA 基因治疗制品 (7)(五)基因治疗的有效性试验 (7)1. 体外试验 (7)2．体内试验 (8)(六)基因治疗的安全试验 (8)2．份子遗传学的评估 (8)3．毒性反应的评估 (8)4．免疫学的评估 (9)5．致癌试验：见本指导原则相关部份。
(9)(七)基因治疗临床试验方案 (9)(八)伦理学考虑 (10)基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的医学治疗。
目前仅限于体细胞。
基因治疗的技术和方式日益多样性。
按基因导入的形式，分为体外基因导入(exvivo)及体内基因导入(invivo)两种形式。
前者是在体外将基因导入人细胞，然后将该细胞注入人体。
其制品形式是外源基因转化的细胞，适合在具有专门技术人材和 GMP 条件的医疗单位进行。
后者则是将基因通过适当的导入系统直接导入人体，包括病毒的与非病毒的方法。
其制品形式是基因工程技术改造的病毒或者是重组 DNA、或者是 DNA 复(混)合物。
基因治疗制剂种类较多，因此，本指导原则不可能用一个模式来概括，只能提出一个共同的原则，具体的方案应根据这些原则，确定研究技术路线。
其基本原则：一是必须确保安全与有效，要充分估计可能遇到的风险，并提出相应的质控要求；二是要促进基因治疗的研究，并加强创新。
生物药物分析与检验基因工程药物检验
2、有限代次的生产
提供培养生产浓度与产量恒定性的数据； 依据宿主细胞-载体系统稳定性，确定最高 允许传种代数和细胞倍增数，并应提供最适 培养条件的详细资料。
3、连续培养生产
应提供经长期培养后所表达基因的分子 完整性资料，以及宿主细胞的表型和基因 型特征。
4、纯化
对于收获、分离和纯化的方法应详细记 述，应特别注意污染病毒、核酸以及有害抗 原性物质的去除。
基因工程产物的杂质包括蛋白质和非蛋 白质两类。
蛋白类杂质： 残留宿主细胞蛋白 采用 免疫分析的方法
非蛋白质类杂质：
①病毒污染检查 ②无菌试验 ③热原质试验 ④残余细胞DNA测定。 ⑤抗原性物质检查 ⑥其他外源性物质
常用检测方法：
杂质和污染物
内毒素 宿主细胞蛋白 其它蛋白杂质 残余DNA 蛋白变异
3.表达
应详细叙述在生产过程中，启动和控制克 隆基因在宿主细胞中的表达所采用的方法及 表达水平。
(二)生产的控制
在工程菌的贮存中，要求种子克隆纯而稳定；
在培养过程中，要求工程菌所含的质粒稳定， 始终无突变；
在重复生产发酵中，工程菌表达稳定；
始终能排除外源微生物污染。
1、原始细胞库
应详细记述种子材料的来源、方式、保存 及预计使用寿命；应提供在保存和复苏条件 下宿主载体表达系统的稳定性证据；采用新 的种子批时，应重新作全面检定。
4.稳定性考察
药品的稳定性是评价药品有效性和安 全性的重要指标之一，也是确定药品贮 藏条件和使用期限的主要依据。
5、 产品一致性的保证
只有对从原料、生产到产品的每一步 骤都进行严格的控制和质量检定，才能 确保各批最终产品都是安全有效、含量 和杂质限度一致并符合标准。
第三节 基因工程药物的检验
基因工程药物制造方案
基因工程药物制造方案引言基因工程技术是一种革命性的生物技术，已经在医药领域取得了巨大的成功。
基因工程药物是通过改变生物体内的基因来生产具有特定功能的蛋白质药物。
相比传统的化学合成药物，基因工程药物拥有更高的效力和更低的副作用，因此备受关注。
本文将介绍基因工程药物的制造方案，包括药物的设计、基因的克隆、表达和纯化、药物的质量控制等方面。
一、药物设计药物设计是基因工程药物制造的第一步。
在药物设计阶段，需要确定目标蛋白质的结构和功能，并选择合适的基因工程技术来生产目标蛋白质。
在药物设计阶段，需要考虑以下几个方面：1. 目标蛋白质的功能和结构：确定目标蛋白质的功能和结构是药物设计的关键。
需要了解目标蛋白质在生物体内的作用和对疾病的影响，以及其结构特征，以便选择合适的基因工程技术。
2. 基因选择：选择合适的基因作为目标蛋白质的表达基因。
通常选择来源于人或其他生物的基因，并通过改造使其在表达宿主中表达出目标蛋白质。
3. 蛋白质的功能改造：有时，原始的蛋白质结构和功能不符合药物的要求，需要通过改造蛋白质的氨基酸序列来优化其功能。
二、基因的克隆基因的克隆是基因工程药物制造的关键步骤。
通过基因克隆技术，可以将目标基因插入到适当的表达宿主中，从而实现目标蛋白质的高效表达。
基因克隆的步骤通常包括以下几个方面：1. 基因的克隆：通过PCR、酶切、连接等技术，可以将目标基因从源DNA中扩增，并插入到适当的表达载体中。
