酶标仪使用指南(PPT60页)
酶标仪的使用指南
即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器.可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量. ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250u l以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求.酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y酶标仪方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单. 微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.其常见结构规格有40孔板,55孔板,96孔板等多种,不同的仪器选用不同规格的孔板,对其可进行一孔一孔地检测或一排一排地检测. 酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得,也可用分光光度计相同的单色器来得到.在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样,滤光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的.下图便是目前常用的酶标仪光路系统图.光源灯发出的光经聚光镜,光栏后到达反射镜,经反射镜作90o反射后垂直通过比色溶液,然后再经滤光片送到光电管. 从酶标仪工作框图和光路图上可看出,它和普通的光电比色计有以下几点差异: (l)盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体. (2)由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光来都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液. (3)酶标仪通常不仅用A,有时也使用光密度OD来表示吸光度. 酶标仪可分为单通道和多通道2种类型,单通道又有自动和手动2种之分.自动型的仪器有X,Y方向的机械驱动机构,可将微孔板L的小孔一个个依次送入光束下面测试,手动型则靠手工移动微孔板来进行测量. 在单通道酶标仪的基础上又发展了多通道酶标仅,此类酶标仅一般都是自动化型的.它没有多个光束和多个光电检测器,如12个通道的仪器设有12条光束或12个光源,12个检测器和12个放大器,在X方向的机械驱动装置的作用下,样品12个为一排被检测.多通道酶标仪的检测速度快,但其结构较复杂价格也较高. 摘自《陕西医学检验》1998.13(4)12 摘要为提高酶标仪检测结果的室内重复性和增强室间可比性，对已建立的酶标仪性能评价与鉴定的基本方法进行了详细解释和补充，以供同行在评价、鉴定仪器时参考与应用。
酶标仪使用指南PPT课件(PPT60页)
阀值下限吸光度=阳性吸光度 -（（灰区/100）*阳性吸光度）
0/EMP：空孔
5/QC：质控品孔
1/SMP：样品孔 6/CAL：校准品孔
2/BLK：空白孔 7/CP：阳性对照孔
3/STD：标准品孔 8/CN：阴性对照孔
4/CO：阀值对照孔 9/CW：弱阳性对照孔
11、打印（功能：打印酶标板实验结果和当前仪器实验进行程序设置）
报告种类的设置
报告种类的说明
1：限值、矩阵值、阈值，这几个报告均需要设
定阈值；浓度和曲线报告需要在内置打印机和从 电脑配合使用的外置打印机上方能打出报告。单 纯的外置打印机和酶标仪配合无法打印出结果。
2：原始数据报告是指没有校正的吸光度值报告。
单波长模式指原始吸光度；双波长模式指检测波 长和参考波长吸光度之差；吸光度报告指经过空 白校正的报告。其中应用的公式有：Abs=RawBlank mean (吸光度值=原始值报告-空白值的平
5 矩阵报告指提供酶标板各孔的定性结果，在上下限值之
间的吸光度分为10个档次，0到9。高于上限显示（+）， 低于下限显示（-）。
报告种类说明
6 阀值报告定性结果或者换算成浓度 :有如下4种阀值报告：
恒值范围：
操作者输入阳性和阴性界值的吸光度。
如果单位是“Abs”,如果某一孔的吸光度在上下限值之间，则显示 “*”，如果大于上限，则显示“+”；如低于下限，则显示“-”。
均值) ；Blank mean=X/n (空白值的平均值=每
个空白孔原始吸光度的总和/个数)。
报告种类说明
3 这里：S.D.= 标准差：X=每个空白孔的原始吸光度值 的总和；X^2=每个空白孔的原始吸光度值平方的总和 ；
酶标仪使用
酶标仪使用实验二酶标仪检测金属离子对SOD 酶活性的影响一实验目的通过SpectraMax M5 酶标仪的演示使用，了解该型号酶标仪的结构；掌握酶标仪的操作步骤与softMax Pro v5.0.1版本软件的使用。
二实验指导要点1.酶标仪仪器安装连接2.仪器使用、保养注意事项3.软件操作步骤三仪器设备及实验材料SpectraMax M5 酶标仪、softMax Pro v5.0.1版本软件、SOD 提取液四仪器检测参数设定1 SpectraMax M5 酶标仪构造酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接，并有连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。
