小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测
四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究
收稿日期:2001 01 20基金项目:国家自然科学基金资助项目No.39770887药理四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究马增春,高 月,刘永学,谭洪玲,路晓钦,张 立(军事医学科学院放射医学研究所,北京 100850)摘要:探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。
腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34+细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。
结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。
四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。
关键词:四物汤;血虚证;环磷酰胺;造血;CD34+中图分类号:R285 5 文献标识码:B 文章编号:1005 9903(2001) 05 0013 03Effects of Siwu Tang on Medullary Hematopoiesis in Mice of BloodDeficiency Induced by C yclophosphamideMA Zeng chun ,G AO Yue ,LIU Yong xue ,TAN Hong ling ,LU Xiao qin ,Z HANG Li(Instutute o f Radiation Medicine ,Beijing 100850,China )Abstract :To study the effects of Siwu Tang on the mice of blood deficienc y induced by cyclophosphamide,we e m ployed the methods of circulating blood cells detec tion by microcellc ounter,flo w c ytometric enumeration of CD34+himato poietic stem and progenitor cells by double fluorescent labeling.The results showed Siwu Tang promoted the recovery of stem and progenitor cells and circulating WBC on the blood deficient mice,and enhanced immune function.proliferative effect of Siwu Tang on bone marrow may play a key role in improvement of hematopoiesis with Siwu Tang treating blood deficient mice.Key words :Si w u Tang;blood deficiency;c yclophospha mide;hematopoiesis;CD34+血虚证是中医临床常见的证候群之一,制作血虚证动物模型的常用方法有射线照射、药物诱发和放血等。
小鼠血虚证造模方法的比较及四物汤的反证
小鼠血虚证造模方法的比较及四物汤的反证分子生物实验研究部分2002207122 岑川第四组摘要：目的：观察和比较乙酰苯肼和环磷酰胺两种不同造小鼠血虚模型方法的差异性和检查同一基因在不同动物模型中的表达差异以及四物汤治疗的效果。
实验方法：通过正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组、四物汤组这四组组织切片的观察比较来评价血虚造模方法，及通过RT-PCR法来检测肝组织同一基因的表达差异。
结果：环磷酰胺和乙酰苯肼均有造血虚的作用，四物汤促进血虚证小鼠肝组织基因的表达可能是其生血作用的机制之一。
