微生物学检验肝炎病毒及检验
肝炎病毒病原生物学
HBcAg抗原很强，能刺激机体产生抗 HBc，但无中和作用。
检出高效价抗HBc，特别是抗HBc IgM则表示HBV在肝内 处于复制状态。 HBeAg：HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志。 急性乙型肝炎进入恢复期时HBeAg消失，抗HBe阳性；但
抗HBe亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中。
微生物学检查法
实验室诊断不依靠分离病毒，而采用下述方法： (一) 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪 便用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶 免疫 (EIA) 法检测HAV 的抗原。 (二) 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。 检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗HAV IgG有助 于流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。 (三) 病毒核酸检测：应用 cDNA-RNA分子杂交技 术及PCR技术检测HAV的RNA，方法特异、敏感。用 斑点杂交法可检出10－9mg核酸。
生物学性状
易感动物和细胞培养
只有黑猩猩对HBV易感，接种后可发生与人类相 似的急慢性感染。 体外细胞培养尚未成功。近年来应用基因克隆技术， 可使HBV基因转移给小鼠或转染细胞株。将病毒DNA 导入肝癌细胞后，病毒可复制并在细胞中表达 HBsAg、 HBcAg和HBeAg。有此细胞株可持续地产生Dane颗 粒。这些细胞培养可用于抗HBV药物的筛选、疫苗制 备及HBV致病机制研究等。HAV口小肠淋巴结内增殖
潜伏期
血（病毒血症）
排毒高峰
肝细胞内增殖
致病（出现临床症状）。
急性期 排毒量 Ab
机体的免疫应答也参与了肝脏的损伤，即抗HAV在 肝脏与HAV结合形成免疫复合物，或Tc(CTL)对感染 病毒肝细胞的攻击所致。
致病性与免疫性
病原微生物的检验项目及结果解释
病原微生物的检验项目及结果解释微生物检查包括：细菌、真菌、衣原体、支原体及病毒等;这对于查明致病原因和选择用药十分重要;但除细菌和真菌外,直接查找方法比较复杂;细菌培养,采集血、痰、咽试子、大便、小便、创面分泌物等标本进行培养,看有无致病菌生长,正常应为阴性或少量非致病菌；真菌检查,标本涂片或培养,检出真菌为不正常;病原微生物的检验主要是检测与l临床患者致病性有关的病原性微生物,对感染性疾病进行快速、准确地诊断,密切结合临床提出及时有效的治疗方案,防止微生物产生耐药性和医院内感染的发生;基础知识1.什么是微生物什么是病原微生物微生物是需借助光学显微镜或电-y：显微镜放大观察到的结构简单,个体微小的生物的总称;微生物的种类很多,医学微生物尤其是临床微生物主要有细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体等;微生物在自然界中广泛存在,与人类和自然界其他生物共生共存,绝大多数对人类和自然界是有益的,只有少部分可以引起人类和动植物发生疾病,这部分微生物才称为病原微生物,比如结核分枝杆菌可引起结核病,痢疾杆菌可以引起痢疾等;2.什么是细菌细菌分哪几种细菌是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体,是大自然物质循环的主要参与者;其体积微小,以微米作为测量单位,无色半透明,只有经过染色才能观察到细菌的轮廓及其结构;经革兰染色,可将细菌分为两大类,即革兰阳性菌和革兰阴性菌;细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成,有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构;根据形状则可分为三类,即：球菌、杆菌和螺旋菌包括弧形菌;3.