第章致病菌的检验——革兰氏阳性产芽孢杆菌简要ppt课件
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实验二细菌的革兰氏染色及芽孢染色法ppt课件
染色时，染料可进入菌体和芽孢； ➢ 进入菌体的染料经水洗后可被脱色； ➢ 当用对比度大、浅色的复染色剂（番红）染色后，
芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染 剂颜色（红色）。
（三）实验器材
1、活材料： ➢ 革兰氏染色：培养12h-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis）
和培养24h大肠杆菌（Escherichia coli） ➢ 芽孢染色：培养28-36 小时 的蜡状芽孢杆菌（Bacillus
你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！
擦油镜镜头方法： A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）用擦镜纸沾少许二甲苯，擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
（四）实验步骤——芽孢染色
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
❖制备菌悬液 ❖染色 ❖涂片固定 ❖脱色 ❖复染 ❖镜检
芽孢染色---制备菌悬液
1、滴生理盐水 生理盐水
2、制备菌悬液 挑取2-3环菌苔
在EP管中滴2 滴生理盐水
与生理盐水混匀
芽孢染色---染色
1、滴加孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
（四）实验步骤——革兰氏染色
3.观察实验结果 待标本自干或用吸水纸吸干后，置显微镜
下检查。
革兰阳性菌（G+）， 被染成蓝紫色。
革兰阴性菌（G-）， 被染成红色。
实验程序Ⅰ（革兰氏染色的方法和步骤）
每人取大肠杆菌和枯草杆菌，做一块混合涂片，进行革兰氏染色。
蒸 馏 水
涂片
干
涂 片
芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染 剂颜色（红色）。
（三）实验器材
1、活材料： ➢ 革兰氏染色：培养12h-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis）
和培养24h大肠杆菌（Escherichia coli） ➢ 芽孢染色：培养28-36 小时 的蜡状芽孢杆菌（Bacillus
你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！
擦油镜镜头方法： A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）用擦镜纸沾少许二甲苯，擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
（四）实验步骤——芽孢染色
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
❖制备菌悬液 ❖染色 ❖涂片固定 ❖脱色 ❖复染 ❖镜检
芽孢染色---制备菌悬液
1、滴生理盐水 生理盐水
2、制备菌悬液 挑取2-3环菌苔
在EP管中滴2 滴生理盐水
与生理盐水混匀
芽孢染色---染色
1、滴加孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
（四）实验步骤——革兰氏染色
3.观察实验结果 待标本自干或用吸水纸吸干后，置显微镜
下检查。
革兰阳性菌（G+）， 被染成蓝紫色。
革兰阴性菌（G-）， 被染成红色。
实验程序Ⅰ（革兰氏染色的方法和步骤）
每人取大肠杆菌和枯草杆菌，做一块混合涂片，进行革兰氏染色。
蒸 馏 水
涂片
干
涂 片
第14章 革兰阳性产芽孢杆菌
甚至高压蒸汽处理，抗原性不被破坏。
在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸特异性Ag依然存在，仍能与特 异性抗体发生反应形成环状沉淀，称为Ascoli 反应(沉淀反应)。
Ascoli 反应是用已知抗体来检测未知抗原。在小口径试管中先加入已 知抗血清，然后将待检抗原小心地加在血清的表面，成为界面清晰的两层。 数分钟后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。本试验常用做抗原 定性。
