生物技术交底书模板
绿化种植施工技术交底记录
绿化种植施工技术交底记录1. 引言绿化是城市建设和环境保护的重要组成部分。
为了确保绿化工程的质量和长期效益，准确地记录和交底施工技术是至关重要的。
本文档旨在记录绿化种植施工技术的交底内容，以确保施工人员清楚了解任务要求和操作步骤。
2. 施工目标在本次绿化种植施工中，我们的目标是：- 确保植物的生长环境与要求一致；- 培植健康、茂盛的植物；- 保护现有环境和基础设施；- 提供可持续的绿化效果。
3. 任务要求在施工过程中，需要完成以下任务：- 根据设计方案进行植物选择和布局；- 准确施工种植植物，并确保其生长环境满足要求；- 确保施工过程中保护周边环境和设施；- 按照合理的周期进行养护和管理。
4. 种植植物选择根据设计方案，我们将选择适应环境并具有良好观赏效果的植物进行种植。
在选择植物时，我们需要考虑以下因素： - 土壤适应性：植物能否适应现有土壤的酸碱度、水分含量和肥力等条件；- 光照需求：植物对阳光的需求程度，以及在不同光照条件下的生长能力；- 水分要求：植物对水分的需求量和耐旱能力；- 抗病虫害能力：植物对一些常见病虫害的抵抗力。
5. 种植布局在进行种植布局时，我们将根据设计方案和实际场地情况进行合理的植物分布。
重点考虑以下因素：- 观赏效果：植物的品种、颜色、花期等因素，以营造美观的绿化效果；- 空间要求：不同植物的生长习性和空间要求，要合理分配种植位置；- 生态环境配合：将植物与周围生态环境进行有机结合，以促进生物多样性和生态平衡。
6. 施工要点在进行绿化种植施工时，需要注意以下要点：- 土壤处理：根据植物的要求，对土壤进行松散、排水和肥沃度的调整；- 种植技术：准确选取适宜的种植方式，包括直播、穴插、移栽等方法；- 植物保护：在施工过程中，确保植物不受损害，避免病虫害的侵害；- 养护管理：施工完成后，建立合理的养护管理制度，保证植物的生长和发展。
7. 安全和环保要求在进行绿化种植施工时，需要注意以下安全和环保要求：- 确保施工现场的人身安全，使用合适的防护装备；- 严禁乱倒垃圾和污染环境，保持施工现场的清洁；- 合理利用水源和节约用水，在防止水源污染的同时确保植物的水分供应。
专利技术交底书(模板)
专利技术交底书模板（撰写说明）步骤或过程以及工艺条件（如温度、压力、时间等）；对于产品发明，①若是装置、仪器等，应给出产品结构，即各组成部分的名称、形状、相互位置及连接关系等，②若是化学组合物、混合物等，应给出产品配方，即各组分的名称、含量、相互关系等，③若是化合物、微生物等，应给出产品性质，即名称、分子式或结构式、序列表、物理或化学特性等。
（2）专利必须是一个技术方案，应该阐述发明目的是通过什么技术方案来实现的，不能只有原理，也不能只做功能介绍，而应该提供相应的技术方案的具体实现方式；（3）附图及其说明。
本部分内容的描述一定要结合附图。
①附图：无论申请发明还是实用新型，如果是产品，一定要提供产品示意图，而且必须是线条图，方框图、黑白方式提供，不必提供彩色图例；可以是示意图，但各部件之间的大小比例应协调；示意图最好是可编辑的电子版，例如AutoCAD 或者Word等②结合附图进行相应的说明：一定要解释产品的各个部分、组件的名称。
例如框图可分成电源部份、显示部份、控制部份、输入部份、输出部份……等等；结合电路工作原理图区分出并指明上述所列的各部份的构成；对应工作原理框图与工作原理图说明各部份的工作原理与本专利工作原理与工作过程，各项功能的实现方法与原理；对于有特殊功能的元器件，应具体描述其工作原理；如果申请方法专利，尽量提供流程图或者示意图，并据此进行说明。
（4）仅仅处于构思阶段，尚未实际生产的产品、尚未实际应用的方法可以申请专利，只要能够提供上述示意图和说明性文字，构成完整的技术方案。
此部分文字越详细越好，字数无限制。