什么是病毒病毒分哪几种病毒是结构最简单、体积最微小纳米的一类非细胞型微生物,介于生命和非生命之间的一种物质形式,其必须严格寄生在活细胞内,含有单一种核酸即脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA的基因组和蛋白质外壳,没有细胞结构,对抗生素不敏感,但对于干扰素敏感;按传播途径病毒可分为呼吸道病毒、胃肠道病毒、经性传播感染的病毒和狂犬病毒等;按感染部位与症状特征则分为肝炎病毒、出血热病毒、疱疹病毒、侵犯神经系统的病毒和肿瘤病毒等;4.什么是真菌真菌是一大类具有细胞壁和典型细胞核,不含叶绿素,不分根、茎、叶的真核细胞型微生物;细胞核高度分化,有核膜和核仁,细胞内有完整的细胞器;5.什么是支原体和衣原体支原体为没有细胞壁,呈高度多形态性,能通过滤器,可用人工培养基培养增殖的一类最小的原核细胞型微生物;由于这一类微生物没有细胞壁,能形成丝状与分支形状而称其为支原体;衣原体是一类专性细胞内寄生、有独特发育周期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物,多呈球状、堆状,有细胞壁;6.人体内的正常茵群是指什么在人的皮肤表面体表、口腔、鼻咽、肠道等腔道黏膜中都存在着细菌,对人体无害甚至有益的细菌称为正常菌群,比如肠道菌群可以将不能吸收的食物残渣进行分解成为粪便排出体外,还可以制造维生索等对人体都有益处;7.细菌检测和病毒检测,真菌检测各有哪些方法细菌可通过细菌形态结构、培养特性、生化反应、血清学试验等方法进行检测;病毒的检测包括电子显微镜观察、抗原检测、核酸检测、病毒分离培养及抗体检测等途径;真菌检测采用直接涂片法、培养法、免疫学试验及动物实验等方法;8.支原体和衣原体检测有哪些方法衣原体检测可采用酶免法、直接免疫荧光法,核酸检测技术包括DNA探针法、聚合酶链式反应PCR、连接酶链式反应LCR等和细胞培养法等;支原体实验室检测方法有：形态学检查、支原体培养、抗原检测、血清学方法和分子生物学方法;9.用于检测病原微生物的标本有哪些根据病人的症状,医生的初步考虑属于某个部位感染就留取此部位的样本进行细菌检查,常用于微生物检查的标本有血液、大便、痰、尿、脑脊液、胸水、腹水、关节液、各种拭子、各种分泌物、各种排泄物、各种穿刺液等;检验项目及正常参考值1．血液1涂片查疟原虫、利杜体：未见疟原虫、利杜体;2血培养：无细菌生长;2．痰1涂片革兰染色：未见真菌及革兰阴性杆菌;2涂片抗酸染色找结核菌：未见抗酸杆菌结核杆菌; 3痰培养：无致病菌生长;3．尿1中段尿培养：无细菌生长;224小时尿沉渣找结核菌：未见抗酸杆菌结核杆菌; 4．大便1大便培养：无致病菌生长；无志贺菌和沙门菌生长; 2大便球杆菌比例：l:3～1:5;5．脑脊液、胸腹水、关节液1涂片革兰染色：未见细菌;2涂片抗酸染色：未见抗酸杆菌;3脑脊液墨汁染色；未见新型隐球菌;4脑脊液、胸腹水、关节液培养：无细菌生长;专家解读1.为什么要做微生物检查7根据不同的病情采集不同的标本进行涂片或培养的检测,从而得出是何种致病菌,并迸一步做药敏试验,从而得出哪些药物对此菌敏感,哪些药物耐药,进而按照药物敏感性进行有针对性的使用抗生素,避免盲目用药造成的经济上的损失以及延误病情所造成的严重后果;所以,只要发热怀疑有感染都应该进行细菌培养、涂片查细菌等有关微生物方面的检验;2.什么标本要留于指定的容器中要找到患者的真正的致病菌,就要先排除外界环境中的微生物污染,医院指定的容器是经过高压灭菌的,是无菌的容器,将标本留于其中,得到的结果才是准确的结果;3.为什么标本留取时有合格与不合格之分对于医学微生物学来说,检测的目的是找出真正的致病菌,对症用药,以使患者得到及时的治疗;因此标本留取是否合格直接影响着报告结果,所以要正确留取;4.怎样正确留取痰液留取痰液时应该是留取清晨第一口痰,留痰前用清水漱口或刷牙,有义齿假牙者取下后漱口或刷牙,咳出深部痰,以黏性、脓性或血性为佳,白色泡沫痰一般为涎液,应弃之重新留取,痰液吐人专用无菌容器中;5.什么叫中段尿培养中段尿培养是诊断尿路感染的重要依据,也是治疗时使用何种抗生索的依据,非常重要;但是在临床工作中,不少病人对如何留取中段尿的方法了解不够,尿液被污染,培养结果出现假阳性;正确的留取方法是：先将外阴部洗干净,用适合的消毒液消毒后再排尿,将刚开始的尿不要,到大约排出尿液l/3后,再用消毒的无菌的管子接尿,留取2～5ml即可,盖盖送检,注意不要用手摸盖子与尿管内壁接触的部分,以确保尿液不被污染;6.