该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。 产气荚膜梭菌、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和破伤风梭菌等。
一、产气荚膜梭菌（Cl. perfringens）
旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。一定 条件下，可引起多种严重疾患，局部组织 出现坏死、水肿、产气。
主要技术内容
引起多种动物的感染、猝死症
3.液体培养基中呈絮状沉淀生长
4.明胶穿刺培养，能液化明胶,沿穿刺线向四周呈放 射状生长,如倒松树状。
5.在含青霉素的培养基中5U/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌 因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串 。
三、抵抗力
一、形态及染色特征
菌体直杆状 ，革兰染色阳性。 一般条件下不形成芽胞，在无糖培养基上可形成。 芽胞大而卵圆，位于菌体中央或近端，使菌体膨胀。 多数菌株可形成荚膜，无鞭毛。
无芽孢
有芽孢
有荚膜
二、培养特性
本菌厌氧培养，但对厌氧程度的要求并不严 ，在普通培养 基 上可生长，若加葡萄糖、血液，则生长更好。菌落多为圆 形、
取回肠内容物加适量灭菌生理盐水稀释，经离心沉淀 后取上清液分成两份 ，一份不加热，一份加热，分别 静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加热组动物常 于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死亡。进一 步用毒素中和试验定型。 目前用多重PCR方法用于毒素基因检测，更加快速方便。
在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸特异性Ag依然存在，仍能与特 异性抗体发生反应形成环状沉淀，称为Ascoli 反应(沉淀反应)。
Ascoli 反应是用已知抗体来检测未知抗原。在小口径试管中先加入已 知抗血清，然后将待检抗原小心地加在血清的表面，成为界面清晰的两层。 数分钟后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。本试验常用做抗原 定性。
该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。 产气荚膜梭菌、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和破伤风梭菌等。
一、产气荚膜梭菌（Cl. perfringens）
旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。一定 条件下，可引起多种严重疾患，局部组织 出现坏死、水肿、产气。
主要技术内容
引起多种动物的感染、猝死症
3.液体培养基中呈絮状沉淀生长
4.明胶穿刺培养，能液化明胶,沿穿刺线向四周呈放 射状生长,如倒松树状。
5.在含青霉素的培养基中5U/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌 因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串 。
三、抵抗力
一、形态及染色特征
菌体直杆状 ，革兰染色阳性。 一般条件下不形成芽胞，在无糖培养基上可形成。 芽胞大而卵圆，位于菌体中央或近端，使菌体膨胀。 多数菌株可形成荚膜，无鞭毛。
无芽孢
有芽孢
有荚膜
二、培养特性
本菌厌氧培养，但对厌氧程度的要求并不严 ，在普通培养 基 上可生长，若加葡萄糖、血液，则生长更好。菌落多为圆 形、
取回肠内容物加适量灭菌生理盐水稀释，经离心沉淀 后取上清液分成两份 ，一份不加热，一份加热，分别 静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加热组动物常 于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死亡。进一 步用毒素中和试验定型。 目前用多重PCR方法用于毒素基因检测，更加快速方便。
革兰氏阳性产芽孢杆菌
常用消毒剂均能于短时间内将其杀死。芽孢抵抗
力较强，在干燥背光处可存活40年以上。煮沸1h 或干热140 ℃3h可杀灭芽孢，对碘敏感。
五、抗原结构
（一）结构抗原
1.荚膜抗原：多肽，仅见于有毒菌株，与毒力和抗吞噬有关 2.菌体抗原：多糖，与细菌毒力无关。性质稳定，经加热煮沸
甚至高压蒸汽处理，抗原性不被破坏。 在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸仍能与特异性抗体发生反 应形成环状沉淀，称为Ascoli 反应。