5、优点和积极效果撰写说明：与背景技术中存在的问题相比较，结合技术方案客观地描述本发明创造的特有技术特征所具有的优点和积极效果(应分析其形成原因，并且最好有具体数据予以支持，不得使用宣传性用语)。
6、实施方式举例撰写说明：详细描述实现本发明创造的具体实施方式（有附图的应对照附图进行解释，但附图不能代替文字说明）。
关于生物工程技术交底书
关于生物工程专利技术交底书1、发明名称根据发明所涉及的主题个数确定，名称应包含所有发明主题（一般不应超过25个字,至多不能超过40个字），所谓发明主题是指产品、方法或用途，如“一种棒状链霉菌重组体及其用途和制备方法”、“一种淡紫灰叶链霉菌及用它制备阿克拉希霉素A、B、Y和糖苷配基的方法”。
2、现有技术发明人（一般为项目负责人）对本项目的国内外进展情况了解最深，完全可以提供与本发明最接近的现有技术，客观地指出现有技术的不足或缺点（该缺点或不足应该是本发明的技术方案将要解决的技术问题），引证反映这些现有技术的文献。
若引证专利文献，需写明国别、公开号、公开日期；若引证论文或专著文献，需写明标题和出处。
3、技术问题技术问题是本发明相对于现有技术，其最终要解决或克服那些不足，与发明所取得的技术效果对应。
即，针对现有技术中存在的缺陷或不足，用正面的、尽可能简洁的语言客观而有根据地反映发明要解决的技术问题。
4、技术方案技术方案是为了实现上述解决技术问题的目的，在发明中采取的何种技术手段。
此部分与具体实施例的区别是，后者可以写明多个采用了具体参数的实施例，各个实施例均能达到本发明预期的效果；而前者是对所有比较理想的实施例的总结，通常表现为某个参数是一个范围，而并非一个点。
生物工程包括基因工程、制药、转基因动植物技术等，具休内容如下：（1）、涉及DNA、基因序列本身：提供名称、结构、制备方法、应用等，如碱基序列、具体制备方式的描述和参数、特定的功能和用途，并提供序列表的软盘或光盘。
（2）、载体或重组在载体：提供载体的组成，具体描述载体的制备过程，包括起始载体、制备步骤、具体条件和参数。
（3）、多肽（重组蛋白质）：提供名称、结构、制备方法和功能等。
(4)、转化体及其制备方法：提供导入的基因或重组载体、宿主（微生物、植物或动物）、导入宿主的方法、选择性收集转化体的方法或鉴定方法等，还应包括“对外源基因在转化体中的表达进行检测的试验及结果”（5）、微生物：按微生物分类命名法对微生物名称正确描述。
技术交底书撰写指南(化学、医药、生物)【用心整理精品资料】
技术交底书撰写模版发明名称：本专利发明人：______技术交底书撰写人及技术联系人：______电话:______ FAX： ______ E-MAIL:______该技术应用产品:术语解释:1本发明要解决的技术问题是什么？对应现有技术的所有缺点，一一正面描述本发明所要解决的技术问题；本发明解决不了的，不用提供。
2、详细介绍背景技术，并描述已有的与本发明最相近似的实现方案（包括两部分：背景技术及现有技术方案[大的背景技术和小的背景技术]，应详细介绍，以不需再去看文献即可领会该技术内容为准，如果现有技术出自专利、期刊、书籍，则提供出处）以下分别介绍两部分的写法：背景技术是作为本发明基础且能够帮助理解本发明相关的公知技术的内容。
其目的是使代理人能够理解发明人所处的情境，即发明人所在的技术领域以及所面临的具体问题。
要求从一般人了解的事物作为出发点，通过一些中间环节，将代理人引入发明人所面临的技术领域，以及该领域的某个待解决的具体问题。
最接近现有技术：是与本发明创造最接近的现有技术方案，即在本发明提出前，现有技术如何解决上述技术问题。
最接近的技术方案应该有比较详尽的说明。
对于方法，应简要说明现有方法的步骤。
该段说明的写法基本和说明本专利申请文件的技术方案的方法相同.）3、现有技术的缺点是什么？针对这些缺点，说明本发明的目的.（客观评价，现有技术的缺点是针对于本发明的优点来说的，本发明不能解决的缺点不必写；基于本发明能解决的问题写出发明的目的）3。
