自身抗体实验室检测及意义分析
72例自身免疫性肝病患者检测结果分析
自身免 疫性 肝病 是 一种 病 因和 发 病机 理 尚不 完全 清楚 的肝 脏疾 病。 以前 ， 由于临 床医生 对该 病 的认 识不 足 ， 容易误 诊 、 诊 。 漏 近年 ， 随着 自身免疫 性肝病 相关 自身 抗 体谱 的发 现及 其 临床检 测 的开 展 ，该病 已引起 临 床 医生 的高度 重 视 。我 院实 验 室 ２０ ～ ０８ ２０ 年开 展 自身 免疫性 肝病 相关 自身 抗体谱 检测 １５ 次 ， ０９ ４人 确诊 为 自身免疫 性肝病 ７ 例 。 将其 实验室 检测 结果 总结 分析如 下 。 ２ 现
２１ ０ ０年 ５月
ｎＡ检测 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ 灵敏 度可 达 ０ ２ｇ ｌ １ｎ／ ，而 Ｅ Ａ Ａ检测 的灵 敏 度 ｍ Ｌｓ 是 ２ｇ ｌ 大地提 高 了检 测 的灵敏 度 。 ｎ／ ， ｍ 极 传 统的 Ｅ ＩＡ方法 对 乙肝两 对半 血清 标志 物定 性测 定 ， ＬＳ 只能 判断 其阴 阳性 ， 法得 知其 真 正 的浓 度 ， 无 给临 床诊 断和 治疗 带来 许多不 便 。而 Ｈ Ｖ血 清标 志物 定量 检 测能 较为 准确 地反 映其 血 Ｂ 清 中的含量 ， 以间接反 映体 内 Ｈ Ｖ复 制活 跃 程度 ， 临床药 物 可 Ｂ 对 疗效评 价具有 重要 意义 。 两对 半定量 检测 结果 的有 效性 在检测 的 过程 中直接 进行 了标 准量 化质 控 ，分 高 中低及 三个 定 值 质控 品； 两对 半定性 检测 的室 内质 控 ， ＬＳ Ｅ ＩＡ只能 间接 进行 质控 ，分 阴阳 性质 控 品 ， 胶 体金 检测 则 不能 进行 严 格 的室 内质控 ， 而 来 免疫 从 保证 检测结果 的有效 性 和溯 源 性 。 在 部分 慢性 乙肝患 者 中 ，由于机 体缺 乏对 Ｈ Ｖ包膜 蛋 白的 Ｂ 免疫 应答 ， ＢＡ 表 达较 低 ，酶标 检测 可 出现 Ｈ ｓ ｇ 抗一 Ｂ Ｈ ｓｇ ＢＡ 和 Ｈｓ 均 阴性 的情 况 ， 量检 测则 可 避免 这 些情 况 的发 生 ， 正确 判 断 定 为 病情 提供依 据 。定量 分 析 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ 和抗 一 Ｂ 的浓度 变 化 ， Ｈｓ 可预 见 急性 乙肝是 否处于恢 复期 。定量 分 析 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ 和抗一 Ｂ 的浓 度变 Ｈｅ 化， 可反映病 情 变化 和治疗 效果 。定 量 检测 能 明确 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ 向抗 一 Ｈｅ Ｂ 转换 的时期 ， 即表 现 为 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ 浓度 下 降 和抗 一 Ｂ 升 高 的过 Ｈｅ
自身抗体在诊断SLE中的临床意义及SLE的临床诊断
自身抗体在诊断SLE中的临床意义及SLE的临床诊断摘要：系统性红斑狼疮（SLE）的临床诊断，国内仍采用1985年制订的11条依据，其中实验室内自身抗体的检查仍是诊断SLE的主要依据。
通过854例SLE病人的ANA、A-RNP、A-SM、ADS-DNA抗体的血清学检查结果的统计、结合临床进行详细分析、阐述了以上四种自身抗体检查在SLE诊断、鉴别诊断、病情变化、治疗效果及估计预后方面的重要意义，对阴性结果的临床意义也作了详细分析。
主题词：系统性红斑狼疮，实验室诊断，自身抗体鉴别诊断1、资料与方法采用1985年至1992年南京军区总医院免疫实验室资料，从临床诊断为SLE的病人中，筛选出854例同时进行ANA、A-RNP、A-Sm、ADS-DNA抗体血清学检查结果，按阴性、阳性统计见附表。
检查方法均为国内普通采用的实验方法，均以WHO制定的阳性标本作对照。
ANA的检查采用间接荧光抗体法，鼠肝片为底物片，待测血清1：10稀释。
A-Sm, A-RNP抗体的检测采用对流免疫电泳法，ENA抗原由小牛胸腺制备，待测血清不做稀释，同时以热处理过的ENA抗原做A-SM抗体沉淀线的鉴别。
ADS-DNA抗体的检查，分别采用变性DNA和短膜虫作包被抗原的ELISA方法，同时实验，对比后确定实验结果，待测血清均做1：10稀释。
2、结果在统计的854例SLE病人中，男女比例为1：5，年龄最大的70岁，最小的13岁，以25至35岁的女性青年最多。
ANA、A-RNP、A-SM抗体的阳性率接近于美国关节炎基金会1982年统计的数据，ADS-DNA抗体的阳性率低于美国关节炎基金会1982年统计的数据，可能与国内采用ELISA测定法有关。
3、讨论ANA阳性可见于多种结缔组织病、恶性肿瘤及肝性疾病，SLE病人ANA阳性率虽然很高，但无诊断特异性。