无芽孢
有芽孢
有荚膜
二、培养特性
本菌对厌氧程度的要求并不严 ，在普通培养基上可生
长，若加葡萄糖、血液，则生长更好。菌落多为圆形、
光滑、隆起、灰白色的圆屋顶样，也可形成圆盘形、边
缘成锯齿状、表面有辐射状条纹的大菌落。
生长非常迅速，快速移植法可帮助此菌的分离。
厌氧肉肝汤中培养，呈均匀浑浊，并产生大量气体。
与破伤风梭菌的致病性无关。
四、微生物学诊断
一般不需微生物学诊断。如有特殊需
要，可采取创伤部的分泌物或坏死组
织进行细菌学检查。
五、免疫防治
主动免疫预防可用明矾沉淀破伤风类毒素 破伤风抗毒素血清可用于紧急预防
复习思考题
1.炭疽杆菌的主要培养特性有哪些？ 2.如何进行炭疽病的微生物学诊断？ 3.产气荚膜梭菌的主要生化特点。
多为腐生菌，主要存在于土壤、水和灰尘中，如
枯草芽孢杆菌。
炭疽芽胞杆菌（B. anthracis）
炭疽芽胞杆菌俗称炭疽
杆菌，是引起人类、各 种家畜和野生动物炭疽 （Anthrax）的病原 。
一、形态及染色特性
革兰氏阳性大杆菌，菌体平直，两端平截。在组织和血液中，单
兽医微生物学课件- 革兰氏阳性产芽孢杆菌
根据其主要毒素的抗原性分A、B、 C、D、E5个型，A型为主
致病性
致病物质——能产生十余种外毒素，有的即为胞外酶
α毒素（卵磷脂酶）——增加血管通透性，溶血、坏死作 用，最重要
β毒素——组织坏死 ε毒素——增加胃肠壁通透性 ι毒素——坏死 κ毒素（胶原酶）——分解胶原纤维、组织崩解 μ毒素（透明质酸酶）——有利细菌及毒素扩散 ν毒素（DNA酶）——降低粘稠度，有利扩散 θ毒素——溶血毒素、细胞毒素 λ毒素——蛋白酶 肠毒素——增加肠黏膜细胞通透性
炭疽杆菌在动物体内的形态
在体外
（培养基上的培养物）形态： （1）在培养基中，此菌常形成长链（几十或上
百个）； （2）培养18～24h后开始形成芽胞，芽胞呈椭圆
形，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体； 条件:氧气充足；25--30℃ ；中型或碱性环境，
易形成芽孢。 （3）在普通培养基中不形成荚膜，但若在血液、
所致疾病
气性坏疽（产气荚膜梭菌为主）
创伤感染、伤口条件与破伤风相似
潜伏期短8-48h 局部组织坏死，产生大量气体，组织气肿（捻发 音） ，压迫神经末梢，剧烈疼痛并伴有恶臭，最后 大块肌肉坏死，毒素入血（毒血症），全身中毒症状， 休克、死亡（30%）
食物中毒 较轻，1-2天自愈
坏死性肠炎（C型）
电镜下的炭疽杆菌
形态及染色特性 本菌为G+大杆菌，1.0～ 1.2μm×3～5μm。无鞭毛，不运动。芽孢椭 圆形，位于菌体中央，芽孢囊不大于菌体。可 形成荚膜。DNA的G+Cmol%为32.2～33.9。
电镜下的炭疽芽孢
其形态在动物体内和体外有较大差异：
在体内
1）在动物组织和血液中，此菌单在或呈2～5个相 连的短链，菌体矢直，相连的两端平截而呈竹节 状，围绕以丰厚的荚膜。 2）荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而 消失后，仍有残留荚膜显示，称为“菌影”。在 猪体内的此菌形态较为特殊，菌体常弯曲或部分 膨大，轮廓不清。 3）动物体内的炭疽杆菌只有当暴露接触空气中的 氧气之后，方能形成芽孢。
致病性
致病物质——能产生十余种外毒素，有的即为胞外酶
α毒素（卵磷脂酶）——增加血管通透性，溶血、坏死作 用，最重要
β毒素——组织坏死 ε毒素——增加胃肠壁通透性 ι毒素——坏死 κ毒素（胶原酶）——分解胶原纤维、组织崩解 μ毒素（透明质酸酶）——有利细菌及毒素扩散 ν毒素（DNA酶）——降低粘稠度，有利扩散 θ毒素——溶血毒素、细胞毒素 λ毒素——蛋白酶 肠毒素——增加肠黏膜细胞通透性
炭疽杆菌在动物体内的形态
在体外
（培养基上的培养物）形态： （1）在培养基中，此菌常形成长链（几十或上
百个）； （2）培养18～24h后开始形成芽胞，芽胞呈椭圆
形，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体； 条件:氧气充足；25--30℃ ；中型或碱性环境，
易形成芽孢。 （3）在普通培养基中不形成荚膜，但若在血液、
所致疾病
气性坏疽（产气荚膜梭菌为主）
创伤感染、伤口条件与破伤风相似
潜伏期短8-48h 局部组织坏死，产生大量气体，组织气肿（捻发 音） ，压迫神经末梢，剧烈疼痛并伴有恶臭，最后 大块肌肉坏死，毒素入血（毒血症），全身中毒症状， 休克、死亡（30%）
食物中毒 较轻，1-2天自愈
坏死性肠炎（C型）
电镜下的炭疽杆菌
形态及染色特性 本菌为G+大杆菌，1.0～ 1.2μm×3～5μm。无鞭毛，不运动。芽孢椭 圆形，位于菌体中央，芽孢囊不大于菌体。可 形成荚膜。DNA的G+Cmol%为32.2～33.9。