怎样留取粪便标本粪便培养必须留取有脓血或有黏液的部分,如果取的部位不当就培养不出致病菌;留取的大便必须放在指定消过毒的容器中,若是放在普通的未消毒的容器中,会被容器中的细菌污染,培养出的细菌不是真实的致病菌;有的将留取的大便标本放在普通纸盒内甚至放在纸上,都是不正确的;7.为什么化脓性感染病灶中取脓汁培养阳性率反而较低脓液是由坏死的组织和吞噬了细菌而死亡的白细胞组成,都是无任何营养的物质,而细菌一般都需要在有较高营养的环境中才能生存生长,因此,在脓液中几乎没有细菌,所以取脓液培养也就难以培养出阳性结果;8.为什么培养的结果要3天甚至更久才能出结果微生物培养不是一时一会儿就可以完成的,它有其自身的生长周期;当标本送检后应及时接种到相应的培养基上,然后放置于温度、湿度恒定的孵箱中,孵育24～48小时后取出, 观察生长的细菌形状,并进行一些生化反应,从而鉴定出细菌名称;在这些生化反应中,有些是可以在几分钟之内看到结果,而大多数反应是要在24小时后才能得到结果;同时要对致病菌进行药敏试验,依然是要24小时出结果;因此最终的报告是要到第3天甚至是更久才能签发;9.为什么痰既要做涂片又要做培养由于培养的过程需要耗费的时间较长,为了辅助临床做出快速的诊断,并合理的选用抗生素,可以先进行涂片,得到大体的细菌分类,如革兰阳性菌或者革兰阴性菌;根据此大致的结果,再结合临床的症状及其他检查,选用合适的药物;10.痰涂片可队代替痰培养吗痰涂片只是一个大致的分类结果,并不能鉴定出是何种致病菌,更无法得到此菌对哪类的药物敏感,因此为了得到精确的结果,就要进行培养,从而得到鉴定和药敏的结果;11.尿培养为什么出现污染就要重新留取尿标本如果患者是尿路感染的话,其致病菌应该是单一的,不会超过两种,所以当培养的结果出现三种甚至更多的时候,应考虑是否是标本污染,为了结果的准确性,建议患者重新留取标本送检以排除外界污染的影响;12.血培养的培养时间为什么比痰培养的时间长血培养的时间一般为7～10天;正常人的血液中是没有细菌生长;当某些细菌入血后,其数量比较少,为了对其进行鉴定并得到药敏结果就要先对其进行增殖,即让其在适宜的环境下繁殖,当增殖到一定数量后进行进一步的鉴定和药敏试验;13.为什么尿培养要进行菌落计数尿路感染通常是指细菌性感染,故尿液细菌数量成为其诊断的依据,而单纯根据患者的临床症状及体征难以确诊,因此尿培养对尿路感染的诊断及治疗很有意义;根据尿菌落计数的多少来区别是标本污染还是尿路感染;一般每毫升在1万个以下多为污染；10万个以上为真性细菌尿,可肯定为感染；l万～10万个为可疑,应重复培养;14.粪便中主要致病菌包括哪些1沙门菌属可导致伤寒病；2志贺菌属可导致痢疾病；菌可导致出血性肠炎；3大肠杆菌O1574霍乱弧菌可导致霍乱病；5金黄色葡萄球菌可导致化脓性肠炎；6变形杆菌等可导致急性肠炎；7白色念珠菌等可反映出抗生素使用过量,应尽快停止使用抗生素;15.粪便的球杆菌比指什么球杆菌比是用于观察肠道菌群是否失调的指标,是针对长期大量应用广谱抗生素患者监测肠道菌群变化,防止二重感染的必要手段;所谓球杆菌比就是粪便中球菌与杆菌数量的比值;正常时以杆菌为主;16.分泌物、脓液等如何留取标本此类标本如果直接留取会将皮肤表面的细菌一起采样,从而导致培养的结果不能准确反映出真正的致病菌;因此,在采样时应先进行局部消毒清洗,然后从深部采样,以得到真正的致病菌;采样过程可以由医护人员完成;防患未然1.如何根据培养结果识别标本被污染当看到一份阳性的细菌报告时,应将培养结果与培养的标本相结合考虑,因为特定的标本有特定的致病菌,比如痰培养的致病菌就不会是甲型链球菌和奈瑟菌,但在尿标本中培养出甲型链球菌就可能是致病菌;同时不能仅以一次的培养结果就作出判断,应多次送检;当多次培养的结果一致时,就可判定此菌是致病菌而非是污染而来;2.化脓性感染灶培养标本的准确留取方法是什么化脓性病灶一般位于皮肤表面,破溃出脓,要留取细菌培养标本千万不可马虎大意,取点脓液就送检;准确的取样方法是,将脓液挤干净后在肉芽生长处取标本送培养,因为肉芽生长处营养丰富,细菌较多,容易培养出阳性结果;如果化脓性病灶尚未破溃,可以采用注射器穿刺到一定深度,估计在肉芽附近的地方抽取标本送检,培养结果会比浅处取出的标本效果好;3.为什么要反复采血进行血培养血培养的标本应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集做细菌培养;只有在高热的时候,细菌才会释放在外周血中,同时由于其含量极少,所以为了提高阳性率需连续采血进行培养;4.