现代分子生物学实验

分子生物学实验

一、课程纲要说明

分子生物学实验是生物科学的一门主干实验课程。分子生物学技术作为现代生物技术中最为先进的实验手段之一，现在已经渗透到生命科学、医学及工农业生产等各个领域中，是一种非常重要的现代技术手段。通过此实验教学使学生了解分子生物学技术发展的现状、未来及应用，使学生掌握分子生物学技术的基本原理及相关的实验操作技术，从而使学生更进一步加深理解和巩固所学的分子生物学课程的理论知识。

二、实验对象：生物科学专业本科学生

三、实验学时数：18学时

四、实验项目及内容：

实验一质粒DNA的提取及酶切

一、实验目的

通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒和酶切的方法。

二、实验内容

1、碱裂解法提取质粒DNA；

2、酶切DNA。

三、实验仪器及用品

1、仪器：恒温培养箱、恒温摇床、台式高速离心机、高压灭菌锅、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架、加样枪、移液器架子、超声波清洗仪、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器

2、用（药）品：葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、NaOH、SDS、乙酸、钾、冰乙酸、氯仿、乙醇、胰RNA酶、氨卡青霉素、蔗糖、溴酚蓝、

8-羟基喹啉、β疏基乙醇、盐酸、含pUC19质粒、EcoRI吸头、小指管

四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：设计

实验要求：选修

实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA

一、实验目的：

通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。

二、实验内容：

1．制备琼脂糖凝胶

2．加样

3．电泳

4．染色

5．观察电泳结果、拍照

三、实验仪器及用品

1．仪器：恒温培养箱、琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、高压灭菌锅、紫外线透射仪、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架

2．用（药）品：蔗糖、三羟甲基、氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、硼酸DNA marker、溴酚蓝、溴化乙、含pUC19质粒、吸头

四、实验人数：每班分2次，每次分6---8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：设计

实验要求：选修

实验三大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

一、实验目的：

通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。

二、实验内容：

1．培养大肠杆菌

2．制备大肠杆菌感受态细胞

三、实验仪器及用品

1．仪器：超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、-70冰箱（超低温冰箱）、恒温水浴锅、50ml 离心管和离心机、吸头、试管、培养皿、锥形瓶、试管架、吸量管、量筒、滴管、吸耳球

胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、氨卡青霉素、大肠杆2.用（药）品：CaCI

2、

菌DH5a、Puc19质粒

四、实验人数：每班分2次，每次分6—8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：设计

实验要求：必修

实验四哺乳动物基因组DNA的提取

一、实验目的：

通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。

二、实验内容：

1．制备哺乳动物肝脏匀浆

2．提取DNA

三、实验仪器及用品

1．仪器：台式高速离心机、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、加样枪、移液器架子、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器、液氮罐

2．用（药）品：鼠肝脏、Tris、SDS、EDTA、蛋白脉K、RNA酶、DNA相对分子质量标准物、λDNA/EcoRI+Hi ndⅢ相对分子质量标准物、HCI、NaCI、NaAc、平衡酚、氯仿、异戊醇、硼酸、溴酚蓝、蔗糖

四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：验证

实验要求：必修

实验五植物总RNA的提取

一、实验目的：

通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法。

二、实验内容：

1．总RNA的提取

2．甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析总RNA

三、实验仪器及用品

1．仪器：低温离心机、台式离心机、200℃以上烘箱、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、高压灭菌锅、液氮罐、50ml 离心管、研钵、剪刀、橡胶手套2．用（药）品：DEPC、异硫氰酸胍、乙酸钠、LiCI、酚、氯仿、乙醇、甲醛、吗啉代丙烷磺EDTA、琼脂糖

四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：验证

实验要求：必修

实验六植物基因组DNA的提取

一、实验目的：

通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。

二、实验内容：

从植物组织中提取DNA

三、实验仪器及用品

1．仪器：高速离心机和离心管（50ml）、台式离心机、吸头、研钵、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、移液器、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌

器

、液氮罐

2．用（药）品：Tris、EDTA、NaCI、异丙醇、琼脂糖、SDS、HCI、KCI、β巯基乙醇、TE

四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时

六、实验类型：设计

实验要求：选修

实验七 PCR基因扩增

一、实验目的：

通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。

二、实验内容：

1．配制反应体系

2．PCR扩增

3．琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果

三、实验仪器及用品

1．仪器：PCR热循环仪、琼脂糖凝胶电泳系统、吸头、指管、移液器、超净工作台、紫外透射仪、凝胶成像系统

2．用（药）品：DNA摸板、dNTP、引物1引物2、Taq酶、琼脂糖、DNA相对分子质量标准物、MgCI

明胶、石蜡油、KCI

2、

四、实验人数：每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。

五、实验学时：3学时