电镜下的炭疽芽孢
其形态在动物体内和体外有较大差异：
在体内
1）在动物组织和血液中，此菌单在或呈2～5个相 连的短链，菌体矢直，相连的两端平截而呈竹节 状，围绕以丰厚的荚膜。 2）荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而 消失后，仍有残留荚膜显示，称为“菌影”。在 猪体内的此菌形态较为特殊，菌体常弯曲或部分 膨大，轮廓不清。 3）动物体内的炭疽杆菌只有当暴露接触空气中的 氧气之后，方能形成芽孢。
兽医微生物学课件- 革兰氏阳性产芽孢杆菌78页文档
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
兽医微生物学课件- 革兰氏阳性产芽 孢杆菌
46、法律有权打破平静。——马·格林 47、在一千磅法律里，没有一盎司仁 爱。— —英国
48、法律一多，公正就少。——托·富 勒 49、犯罪总是以惩罚相补偿；只有处 罚才能 使犯罪 得到偿 还。— —达雷 尔
50、弱者比强者更能得到法律的保护 。—— 威·厄尔
Hale Waihona Puke
革兰氏阳性菌PPT幻灯片课件
32
3、拟核（或核质体、核区） 由大型环状双链DNA纤丝不规则地折叠或缠绕而构成
的无核膜、核仁的区域。
细菌DNA：长度一般为1~3mm
例：大肠杆菌的DNA长约1mm。
多糖和荚膜多糖）的重要场所 ＊膜上含有与氧化磷酸化或光合磷酸化等能量代谢有关的 酶系，是细胞的产能基地 ＊是鞭毛基体的着生部位，并可提供鞭毛旋转运动所需的 能量。
31
间体：由细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状物，一 般位于细胞分裂的部位或附近。
间体 间体的功能:
参与隔膜形成 与核分裂有关 类线粒体功能
11
细菌的染色
12
13
革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦 医生Hans Christian Gram于1884年创立。
基本步骤： 涂片固定→ 结晶紫初染1min →碘液媒染1min
→95%乙醇脱色0.5min →沙黄复染1min 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
14
15
（二）细菌的细胞构造
基本结构
细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核
特殊结构
鞭毛 菌毛 糖被（荚膜和粘液层） 芽孢
16
（一）细菌细胞的基本结构
细菌细胞结构
17
1、细胞壁
约占细胞干重的10%～25%。 （1）细胞壁的功能 固定细胞外形和提高机械强度，使其免受渗透压等外力 的损伤； 为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需； 阻拦大分子有害物质（抗生素和酶）进入细胞； 与细菌的抗原性．致病性和对噬菌体的敏感性密切相关。
细胞膜液态镶嵌模型
膜是由球形蛋白与磷脂 按照二维排列方式构成的流 体镶嵌式，流动的脂类双分 子层构成了膜的连续体，而 蛋白质象孤岛一样无规则地 漂流在磷脂类的海洋当中。
3、拟核（或核质体、核区） 由大型环状双链DNA纤丝不规则地折叠或缠绕而构成
的无核膜、核仁的区域。
细菌DNA：长度一般为1~3mm
例：大肠杆菌的DNA长约1mm。
多糖和荚膜多糖）的重要场所 ＊膜上含有与氧化磷酸化或光合磷酸化等能量代谢有关的 酶系，是细胞的产能基地 ＊是鞭毛基体的着生部位，并可提供鞭毛旋转运动所需的 能量。
31
间体：由细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状物，一 般位于细胞分裂的部位或附近。
间体 间体的功能:
参与隔膜形成 与核分裂有关 类线粒体功能
11
细菌的染色
12
13
革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦 医生Hans Christian Gram于1884年创立。
基本步骤： 涂片固定→ 结晶紫初染1min →碘液媒染1min
→95%乙醇脱色0.5min →沙黄复染1min 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
14
15
（二）细菌的细胞构造
基本结构
细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核
特殊结构
鞭毛 菌毛 糖被（荚膜和粘液层） 芽孢
16
（一）细菌细胞的基本结构
细菌细胞结构
17
1、细胞壁