如何防止尿路感染肾脏排泄的尿液,对膀胱和尿道起着冲洗作用,有利于细菌的排出,每天大量饮水,2～3小时排尿l次,能避免细菌在尿路的繁殖,可降低尿路感染的发病率,这是预防尿路感染最实用有效的方法;要经常注意阴部的清洁,要勤洗澡,且不要用池浴或盆浴,要勤换内裤,在新婚、月经、妊娠和产褥期,尤应注意;女婴要勤换尿布;5.怎样防止呼吸道的细菌感染注意均衡饮食,进行运动,有足够休息,减轻压力和避免吸烟,以增强身体的抵抗力,同时保持良好的个人卫生习惯,保持室内空气流通;如有呼吸道感染病症,应尽早找医生诊治,愈早医治,痊愈机会愈高;6.如何预防细菌性痢疾注意个人卫生,喝开水不喝生水,用消毒过的水洗瓜果蔬菜和碗筷及漱口；饭前便后要洗手,不要随地大便；吃熟食少吃凉拌菜,剩饭剩菜要加热后吃；做到生熟分开,防止苍蝇叮爬食物；得病后要及时就医治疗;走出误区1.痰涂片未找到结核杆菌就能排除肺结核了吗痰涂片未找到结核杆菌不能排除肺结核;因为结核杆菌不是随时都能随痰排出的,应采集患者在清晨漱口,深咳留取的第一口痰,并且要连续3天送检以提高检出率;2.痰培养结果正常是没有培养出细菌吗痰是从呼吸道经口腔排出的,正常人的口腔中也含有大量的正常菌群,主要包括甲型链球菌和干燥奈瑟菌,这些菌对人体是不会致病的;因此,痰培养的正常结果可以包括此两种菌; 3.当痰培养没有培养出致病菌就可队断定没有细菌感染吗从患者的标本留取到标本的运输和接种,各个环节都会直接影响培养的结果;首先患者留取的痰标本质量,直接决定结果的准确性;当标本不合格时,即便有致病菌也可能培养不出来,从而延误诊断和治疗;留取痰液时应该是留取清晨第一口痰,留痰前用清水漱口或刷牙,有义齿者取下后漱口或刷牙,咳出深部痰,以黏性、脓性或血性为佳,白色泡沫痰一般为涎液,应弃之重新留取,痰液吐入专用无菌容器中;标本留完后,应立即送检,防止标本干涸;因此,为了提高致病菌的检出率,应适量增加送检次数;4.尿培养阴性可队断定没有尿路感染吗尿培养阴性对排除尿路感染有一定价值;但是有时会出现假阴性,包括以下几种可能：1外阴消毒对尿培养影响很大,消毒液过多而混入尿标本,抑制了细菌生长,出现假阴性结果；2尿培养前曾使用抗菌药物,可出现假阴性；3膀胱内尿液停留时间短不到6小时,或饮水太多,稀释了尿中细菌,可有假阴性；4血源性急性肾盂肾炎、肾实质内小脓肿形成,慢性肾盂肾炎黏膜病变趋向痊愈,而肾实质病变依然存在,或尿路梗阻并存感染灶与尿路不相通,则尿中细菌往往呈阴性；5尿路感染的排菌可呈间歇性,如慢性肾盂肾炎没有急性症状时,尿培养可为阴性,但在其急性发作时,尿培养则常为阳性;由此可知,对尿细菌学检查结果的判断,必须结合临床表现及其他检查,有时还要反复多次进行;5.尿培养阳性结果就是尿路感染吗尿培养出现假阳性有可能是尿液收集不新鲜,放置时间超过l小时,导致细菌大量繁殖,从而出现假阳性;因此应及时留取标本送检;6.粪便中有细菌就是细菌性痢疾吗粪便是人体消化系统自口腔中摄入食物,经过胃、肠一系列消化吸收后,排出体外的食物残渣;它的形态、颜色、成分可直接反映出人体整个消化系统包括胃、十二指肠、肝、胆,空肠、回肠的功能是否健全、有无异常或局部感染病灶等;正常大便中应有大量的细菌,主要是大肠杆菌,它是肠道的主要寄生菌,同时它形成了一个正常菌群,其作用主要是：1维护肠道的消化吸收功能；2抵御外侵细菌;细菌性痢疾是由志贺菌属引起,因此,题中的说法是不正确的;7.痢疾病人大便的细菌可以直接涂片看痢疾杆菌吗痢疾是由志贺菌引起的,由于粪便本身就有细菌,因此,直接涂片是无法看到志贺菌的,只有经过培养,进而才能鉴定其类别;8.药物敏感试验表示敏感的药物杀菌效果就肯定好吗药物敏感试验都是将病原微生物从患者身上分离出来;然后体外培养,得到纯体后再进行鉴定和药敏试验,由于体外和体内的环境不同,有的细菌可以利用体内的一些物质生成抵抗抗生素的成分,使抗生素失效;所以会出现体外敏感,而体内耐药的情况;同时在体内用药的剂量与药敏试验的实际剂量的差异也会导致药物敏感性与临床效果出现偏差。
肝炎病毒微生物学检验复习重点