1 如果找不出对比技术方案及其缺点，可用反推法，根据本发明的优点来找对应的缺点；3.2 本发明不能解决的缺点,不需提供；3.3 缺点可以是特异性差、敏感度低、成本高、产率低、合格率低、反应速度慢、副作用、效果差、使用不方便等类似问题.4、本发明技术方案的详细阐述（越详细越好；发明中每一功能的实现都要有相应的技术实现方案；所有英文缩写都应有中文注释；)。
4。
1 本部分为专利申请最重要部分,需要详细提供；4。
发明专利申请技术交底书范例
技术交底书模板致申请人：非常感谢您对我公司的信任以及支持，我司的代理人具有深厚的专利实务处理经验和广泛的技术背景，但是并不是技术专家，为了方便双方沟通，请您按照以下的指引提供技术交底书，在完成技术交底后可以删除我们提供的示例内容。
注：全文对同一事物、部件或步骤的叫法（名称）应当统一，避免出现一种东西多种叫法；英文缩写应有中文译文及英文全称。
专利法规定：1）专利必须是一个技术方案，应该阐述发明目的是通过什么技术方案来实现的，不能只有原理，也不能只做功能介绍；2）专利必须充分公开，以本领域技术人员不需付出创造性劳动即可实现为准。
■特别提示（简易模板）：若无法填写详细的技术交底书，可仅提供下述四点：①现有技术存在的缺陷，该缺陷应当是本发明可以解决或克服的缺陷，不能解决或克服的缺陷不用说明；（待填写内容）②产品结构示意图，或电路、方法、数据流的示意图；（待填写内容）③涉及产品的，根据示意图说明产品各个部分的名称和连接关系，涉及方法的，根据示意图说明方法的流程步骤顺序和操作参数或条件，涉及电路或数据信息的，电路或数据信息的数据流逻辑；（待填写内容）④相比现有技术，本申请的技术方案的进步之处，及该进步带来的效果。
（待填写内容）下为详细的技术交底格式，请您参考示例填写：一、现有技术1.1技术领域[备注]技术领域应指出本发明创造技术方案所属或直接应用的技术领域请您参考示例填写：[示例]: 涉及一种指示电压存在的试电装置，尤其是能识别安全和危险电压的试电笔1.2 与本发明相关的已有技术、以及已有技术的缺点[备注]已有技术，是对于本要申请专利最相近的一种已有公开技术，如果是产品的说明已有产品的结构，如果是方法说明已有方法的步骤，并结合结构、或方法的技术，有逻辑性的说明义有技术存在的技术问题和技术缺点，而不是人的主观感受请您参考示例填写：[示例]:目前，公知的试电笔构造是由测试触头、限流电阻、氖管、金属弹簧和手触电极串联而成。
专利技术交底书(微生物类)
除以上资料外，如有其它相关信息，请加以说明。
注：在生物技术领域中，当发明创造涉及“公众不能得到”的生物材料时，申请人必须按照专利法实施细则第二十五条的规定到中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC，北京）或中国典型培养物保藏中心（CCTCC，武汉）办理有关的保藏手续，由保藏单位出具生物材料的保藏证明和存活证明，作为充分公开的依据。
（1）已知微生物，
l 其名称按照分类命名法描述，中文名称+拉丁文学名；
l 说明公开该微生物的文献出处和公众获得该微生物的具体途径，如果是在非专利文献公开，需提供由生物材料持有者保证从申请日起二十年内向公众发放生物材料的证明；
（2）新的微生物，包括：
l 其获得途径、分离方法和条件，包括：从自然界筛选、理化诱变、传代培养的自发突变、从动植物组织经过原代培养和传代培养建立新细胞系、融合细胞、重组DNA方法构建；
l 如果用途是已知的，可以直接引用；
l 如果用途是新的，应提供实施例和效果数据证明；
l 如果发明点在于突出效果，应提供对比实施例和效果数据证明；
l 对于上述3中（2）、（3）、（4）的目的，应提供相应用途的实施例和效果数据证明。
八、引证资料
除专利申请表中所列之附件外，可列出与本申请相关之参考资料及文献，如学术报告、论文、技术报告等，并请附送影本。（需补充资料时，请另纸附上）
发明人签名：
1.2.
3.4.