2仪器使用、保养注意事项电源要求：酶标仪对电源要求很高，我们要求的电源有接地，并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点，防止：1）大电流的冲击，2）电压不稳，3）突然断电。
保养要求：有良好的电源，保持24小时开机。
保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。
维持室内比较恒定的温度，以20-22度为最适宜。
适用6-384孔板。
96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液，最佳检测体积为200ul。
384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液，最佳检测体积为80ul。
检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。
如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。
对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。
3 softMax Pro v5.0.1版本软件使用双击图标即可打开以下软件操作界面：1）单击即可进入如下界面：首次使用该软件，在该界面可以填写Reader的型号，包括Molecular Devices所有类型（单功能和多功能）的酶标仪。
酶标仪操作手册
EZ Read 400(Anthos 2010) 酶标仪操作说明书郑州博赛生物快速使用在打开该软件之前，请确认酶标仪已经上电。
打开软件以后，出现用户登录界面，选择相应的用户名，并输入密码，点击“登录”按钮，登录系统。
默认账户为Admin，密码为空。
登录后的界面如下图所示：点击工具栏里面的“系统参数”按钮，进入到“系统参数”的设置界面。
点击“自动获取端口”（注：确保酶标仪已上电，并且安装好了驱动程序）。
软件会自动获取电脑的端口。
获取完端口以后，关闭该窗口。
回到主界面后，点击工具栏的“单项测量”按钮。
选择所需测量的项目。
选择所需填充的样本个数，点击“自动填充”。
软件会自动填充样品。
点击“测量”按钮，酶标仪开始工作。
测量完成以后，会在界面上显示结果。
测量完成后，选择“保存数据”。
点击工具栏的“病案（样本）录入”按钮。
进入到病案录入的界面。
点击“建立新批次”批次编号和批次描述，可以根据需要改写，此处选择默认值。
点击确定。
双击新健的批次，进入“编写病案信息”的窗口。
如下图，填写病人信息，按“添加”按钮或者“F5”键增加病人信息。
病人信息编写完成以后，关闭该窗口，回到主界面。
点击工具栏的“报到单打印”选择需要打印的报告单，点击右下角的“添加到队列”。
需要打印的病人报告添加到“打印队列”中。
点击右下角的“打印”按钮，开始打印报告单。
菜单功能详解一：文件1.1：注销/登录，用于软件的注销及登录操作1.2：系统退出，用于退出系统1.3：软件注册，用于软件的注册。
首次使用软件的时候，需要提供医院的名称，注册软件，用于注册的医院名称会在打印报告单上显示出来。
二：系统设置2.1：系统参数主要用来设置系统和电脑的连接端口、读取及设定酶标仪的波长、检测灯源是否正常、滤光片复位等。
2.2：输入字典：用于标本类型、科别、送检医师、常用医嘱等字典的设置，方便医护人员进行病人信息的录入。
2.3：打印设置：用于设置每张纸打印报告单的数量，设置保存测量数据前是否需要输入板号等。
酶标仪成像功能检测手册说明书
酶标仪成像功能检测手册目录目录一、具有成像功能的多功能酶标仪基础 (1)1.1、什么是多功能酶标仪 (1)1.2 、具有成像功能的多功能酶标仪 (1)1.3 、酶标仪成像功能的优势 (1)二、成像功能硬件特点 (3)三、酶标仪成像功能的应用分类 (4)四、酶标仪成像功能的应用举例 (5)4.1、透射光通道下的无标记细胞识别和计数 (5)4.1.1、StainFree无标记细胞计数 (5)4.1.2、DAPI染色替代方案：活细胞成像计数 (6)4.1.3、无标记细胞增殖和形态评价 (9)4.2、荧光蛋白表达 (11)4.2.1、GFP的转染优化 (11)4.3、细胞活性/凋亡/毒性检测 (15)4.3.1、心肌细胞毒性评价 (16)4.3.2、细胞热激应答 (19)4.3.3、诱导多能干细胞来源的细胞毒性测定 (22)4.3.4、用SpectraMaxMiniMax细胞成像系统和MetaMorph软件测量神经突触 (25)4.3.5、GM-CSF和TNFα诱导的细胞凋亡检测 (29)4.4、玻片及大样本成像 (32)4.4.1、荧光细胞爬片和组织切片 (32)五、MiniMax成像参数设置和图像采集流程 (35)5.1、选择成像功能 (35)5.2、选择孔板类型及读板区域 (35)5.3、选择成像视野数 (36)5.4、设置采集曝光时间和聚焦 (36)5.5、图像分析设置 (37)5.6、数据测量 (37)5.7、感兴趣区域设置 (38)1.1、什么是多功能酶标仪多功能酶标仪指拥有多种检测模式的单体台式酶标仪。
通常某些多用途高端型酶标仪支持标准1cm比色皿检测，不仅仅微孔板可进行吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)检测，并且从以上技术中衍生出多种检测方法，主要包括时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)、AlphaScreen/AlphaLISA及BRET，另外1cm比色皿也可进行除吸光度检测外的荧光强度和化学发光检测。
