蛋白组分测定
蛋白组分绝对含量计算公式
蛋白组分绝对含量计算公式在食品科学和营养学领域，蛋白质是一种重要的营养物质，它是人体生长和维持生命所必需的。
蛋白质的含量和质量是衡量食品营养价值的重要指标之一。
因此，准确计算蛋白质的含量对于评价食品的营养价值至关重要。
本文将介绍蛋白组分绝对含量的计算公式，并探讨其在食品科学中的应用。
蛋白质是由氨基酸组成的大分子有机化合物，它是构成细胞和组织的重要成分，对维持人体正常的新陈代谢和生理功能起着重要作用。
蛋白质的含量可以通过多种方法进行测定，其中蛋白组分绝对含量的计算公式是一种常用的方法之一。
蛋白组分绝对含量的计算公式如下：蛋白组分绝对含量（g/100g）=氨基酸含量（g/100g）×氨基酸的蛋白质转化因子。
其中，氨基酸含量是指食品中各种氨基酸的含量，通常通过氨基酸分析仪进行测定；氨基酸的蛋白质转化因子是指不同氨基酸的蛋白质转化率，它反映了不同氨基酸对蛋白质含量的贡献程度。
蛋白组分绝对含量的计算公式可以帮助我们准确地计算食品中蛋白质的含量，从而评价其营养价值。
在实际应用中，我们可以通过以下步骤来计算蛋白组分绝对含量：1. 测定食品中各种氨基酸的含量。
这一步通常通过氨基酸分析仪进行测定，得到各种氨基酸的含量数据。
2. 计算氨基酸的蛋白质转化因子。
不同氨基酸对蛋白质含量的贡献程度不同，因此需要根据氨基酸的生理功能和蛋白质转化率来计算其转化因子。
3. 根据上述公式计算蛋白组分绝对含量。
将测定得到的各种氨基酸的含量数据代入公式中，再乘以相应的氨基酸的蛋白质转化因子，即可得到蛋白组分绝对含量。
蛋白组分绝对含量的计算公式在食品科学中具有重要的应用价值。
它可以帮助我们准确地评价食品中蛋白质的含量，从而指导人们合理膳食，保障人体对蛋白质的需求。
此外，蛋白组分绝对含量的计算公式还可以用于食品加工和生产中的质量控制，帮助生产者控制食品中蛋白质的含量，提高产品的营养价值。
除了在食品科学中的应用，蛋白组分绝对含量的计算公式还可以在营养学研究中发挥重要作用。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理蛋白质是生物体内一种重要的有机化合物，具有构建细胞结构、调节生理功能等重要作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于生物科学研究和临床诊断具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法及其原理。
一、比色法比色法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂形成显色物，根据显色物的光吸收特性来测定蛋白质的含量。
1. 低里氏法低里氏法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是利用试剂双硫苏三唑酮（DTNB）与蛋白质中的半胱氨酸残基反应产生黄色的二硫苏三唑，然后通过分光光度计测定其在412nm处的吸光度，根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 伯杰法伯杰法是一种基于酪蛋白与浊度试剂金霉素的显色反应来测定蛋白质含量的方法。
酪蛋白与金霉素结合形成沉淀，通过比色法测定沉淀的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
3. 白蛋白-酷伊斯基（BCA）法BCA法是一种常用的高灵敏度蛋白质测定方法，其原理是在碱性条件下，蛋白质与BCA试剂中的铜离子络合生成紫色的离子螯合物，通过比色法测定在562nm处的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
二、光谱法光谱法是一种基于蛋白质在特定波长下的吸收特性来测定蛋白质含量的方法。
1. 紫外吸收法紫外吸收法根据蛋白质中的芳香族氨基酸（如酪氨酸、酪氨酸和色氨酸）在紫外光区域（200-400nm）的吸收特性来测定蛋白质含量。
通过分光光度计测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 近红外光谱法近红外光谱法是一种无损、非破坏性的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质溶液在近红外光区域（700-2500nm）的吸收特性与其含量之间的关系。
通过近红外光谱仪获取蛋白质溶液的光谱图像，然后利用化学计量学方法建立标准模型，通过光谱图像预测蛋白质的含量。
三、生化分析法生化分析法是一种利用生化技术和仪器设备来测定蛋白质含量的方法。
α1α2球蛋白标准
α1α2球蛋白是人体内重要的蛋白质组分，主要由肝脏合成。
它们在血液中的含量可以反映肝功能的状况。
对于α1α2球蛋白的标准值，不同实验室和
地区可能会有所差异，但一般来说，成年人的参考范围如下：
1. α1球蛋白：正常值范围为0.7-1.8g/L。
2. α2球蛋白：正常值范围为0.4-1.4g/L。
如果α1α2球蛋白的测定值超出正常范围，可能表明肝功能存在异常。