关键词：血虚环磷酰胺乙酰苯肼四物汤RT-PCR法基因表达近年来,随着对血虚证研究的不断深入,对血虚证动物模型的研究也有新的进展。
尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质,但作为替代实验对象,已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用。
乙酰苯肼和环磷酰胺造模都是血虚造模常用的发法，但由于机制不同，所以有各自不同的特点。
一实验器材和实验方法75%乙醇、氯仿、异丙醇、Trizol、RNAsin(40Ｕ/u)、DNTP（10mＭ）、EB（2mg/ml）、5*TBE、琼脂糖、上下游引物、随机引物（100ug／ul）、20，200，1000u移液枪、电动匀浆机及匀浆管、冷冻式离心机、离心管、电泳仪、PCR仪、剪、镊等正常小鼠组、环磷酰胺造模小鼠组、乙酰苯肼造模小鼠组、四物汤治疗小鼠组各十只煎药：四物汤（生地. 白芍. 当归. 川芎各3g) ,共煎成药汁130ml灌胃给药：治疗组小鼠每天给药四物汤一次，共七天。
前两天每次每只小鼠给药1ml，后五天每次每只小鼠给药0.5ml，其余３组小鼠后四天每只加灌0.5ml生理盐水。
RNA 提取1.取各组实验组任一只小鼠肝组织50-100mg,剪碎，加入1mlTorizol液，快速电动匀浆2.22度，静置5min3.加入氯仿0.2ml,颠倒15s4.22度，静置3min5.离心：4度，15000转/分* 15min6.取上清液0.5ml( 含提取的RNA）7.加入适量异丙醇，混匀8.22度，静置10min9.离心：4度，15000转/分* 10min10.弃上清液11.加入1ml4度75%乙醇（提纯RNA，释放异丙醇）12．离心：４度，10000转／分*５min13．弃上清液，真空干燥５min14．用25ul水溶解，－７０度保存反转录５＊ｂｕｆｆｅｒ ４μlＤＮＴＰ（１０ｍＭ） ２μl随机引物（１００ｕｇ／μl） １μlＤＴＴ（１００ｍＭ） １μlＲＮＡｓｉｎ（４０Ｕ／μl） １μl总ＲＮＡ（２ｕｇ）水 至１８μl６５度，５分钟，冰上，加ＲＮＡｓｉｎ１μl，Ｍ－ＭＬＶ１μl。
血虚证两种造模方法的比较和中药疗效评价
血虚证两种造模方法的比较及中药疗效评价卢文丽方肇勤2007-01-17一、实验目的1. 比较血虚证两种不同造模方法的优劣。
2. 评价中药复方的疗效。
二、实验材料1．实验动物：昆明种小鼠，雄性，40只。
2．药物或试剂乙酰苯肼（APH，为白色粉末状固体，用时配制成2％溶液）、环磷酰胺粉针剂：200mg×10支×1盒（用时配成10mg/ml溶液）、无水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化钠溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。
3．仪器或设备电子天平1台，100ml柱形小烧杯2个，50ml/100ml量筒各1个，10ml刻度吸管2个，洗耳球1个，玻璃棒2根，60ml小口试剂瓶2个，标签纸1张，酒精棉球，1ml一次性注射器数支，小鼠灌胃针2支。
以上为动物造模及药物配制用材料，余具体见各实验指导。
三、实验步骤1．动物分组随机分为正常组A、环磷酰胺模型组B、乙酰苯肼模型组C、乙酰苯肼治疗组D等4组，每组10只。
分笼饲养于内铺垫料的塑料笼内，每笼等量。
2．2％乙酰苯肼溶液的配制（1）电子天平取乙酰苯肼粉末1g，并将其小心倒入100ml小烧杯内；（2）玻璃滴定管吸取10ml无水乙醇，注入烧杯内，玻璃棒搅拌；（3）待粉末几乎溶解完全后，50ml量筒量取30ml生理盐水倒入烧杯内，搅拌。
若仍有粉末未溶解，置于37℃水浴箱内一段时间即可。
（4）将完全溶解后的溶液倒入50ml量筒内，添加生理盐水定容至50ml。
将溶液倒入50ml小口试剂瓶内，贴好标签，常温下保存。
3．药物及剂量采用四物汤治疗：当归10g，川芎10g，白芍10g，熟地黄10g。
给药剂量按照成人体重（60kg）的10倍计算。
药物煎煮浓度为0.4g/ml，约灌胃0.5ml/只。
4. 造模及给药方法组别造模灌胃给药A 腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水，第1、2日各1次。
皮下注射同B组造模药物等量的生理盐水，第1、4日各1次。
当归补血汤与四物汤对血虚模型小鼠补血作用比较研究