约占细胞干重的10%～25%。 （1）细胞壁的功能 固定细胞外形和提高机械强度，使其免受渗透压等外力 的损伤； 为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需； 阻拦大分子有害物质（抗生素和酶）进入细胞； 与细菌的抗原性．致病性和对噬菌体的敏感性密切相关。
细胞膜液态镶嵌模型
膜是由球形蛋白与磷脂 按照二维排列方式构成的流 体镶嵌式，流动的脂类双分 子层构成了膜的连续体，而 蛋白质象孤岛一样无规则地 漂流在磷脂类的海洋当中。
致病菌的检验--革兰氏阳性产芽孢杆菌(简要) ppt课件
② 形成椭圆形芽胞，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体； ③ 普通培养基上不形成荚膜。
一、形态及染色特性
（3）炭疽杆菌特征形态： ① 慢性局部炭疽病料: 菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转 的杆状； ② 血琼脂、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，10~20%CO2条件下可 形成荚膜； ③ 病料腐败后，碳疽芽孢杆菌菌体分解，但荚膜抗腐败能力较 强，荚膜仍可残留，称为“菌蜕”。
是炭疽毒素（PA、LF、EF）的组成成分之一，具有免疫原性， 能刺激机体产生保护性抗体。
六、致病性
动物吃─→含本菌芽胞的饲料或青草─→肠出芽增殖→ 血→败血症，脾肿大发黑→炭疽(病程短而急，数日死 亡 )。 1、易感性 （1）绵羊、牛、鹿最易感——急性败血性，尸僵不全、 血凝不良、天然孔出血，臌气；脾急剧肿胀至3~4倍； （2）马属、骆驼、猪、山羊次之——多为慢性局部感 染 , 如 咽 部 ； （3）狗、猫及食肉动物抵抗力强——多表现肠炭疽； （ 4 ） 禽 类 通 常 无 易 感 性 ；
2、毒力因子
（1）荚膜：炭疽杆菌的荚膜能抵抗宿主吞噬细胞的吞噬，有 利于在机体内生存、繁殖和扩散。 （2）炭疽毒素：主要由3种成分构成。 ① 水 肿 因 子 (edema factor ， EF): 脂 蛋 白 ② 致 死 因 子 (lethal factor ， LF): 蛋 白 质 ③ 保护性抗原(protective antigen，PA): 一种辅酶。 此3种成分单独对动物无毒性。前2种成分混合注射家兔或 豚鼠皮下可致皮肤水肿；后2种混合注射可致肺部出血水肿， 并使豚鼠致死；3种混合注射可出现炭疽典型中毒症状。 炭疽毒素主要是增强微血管的通透性，改变血液循环动力 学，血液呈高凝状态，引起DIC和感染性休克。
体内外培养有较大形态差异。
一、形态及染色特性
（3）炭疽杆菌特征形态： ① 慢性局部炭疽病料: 菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转 的杆状； ② 血琼脂、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，10~20%CO2条件下可 形成荚膜； ③ 病料腐败后，碳疽芽孢杆菌菌体分解，但荚膜抗腐败能力较 强，荚膜仍可残留，称为“菌蜕”。
是炭疽毒素（PA、LF、EF）的组成成分之一，具有免疫原性， 能刺激机体产生保护性抗体。
六、致病性
动物吃─→含本菌芽胞的饲料或青草─→肠出芽增殖→ 血→败血症，脾肿大发黑→炭疽(病程短而急，数日死 亡 )。 1、易感性 （1）绵羊、牛、鹿最易感——急性败血性，尸僵不全、 血凝不良、天然孔出血，臌气；脾急剧肿胀至3~4倍； （2）马属、骆驼、猪、山羊次之——多为慢性局部感 染 , 如 咽 部 ； （3）狗、猫及食肉动物抵抗力强——多表现肠炭疽； （ 4 ） 禽 类 通 常 无 易 感 性 ；
2、毒力因子
（1）荚膜：炭疽杆菌的荚膜能抵抗宿主吞噬细胞的吞噬，有 利于在机体内生存、繁殖和扩散。 （2）炭疽毒素：主要由3种成分构成。 ① 水 肿 因 子 (edema factor ， EF): 脂 蛋 白 ② 致 死 因 子 (lethal factor ， LF): 蛋 白 质 ③ 保护性抗原(protective antigen，PA): 一种辅酶。 此3种成分单独对动物无毒性。前2种成分混合注射家兔或 豚鼠皮下可致皮肤水肿；后2种混合注射可致肺部出血水肿， 并使豚鼠致死；3种混合注射可出现炭疽典型中毒症状。 炭疽毒素主要是增强微血管的通透性，改变血液循环动力 学，血液呈高凝状态，引起DIC和感染性休克。
体内外培养有较大形态差异。
微生物革兰氏染色法和芽孢染色法ppt课件
注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不 足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成 阴性菌