肝炎病毒（hepatitis virus）1.肝炎病毒：①以侵害肝脏为主的一组病原体；②病毒性肝炎感染率和发病率非常高；③属于法定乙类传染病；④五种：甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒；2.五类肝炎病毒比较（一）HA V1.临床意义：①粪－口途径传播；②污染食物、水源、海产品及食具等；③只有急性期，终身免疫；④1988年上海HA V流行；2.基因组：①单股正链RNA；②5′NCR－ORF－3′NCR组成；③ORF分为P1、P2和P3三个功能区3.生物学特性：①敏感动物：灵长类；②敏感细胞：HEK，Vero；③理化特性与抵抗力：较强的抵抗力；尤其耐酸、耐热，耐有机溶剂；4. 实验诊断（1）标本采集：①血清学检查：血清或血浆，IgM；②HA V抗原检测：粪便；③病毒颗粒观察：肝活检组织；（2）形态学检查：粪便：①直接电镜技术；②免疫电镜技术；③固相免疫电镜技术；（3）实验诊断A 抗体检测：IgM：用于急性感染的早期诊断，常用IgM抗体捕捉ELISA检测法IgG：双份血清IgG抗体上升>4倍为阳性，用于流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价，常用间接ELISA检测法B .抗原检测：常用ELISA双抗体夹心法，难以常规开展（4）核酸检测：核酸分子杂交、逆转录PCR（RT－PCR）；5. 报告及解释：在判断急性、新近或者既往感染病毒抗原或核酸、IgM型抗体、IgG型抗体（二）HBV1. 传播途径（1）血源性传播: 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等（2）母婴垂直传播：宫内传播、分娩时微小皮损处传播、产后母婴密切接触（3）接触传播：日常接触或性接触2. 流行病学：全球性流行但地区差异很大；我国为高发区，HBsAg+率9.75%，呈家族聚集性；农村高于城市，南方高于北方，男性高于女性；20~29岁为发病高峰。
3. 乙型肝炎的临床表现潜伏期：30~180d；隐性感染→健康携带者；愈后→恢复期携带者；急性肝炎；慢性肝炎：轻型、重症；肝癌、肝硬化：DNA整合、X基因、HBsAg；关节炎、肾小球肾炎：HBs免疫复合物；致病机制：免疫病理作用；4. 生物学特性：嗜肝DNA病毒科、正嗜肝病毒属大球形颗粒，Dane颗粒，感染性病毒体；小球形颗粒，HBsAg；管形颗粒，HBsAg；5. 分型与变异血清型、基因型、变异性（多样性变异，4个区均容易变异，从而逃避宿主免疫，引起漏检）6. HBV的复制方式（1）吸附并进人肝细胞后，脱去衣壳，病毒的DNA进入肝细胞核内。
肝炎病毒讲义
18
肝炎未分型 35597
16
2012年 发病数 死亡数
1380800
747
24453
5
1087086
582
201622
108
27271
28
40368
24
与去年同期比（％）
发病率增减
死亡率 增减
-9.79 -1.44
-9.48 -11.85
0.26 1.81 -12.26
-75.00 -6.02 41.25
过分强烈的细胞免疫
大面积肝细胞损伤
爆发型肝炎（重症肝炎）
免疫功能正常
隐性感染或急性肝炎
免疫功能低下
慢性肝炎或慢性活动性肝炎
4. 病毒变异与免疫逃逸
S基因变异：a抗原表位基因发生变异，导致 HBsAg抗原性改变，出现免疫逃逸和“诊断逃 逸”。
PreC基因的变异：1896 nt G-A突变导致第28位 TGG变为TAG，使PreC基因不能转译出完整的 HBeAg。
HBsAg和抗-HBs的免疫复合物沉积于肝内，可 使肝毛细管栓塞，导致急性肝坏死，表现为重 症肝炎。
免疫复合物沉积于肾小球基底膜、关节滑液囊 等处，激活补体，导致Ⅲ型超敏反应
3.自身免疫反应引起的病理损害
HBV感染使肝特异性脂蛋白抗原（liver specific protein, LSP）暴露，LSP作为自 身抗原诱导机体产生自身抗体，通过直接 或间接作用，导致肝细胞损伤。
肝炎病毒
Hepatitis Virus
主 甲型肝炎病毒 HAV 要 乙型肝炎病毒 HBV 包 丙型肝炎病毒 HCV 括 丁型肝炎病毒 HDV
戊型肝炎病毒 HEV
中国不仅是一个人口大国，而且也是病 毒性肝炎的高发区。目前已知的甲、乙、丙 、丁、戊、庚及TTV型肝炎，在我国均有发 生，其中尤以甲、乙、丙、戊4个型别的流
实验室检验项目的分类
实验室检验项目的分类
实验室检验是临床诊断过程中必不可少的一部分。
实验室检验的项目
很多，按照其检验内容和目的，可分为以下几类：
1. 临床生化检验：主要检测患者的生理、代谢功能和营养状态等方面
的指标，如血浆蛋白、血压、血糖、脂肪酸等。
2. 体液检验：主要检测人体各种体液的化学、生理、免疫学等方面的
指标，如脑脊液、胸腔积液、尿液等。