需要注意的是，单独的α1α2球蛋白测定值异常并不足以确诊肝病，需要结合其他肝功能指标和临床症状综合判断。
在检测肝功能时，最好进行全面的肝功能检查，包括转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶等多种指标，以获得更准确的诊断结果。
组分蛋白测定实验报告
一、实验目的1. 了解组分蛋白测定的原理和方法。
2. 掌握组分蛋白测定实验的步骤和注意事项。
3. 培养实验操作技能，提高对蛋白质组分分析的认识。
二、实验原理组分蛋白测定是利用特定的方法将蛋白质样品中的各种组分分离，并对各组分进行定量分析。
本实验采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术，对蛋白质样品进行分离，并通过比色法测定各组分蛋白的相对含量。
SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离技术，其原理是在样品中加入一定浓度的SDS （十二烷基硫酸钠）和还原剂（如β-巯基乙醇），使蛋白质发生变性、解离，形成SDS-蛋白质复合物。
SDS-蛋白质复合物在电场作用下，根据分子量大小进行分离。
由于SDS对蛋白质的变性作用，蛋白质的分子量与其迁移率呈线性关系，因此可以通过测定各组分蛋白的迁移率来推算其分子量。
比色法是一种快速、简便的定量分析方法，其原理是利用蛋白质与特定试剂反应产生的颜色变化与蛋白质含量成正比，通过比色计测定吸光度，从而计算蛋白质含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质样品- SDS-PAGE凝胶- 电泳缓冲液- 还原剂- 标准蛋白溶液- 比色试剂- 比色计2. 实验仪器：- 电泳仪- 离心机- 研钵- 移液器- 烧杯- 移液管- 比色杯四、实验步骤1. 准备SDS-PAGE凝胶：按照说明书配制SDS-PAGE凝胶，加入蛋白质样品、还原剂和上样缓冲液。
2. 电泳：将SDS-PAGE凝胶置于电泳仪中，加入电泳缓冲液，设置电压和电泳时间。
3. 取出凝胶：电泳结束后，取出凝胶，用考马斯亮蓝G250染色。
4. 洗脱：将染色后的凝胶置于脱色液中，脱色至背景清晰。
5. 定量分析：将凝胶置于比色杯中，加入比色试剂，用比色计测定吸光度。
6. 结果分析：根据标准蛋白溶液的吸光度值和蛋白质含量，绘制标准曲线。
根据实验样品的吸光度值，从标准曲线上查找相应的蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过SDS-PAGE分离，蛋白质样品被成功分离成多个组分。
蛋白质分子量测定
蛋白质分子量测定方法目前，蛋白质分子量测定的常用方法主要有四种：年度法、凝胶过滤层析法、凝胶电泳法和凝胶渗透色谱(GPC)法。
一、粘度法一定温度条件下，高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性，随着分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。
通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化，即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。
该方法操作简单、设备价格较低，通常不需要标准样品，但无法测定聚合物的分子量分布。
粘度法所需设备：恒温槽、乌倍路德粘度计。
二、凝胶过滤层析法在凝胶色谱柱中，分子量不同的聚合物分子，由于其渗入凝胶微孔的能力不同而在柱中得以分离。
分子量较大的分子，渗入凝胶微孔较浅，随洗脱液流动速度较快，因而先流出色谱柱；相反，分子量较小的聚合物分子后流出。
通过测定从进样到聚合物分子流出色谱柱期间流过凝胶柱的洗脱液的体积，并与标准样品比较，即可计算聚合物的分子量，并估算其分子量分布。
凝胶层析技术操作方便，设备简单，样品用量少，而且有时不需要纯物质，用一粗制品即可，目前已得到相当广泛的应用。
凝胶层析法测定分子量也有一定的局限性，在pH6—8的范围内，线性关系比较好，但在极端pH时，一般蛋白质有可能因变性而偏离。
糖蛋白在含糖量超过5%时，测得分子量比真实的要大，铁蛋白则与此相反，测得的分子量比真实的要小。
凝胶过滤层析法所需设备：层析柱、紫外分光光度计。
三、SDS-凝胶电泳法SDS是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而使其电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，于是根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。
SDS-凝胶电泳法是目前蛋白质分子量测定中使用最广泛的方法，实验成本较低，仪器设备也相对很简单，一套电泳装置即可。
实验报告 蛋白质分子的测定
实验一蛋白质分子的测定─凝胶层析法一、实验原理凝胶层析法（即凝胶过滤法，gel filtration）是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法。