精品
5
实验结果
阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色）
精品
6
细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
2
革兰氏染色原理
第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
精品
9
细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
实验二
革兰氏染色法和芽孢染色法
精品
1
革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
精品
精品
5
实验结果
阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色）
精品
6
细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
2
革兰氏染色原理
第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
精品
9
细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
实验二
革兰氏染色法和芽孢染色法
精品
1
革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
精品
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2019
-
9
4.明胶穿刺培养，呈倒松树状，表面液化呈漏斗状。
明胶穿刺培养
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5. 在含0.5IU/ml青霉素的培养基中，可形成串珠反应，与其它需氧 芽孢杆菌区别。当青霉素加至10IU/mL时，炭疽杆菌生长受抑， 不生长或微弱生长，而该属其他细菌一般不被抑制。 串珠反应 ：在含青霉素0.5IU/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细 胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串 。
2. 保护性抗原（PA） 是炭疽毒素（PA、LF、EF）的组成成分之一，具有免疫原性， 能刺激机体产生保护性抗体。
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六、致病性
动物吃─→含本菌芽胞的饲料或青草─→肠出芽增殖→ 血→败血症，脾肿大发黑→炭疽(病程短而急，数日死 亡 )。 1、易感性 （1）绵羊、牛、鹿最易感——急性败血性，尸僵不全、 血凝不良、天然孔出血，臌气；脾急剧肿胀至3~4倍； （2）马属、骆驼、猪、山羊次之——多为慢性局部感 染, 如咽部； （3）狗、猫及食肉动物抵抗力强——多表现肠炭疽； （4）禽类通常无易感性； （5）人类：因侵入途径不同而出现不同症状。 2019 15
第14章 革兰氏阳性产芽孢杆菌
产芽胞细菌是一群差异很大的细菌，本章仅介绍兽医上 具有重要意义的芽胞杆菌科(Bacillaceae), 目前主要包括 6个属, 与兽医有关的是属Ⅰ和Ⅲ。 属Ⅰ：芽胞杆菌属(Bacillus) 属Ⅱ：芽胞乳杆菌属(Sporolactobacillus) 属Ⅲ：梭状芽胞杆菌属(Clostridium), 也称梭菌属 属Ⅳ：脱硫腊肠样芽胞杆菌属(Desulfotomaculum) 属Ⅴ：芽胞八叠球菌属(Sporocarina) 属Ⅵ：颤螺菌属(Oscillospira)
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体内外培养有较大形态差异。 （1）体内（即病料中，如血液、组织）形态： ① 单在或短链状(一般约2~5个)，似竹节状； ② 形成荚膜；不形成芽胞； ③ 相连的菌端平截或微凹，游离端钝圆，本菌属的其他细菌接头 钝圆，如蜡状芽胞杆菌。
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一、形态及染色特性
（2）体外（培养基）形态： ① 长链状（几十或上百个）； ② 形成椭圆形芽胞，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体； ③ 普通培养基上不形成荚膜。
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二、培养特性