2. 表达载体的构建：表达载体是用来在表达宿主中表达目标蛋白质的工具。
通过将目标基因插入到表达载体中，可以实现基因的高效表达。
3. 载体转化：通过转化技术，将构建好的表达载体导入表达宿主中，从而实现目标基因的表达。
三、表达和纯化在目标基因插入表达宿主后，需要对目标蛋白质进行表达和纯化。
表达和纯化是基因工程药物制造的关键步骤，影响药物的质量和效力。
表达和纯化的步骤通常包括以下几个方面：1. 表达和识别：通过识别标签、抗体标记等技术，可以检测目标蛋白质在表达宿主中的表达情况，并进行识别和分离。
生物技术制药模拟题答案最终版
一、名词解释生物技术药物:生物技术药物是指采用DNA重组技术或其他创新生物技术生产的治疗药物。
透析培养:透析培养是对微生物培养用透析膜包裹，并使外部有新鲜培养液流动着的一种培养方法。
单克隆抗体:单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
次级代谢产物:次级代谢产物是指微生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该生物无明显生理功能，或并非是微生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素、毒素、激素、色素等。
固定化酶:用物理或化学方法处理水溶性的酶使之变成不溶于水或固定于固相载体的但仍具有酶活性的酶衍生物。
生物药物:生物药物是指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。
生物药物，包括生物技术药物和原生物制药。
血液成分制品:系指单用物理方法自全血中分离制备的成分，包括红细胞、白细胞、血小板和血浆。
组织工程:应用生命科学和工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物正常及病理两种状态下组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护和促进人体各种组织或器官损伤后功能和形态生物替代物的学科。
抗体酶:20世纪80年代以来出现的一种具有催化活性的蛋白质，是利用生物学和化学的成果在分子水平上交叉渗透研究的产物；其本质上是免疫球蛋白，只是在其易变区被赋予了酶的属性，因此抗体酶又称为催化抗体。
二、选择题1. 世界上采用基因工程生产的第一个传染性疫苗是（ A ）A 乙肝疫苗B 霍乱疫苗C 甲肝疫苗D 艾滋病疫苗2. 单克隆抗体杂交瘤细胞与抗体性状鉴定的主要方法是（ A ）A 染色体分析 B凝胶电泳 C 免疫荧光技术 D 层析3．下列不属于影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素是：（ D ）A 外源基因的拷贝数B 外源基因的表达效率C 表达产物的稳定性D 宿主细胞的容量4. cDNA法获得目的基因的优点是（ B ）A 成功率高B 不含内含子C 操作简便D 表达产物可以分泌5. 菌体生长所需能量（ A ）菌体有氧代谢所能提供的能量时，菌体往往会产生代谢副产物乙酸。
基因治疗技术的操作标准与质量控制要点
基因治疗技术的操作标准与质量控制要点基因治疗是一种应用基因工程技术的新型治疗方法，旨在通过修复、替换或调节人体细胞或组织中的异常基因，从根源上治疗遗传性疾病和其他一些疾病。
在进行基因治疗时，确保操作标准的准确性和质量控制的有效性至关重要。
以下是基因治疗技术的操作标准和质量控制的关键要点。
一、操作标准1. 临床试验设计：在进行基因治疗时，需要严格按照临床试验设计进行，包括研究目的、研究对象、治疗方案以及预期的疗效和安全性评估等方面的设计。
2. 基因载体的选择：选择合适的基因载体对于基因治疗的成功至关重要。
常用的基因载体包括病毒载体和非病毒载体，需要根据具体的临床试验需求进行选择。
3. 基因载体构建：构建基因载体时，需要确保基因的准确插入和拷贝数，并进行有效的筛选和扩增，以确保治疗基因的表达和稳定性。
4. 细胞治疗前处理：在进行基因治疗前，需要对患者的细胞进行处理，包括收集、分离和培养等步骤。
这些步骤需要在符合标准的实验室条件下进行，并且需要确保细胞的纯度和活力。
5. 基因转染：基因转染是基因治疗技术的核心步骤，确保基因的有效转染对于治疗的成功至关重要。
在进行基因转染时，需要选择合适的转染方法，并进行有效的转染监测和评估。
6. 细胞治疗后处理：在进行基因治疗后，需要对细胞进行后续处理，包括检测基因的表达、细胞的活力和纯度等，以确保治疗效果的评估和监测。