·论著·作者单位：浙江衢化医院药剂科（衢州324004）通信作者：金情政，E-mail ：jinqingzheng111@摘要目的观察当归补血汤与四物汤对血虚模型小鼠补血作用以及两个方剂的差异性。
方法ICR 小鼠40只，随机分成正常组、模型组、当归补血汤组和四物汤组，每组10只，除正常组外，另三组复制失血性血虚小鼠模型，当归补血汤组和四物汤组同时分别灌胃当归补血汤和四物汤，连续给药7天，观察小鼠体征特点，测定各组小鼠给药前及造模给药后血红细胞（RBC ）、血红蛋白（HGB ）、红细胞压积（HCT ）、血小板计数（PLT ）和白细胞（WBC ）的值以及第7天出血凝血时间变化。
结果给药7天，当归补血汤组小鼠食欲、行为和毛色等体征特点改善直至完全恢复，四物汤组小鼠体征特点改善不明显。
与正常组比较，模型组小鼠各指标均降低[RBC ：（6.65±0.87）×1012/L 比（9.90±0.95）×1012/L （P <0.01），HGB ：（108.6±11.69）g/L 比（134.4±13.55）g/L （P <0.01），HCT ：（44.37±4.72）%比（52.01±4.98）%（P <0.01），PLT ：（983±7.81）×109/L 比（1218±10.27）×109/L （P <0.01），WBC ：（6.20±0.22）×109/L 比（7.80±0.05）×109/L （P <0.01）]；与模型组比较，当归补血汤组与四物汤组小鼠各指标均升高[当归补血汤组：RBC （9.31±0.89）×1012/L ，HGB ：（136.1±11.88）g/L ，HCT （53.10±5.24）%，PLT （1005±10.43）×109/L ，WBC （8.26±0.31）×109/L ，P <0.05，P <0.01；四物汤组：RBC[（9.68±0.99）×1012/L ，HGB （132.4±14.62）g/L ，HCT （53.18±5.89）%，PLT[（1097±6.97）×109/L ，WBC （7.63±0.05）×109/L ，P <0.05，P <0.01]。
血虚证造模方法比较及四物汤反证研究概况(综述)
血虚证造模方法比较及四物汤反证研究概况(综述) 上海中医药大学 02医（七）李佳莹 2002207205【摘要】综述近年内关于使用环磷酰胺和乙酰苯肼造血虚证动物模型研究中的不同方法以及效应，包括四物汤反证法在这方面的应用和结果。
中医与西医对于不同病症的评判方法和研究手段存在一定的差异，造模手法纷繁，给实验的复制带来麻烦，药物用量和持续时间见仁见智，未有统一标准。
如何在现有的实验研究条件和下将二者的思路与方法尽可能调和，以求得在同一平台同步发展，一直是研究人员关心的问题。
【关键词】血虚证动物模型环磷酰胺乙酰苯肼四物汤【引言】中医认为血虚证是指血液亏虚、脏腑百脉失养，所表现的全身虚弱性的证候。
形成血虚证的原因很多，有先天禀赋不足，或后天失养，脾胃虚弱，生化乏源；或各种急性出血；或久病不愈，伤气耗血；或思虑过度，暗耗阴血；或瘀血阻络，新血不生；或肠道寄生虫等等。
主要临床表现有面色无华或萎黄，唇色淡白，爪甲苍白，头晕目眩，心悸失眠，手足发麻，妇女月经量少色淡，经期错后或闭经，舌淡苔白，脉细无力。
近年来,随着对血虚证研究的不断深入,对血虚证动物模型的研究也有新的进展.尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质,但作为替代实验对象,已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用.中医"证"的动物模型常要符合两个标准：①模型是否出现该"证"的临床症状和基本生理病理变化;②模型所反映的基本生理病理变化应能被相对应的代表性方药所逆转。
用实验方法研究血虚证首先要解决一个大前提，即现代医学的贫血模型是否可以应用于血虚证的研究。
正如郝淑然[17]等人提出的：“我们在血虚证的科研过程中,即便我们制作出“血虚”动物模型,能否确保它符合中医血虚证的各项参数,符合中医血虚证的标准。
如果它不符合真正血虚证的标准,那么我们的实验研究又具有什么意义呢?”所以，在我们的实验开始之前，关于这点的评判是非常重要的。
四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血损伤恢复作用的实验研究