1. 需氧或兼性厌氧，最适生 长温度30-37℃，pH7.2-7.6， 营养要求不高，普通培养基 中生长良好。 强毒株形成灰白色不透明、 大而扁平、表面干燥； 无毒或弱毒株形成稍小而隆 起、表面较为光滑湿润、边 缘比较整齐的光滑型菌落。
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8 强毒株菌落
2. 血琼脂：一般不溶血，个别菌株轻微溶血；而该属 其他成员多有明显溶血； 3. 液体肉汤培养基： 24h呈絮状沉淀生长，上清透明 清朗，不形成菌膜和菌环；
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三、生化特性
生化试验不是炭疽杆菌的主要鉴定项目。可了解以 下内容： 分解葡萄糖， V.P阳性， 还原硝酸盐， 不产生吲哚、 H2S，H2O2酶阳性。
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四、抵抗力
1、繁殖体：抵抗力不强，同一般无芽孢杆菌。常用 消毒剂均能于短时间内将其杀死。 2、芽胞体：抵抗力非常强，对热、干燥等具有较强 的抵抗力； 室温干燥可存活十年，干燥背光处可存活 40年以上。在动物皮毛上能活数年，混入泥土中可存活 数年至数十年，每到春夏时期地面长出青草时，可将泥 中的芽胞带至地面，牛羊食入而受感染。 3、牧场一旦被芽胞感染，传染性可保持20-30年。煮 沸1h或干热140℃3h可杀灭芽孢。炭疽杆菌的芽胞对碘 敏感，1:2500碘液10min即可杀死芽胞。
2、毒力因子
（1）荚膜：炭疽杆菌的荚膜能抵抗宿主吞噬细胞的吞噬，有 利于在机体内生存、繁殖和扩散。 （2）炭疽毒素：主要由3种成分构成。 ① 水肿因子(edema factor，EF): 脂蛋白 ② 致死因子(lethal factor，LF): 蛋白质 ③ 保护性抗原(protective antigen，PA): 一种辅酶。 此3种成分单独对动物无毒性。前2种成分混合注射家兔或 豚鼠皮下可致皮肤水肿；后2种混合注射可致肺部出血水肿， 并使豚鼠致死；3种混合注射可出现炭疽典型中毒症状。 炭疽毒素主要是增强微血管的通透性，改变血液循环动力 学，血液呈高凝状态，引起 DIC和感染性休克。 2019 16
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炭疽芽胞杆菌（B. anthracis）
该菌俗称炭疽杆菌，人畜共患病原体，在医学和
兽医学上都相当重要，是引起人类、各种家畜和
野生动物炭疽
一、形态及染色特性
G+大杆菌，长而粗大，菌体平直，两端平截。长 3.0~8.0µ m，宽1.0~1.5µ m；无鞭毛。在组织和血液中 单在或短链状，培养后形成竹节状长链。 该菌在组织或含血液培养基中可形成荚膜。有氧条件 下形成芽孢，位于菌体中央，不膨出菌体。无鞭毛。
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五、抗原结构
1. 结构抗原 (1) 荚膜抗原：多肽，仅见于有毒菌株，与毒力和抗吞噬有关。 (2) 菌体抗原：多糖，与细菌毒力无关。性质稳定，加热煮沸 甚至高压蒸汽处理抗原性不被破坏。在病畜皮毛或腐败脏器 中经长时间煮沸仍能与特异性抗体反应形成环状沉淀，称为 Ascoli 反应。
(3) 芽胞抗原：由芽胞的外膜和皮质组成，具免疫原性。
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一、形态及染色特性
（3）炭疽杆菌特征形态： ① 慢性局部炭疽病料: 菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转 的杆状； ② 血琼脂、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，10~20%CO2条件下 可形成荚膜； ③ 病料腐败后，碳疽芽孢杆菌菌体分解，但荚膜抗腐败能力较 强，荚膜仍可残留，称为“菌蜕”。
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第一节 芽胞杆菌属（Bacillus）
一群需氧、能产芽胞的革兰氏阳性大杆菌。共40多种， 其中对人畜致病的较少，仅炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)具强烈致病性，侵害草食动物及人，引起动 物和人类炭疽病。 类炭疽杆菌(形态与炭疽杆菌相似)是实验室常见的污染 菌，偶尔也能致病。蜡状芽胞杆菌(S. cereus)的某些菌 株可产肠毒素，引致食物中毒；其他多为腐生菌，主要 存在于土壤、水和灰尘中，如枯草芽孢杆菌(B. subtilis)。 本节重点介绍炭疽芽胞杆菌。