二、质量控制要点1. 设立标准操作流程（SOP）：制定清晰的SOP，以确保操作的一致性和可追溯性，包括每个操作步骤的具体要求、操作者的培训和评估等。
2. 实验室设备和环境控制：确保实验室设备的正常运行和维护，包括安全性评估、温度和湿度控制等。
此外，还需要对实验室环境进行严格的控制，确保无菌操作和避免交叉污染。
3. 基因治疗产品的质量控制：建立有效的质量控制体系，对基因治疗产品进行全面的质量评估，包括基因的准确性、纯度和活力等方面的检测。
4. 质量管理体系：建立质量管理体系，包括质量控制、质量评估、质量改进和质量培训等方面的制度。
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用杂交翻译法挑选 含干扰素cDNA克隆
将干扰素cDNA克隆入表达载体 在大肠杆菌 中进行高效表达
二、基因工程干扰素的制备
启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提
精提 半成品制备 半成品检定 分装
冻干
成品检定 成品包装
α2b干扰素生产过程
1.发酵
工程菌：SW-IFNα-2b/E.coli DH5α， 质粒用启动子，含氨苄青霉素抗性基 因。培养基含1%蛋白冻0.5%酵母提取 物0.5%NACl。摇床培养30 C，10ho，发 酵种子。15L发酵罐培养， 30 C，8h。 o然后42 C，3h。o 离心去上清。
对生产种子，应详细叙述细 胞生长与产品生成的方法和材料， 并控制微生物污染；提供培养生 产浓度与产量恒定性数据，依据 宿主细胞-载体系统稳定性，确定 最高允许传种代数；
在培养过程中，应测定被表 达基因分子的完整性及宿主细 胞长期培养后的基因型特征； 依宿主细胞-载体稳定性与产品 恒定性，规定持续培养时间， 并定期评价细胞系统和产品。
⒉ 纯度分析
⑴蛋白质含量测定 SDS-PAGE、等电聚焦、各种HPLC、 毛 细管电泳
⑵杂质 ①蛋白类杂质 残留宿主细胞蛋白 采 用免疫分析的方法 ②非蛋白类杂质
②非蛋白类杂质 非蛋白类杂质主要有: 病毒、细菌等微生物、热原、 内毒素、致敏源及DNA。
常用检测方法：
杂质和污染物
内毒素 宿主细胞蛋白 其它蛋白杂质 残余DNA 蛋白变异 甲酰蛋氨酸 蛋氨酸氧化 产物变性或聚和脱氨基
2.产品的提取与纯化 湿菌超声破碎，离心，上清超滤浓 缩， Sephadex G50 分离。 经SDS-PAGE检查。 在经DE-52柱纯化。
三、质量控制标和要求
⒈半成品检定 ⑴干扰素效价测定 ⑵蛋白质含量测定 ⑶比活性 ⑷纯度测定 ⑸相对分子量测定
⑹残余外源性DNA含量测定 ⑺残余血清igG含量测定 ⑻残余抗生素活性测定 ⑼紫外光谱扫描 ⑽肽图测定 ⑾等电点测定
在培养过程中，要求工程菌所 含的质粒稳定，始终无突变；
在重复生产发酵中，工程菌表 达稳定；
始终能排除外源微生物污染。
生产基因工程产品应有种子 批系统，并证明种子批不含有致 癌因子，无细菌、病毒、真菌和 支原体等污染，并由原始种子批 建立生产用工作细胞库。
原始种子批须确证克隆基因 DNA序列，详细叙述种子批来源、 方式、保存及预计使用期，保存 与复苏时宿主载体表达系统的稳 定性。
⒌产品一致性的保证
五、产品的保存 ⒈液态保存 ⑴低温保存 ⑵在稳定的下保存 ⑶高浓度保存 ⑷加保护剂保存 ⒉固态保存
第十节 基因工程药物制造实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细胞分泌的一种 活性蛋白质，具有广泛的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性， 是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性 的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰素在分 为α1b α2a α2b等亚型。
检测方法
鲎试剂、家兔热原法 免疫分析、SDS-PAGE、CE 免疫分析、SDS-PAGE、 HPLC、CE DNA杂交、紫外光谱、蛋白结合 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 IEF、 CE 肽谱、HPLC、 质谱、氨基酸分析 SDS-PAGE、IEF、HPLC、 CE、质谱、 凝胶过滤
免疫学方法: 放射免疫(RIA)、酶联 免疫(ELISA)
受体结合试验
高效液相色谱(HPLC)、肽图分析法、 末端序列分 析、圆二色谱、核磁 共振