siwu drugs of formula
granulaon group 阳性对照组 Positive control
82.3±9.5△
54.7±3.7△
84.2±10.3△
▲P <0.05, vs normal control；△P <0.05, vs model group；* P <0.05 vs siwu drugs group
Department of Histology and Embryology, Cheng Du University of TCM, chengdu, china（610075）
Department of Histology and Embryology, Bei Jing University of TCM, Bei Jing, china (100029） Abstract
我们对各组小鼠 8d 后的外周血和骨髓有核细胞数进行了检测，结果发现，造模后 WBC、 RBC 和 Hb 以及骨髓有核细胞均明显降低，证明骨髓抑制模型是成功的，同时发现四物汤配 方颗粒对外周血各项的恢复有明显的促进作用，进一步表明四物汤配方颗粒有促进骨髓抑制 贫血小鼠骨髓造血功能恢复的作用。证明四物汤配方颗粒经过提取等科学技术方法和严格的 质量控制，在补血方面效果稳定。
CFU-GM
BFU-E
CFU-E
CFU-Meg
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ正常组
86.2±2.6
58.2±6.1
81.2±6.3
Normal control 模型组
21.7±5.3▲
15.6±1.5▲
25.9±6.6▲
Model group 四 物 汤 配 方 颗 粒 组 70.5±6.3△
血虚动物造模方法及四物汤的补血作用研究
血虚动物造模方法及四物汤的补血作用研究胡怡芳[摘要]：对近二十年来的血虚动物模型制作方法进行概述，主要集中在60Coγ射线造模法，化学药物造模，放血法，免疫介导法及复合造模法，各种方法均有优缺点，很难找出一种最有效的方法，只能根据研究的需要选择最合适的方法，应不断改进和研究，以找到最接近临床的造模方法。
四物汤是临床最常用的补血方，具补血调血功能，近年来，国内外很多学者应用现代科学方法对去进行了多方面的研究。
[关键词]：血虚证，造模法，动物模型，四物汤[引言]：随着科学技术的日益发展，实验动物学已经成为现代科学的重要组成部分，每一项重大科研成果的取得都与实验动物的应用密不可分。
同时中医药的研究也在不断发展，用现代科学方法研究中医基础理论的方法越来越受到重视，除了从临床对人体的直接研究，实验动物的应用也越来越广泛，中医证候模型建立的研究也越来越趋于成熟，现就中医血虚动物造模方法及四物汤的补血效果概述如下：[正文]：一.血虚动物造模方法：1．60Coγ射线造模法通过60Coγ射线照射动物全身，使动物造血干细胞减少，白细胞数量下降和骨髓损伤。
多选用C57BL/6J和昆明种小鼠，多为雌性，体重多在18~22g，多为全身一次性照射，距离为4m，剂量为3.5Gy，剂量率在1.27~1.701之间，时间160s左右。
[1-5] 刘永学等[6]对经不同剂量（2.5、5.5、7.5Gy）γ射线照射后，小鼠出现不同程度的血虚症作了研究，照后各剂量组小鼠的骨髓和脾脏细胞均出现了典型的凋亡变化，细胞凋亡越明显，小鼠血虚症越严重，但造血细胞凋亡出现的时间与血虚症的程度无关，无论照射剂量大小，调亡都发生在血虚症出现的早期。
2.化学药物造模2．1乙酰苯肼（APH）：APH为强氧化剂，较专一的对红血球有缓慢的进行性氧化损伤作用，尤其是干扰了红血球内的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，促进血红蛋白变形而形成海氏小体，使红血球易于崩解，最终造成机体的溶血性贫血。
四物汤及其活性单体对血虚证小鼠的补血作用