酶标仪简单操作_图文.
CONTENTS4. 开机 ........................................................................................................................................... . (2)4.1开机设置 ........................................................................................................................................... .. 2 4.2主菜单 ........................................................................................................................................... .. (2)5. 项目设置 ........................................................................................................................................... .. (3)5.1计算方法 ........................................................................................................................................... .. 3 5.1.1吸光度模式 ............................................................................................................................... 3 5.2新建修改项目设置 (3)6. 样品测试 ........................................................................................................................................... .. (4)6.1. 布板参数设置 (4)6.2. 选择测试项目 (4)6.3. 布板 ........................................................................................................................................... .......... 5 6.4. 全选 ........................................................................................................................................... .......... 5 6.5. 开始测试 ........................................................................................................................................... .. 6 6.6. 吸光度显示 .........................................................................................................................................6 6.7. 数据发送 ........................................................................................................................................... .. 78. 数据传输 ........................................................................................................................................... (9)8.1数据传输到PC (9)8.1.1. PC 设置 (9)8.1.2. RIDA ®SOFT Win Software 设置 .......................................................................................... 9 8.1.3. 在主菜单中传输数据 . (11)4. 开机4.1 开机设置打开仪器背面的电源开关,等待约 10 秒钟,屏幕出现以下画面:初始化过程中如果有错误发生,系统会弹出窗口报告错误信息。