如果进一步分型检查，可提示有关SLE特异性自身抗体的存在。
ANA阳性滴度变化与病情及治疗密切相关，病情活动时可呈强阳性或滴度增高，病情经治疗缓解后ANA滴度下降甚至呈阴性。
临床实验室风湿病自身抗体检测室间质评结果回顾
免疫吸附试验" 1RZY-# !免疫印迹试验" jP# ) 在各 定结果上传至国家风湿病检验中心!由其对检测结果
项室内质控合格的基础上!试验前认真核对好室间 进行评价!各项质控品检测及评价结果详见表 #*表 !)
质控品的批号和编号!调整好试验各项条件和仪器
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试剂(采用德国欧蒙生物技术有限公司生产的 试剂)
设备!并严格按照 YSN文件及仪器试剂使用说明进 行试验) 为了保证检测质量和结果的准确性!我室 采用了双份质控品同时进行检测!分别得到的滴度 和 Y ]0S值结果一致)
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分别采用间接免疫荧光检测试验" ZZ/# ! 酶联
在规定时间内完成样本的检测!通过互联网将测
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自身免疫病和自身抗体检测详解演示文稿
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IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型
细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期
均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原
发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致 敏淋巴细胞的现象。
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与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病：
是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为
2%，而第一级HLA--B27阳性的亲属
中，发生强直性脊柱炎的危险性达
20%。
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自身免疫病的基本特征
系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率也 较高，在SLE第一代亲属中发病率达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵 双胎更为常见 。在1980年的调查中35组 单卵双胎的患者中，有22组患SLE，共患 病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1组患 病，为12.5%。
免疫印迹法(IB）：
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自身免疫病常规实验室检查
• 血常规：
• RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
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自身免疫病常规实验室检查
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自身抗体的检测方法
金标免疫斑点法
自身抗体检测的室内质量控制
自身抗体检测的室内质量控制室内质量控制是指医学实验室内为达到质量要求所进行的操作技术和活动，即检验人员按照一定的频度连续测定稳定样品中的特定组分，并采用一系列方法进行分析，按照统计学规律推断和评价本批次测量结果的可靠程度，以此判断检验报告是否可发出，及时发现并排除质量环节中的不满意因素。
下面将从四个方面介绍关于自身抗体检测开展室内质控的应用要点。
一、质控品的选择1、质控品的基本要求：无基质效应、稳定性好、均匀性好、定值与非定值、质控品水平（阴性、弱阳性、强阳性）。
国家标准GB/T20468-2006《临床实验室定量测定室内质量控制指南》和行业标准WS/T641-2018《临床检验定量测定室内质量控制》，均对质控品特性作出如此要求：质控品应与患者待测样本具有相似或相同的基质。
质控品应均一和稳定，如条件允许，可储存一年或以上的用量。
瓶间变异性应小于分析系统的变异。
2、质控品的来源：检测系统配套质控品、第三方质控品、自制质控品。