zone by administration by gavage every rat for once every day to prepare the model for8weeks，and at the same time Liuwei Dihuang Wan was taken at dose of15g/kg，25g/kg and35g/kg by administration by gavage while model building．It was detected the levels of fasting blood glucose（FBG），fasting insulin and adiponectin in serum by ELISA，and the insulin sensitivity index（ISI）and insulin resistance（HO-MA-IR）index were calculated after eighth weeks．Results：Compared with model group，Liuweidihuamg Wan could loss the level of FBG （all P＜0．01），elevate the level of adiponectin（all P＜0．01），regulate elevated insulin to normal level（all P＜0．01）．And ISI and HO-MA-IR index were of significant difference（all P＜0．01）as compared with model group．Conclusion：It is demonstrated that Liuweidihuang Wan can regulate blood glucose，adiponectin，insulin to normal level，raise insulin sensitivity and drop HOMA-IR while these were at patho-logical state，which suggested that Liuweidihuang Wan can treated T2DM．Key words Liuweidihuang Wan（六味地黄丸）；type2diabetes mellitus；adiponectin；insulin；insulin resistance四物汤及其活性单体对血虚证小鼠的补血作用*郭平1，王升启2（1山东中医药大学，济南250355；2军事医学科学院，北京100850）摘要目的：研究四物汤及其活性单体芍药苷和川芎嗪对辐射致血虚证小鼠的补血作用。
血虚证小鼠造模及四物汤治疗实验
血虚证小鼠造模及四物汤治疗实验——中药制备及分子生物学指标检测程韵 2002207120 02中基摘要：本次实验是要比较乙酰苯肼和环磷酰胺制造的小鼠血虚证模型的效果，并且用四物汤治疗乙酰苯肼造模组，来证明四物汤疗效并反证乙酰苯肼造血虚效果。
本组实验以RT-PCR 方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变；并观察肝、胃、小肠组织切片的病理改变。
小鼠肝细胞白蛋白组电泳结果亮度显示：四物汤治疗组＞乙酰苯肼造模组＞环磷酰胺造模组＞正常对照组，葡萄糖醛酸酶组电泳结果亮度显示除正常组稍亮外其他各组均不明显。
四物汤对乙酰苯肼造模组小鼠的基因表达有部分影响。
组织切片观察除了肝组织在四物汤治疗组水肿有一定程度减轻，其它组织无明显变化。
关键词：血虚证模型乙酰苯肼环磷酰胺四物汤 RT-PCR引言：血虚证是中医的基础病证,主要表现为营血亏损。
而血虚证动物模型是阐明血虚证的本质和病理生理,以及中药治疗血虚证的机理的不可缺少的途径。
血虚证动物模型的造模方法有60 Co γ射线造模法、化学药物造模法、病因造模法和免疫介导造模法，其中化学药物造模法可选用乙酰苯肼或环磷酰胺来造模。
此次实验选取乙酰苯肼和环磷酰胺进行造模，并对乙酰苯肼造模组进行四物汤治疗，观察各组小鼠的病理，生理，生化和分子生物学指标，比较两种造模方法的效果。
本组在此次实验中的任务主要是中药制备及以RT-PCR方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变情况。
一．材料与方法：（一）动物及处理：实验选用昆明种雄性小鼠40只（平均体重约25g）。
随机分成四组：正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组和四物汤组。
每组10只，分笼饲养于内铺垫料的塑料笼，每组1笼。
每天自食足量普通颗粒饲料。
（二）中药制备及给药：生地、白芍、当归、川芎各20g（上海中医药大学综合实验室采购），冷水浸半小时，煎取药汁后按照所需药物浓度比例浓缩为670ml。
取100ml药物放置于动物房冷藏，每日灌胃给药。