酶标仪使用说明
Molecular Devices 微孔板检测系统操作简介仪器和软件总体介绍3硬件操作步骤及注意事项4仪器安装连接4仪器保养注意4软件操作步骤5总体介绍5软件界面61.菜单栏62.图标栏63.文档区域7仪器检测参数设定8四种检测类别：91.终点法检测92.动力学法检测 113.波长扫描检测 114.单孔多点检测 11检测样品分组设定131.设定本底参照(BLANK) 142.设定标准样品(Standards)及相应的标准曲线 143.设定未知样品(Unknowns)并根据标准样品计算相应的浓度 18仪器和软件总体介绍微孔板检测系统(酶标仪)，以M5为例，仪器正面左边角有型号名SpectraMax M5：酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接，下图为连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。
另外酶标仪对电源要求很高，我们要求的电源有接地，并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点，防止：1）大电流的冲击，2）电压不稳，3）突然断电。
推荐SANTAK公司出品的UPS不间断电源，图片如下：仪器的所用功能都可以通过专业软件SoftMax Pro v5.0.1来控制，在电脑中安装后在桌面上会有如下的图标：硬件操作步骤及注意事项仪器安装连接仪器与电脑连接完毕并连接上高质量的电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。
电脑和仪器哪个先开没有关系。
仪器保养注意1） 有良好的电源，保持24小时开机。
2） 保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。
3） 维持室内比较恒定的温度，以20-22度为最适宜。
4） 96孔微孔板内每孔可检测100-300ul 溶液，最佳检测体积为200ul 。
5） 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul 溶液，最佳检测体积为80ul 。
6） 检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。
ELISA实验酶标仪洗板机的原理和使用(课堂PPT)
常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及 比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用 2mol/L。
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3.4 对照设定
阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同时也作为判断结果 的对照。
3.3.1 HRP的底物 DH2+ H2O2E D+ 2H2O
DH2为供氧体， H2O2为受氢体。 DH2一般为无色化合物， 经酶作用后成为有色的产物。
DH2如：邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)和ABTS 。
OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，在492nm处有最高 吸收峰，灵敏度高，比色方便，是HRP结合物最常用的底物。
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1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之 间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
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1.1.3 最适比例
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1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
常用封闭剂：0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1%明 胶;脱脂奶粉,比较价廉，可以高浓度使用（5%）。
洗涤液：在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20 磷酸盐缓冲液。
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3.2 ELISA的试剂准备 B
结合物 即酶标记的抗体（或抗原）是ELISA中关键的试剂 1. 酶的催化活性 2. 抗体（或抗原）的免疫活性 3. 含有或少含有游离的抗体（或抗原） 4. 结合物尚要有良好的稳定性。
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个空白孔原始吸光度的总和/个数)。
报告种类说明
3 这里：S.D.= 标准差：X=每个空白孔的原始吸光度值 的总和；X^2=每个空白孔的原始吸光度值平方的总和 ；
n=空白孔的数量。
4 限值于低值显示（-），高于高值显示（+）。