日 期：
技术交底人：
联络电话/分机：
（本栏由事务所人员填写）
承办人员意见：
3．最后描述拟申请技术的有益效果。
五、说明书附图涉及制备方来自之发明可提供工艺流程图。要求---附图必须清楚，完整，线条不得过细，涉及设备的同一组成部分在各附图上的序号必须相同。
专利交底书模板-农林渔养殖
3、检测结果
2、特别需要指出现有技术的缺陷以及缺陷产生的原因。
秀珍菇(Pleurotus geesteranus)，又名小平菇、姬菇，在分类学上属于真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科侧耳属。秀珍菇名称来源于台湾，于20世纪90年代时在台湾省等地发现，其体型与普通凤尾菇相比明显较小，是一种较为稀少的食用菌新品种。
浙江省农科院园艺研究所等单位以从台湾、日本引进的秀珍菇菌株为亲本，应用杂交、辐射技术成功选育农秀1号、秀珍菇LD-1等具有自主知识产权的优新品种。为减轻劳动强度、降低劳动成本，福建、浙江等地部分菇场对秀珍菇菌袋固定制冷模式做了一些新的探索与尝试，即将移动式制冷机组搬入菇棚内直接进行低温刺激催蕾，由于缺乏配套的设施和技术，存在制冷效果不佳、出菇不整齐、菇蕾萎缩死亡多等问题，该项工艺至今未能取得实质进展，淳安、桐乡等地为科学利用农林产业的废弃资源，通过开展以桑枝为主原料的黑木耳栽培试验研究，成功建立了规模化的生产基地，目前国内利用桑枝、梨枝栽培秀珍菇还仅限于小规模的试验中，其相关技术要求尚未明确。
5)在覆土后7～10天，白色菌丝爬上土面，土层表面布满浓白色菌丝后，停止喷水，可促使袋面菌丝倒伏，迅速改变秀珍菇的生长状态，由营养生长阶段转入生殖生长阶段，在转入到生殖生长阶段之后，将空气相对湿度控制在85％～95％，培养温度控制在20～30℃，加强通风换气，有利于刺激土层内菌丝进一步形成菌束，当栽培袋表面出现大量菇蕾，菌盖肥厚紧实、菌褶上菌膜尚未破裂开伞时为采收适宜期；所述空气相对湿度最好控制在85％～90％，培养温度最好控制在20～26℃；所述通风换气的方法可为：向地面浇水和空中喷雾，喷水时间增加到每日4～5次，通风时外部的棉帘使之和通风孔达到空气流通的效果，当菌盖长至2～3cm、盖边缘微内卷、孢子尚未弹射前为采收适期。
技术交底书【模板】
技术交底书一、本发明（实用新型）的名称
二、背景技术
三、有益效果
四、具体实施方式
五、分类注意事项
六、交底书附图
1、代理人并不是全才的技术专家，交底书尽量写得全面、清楚。
使代理人能看懂，理解发明思想。
2、对于技术词语应采用本行业标准的称谓，尽量不出现企业的俗称及习惯叫法，并且前后统一，避免出现一种东西多种叫法。
3、解决问题的是一个技术方案，应该阐述发明（实用新型）目的是通过什么技术方案来实现的，不能只有原理，也不能只做功能介绍；因为最终专利保护的是技术方案本身，而不是原理、性能、功效等。
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技术交底书模板-生物类1.发明创造名称：应简单明确地描述发明的实质内容，可按其技术特点、用途或技术和用途双重命名，发明创造名称不得超过25个字，避免使用宣传性、广告性词汇。
一种快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的方法2．背景技术及现有技术的缺陷和不足：背景技术：是对最接近的现有技术的说明，可分为大的背景技术和小的背景技术两个方面进行介绍，大的背景技术主要指该技术领域的总体状况，小的背景技术指与本发明改进的具体技术密切相关的技术状况；背景技术的详细程度，以不需要再去看文献即可理解该技术密切相关的技术状况，如果现有技术出自专利文献、期刊、书籍，则提供出处。
现有技术的缺陷和不足：1.客观评价现有技术的缺点，会带来哪些问题，这些缺点是针对本发明的优点来说的，本发明正是要解决这些问题和缺点；本发明无法解决的技术问题不必描述，本发明不能解决的缺点也不必写；2.如果找不出对比技术方案及其缺点，可用反推法，根据本发明的优点来找出由对应的缺点，还可以从结构角度推导出现有先进产品的缺点；3.缺点可以是代谢产物性能差、产量低、菌种稳定性不高等类似问题；针对前面现有技术的所有缺点，逐一正面描述本发明所要解决的技术问题。
近年来，非结核分枝杆菌感染明显增加，结核与非结核分枝杆菌在临床上引起的疾病难以区别，最具代表性的结核分枝杆菌引起的结核病酷似非结核分枝杆菌肺病，但两者对抗结核药物敏感性不同，故正确鉴定分枝杆菌在疾病诊断及治疗中至关重要。
传统的生物学鉴定方法主要依据细菌生长速度、色素产生、对药物耐受性、生化反应等，方法复杂、费时，在得到分离培养物后仍需2～4周方能获得结果，因此有必要建立一种快速诊断结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的方法，对结核病确证及临床用药具有重要的指导意义。