四物汤及两味中药组方对_射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究
朱力军,路晓钦,谭洪玲,肖成荣,高月(军事医学科学院放射医学研究所,北京100850)摘要:[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。
[方法]采用60Co 射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型,测定外周血象、CD34+细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。
[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方;(2)两味药组方中,当归相关组对CFU -E,CFU -M ix,CFU -GM 的促进作用较好,且有升高白细胞的作用;而地黄相关组对CFU -E 有增殖作用;白芍相关组能明显促进NFS 60细胞的增殖;川芎相关组增加CD34抗原表达,并促进细胞由G 0/1期向S 期转化,其作用和所含的川芎嗪有关。
[结论]四物汤全方优于两味药组方,各组方的作用靶点和作用强度各有异同。
关键词:四物汤;血虚证;CD34+细胞;NFS 60细胞中图分类号:R285 5文献标识码:B文章编号:1672-1519(2003)04-0058-04四物汤及两味中药组方对 射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究血虚证是中医临床常见的证候,而四物汤临床上主要用于补血、活血、调经,是中药方剂中的经典名方,也是治疗血虚证的常用药。
本实验室已成功的通过 射线照射,制成了实验性血虚证小鼠模型,并对四物汤及其单药、3味药组方进行了系统的观测[1-3]。
本研究着重对全方及两味药组方对该血虚证小鼠的作用机制进行了深入探讨。
1实验材料1.1动物C57BL/6J 小鼠120只,6~8周龄,体质量(20 2)g ,雌性;由军事医学科学院实验动物中心提供,常规饲养。
1.2主要试剂与仪器FITC 标记的大鼠抗小鼠CD34抗体及对照抗体;流式细胞仪(美国FACS Cabiur); 剂量辐射检测控制仪(军事医学科学院QT -3型优质OCL);s y sm ex 820自动血球计数仪。
1.3药物制备四物汤按 太平惠民和剂局方 规定的剂量称取组成,熟地黄30g ,当归20g ,白芍20g ,川芎12g ,共计82g /d 。
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小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测黄玮摘要：目的：观察分别用乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠血清白蛋白(ALB)含量的变化，以及四物汤治疗乙酰苯肼造模小鼠血清白蛋白含量的改变，并间接评估血清白蛋白作为血虚证小鼠指标的特异性。
方法：溴甲酚绿法（BCG）。
结果：只有乙酰苯肼造模使小鼠血清白蛋白增高（P<0.05），环磷酰胺虽然使小鼠血清白蛋白含量降低但无显著差异，四物汤的治疗作用也不显著。
结论：血清白蛋白在乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠中的变化趋势不一致，因此单纯以血清白蛋白作为血虚小鼠衡量指标的不合理；四物汤为补血名方，但对乙酰苯肼造成小鼠血虚模型的治疗效果不明显。
关键词：血清白蛋白、血虚证造模、环磷酰胺、乙酰苯肼、小鼠1、引言：血虚证是祖国医学的常见证型之一，成因繁多，临床症状复杂，要深入地研究血虚证并加强其临床治疗效果，有懒于良好的血虚证动物模型的建立。
目前，血虚证动物模型（1、5）的建立方法很多，但存在缺乏统一的衡量指标（3、4），血虚的状态不稳定等缺点。
本实验是采用了目前较简便的两种血虚证造模方法：乙酰苯肼、环磷酰胺，进行小鼠造模，结合小鼠四诊（2）、血图片、骨髓图片、组织切片等，观察其造模后的血虚表现，以判断是否可纳入。
同时，用补血名方四物汤治疗模型组，反证。
以检验、比较两种血虚证造模方法是否成熟。
并且，测定各组小鼠血清白蛋白含量，观察是否有关联的特异性改变，以期找到比较合理、可靠的生化指标，为判断造模是否成功提供可定量的标准。