3、选用第三方质控品时，需要评估浓度水平的适用性，根据质控品说明书，若有提到的“适用仪器”与实验室使用的仪器一致，则可以直接使用质控品标明的浓度水平。
若无，则应使用本实验室的检测方法进行验证，评价其水平是否满足相应浓度要求。
4、如果没有商品化质控品，实验室可以自制质控品。
二、自制质控品1、质控品原则：①选择人血清基质，添加剂尽可能少，无溶血、无黄疸、无乳糜血、无传染性；②均匀性好，变异小；③稳定性好，至少半年用量的相同批号，复溶后稳定；④浓度水平要满足实验要求。
2、质控品（QCM）自制方法流程，可以参照CNAS-GL005:2018(IDT ISO G80:2014)：QCM的技术要求→原料采集→制备→分装和包装→均匀性评估→定值/赋值→稳定性评估→形成文件/信息→储存。
3、质控品水平：①阴性质控品：目标项目人阴性血清混合物。
②阳性质控品：目标项目人阳性血清混合物，间接免疫荧光法ANA滴度1:1000或以上，印迹法抗核抗体谱中强度阳性（若组合式检测，至少2个阳性项目）。
自身抗体检测的质量控制与操作标淮化
官组织 。 ２ 荧 光标 记 二 抗 的 选 择
步的单特异性检测 。虽然抗体 的最终 区分需要使用纯化 的
抗 原作 为实验基 质 ，但 单独 的 “ 水平２ ”测 定 ，不 能适用 自 身抗 体检测 的需要 ，特 别是对抗核抗体 的测定 ，单做 “ 水平
２ ”测 定将会漏 掉某 些 自身抗 体 ，必须 同时用免疫 荧光法进 行筛 查。 ５ 间接免疫荧光法测定 自身抗体的实验报告及解释 ５ １ 阴性 ． 在整个检测系统 （ 包括各种质控 ）正常情 况下 ，
在 自身抗体检测中 ，荧光标记二抗 的质量 ，直接影 响实 验 的结果 ，荧光素 与第 二抗体 的偶联 需要 保持一定 的摩尔 比
存在 （ 能有 临床 意义 ），可将标 本进一步稀释 ，以获得 该 可
抗体 的滴度 。另一方面 ，选择 的这一 起始稀释度 仅使 用～ 次 分析过程 ，就 可 以排除多种 自身抗 体的存在 。许 多试 剂厂商 基于其免疫 实验室的检测系统 ，会 推荐血清稀释度 。为避免 前带现象 的发 生，有时对可疑 的阴性标本 ，仍需要进 一步稀 释后进行测定 。 ４ 实验 的双水 平测定
参 考文献 ［］ 王兰兰 ．自身抗体检测 的应用 与质量保障原则 ［］ １ Ｊ ．中华检验 医学杂志，
２ ０ ，ｉ ． ０ ５ ０
择，不同的实验室应根据本 室采用的测定 自身抗 体的方法 ， 结合 临床统 计数 据确 定待 测标 本合适 的起 始稀 释度 。一方 面，如该稀释度的检测结果 为阴性，则认 为该抗体 或多种抗 体不显著存在 （ 临床 意义 ），一般无需稀释标本 做进一步 无
最新：自身抗体检测质量控制专家共识2023
最新：自身抗体检测质量控制专家共识2023摘要自身抗体是自身免疫病的重要生物标志物，在疾病的诊断、鉴别诊断、活动性评价和预后评估等发挥关键作用。
规范自身抗体检测质量控制对于准确地报告相关检验结果具有重要意义。
国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心（北京协和医院）实验诊断研究委员会、中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会、国家风湿病数据中心于2023年组织相关临床和实验室专家，依据国家标准、行业指南，结合国内实际情况及自身抗体检测质量控制经验制定了本共识，旨在规范我国相关实验室自身抗体检测质量控制工作。
自身抗体是自身免疫病的重要生物标志物，在疾病诊断、鉴别诊断、活动性评价及预后评估等发挥关键作用。
近年，自身抗体更加广泛地应用于临床，为自身抗体检测带来了前所未有的挑战。
其中，从定性分析迈向定量评价是现阶段自身抗体检测发展的趋势。
检验方式的革新及检测水平的提高亟须规范化的自身抗体检测质量管理保驾护航。
自身抗体检测的质量管理应覆盖检验全程，即检验前、检验中和检验后。
在已发布的各自身抗体检测临床应用专家共识中，对样品要求、性能验证、质量控制和参考区间等检验全程的多个要点进行了说明［1,2,3,4,5］。
为进一步推动自身抗体检测质量管理水平的提升，国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心（北京协和医院）实验诊断研究委员会，中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会，国家风湿病数据中心于2023年组织相关临床和实验室专家，依据国家标准、行业指南，结合国内实际情况及自身抗体检测质量控制的经验，起草了本共识草案，随后对其进行讨论匚总形成共识初稿，经召开专家讨论会逐条审议讨论，达成一致意见后形成本共识。
本共识着重讨论和关注自身抗体检测质量管理中的质量控制，包括室内质量控制、室间质量评价和实验室内比对，旨在规范我国相关实验室的自身抗体检测质量控制工作，为临床提供准确的自身抗体检测结果的同时，亦为自身抗体检测的标准化夯实基础。
自身免疫性疾病抗体谱及其实验室检测进展_汪付兵.