3. 免疫学检验：主要检测患者的免疫状态和免疫功能，如人类免疫缺
陷病毒(HIV)检测、肝炎病毒检测等。
4. 微生物学检验：主要用于细菌、真菌、病毒等病原体的检测和鉴定，包括细菌药敏试验、肺结核分枝杆菌检测等。
5. 分子生物学检验：主要检测人体基因、DNA、RNA等分子水平上的信息，如PCR检测、基因突变检测等。
以上五类实验室检验项目是临床医学中常用的检测分类。
在医生选择
检测项目时，应根据不同患者和不同疾病发展的特点和需要，选择相
应的检测项目，以便更快、更准确地进行病情诊断和治疗。
此外，在进行实验室检验时，应确保检验方法、设备和材料的质量和安全性，并保护患者的隐私和个人信息，提高医学检验的可靠性和准确性。
食品卫生微生物学检验总则
食品卫生微生物学检验总则一、引言食品卫生微生物学检验是评价食品卫生安全的重要方法之一。
食品中存在着各种微生物，包括细菌、真菌、病毒等，有些微生物可能对人体健康造成危害。
食品卫生微生物学检验的目的是检测食品中的微生物数量和种类，评估食品的卫生状况，确保食品安全。
本文将对食品卫生微生物学检验的总则进行介绍和说明。
二、适用范围本总则适用于对各类食品进行微生物学检验的实验室和机构。
食品包括但不限于生鲜食品、加工食品、饮料等。
三、检验项目1. 总大肠菌群检验总大肠菌群是指生活在动物消化道内的肠道细菌，其检测是食品微生物学检验的基础项目。
总大肠菌群的检验可以通过测定菌落计数或采用分子生物学方法进行检测。
2. 大肠杆菌检验大肠杆菌是从动物的肠道中分离出来的一类菌株，其存在通常表示食品存在粪便污染。
大肠杆菌检验通常采用培养基培养的方法进行，辅助以相关的生化试验。
检验结果可以通过菌落计数或PCR等方法进行判断。
3. 病原菌检验食品中可能存在一些致病菌，如沙门氏菌、葡萄球菌等。
病原菌检验需要通过细菌培养和相关生化试验来确定食品中是否存在致病菌。
4. 霉菌检验某些食品容易受到霉菌的污染，如果蔬、坚果等。
霉菌检验可以通过培养和血平法来检测食品中的霉菌数量和种类。
5. 病毒检验食品中可能存在一些病毒，如诺如病毒、肝炎病毒等。
病毒检验一般采用分子生物学方法进行，如PCR、RT-PCR等。
6. 其他检验项目根据食品的不同特点，还可以针对特定的微生物进行检验，如乳酸菌检验、酵母菌检验等。
四、检验方法食品卫生微生物学检验可以采用传统的培养法和分子生物学方法。
具体的检验方法应根据食品的特点和检验要求确定。
1. 传统培养法传统培养法是检验微生物最常用的方法之一。
它通过将食品样品在相应培养基上培养，并观察和计数菌落来确定微生物的数量和种类。
常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌培养基等。
2. 分子生物学方法分子生物学方法包括PCR、RT-PCR、荧光定量PCR等技术。
肝炎病毒—医学微生物学
甲型肝炎的预防
1. 切断传播途径：注意个人卫生、不生食；
粪便、污水管理；食品管理；灭蝇；宣教。 2. 特异性预防： 疫苗：减毒活疫苗，灭活疫苗，蛋白疫苗； 3. 被动免疫：丙种球蛋白
二、乙型病毒性肝炎
（一）病原学
HBV属 嗜肝DNA病毒
土拨鼠肝炎病毒（WHV）
地松鼠肝炎病毒(GSHV)
•单纯疱疹病毒（HSV）
•风疹病毒(RV)
它 们 均 非 嗜 肝 病 毒
所 致 肝 损 害 为 继 发 性
一、甲型病毒性肝炎
（一）生物学性状
● HAV为单股正链 RNA 病毒，归类于小RNA病 毒科肝炎病毒属
●病毒结构： 病毒直径27 nm，无囊膜，为正20面体球形颗粒
●抵抗力：
HAV体外抵抗力较强，低温下可长期存活 100 ℃加热 5 分钟可使病毒灭活
2004年12月，报告发病数居前五位的 病种为：肺结核、乙型肝炎、细菌性和 阿米巴性痢疾、淋病、梅毒，占发病总 数的85．17％；死亡数居前五位的病种 为：狂犬病、肺结核、艾滋病、乙型肝 炎、流行性出血热，占死亡总数的 86．19％。[
Dane particle
生物学性状
Complete particle, infective HBV spherical，double capsid球形,双层衣壳。 outer capsid=envelope 外衣壳=包膜(脂质双层+蛋白质) HBsAg等 inner capsid内衣壳： HBcAg、HBeAg internal内部： DNA--- circular, double- stranded环状双链 DNA polymerase 多聚酶