2、材料与方法：2.1试剂与药物：乙酰苯肼；环磷酰胺粉针剂；白蛋白试剂（溴甲酚绿、柠檬酸、柠檬酸二钠、Brij-35）、蛋白标准液42.0g/L,由上海申索试剂有限公司）；双蒸水（实验室自备）；中药（生地、芍药、当归、川芎各3g，煎汤130ml）2.2器材：台式离心机, 型号TDL80-2B（上海安亭科学仪器制造厂）；722分光光度仪计（上海精密科学仪器有限公司）； 2ml比色皿4个；震荡器；移液枪20ul、1000ul各一把，镊子3把，试管、试管架、枪头、卷纸若干2.3动物：实验昆明种小鼠，普通级，雄性，40只2.4方法：分组：将40只实验小鼠分为，正常组、环磷酰胺组、乙酰苯肼组、四物汤组4组，每组随机10只小鼠。
造模：在1、4天用乙酰苯肼1.7mg/10g剂量皮下注射造乙酰苯肼组、四物汤组模型，其它组注射等量生理盐水；在1、2天按环磷酰胺1mg/10g剂量腹腔注射造环磷酰胺组模型，其它组注射等量生理盐水；同时，四物汤组每天灌服四物汤0.5ml/只，其他组灌服等量生理盐水。
采样：第8天行小鼠摘眼球取血，离心分离出血清。
脱颈椎处死小鼠，做各项病理检测。
检测：取空白管1支、标准管1支、测定管38支（四物汤组有两只老鼠死亡）；根据预实验结果，空白管加入双蒸水4ul、对照管加入蛋白标准液4ul、测定管分别加入各小鼠血清样本4ul；各管再加入1000ul白蛋白试剂；震荡器上混匀，室温放置10分钟，以空白管较零，0.5cm光径，628nm处测定吸光度。
白蛋白含量（g/L）=测定管吸光度*标准液浓度/标准管吸光度（一周后再测一次，其中乙酰苯肼组有一管丢失）2.5统计：Excel简单数据处理，SPSS11.5软件单因素方差分析、作图3、结果：表1 各组小鼠血清白蛋白（g/L ）比较 注：* 表示与正常组比较P 〈0.05 ·表示与环磷酰胺组比较P 〈0.05 & 表示与乙酰苯肼组组别 正常组 环磷酰胺组 乙酰苯肼组四物汤组 第一次测量白蛋白含量34.8373 6.70 30.9685 5.84 40.3270 3.39 * ·39.45123.07 · 第二次测量白蛋白含量28.0400 3.78 27.0267 4.12 31.8963 2.49* ·30.6500 4.05·注：1、2、3、4分别代表正常组、环磷酰胺组、乙酰苯肼、四物汤组从表1 和图1、2可以看出：用环磷酰胺造模小鼠血清白蛋白含量普遍降低，但差异不显著；用乙酰苯肼造模小鼠，血清白蛋白含量普遍升高且与正常组、环磷酰胺组比较都有显著差异；用四物汤治疗乙酰苯肼造模小鼠，血清白蛋白含量有所降低，但与乙酰苯肼组比较没有显著差异，同时与正常组也没有显著差异。
两次测定，虽然第二次测得值比第一次测得值要小，但所反应的组间趋势是完全一致的。
在实验过程中，由于操作不当，引起了溶血，为排除溶血对实验结果的影响，故去除溶血小鼠血清测得值，再做数据统计，得表2 结果：表2 剔除溶血后各组小鼠血清白蛋白（g/L ）比较组别 正常组 环磷酰胺组 乙酰苯肼组 四物汤组第一次测量白蛋白含量35.70127.8902 31.0014 6.201740.0830 3.3486· 38.6017 3.0039· 第二次测量白蛋白含量28.3048 4.4159 27.2889 4.288533.0933 2.1195· 30.9111 4.5727 注：* 表示与正常组比较P 〈0.05 ·表示与环磷酰胺组比较P 〈0.05 & 表示与乙酰苯肼组比较P 〈0.05由表2 可以看出，它和表1 所反映的组间趋势是一致的，只是乙酰苯肼组和正常组之间的差异变得不再显著。
而去除溶血小鼠血清测得值后，各组的均值都有所升高。
4、讨论：4.1白蛋白是血浆的主要蛋白质，约占血浆总蛋白的60%，是维持血浆渗透压的主要成分。
约40%的白蛋白存在于血浆中，其余60%存在于组织间液中。
白蛋白还具有结合各种配体分子的能力，这些配体分子包括非酯化脂肪酸、钙、某些类固醇激素、胆红素一部分血浆中的色氨酸。
在人体铜运输中有重要作用。
白蛋白由肝脏合成分泌入血中，半衰期是13天，在慢性肝脏疾病中，血浆白蛋白的含量会降低。
（6）有报道指出：血清白蛋白水平与危重病患者虚实证候间存在相关性，虚证血清白蛋白含量降低（7、8）。
4.1.1我们的实验结果是环磷酰胺组小鼠ALB 下降，虽然没有显著差异。
环磷酰胺是抗肿瘤药，能抑制骨髓造血，对机体是一个整体抑制作用，故小鼠ALB 下降。