将凝胶颗粒在适宜溶剂中浸泡，使充分吸液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，小分子可以进入凝胶内部，流苏缓慢，一直最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得以分离。
凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，不论是天然凝胶还是人工合成凝胶，其内部都具有很微细的多空网状结构。
凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶（Sepharose），人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶（Bio-gel-P）和葡聚糖凝胶（Sephadex G）。
其中葡聚糖凝胶是具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。
将凝胶装柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表示。
Vt由V o，Vi与Vg三部分组成，即Vt=Vi+Vg+V o。
V o为“孔隙体积”、“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积；Vg为凝胶本身体积；Ve为洗脱体积，即自加入样品时算起到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积，Ve与V o及Vi之间的关系为：Ve=V o+K d Vi，；K d为样品组分在二相间的分配系数，Kd=(Ve-V o)/Vi，有效分配系数为Kav，Kav=(Ve-V o)/(Vt-V o)。
在一般情况下，凝胶对组分没有吸附作用时，当流动相流过Vt体积后，所有的组分都应该被洗出来，这一点为凝胶层析的特点，与一般层析方法不同。
Ve与分子量的关系：对同一类型的化合物，洗脱特性与组分的分子量有关，流过凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的走在前面。
Ve与分子量的关系为：Ve=K1-K2logM，K1与K2为常数，M为分子量，通常用Kav代替V e，建立标准蛋白质分子式量LgM与Kav的标准曲线，称为“选择曲线”。
蛋白质组学三大基本技术
蛋白质组学三大基本技术
1、质谱技术：质谱技术是蛋白质组学中最常用的和最基本的技术，它可以检测和识
别各种生物样品中的蛋白质和其他大分子有机物，从而可以提高研究的准确性，特别是在
研究动态蛋白信号转导及表观遗传因子的时候，质谱技术的应用更加广泛。
质谱技术包括
两种：基于气相法的高级数据库技术，和基于液相法的maldi技术。
质谱技术主要是利用
质谱仪来获取受体上蛋白质结构的数据，然后利用数据库搜索，来识别出蛋白质结构特征
及在受体上的结合状态。
2、SDS-PAGE技术：SDS-PAGE技术是一种蛋白电泳分析技术，它可以分离组成复合蛋
白的每个蛋白质组分，并对蛋白质的组成成分及其特有的分子量进行测定，是一种蛋白质
分类及检测的基础性技术。
SDS-PAGE技术利用聚丙烯酰胺亚胺(SDS)作为为分子内部量均
分剂，可将蛋白链折叠、聚集形成单个分子，然后进行电泳分离操作，在膜隔开一定距离，然后再对所获取到的蛋白分子特征进行识别，以得出它的结构和分子量的信息，进而得出
受体上分子的特征及其功能。
3、免疫淋巴细胞技术：免疫淋巴细胞技术是实验可能性较好、分离效果更好。
它以
电泳分离技术作为分离介质，从新鲜样品中分离出完整的肽盐化药物，可有效地检测及克
隆受体上的蛋白片段及肩膀，进而得出蛋白质组学上受体特征及其功能。
小麦籽粒蛋白组分测定
小麦籽粒蛋白组分测定
小麦是一种广泛种植的农作物，其籽粒中含有丰富的蛋白质。
对小麦籽粒蛋白组分的测定对于了解小麦的品质和营养价值具有重要意义。
小麦籽粒蛋白组分测定是通过一系列的实验方法和技术来进行的。
首先，需要将小麦籽粒样品进行研磨，得到细粉末。
然后，利用溶液进行提取，将蛋白质从其他组分中分离出来。
接下来，通过离心等操作，将提取的蛋白质进一步纯化和分离。
最后，利用色谱技术或质谱技术等方法，对蛋白质进行定性和定量分析。
小麦籽粒蛋白组分的测定可以得到多个指标，例如总蛋白质含量、谷蛋白含量、球蛋白含量等。
这些指标可以反映小麦的营养价值和品质。
总蛋白质含量是评价小麦蛋白质丰富程度的重要指标，谷蛋白含量是衡量小麦蛋白质营养价值的关键指标，而球蛋白含量则与小麦面筋质地和加工性能有关。
小麦籽粒蛋白组分的测定对于小麦品种改良和农产品质量控制具有重要意义。
通过了解小麦蛋白质的组成和含量，可以选择适合特定用途的小麦品种。
同时，对于小麦加工工业来说，了解小麦蛋白质的特性可以优化加工工艺，提高产品质量。
小麦籽粒蛋白组分测定是一项重要的研究工作，对于了解小麦的品质和营养价值具有重要意义。
通过科学准确的实验方法和技术，可
以获取关于小麦蛋白质组分的详细信息，为小麦品种改良和农产品质量控制提供科学依据。
我们相信，随着科技的不断进步，小麦籽粒蛋白组分测定将在农业领域发挥越来越重要的作用。