目前鉴别结核分枝杆菌的分子生物方法有PCR，ELISA、免疫胶体金等方法，以上各种方法虽然可能在临床上提供较好的价值，但因需要昂贵的仪器设备、繁琐的操作过程、灵敏度低等不同的原因未能在临床上大规模推广使用。
环介导等温基因扩增技术（Lo op-Mediated Isothermal Amplification，以下简称LAMP法）是日本荣研化学株式会社于2000年前后开发出的基因扩增技术，其具有快速简便、操作准确、容易普及、安全可靠的优点，目前尚未有将LAMP法应用于快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。
3．具体的技术方案描述：本部分所提供的内容涉及专利申请文件中最重要的部分，越详细越好。
对于发明专利要求保护的主题是一个技术方案，因而在这部分应当阐述本发明要解决的技术问题（即发明目的）是通过什么样的技术方案来实现的，不能只有原理和功能介绍，应当详细描述本发明的各个发明改进点及相应的技术方案。
技术方案应当通过清楚、完整地描述本发明的技术特征（如菌种名称、微生物生物学特性、应用效果试验方法及证明数据等），使本专业技术领域中的普通技术人员不需通过创造性劳动能够实施本发明为准。
对于不同类型的发明，需要采用不同的描述方式来说明其技术方案。
例如：（Ⅰ）涉及“微生物”发明的要求应当包含①微生物名称的描述：对于新菌株的情况，微生物的分类学名称相应为种名+菌株名，种名采用国际标准命名法命名，菌株名由申请人自己命名，例如：啤酒酵母（Saccharomyces cere visiae）Y-1；②生物保藏情况体现：对于新的微生物，应当注明“菌株名+保藏单位简称+保藏号”，例如：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Y-1，已于1993年9月8日保藏在中国典型培养物保藏中心，其简称为CCTCC，保藏编号为No.M93049；③微生物的生物学特性的记载：包括形态学特性、培养特性、生理特性和代谢特性等；④制造微生物的方法：描述应当以本领域普通技术人员能够制造为准，通常包括筛选、诱变、DNA重组技术等；⑤记载一种微生物的应用效果：必须在说明书中提供试验证据来证实微生物的用途和实用效果。
（Ⅱ）涉及重组DNA技术发明的要求涉及DNA分子本身的发明①DNA分子的详细结构（可以是碱基序列表示）、分子类型及来源等；②制备过程，包括工艺及条件、收集纯化步骤、鉴定方法等；③功能和用途，证实这种功能和用途的生物学实验。
涉及载体的发明制备过程，包括起始载体、制备重组的方法步骤、所用酶、处理条件等；最好描绘构建重组载体的过程的示意图。
涉及多肽本身的发明对多肽或蛋白质的名称、结构、制备方法和蛋白质的功能进行描述。
涉及转化体及其制备方法的发明描述导入的基因或重组载体、宿主、导入方法、收集转化体的方法及鉴定方法等。
本发明的目的在于提供一组用于快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的特异性引物，及一种用环介导等温基因扩增技术（LAMP技术）快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的方法。
本鉴定方法方便快捷、价格低廉，适于推广应用。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：本发明根据结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌16S RNA的特异性设计4条特异性引物，利用环介导等温扩增技术，在60～65℃，等温扩增60~90分钟，根据显色剂显示的颜色来区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。
用于快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的特异性引物，包括：内引物1：5’- TGGTCGTAGTAGGTCGA TGGGGAGTCGA TCTGCACACAGCT -3’（SEQ ID No.1）；内引物2：5’- TGCGCGATGGCGAACTCAAGGCACCGTAAACACCGTAG -3’（SEQ ID No.2）；外引物1：5’- TCATCGCCGATCATCAGG -3’（SEQ ID No.3）；外引物2：5’-CGAGTTTGGTCA TCAGCCG-3’（SEQ ID No.4）。