如果单位不是“Abs”,则会按照每孔吸光度与标准常数比较进行报告， 在上下限值之间，则显示“*”，如果大于上限，则显示“+”；如低 于下限，则显示“-”。单阀值：
操作者输入灰区范围。
如果单位是“Abs”,吸光度在灰区内显示“*”，吸光度高于灰区显示 “+”，吸光度低于灰区显示“-”。
阀值上限吸光度=阳性吸光度 +（（灰区/100）*阳性吸光度）
4、上箭头
（功能：向上移动光标，并在按下“转换”键后，可从A..Z输 入字母或符号。）
5、左箭头
（功能：回到上一界面，向左移动光标）
6、下箭头
（功能：向下移动光标，并在按下“转换”键后，可从Z..A输 入字母或符号。）
7、右箭头（功能：改变或者选择某一值或者类型，向右移动光 标）
8、转换（功能：输入小数点，改变输入模式）
报告种类的设置
报告种类的说明
1：限值、矩阵值、阈值，这几个报告均需要设
定阈值；浓度和曲线报告需要在内置打印机和从 电脑配合使用的外置打印机上方能打出报告。单 纯的外置打印机和酶标仪配合无法打印出结果。
2：原始数据报告是指没有校正的吸光度值报告。
单波长模式指原始吸光度；双波长模式指检测波 长和参考波长吸光度之差；吸光度报告指经过空 白校正的报告。其中应用的公式有：Abs=RawBlank mean (吸光度值=原始值报告-空白值的平
分为以下4个形式(1)不使用（2）常数（3）质控（4）公 式。
2（1）不使用：适用于做定量试验，做定量试验时可以
不设阈值；（2）常数：里面分单阈值和阈值范围两分菜 单。单阈值，利用小数点键和数字键来输入阳性和灰值区 右箭头选择单位，上下键选择参数；阈值范围：利用小数 点键和数字键来输入阳性和灰值区右箭头选择单位，上下 键选择参数。（3）质控：此项设置里只需在单阈值里输 入灰区值，即可。（4）公式：机器里存有 5个公式，将 光标移到公式的选项，摁三次输入进入公式修改参数；操 作者可根据试剂盒上所提供的公式，在里面选择与之一致 的公式，公式中的K值和灰区根据需要进行更改。修改完 后需按输入键，方可保存的设定。
进入程序步骤1
进入程序步骤2
终点法程序
编辑试验程序
1 摁编辑菜单，即进入程序的编辑，摁下编辑菜单，出现
以下分菜单（1）程序设置，（2）权限设定，（3）滤光 片设置，（4）日期设定，（5)试验室名称。
2 根据试验类型的不同，可分为定性试验和定量试验，方
法可分为终点法和动力法。
3终点法是只考虑试验的前后结果，并不考虑其中间的试
5 矩阵报告指提供酶标板各孔的定性结果，在上下限值之
间的吸光度分为10个档次，0到9。高于上限显示（+）， 低于下限显示（-）。
报告种类说明
6 阀值报告定性结果或者换算成浓度 :有如下4种阀值报告：
恒值范围：
操作者输入阳性和阴性界值的吸光度。
如果单位是“Abs”,如果某一孔的吸光度在上下限值之间，则显示 “*”，如果大于上限，则显示“+”；如低于下限，则显示“-”。
振动：3 s Mid 11:00 11/08/04
面括号中的小数字表 示此波长的滤光片在 滤光片轮上第几个位
置。
R：表示参考波长
振板参数(包括：振板 时间，振板速度等参 数)
调用和编辑一套程序
摁检索存贮键，再选择程序，再选择终点 法，即可进入机器里面里面存贮的程序， 里面存有二十多个程序可供使用者编辑使 用
验过程；而动力法则研究的是试验过程中，中间某一段时 间的试验记录。
编辑菜单的主界面
定性试验操作过程
1 试验参数的设定：包括阈值的设置，报告种类设置，限
值设置，试验模式的设定。
2酶标板的布局：包括手工布局和自动布局。 3读板和打印
阈值的设置
1 进入程序设置，第一项就时阈值的设置，在阈值设置里
阈值设置的主界面
常数设置界面
常数中单阈值设置
常数中阈值范围的设定
质控设定界面
公式操作界面
公式阈值设置的界面
报告种类设置
1 报告的分类：原始数据，吸光度，限值，矩阵值，阈值，
曲线，浓度，差异。
2 选择报告的方法：将光标移到所需选择得报告，然后摁
鼠标右键，这样就选择了你所需要报告种类。
9、输入（功能：确认完成输入或者某一设置）
10、数字键（功能：输入数字或者酶标板布局的情况）
0/EMP：空孔
5/QC：质控品孔
1/SMP：样品孔 6/CAL：校准品孔
2/BLK：空白孔 7/CP：阳性对照孔
3/STD：标准品孔 8/CN：阴性对照孔
4/CO：阀值对照孔 9/CW：弱阳性对照孔
11、打印（功能：打印酶标板实验结果和当前仪器实验程序设 置信息）
2：当仪器进入系统注册这个环节时，需要操作者输入密
码，在第一次开机时，可输入机器默认的密码即00000， 此密码也可以作为您以后使用该机器的密码，如您想更改 密码可通过编辑菜单中的权限设定来改变密码。
酶标仪的主界面
主屏幕简介
01：终点法分析01
当前程序的序号
M450（1） R630（4） M：表示检测波长，后
酶标仪使用指南(PPT60页)
酶标仪使用指南
广州市昊洋贸易有限公司 工程师：王建岭
酶标仪使用指南(PPT60页)
酶标仪简介
1、主菜单
（功能：按此键直接回到主界面）
2、开始/停止
（功能：按此键开始用当前设置进行读板；可中途停止读板。
3、进纸
（功能：此功能键在配有内置打印机的680型酶标仪上使用）
12、编辑（功能：进入编辑菜单，进行程序设置）
13、储存检索（功能：调用实验程序或者酶标板结果
开机状态
1仪器自检 Model680
开机状态 2仪器初使化
3系统注册 使用者：普通使用者 密码：×××××
按输入键
开机状态说明
1：仪器自检和仪器化的两过程为机器自动执行，无需手
动操作，这个过程大约需要15秒钟。