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大麦籽粒蛋白质组分含量测定
根据溶解度分类法，大麦籽粒中的蛋白质可分为四类：水溶性蛋白、盐溶性蛋白、醇溶蛋白和碱溶性蛋白。
根据其电泳迁移率和氨基酸组成，醇溶蛋白可分为四种，即B 醇溶蛋白、C 醇溶蛋白、D 醇溶蛋白和γ醇溶蛋白。
1．蛋白组分的提取
成熟籽粒在80℃烘箱中烘干至恒重，用样品粉碎机粉碎，过0.5mm 筛。
水溶蛋白：0.5g 样品加10mM Tris-HCl(pH7.5, 10ml)室温下置于连续振荡器上提取2 h ，离心(4000 g)10min ，连续提取两次，将得到的上清液混合保存。
盐溶蛋白：0.5g 样品加5ml 提取液1在室温下置于连续振荡器上提取1 h ，离心(1000 g ≈3900rpm)8min 。
醇溶蛋白：0.5g 样品加1.5ml 提取液2在60℃下置于连续振荡器上提取1 h ，离心(14000 rpm)10min 。
碱溶蛋白：0.2g 样品加10ml0.24％五水合硫酸铜，1.68％KOH ，0.5％酒石酸钾钠和50％(v/v)异丙醇提取显色液在室温下置于连续振荡器上提取1.5 h ，再在60o
C 恒温水浴震荡5min ，离心(4000g)10min ，550nm 比色测定。
提取液配置顺序参考后面的双缩脲试剂配制。
2．蛋白组分含量测定
清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白含量利用考马斯亮蓝法以牛白蛋白做标准曲线测定，谷蛋白用Biuret法测定。
清蛋白，球蛋白，醇溶蛋白含量测定(考马斯亮兰法Bradford，1976)：
（一）实验原理
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。
这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。
经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
（二）操作方法
染色剂配制：考马斯亮蓝G-250（100mg）溶于50 ml 95%乙醇，加入100ml，85% (w/v)磷酸，稀释至1L。
最终浓度为： 0.01% (w/v)考马斯亮蓝G-250, 4.7% (w/v)乙醇, 8.5% (w/v)磷酸。
蛋白质含量测定：称取样品蛋白M1（10-100μg）用缓冲液稀释至0.1ml,移至12 x 100 mm 试管。
加入5ml以上染色剂。
摇匀后 2min-1h 时间内测595 nm波长下的吸光值（3ml比色皿）。
空白对照为0.1 ml缓冲液+5 ml染色剂。
样品蛋白质含量可以根据其吸光值在标准曲线上定位。
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。
完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。
由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
（3）干扰物质少。
如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是：
（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。
（如同0.1N的酸干扰Lowary法一样）。
（3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
谷蛋白测定（双缩脲法，Biuret法）
（一）实验原理
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris 缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液：用标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。
酪蛋白用0．05N NaOH配制。
（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。
此试剂可长期保存。
若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
2. 器材：
可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
（三）操作方法
1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。
充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。
用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。
取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。
注意样品浓度不要超过10mg/ml。