参照四诊观察，环磷酰胺组小鼠主要表现为气虚，血虚证候在不断加重，检测时可能小鼠还没达到最理想的血虚状态，故与正常组对比差异不显著。
4.1.2乙酰苯肼造模小鼠ALB 升高，且与正常对照组有显著差异。
参照四诊观察，乙酰苯肼组小鼠主要表现为血虚证，在造模后第4天达峰值后逐渐恢复。
按文献推测，其ALB应该下降，实验结果是不可忽视的升高，这是为什么呢？乙酰苯肼是通过破坏红细胞膜的稳定性，从而引起溶血，而致小鼠血虚。
红细胞破坏，血红蛋白直接被释放入血浆，与血浆中的结合珠蛋白最后变成胆红素。
溶血较多时血浆中结合珠蛋白的浓度显著降低或消失。
当血浆内结合珠蛋白全部与血红蛋白结合后，从游离血红蛋白分解出的血红素能与血结素结合，也被肝细胞摄取。
大量溶血时血浆血结素的浓度亦降低。
血浆中的游离血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白，再分解为高铁血红素,与血浆中白蛋白结合成高铁血红白蛋白，最后与血结素结合而被细胞摄取。
另一方面，胆红素也主要通过与血浆白蛋白非共价结合而运输。
（6、12）也就是说，在溶血状态下，机体为降低胆红素毒性（肾毒、脑病）（18-20）损伤，急剧需要大量的白蛋白。
而白蛋白主要在肝脏，乙酰苯肼并不损伤肝脏细胞，肝脏很有可能代偿性的大量分泌白蛋白以供应机体的需要。
白蛋白半衰期是13天，大量分泌正好可以被我们检测到。
况且我们取血时，小鼠已处于恢复期，胆红素浓度不高，白蛋白处于未结合状态可以被溴甲酚绿试剂检测到。
另外，白蛋白处于结合状态时，血红素为有色基团，可以增加吸光度，对检测有一定的干扰。
有研究报告指出：溶血对血液的生化指标检测有干扰，造成ALB升高，但研究结果并不一致。
（13-17）但是，我们剔除溶血后所得的ALB值反而增大，与上面的讨论结果不一致。
一方面，我们没有很认真地来挑选溶血试管，有些因乙酰苯肼而溶血的试管也被剔除，有些环磷酰胺组小鼠因错误操作而发生溶血但颜色不明显而被保留，数据可信度不高。
同时，新近溶血白蛋白结合的基团过多，则有可能影响它与溴甲酚绿的结合，反而不被检测到。
参照同组做的抗氧化能力的检测，也表现出同样的趋势，乙酰苯肼组抗氧化能力显著提高（P<0.05）。
其原因也可能与溶血后胆红素含量增加有关，胆红素是体内的内源性抗氧化剂。
（6、12）4.1.3如此看来：血清白蛋白在血虚证的纳入中并没有特异性的表现，可以升高，也可以降低，要视具体情况而定。
单纯以血清白蛋白降低为标准来衡量血虚程度显然是不合理的。
至少，在乙酰苯肼造模的血虚动物中不能以白蛋白降低作为判断血虚程度的标准。
而临床的资料也显示，血虚证的生化指标是很难确定的，类似的红细胞、血红蛋白在气虚、血虚的鉴别上并没有差异（10、11）。
故更应当提倡小鼠模型的中医四诊辩证。
4.2我们知道四物汤是补血名方，适用于血虚证。
有报道也指出，对于乙酰苯肼造模小鼠同样有显著的治疗效果。
（1、9）我们在实验中发现，四物汤对乙酰苯肼造模小鼠症状及各项指标有一定的改善，但没有显著差异。
这可能与我们所选用的治疗剂量、浓度不够有关。
同时，小鼠在灌胃时的损伤也是不可忽略的，前几天其他三组没有对照灌服生理盐水，四物汤组有两只小鼠死于灌胃，并且在四物汤组小鼠胃的组织切片中发现了大量的炎症细胞。
这对四物汤的治疗效果也是一种干扰。
参照四诊观察结果，乙酰苯肼所造成的血虚模型一直伴有很大的气虚征候和一定的阳虚、精亏状况，也许不符合四物汤血虚证的指针，故治疗效果不显著。
并且，血虚证在临床上多是一个慢性病证，乙酰苯肼所造模型为一个急性的失血过程，用四物汤治疗有失偏颇。
在我们检测时已处于自我恢复期，故四物汤与乙酰苯肼组的对比差异也会缩小。
从另一方面也说明，以方测证有其不合理的成分。
4.3参照整个实验的结果，可以看出：乙酰苯肼所造血虚模型在第4天表现最突出，其后又自行恢复；而环磷酰胺所制得的血虚模型比较长久，血虚程度在不断加重。
可以按实验需求合理选择造模方法，或进行一定的改良。
但是，不管是环磷酰胺组还是乙酰苯肼组，都不是单纯的血虚模型，一直伴随着不等的气虚、阳虚、精亏证候。
说明虚症之间存在着相互转化的机制，与我们临床也很符合。
有报道称：气虚、血虚在红细胞、血红蛋白量的变化上并没有差异（10、11）。
故治疗时要重视中医辩证、注意到间夹证的有无。
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