⑴ 肽图分析 肽图分析是用酶法或化学法降解
目的蛋白质,对生成的肽段进行分离分 析。它是检测蛋白质一级结构最有效 的方法，该技术灵敏高效是对基因工 程药物的分子结构和遗传稳定性进行 评价和验证的首选方法。常用HPLC、 毛细管电泳。
⑿除菌半成品干扰素效价测定、无菌试 验、热原试验。
⒉成品检定
⑴物理性状 ⑵鉴别试验 ⑶水分测定 ⑷无菌试验 ⑸热原试验 ⑹干扰素效价测定 ⑺安全试验
⑵ 氨基酸成分分析 50个氨基酸较理想
⑶ 部分氨基酸序列分析 N端15个氨基酸可作为重 组蛋白质和多肽的重要鉴 定指标。
⑷ 重组蛋白质浓度测定和相对分 子量的测定
蛋白质浓度测定方法有:福林-酚 法、双缩脲法
蛋白相对分子量的测定:凝胶过滤 法、SD-SPAGE法
⑸ 蛋白质二硫键分析 测定方法有: 对氯汞苯甲酸法等 5，5’-二硫基双-2-硝基苯甲酸法
培养周期结束时，应监测 宿主细胞-载体系统的特性， 如质粒拷贝数、宿主细胞中表 达载体存留程度，含插入基因 载体的酶切图谱等。
三、纯化工艺过程的质量控制
产品要有足够的生理和生 物学试验数据，确证提纯物分 子批间保持一致性；外源蛋白 质、DNA与热源质控制在规定 限度以下。
在精制过程中能清除宿主 细胞蛋白质、核酸、糖类、病 毒、培养基成分及精制工序本 身引入的化学物质，并有检测 方法。
一、基因工程菌的组建
诱生的白细胞
提取全RNA
通过寡dT-纤维素柱 获得寡A的mRNA
逆转录成cDNA
双链cDNA接上dT或dG尾
蔗糖密度梯度 离心提取12s
的 mRNA
pBR322质粒
pBR322质粒加上dA或dC
第十节 基因工程药物制造 实例
干扰素（interferon，IFN）是人体细 胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛 的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性，是 人体防御系统的重要组成部分。根据 分子结构和抗原性的差异分为α、β、 γ、ω等4个类型。α型干扰素在分为 α1b α2a α2b等亚型。
一、 原材料的质量控制
原材料的质量控制是确保编码 药品的DNA序列的正确性，重组微 生物来自单一克隆，所用质粒纯而 稳定，以保证产品质量的安全性和 一致性。
根据质量控制要求应了解以下 特性： ⒈明确目的基因的来源、克隆经过， 并以限制性内切酶酶切图谱 和核苷酸序列予以确证；
⒉应提供表达载体的名称、结构、遗 传特性及各组成部分（如复制子、 启动子）的来源与功能，构建中所 用位点的酶切图谱，抗生素抗性标 记物；
四、目标产品的质量控制
基因工程药物的质量控制主要 包括以下几项要求:产品的鉴别、纯 度、活性、安全性、稳定性和一致 性。它需要利用生物化学、免疫学、 微生物学、细胞生物学和分子生物 学等多学科的理论与技术所建立的 鉴定方法。
⒈产品的鉴别
常用的鉴定方法:
电泳方法: SDS-PAGE、等电聚焦、 免疫电泳
杂质和污染物
单克隆抗体 氨基酸取代 微生物 支原体 病毒
检测方法
SDS-PAGE、免疫分析 氨基酸分析、肽谱、质 谱、CE 微生物学检查 微生物学检查 微生物学检查
⒊生物学活性测定 需通过动物体内试验和通过细胞培养 进行体外效价测定。
⒋稳定性考查 是药品有效性安全性的重要指标，是药 品贮藏条件和使用期限的主要依据。
⒊ 应提供宿主细胞的名称、来源、 传代历史、检定结果及其生物学特 性；
⒋须阐明载体引入宿主细胞的方法 及载体在宿主细胞与载体结合后的 遗传稳定性；
⒌提供插入基因与表达载体两侧端 控制区内的核苷酸序列，详细叙述 在生产过程中启动与控制基因在宿 主细胞中表达的方法及水平等。
二、培养过程的质量控制
在工程菌的贮存中，要求种子 克隆纯而稳定；
一、基因工程菌的组建
诱生的白细胞
提取全RNA
通过寡dT-纤维素柱 获得寡A的mRNA
逆转录成cDNA
双链cDNA接上dT或dG尾
pBR322质粒
pBR322质粒加上dA或dC
蔗糖密度梯度 离心提取12s 的 mRNA
退火获的杂交质粒
转化大肠杆菌
扩增杂交质粒
筛选抗青霉素但对氨苄 青霉素敏感细菌克隆
第九节 基因工程药物的 质量控制
是利用活细胞作为表达系统，产 物的分子量较大，并有复杂的结 构，还参与生理功能的调节，用 量极微，任何质和量的偏差都可 贻误病情造成严重危害。
宿主细胞中表达的外源基因， 在转录翻译精制工艺放大过程 中都可能发生变化，故从原料 以及制备全过程都必须严格控 制条件和鉴定质量。