鸭乙型肝炎病毒（DHBV）
甲型肝炎病毒微生物学及其检验PPT课件
15
病毒感染的临床检测
病毒培养及电镜检测目前在临床上均 不能常规开展
ELISA法检测抗HAV-IgM是目前诊断急性 甲肝最可靠、最敏感、应用最广的方法。
抗HAV-IgG检测：主要用于人群感染率的调 查
也可进行PCR、核酸杂交，但也不常用
18
• 口—口咽部/唾液腺（增值）—肠黏膜、 局部淋巴结（大量增殖）—血液（病毒 血症）—肝脏
19
潜伏期15—50天 转氨酶升高前5—6天
血液 粪便 发病两周 血清及肠道中产生—HAV IgG/IgM 粪便中午病毒排出
20
皮肤黄疸
21
巩膜黄染
22
23
以往认为HAV对肝细胞有直接杀伤作用。 目前观点： HAV导致肝细胞损伤的机理以宿主免疫反应为主。 （特异CTL、细胞因子、中和抗体）
26
结束语
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
讲师：XXXXXX
XX年XX月XX日
27
10
• 第一节 甲型肝炎病毒
11
甲型肝炎病毒
12
一 生物学特性
• 形态结构 球形 无包膜 单链RNA 衣壳抗原性
13
二 培养特性
1.动物培养 ： 静脉注射或经口---
发生肝炎-----粪便（早期）、血清（恢复 期）
2. 细胞培养：
14
பைடு நூலகம்
★ 病毒感染血清标志物的临床检测
病毒培养及电镜检测目前在临床上均不能常规开展 ●ELISA法检测抗HAV-IgM是目前诊断急性甲肝最可
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物学检查
HIV抗体检测 初筛试验 确证试验 HIV抗原检测 核酸检测
防治原则
广泛的宣传教育 建立检测系统 加强检疫 切断传播途径 治疗:AZT、3TC
Gp120 Gp41
包膜蛋白
P14内膜蛋白
P24衣壳蛋白 RNA
逆转录酶
HIV结构示意图
病毒脱壳
病毒 进入细胞
病毒包膜与 细胞膜融合
HIV的Gp120与 细胞表面的CD4结合
致病机制
细胞免疫介导的免疫损伤 免疫复合物性的免疫损伤：肝外损伤 自身免疫反应的免疫损伤 病毒变异：逃逸免疫
免疫性
抗-HBs：一般于感染后4～5月阳转，持续6 个月或数年，是保护性抗体 抗-HBc：一般于感染后3～5周阳转，无保 护作用，IgM可作为急性一干的诊断指标， IgG是HBV既往感染的指标 抗-HBe：一般在HBeAg消失时出现，是病 情开始恢复的征兆
致病机制
主要侵犯带有CD4分子的细胞(如TH细胞) HIV对CD4+T细胞的损伤 CD4+T细胞减少 CD8+T细胞相对增多 CD4+/CD8+比例倒置 HIV造成单核细胞损伤 HIV造成神经细胞损伤
HIV引起的免疫应答
HIV引起的体液免疫与细胞免疫不能有效的 清除HIV HIV的免疫逃逸 HIV感染导致免疫功能低下 HIV整合于细胞染色体 HIV变异 HIV损害各种免疫细胞
HIV是获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的 病原体 HIV属逆转录病毒科，慢病毒属 HIV有HIV-1和HIV2两型
生物学特性
形态结构：球形，RNA病毒，双层衣壳， 有包膜 HIV的复制 HIV的培养:黑猩猩和恒河猴是HIV感染的 动物模型 抵抗力:不强
传染源和传播途径
传染源: 患者和HIV无症状携带者 传染途径 性接触 血液传播 母婴垂直传播
HBV诱导免疫应答对机体的双重作用
免疫保护作用 抗－HBS和抗前S对病毒的中和作用 CTL对细胞内病毒的清除作用 免疫损伤作用 肝细胞损伤 肝外损伤
机体免疫状态与HBV感染的转归
免疫功能正常－－隐性感染或急性乙肝， 病毒被清除 免疫低下－－慢性乙肝 免疫过强－－暴发性肝炎 免疫耐受－－HBV无症状携带
HBV与原发性肝癌
流行病学方面 动物模型 病毒分子结构
微生物学检查
HBV抗原抗体系统的检测 HBV五项指标
HBsAg、抗HBs HBeAg、抗HBe 抗HBc
HBV抗原抗体检测的应用
乙型肝炎的诊断 判断传染性 判断预后 筛选献血员 检测疫苗接种效果 流行病学调查
HBV抗原抗体检测结果的临床分析
HBcAg
存在于Dane颗粒中 不易在血液中检出 可在感染的肝细胞表面存在 刺激机体产生抗-HBc（IgG、IgM） 血清抗-HBcIgM的检出，表明病毒在肝细 胞中复制