·综述·自身免疫性疾病抗体谱及其实验室检测进展汪付兵综述,涂建成△审校(武汉大学中南医院检验科/基因诊断中心,湖北武汉430071关键词:自身免疫疾病;实验室技术和方法;抗体D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2013.07.005文献标识码:A文章编号:1673-4130(201307-0776-02自身抗体是诊断自身免疫病的重要依据,每种自身免疫疾病都伴有特征性的自身抗体谱[1-2],是早期诊断必不可少的生物学指标。
患者血液中存在高效自身抗体是自身免疫性疾病的特点之一,也是临床确诊自身免疫疾病的重要依据。
某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度特异性,已成为诊断相应疾病的金标准[1,3]。
1临床常见自身免疫性疾病自身抗体谱1.1自身免疫性肝病及其自身抗体谱[4-8]自身免疫性肝病是由自身免疫反应引起的、不明原因的肝脏疾病,主要包括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发硬化性胆管炎以及其重叠综合征。
在这几类肝脏疾病中,自身抗体的检测在临床诊断中起重要作用。
抗核抗体是自身免疫性肝炎最常见的自身抗体,主要出现在Ⅰ型A I H中并且常与抗平滑肌抗体同时出现。
A N A对A I H不具有诊断的特异性,可见于多种结缔组织疾病和其他自身免疫性疾病。
若A N A和A S MA同时出现,则高度提示Ⅰ型A I H。
抗肝肾微粒体抗体和抗肝溶质抗原Ⅰ型抗体为Ⅱ型A I H的特异性标志。
抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体是Ⅲ型自身免疫性肝炎最特异性的指标。
高滴度的抗线粒体抗体M2是原发性胆汁性肝硬化的标志。
原发性硬化性胆管炎最常见的自身抗体为核周型抗中性粒细胞胞质抗体。
1.2血管炎及其自身抗体谱[9-11]抗中性粒细胞胞质抗体(A N C A是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体,对系统性血管炎、炎性肠病、结缔组织病等多种疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。
该项目以间接免疫荧光为检测方法,可分出两种不同的荧光模型:(1抗中性粒细胞胞浆抗体其主要靶抗原为蛋白酶3;(2抗中性粒细胞核周抗体其常见靶抗原为髓过氧化物酶。
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核抗原成分复杂，已经发现有几十种，高滴度 ANA对多种自身免疫免疫性疾病具有重要的诊 断意义，有的已成为某些自身免疫性疾病的诊 断标志物。
ANA筛查及亚类ANA抗体的检测对明确诊断、 临床分型、病情观察、预后等具有重要意义。
硬皮病
着丝点型 抗着丝点抗体
硬皮病
胞浆型 抗细胞浆成分抗体
原发性胆汁性肝硬化
ANA clinical significance
多种风湿性疾病可出现阳性 正常人可有5%的阳性率，并随年龄增加
有上升趋势，5%SLE病人的ANA为阴性 ANA对诊断风湿病敏感，但特异性差，不
能提示发生免疫反应的是抗细胞核那种成 分抗体，只能根据荧光型大致估计，临床 作为诊断风湿病的筛选实验。
常见自身抗体检测及意义
The Common Autoantibodies Examination and Clinical Significance
————《诊断学》 免疫学检验
The First Affiliated Hospital of Nanchang University Qingshui Huang(黄清水)
抗dsDNA抗体阳性：对SLE特异性高，活动期阳性 率达70～90%，但敏感性低
抗ssDNA抗体阳性：许多自身免疫性疾病都可有阳 性，其诊断特异性不如抗dsDNA抗体
Anti-Extractable Nuclear antigen Antibodies
Antinuclear antibodies
ANA：是指存在与血液和体液中，能与真核细 胞核抗原起反应的自身抗体的总称。
狭义的ANA是指用间接免疫荧光法检出的抗细 胞核成分的抗体；
广义的是指用各种方法能检出的核物质，包括 核酸、酸或碱性核组织蛋白和非组织蛋白等的 抗体。