一种快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的方法，具体包括如下步骤：（1）模板DNA的提取：提取待检样品的DNA，所述待检样品是已鉴定为含有分枝杆菌的样品或分离的分枝杆菌；（2）环介导等温基因扩增反应：在200µl PCR管配制反应体系：引物混合液1µl，反应液 12.5µl，DNA聚合酶0.5~1µl，模板DNA 2~5µl，用灭菌去离子水补齐到25µl，然后加入20µl的密封液，将上述反应管于63~65℃反应60~90min；所述引物混合液含有上述的4条特异性引物（SEQ ID No.1~4），其中，内引物1的浓度为4~8 pmol/µl、内引物2的浓度为4~8 pmol/µl、外引物1的浓度为1 pmol/µl、外引物2的浓度为1 pmol/µl；所述反应液含有10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4、 5mM Betaine，四者的体积比为7~9：5：2~4：9~11；（3）结果判断：在上述反应管中加入1~2µl显色剂SYBR GREENⅠ，混匀后观察反应液的颜色，若呈现绿色则为结核分枝杆菌，橙色则为非结核分枝杆菌。
所述反应液中，10mM dNTP：10×ThermoPol反应缓冲液：150mM MgSO4：5mM Betaine（体积比）=8：5：3：10。
所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，浓度为8U/µl。
4．本发明创造的优点：针对上述“现有技术的缺陷和不足”并结合技术方案中的各个发明改进点作出具体说明，即以推理方式具体分析各个改进点如何带来这些优点，使得对优点的说明做到有理有据；通过对发明的分析和理论说明相结合，或实验数据说明，它可以是产率或疗效的提高、能耗、原材料、工序的节省，操作、控制、使用的简便，降低毒副作用，减少环境污染、代谢产物有药用价值、产量高、菌种存活使用时间长等。
本发明方法方便快捷，能在较短的时间内鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌，且不需要昂贵的仪器设备；灵敏度高，最低可检测出100个菌/ml；特异性好，本发明根据16S RNA基因序列设计4对引物，与目的基因的6个区域结合，具有较高的特异性。
本发明对于结核分枝杆菌或非结核分枝杆菌感染的诊断与临床用药具有较高的参考价值，适于推广应用。
5．具体实施方式及附图：具体实施方式：（1）微生物：应给出微生物的获取方式、筛选过程、生物学实验方法、用途和效果的证明方法等；（2）DNA重组：源基因的获取方法、重组制备方式、工艺条件、纯化步骤、鉴定方法等。
具体实施方式应与技术方案相一致，并且应当对权利要求书的技术特征给予详细说明，以支持权利要求书（有多种实施方式时，提供多个实施例）；还应给出相关性能、效果表征的数据等。
附图：基因工程图谱（包括HPLC图谱、实验曲线、基因重组、电泳图谱等），并针对附图进行说明。
实施例环介导等温基因扩增反应体系的准备：（1）反应液：10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4、 5mM Betaine，四者的体积比为8：5：3：10；（2）引物液：包括4pmol/µl内引物1、4pmol/µl内引物2、1 pmol/µl外引物1、1 pmol/µl外引物2，四条引物分别为：内引物1：5’- TGGTCGTAGTAGGTCGATGGGGAGTCGATCTGCACACAGCT -3’（SEQ ID No.1）；内引物2：5’- TGCGCGATGGCGAACTCAAGGCACCGTAAACACCGTAG -3’（SEQ ID No.2）；外引物1：5’- TCATCGCCGATCATCAGG -3’（SEQ ID No.3）；外引物2：5’-CGAGTTTGGTCATCAGCCG-3’（SEQ ID No.4）；（3）DNA聚合酶：Bst DNA聚合酶，浓度为8U/µl；（4）显色剂：荧光染料1×SYBR Green I。
用上述反应体系按以下方法对结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌进行鉴定。
本实施例的待检样品为已鉴定为分枝杆菌患者的痰液，当然，也可以为已鉴定为分枝杆菌患者的支气管灌洗液及其它样品，或者分离的分枝杆菌。
1、模板DNA提取：1）将3ml的痰标本置于室温；2）在痰样标本中加入2倍痰样体积的4%的NaOH；3）每隔2min涡旋振荡15s，处理15min，然后吸取1ml加入带旋盖的离心管中；4）12000r/min离心15min，去上清液；5）加入0.9%的NaCl 1ml，洗涤，12000r/min离心15min，去上清液；6）加入100µl的纯化水；7）100℃煮20min，然后冰浴10min；8）离心取上清液转移至另一支离心管中作为模板DNA。