HBeAg
存在于Dane颗粒中 游离存在于血液中 是病毒复制及强传染性的指标 产生抗－HBe，是预后良好的征象
突变株可不产生HBeAg
乙肝病毒的复制
乙肝病毒的三种颗粒
Dane结构
Dane颗粒
核心：双股不完全闭合的DNA 和DNA 聚合酶
内衣壳：20面立体对称
外衣壳：相当于病毒的包膜
HBV感染的分布
甲型肝炎病程
HAV体内过程
HAV电镜图
HAV病毒结构
逆转录病毒
逆转录病毒是一组含有逆转录酶的 RNA病毒。
人类免疫缺陷病毒（HIV）
HBsAg HBeAg 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc
结果分析
＋
－－
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
－ － HB V感染或无症状携带
＋
＋－
－ － 急慢性乙肝或无症状携带
＋
＋－
－ ＋ 急慢性乙肝（大三阳）
＋
－－
＋ ＋ 趋于恢复（小三阳）
－
－＋ ＋＋
－
－ ＋ ＋ － 既往感染恢复期
－
－－ －＋
－
－＋
－ － 既往感染或接种过疫苗
防治原则
控制传染源，切断传播途径 人工自动免疫： 疫苗（血源性、基因工程) 人工被动免疫： 高效价人血清球蛋白（HBIg）
丙型肝炎病毒（HCV）
球形，有包膜，属RNA病毒 传染源：病人、病毒携带者 传播途径：输血、注射、性接触等 引起丙型肝炎 比乙型肝炎更易转为慢性 病后免疫力不牢固 ELISA法检测抗HCV抗体
+ssRNA +ssRNA:-ssDNA
ssDNA:+ssDNA +ssRNA
HIV复制
释放
装配
转译 病毒蛋白
HIV
复 制 示 意 图
5月
8月
1年
5年
乙肝病毒感染经过与免疫反应关系（隐性感染）
HBeAg
抗HBc(IgG) HBsAg
抗HBe
0 3月
1年
10年
20年
30年
乙肝病毒感染经过与免疫反应关系（慢性持续性肝炎）
HBV基因结构
长链
环状双股不完全闭合 的DNA
短链
长链有4个开放读码 框架，分别为：
S区 C区 P区 X区
DNA聚合酶
乙型肝炎病毒
是引起乙型肝炎的病原体 乙型肝炎易发展为慢性乙肝 乙肝病毒在世界范围内传播 乙肝病毒携带者达10％以上
生物学形状
形态与结构 大球形颗粒:又称Dane颗粒，是完整的HBV 小球形颗粒:是病毒组装后过剩的衣壳蛋白 管形颗粒：由小球形颗粒串连而成
乙肝病毒的基因
短链：为正链，长度是长链的50％～100％ 长链：为负链，含HBV全部遗传信息 S区：编码HBsAg和前S1抗原和前S2抗原 C区：编码HBcAg和HBeAg P区：编码DNA 多聚酶 X区：编码HBxAg(可能与肝癌发生有关)
乙肝病毒的复制方式
吸
附
、
脱
穿
壳
入
肝
细
胞
前基 因组
转译外衣壳蛋白 转译内衣壳蛋白 复制子代核酸
组装 释放
HBV的抗原组成
HBsAg:
以三种不同形式存在于患者血清中 HBsAg亚型的分布有明显地区差异,并与种族有关 血清HBsAg是感染HBV的重要标志 HBsAg刺激机体产生的抗-HBs是中和抗体,对机体 有保护作用 关于前S1和前S2抗原
丁型肝炎病毒（HDV）
属缺陷病毒，由HBsAg构成其外壳 经输血等途径传播 只感染HBsAg阳性的人 与HBV协同或同时感染
戊型肝炎病毒（HEV）
球形，无包膜，属RNA病毒 传染源：病人 传播途径：粪口途径 病情较重，孕妇感染死亡率高
HBeAg
抗HBs
HBsAg
抗HBe
抗HBc(IgG)
0 3月
微生物学检验肝炎病毒及检 验
甲型肝炎病毒
是引起甲型肝炎的病原体
微生物学检查
免疫电镜检测病毒颗粒 免疫学方法检测病毒抗原 检测抗HAVIgM是确诊甲型肝炎的依据 方法：ELISA法和放射免疫测定 PCR法：检测病毒核酸 检测抗HAVIgG主要用于流行病学调查
防治原则
特异性预防：接种甲型肝炎病毒减毒活疫苗 紧急预防：肌肉注射丙种球蛋白 一般性预防：加强饮水和食品的卫生监督管 理
HBV其他生物学性状
培养: ◆黑猩猩是HBV最敏感的动物模型 ◆细胞培养已获成功 抵抗力:强 ◆能耐受低温、紫外线、干燥和一般消毒剂 100℃10分钟、高压蒸汽灭菌、0.5％过氧 乙酸 等能使HBV灭活
传染源与传播途径
传染源：乙肝病人、无症状病毒携带者 传播途径：血液、血制品等途径传播母婴垂直传 播 临床表现： 无症状携带者 急性乙肝 慢性乙肝暴发性肝炎 肝外表现：发热、皮疹、血管炎等