Antinuclear antibodies
The pathogenesy of autoimmune disease
自身组织
免疫耐受
myasthenia grav细is胞免疫
Graves AIHA
disea自se身反应性T细胞
1 type DM
multiple sclerosis
器官特异性
自身免疫 自身免疫性疾病
体液免疫
Rheumatoid arthritis SSyjosgt自erem身ni’抗cs 体lsuypnudsroemryethematosus Systemic sclerosis Polymyositis/dermatomyositis Wegener’s granulomatosis
非器官特异性
眼
干燥 综合征
全身症状
皮肤粘膜
浆膜炎
抗磷脂抗 体综合征
血液系统
Autoimmune 肌肉骨骼
diseases
肾脏
消化系统 神经系统
肺脏
心血管
Autoimmune diseases characteristics
病程长，女性患者居多，病因不清，有遗 传倾向，临床症状多样
病理特征为免疫炎症 免疫抑制剂治疗有一定疗效 可检出
Clinical significance
1学时
Case one
患者女，30岁，因面部红斑、胸闷、发热 1个月加重7天入院。查体：体温38.5℃， 脉搏102次/分，呼吸28次/分，面部红斑， 左胸胁部饱满，呼吸活动度减弱，局部叩 诊呈浊音，语颤、呼吸音消失，抗生素治 疗无效。
诊断考虑？鉴别诊断？需要完善哪些检查？
高滴度的自身抗体 和（或）自身致敏淋巴细胞
Autoantibodies
自身抗体
是针对自身组织成分产生的抗体，与自身组织成分 的抗原决定簇发生反应，通过各种途径造成自身免 疫损伤，如：变态反应、免疫复合物、ADCC、炎症 反应及干扰细胞功能等。
Autoantibodies characteristics
ANA testing guidelines
Anti-DNA antibody
概述：染色体由dsDNA和组蛋白（H1、H2、H2、 H3、H4五种成分）及非组蛋白组成（种类很多 如：核酸代谢所需的各种酶等），抗DNA抗体 包括两大类：抗dsDNA抗体和抗ssDNA抗体
参考值：IFA法为阴性 临床意义
Indirect immunofluorescence
The common ANA photofluorogram
பைடு நூலகம்
荧光型
相关抗体
临床意义
均质型 抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体 SLE、RA、SS
斑点型 抗ENA抗体
MCTD、多种自身免疫性疾病
核膜型 抗dsDNA抗体
SLE
核仁型 抗核仁核糖核酸抗体
Autoimmunity
自身免疫
是指机体免疫系统受某些内外因或遗传等因素 作用产生针对自身抗原发生免疫应答反应，出 现自身抗体或自身致敏淋巴细胞的现象。
Autoimmune diseases
自身免疫性疾病
一类由自身免疫反应导 致对机体造成免疫性病 理损伤或功能障碍的疾 病，可分为器官特异性 （慢性甲状腺炎）和非 器官特异性（SLE、RA） 两大类。
自身抗体
肯定诊断
提示诊断
评估预后 指导用药
Methodes of common examination
ELISA
斑点法
IIF
Westblot
印迹法
Common examination items
ANA ds-DNA ENA ANCA Anti-CCP GBM ACL autoimmune liver diseases
1
Teaching outline
理解几个概念
Autoimmunity Autoimmune diseases Autoantibodies and characteristics
掌握常见自身抗体及其临床意义
ANA、 RF、ENA 、ANCA、autoimmune liver diseases
自身抗体特性
产生 在遗传背景下，隐蔽抗原的释放或移位，自身 组织抗原的改变或修饰，交叉抗原，免疫系统的调 节异常等。
作用 自身抗体参与免疫病理损伤，对某些自身免疫 性疾病的诊断具高度特异性，血清滴度与疾病的活 动性密切相关。
自身免疫=自身免疫性疾病？
Autoantibodies significance