检测人体血清中的蛋白质组分
血清蛋白电泳报告解读
血清蛋白电泳报告解读
血清蛋白电泳报告是一种用于评估血液中不同蛋白质组分的相对含量和比例的检查。
下面是对血清蛋白电泳报告的一般解读：
1. 白蛋白：白蛋白是血液中最主要的蛋白质，它在体内具有多种功能，包括运输营养物质、维持渗透压和抵御感染。
报告中的白蛋白水平通常以g/dL或g/L 为单位表示。
2. α1-球蛋白：α1-球蛋白由多种蛋白组分组成，其中包括甲胎蛋白、α1-抗胰蛋白酶等。
异常升高的α1-球蛋白水平可能提示炎症、肝脏疾病或其他疾病存在。
3. α2-球蛋白：α2-球蛋白由多种蛋白组分组成，如α2-巨球蛋白和铁结合蛋白。
异常升高的α2-球蛋白水平可能与慢性炎症、肿瘤或其他疾病相关。
4. β-球蛋白：β-球蛋白主要由转铁蛋白和低密度脂蛋白等组成。
异常升高的β-球蛋白水平可能与肝脏疾病、肾脏疾病或其他疾病有关。
5. γ-球蛋白：γ-球蛋白主要是免疫球蛋白，包括IgG、IgA、IgM等。
异常升高的γ-球蛋白水平可能表示免疫系统活跃，如感染、炎症或免疫性疾病。
在解读血清蛋白电泳报告时，需要综合考虑患者的临床病史、体征和其他相关检查结果。
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。
若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。
2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。
按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。
血清蛋白的分类与特征
血清蛋白的分类与特征（以区带电泳为主要技术分类）一、白蛋白（albumin,Alb）由肝实质细胞合成，分子量6.64万，等电4～5.8，半寿期（15～19天，占血浆总蛋白的40%～60。
血浆白蛋白浓度可以受饮食中蛋白质摄入的影响，在一定程度上可以作为个体营养状态的评价指标，有较广泛的载体功能。
正常参考值：35～50g/L。
血浆白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义。
低白蛋白血症，可见于以下几种原因：（1）白蛋白合成减低：常见于急性或慢性肝病。
（2）由于营养不良或吸收不良。
（3）遗传性缺陷：无白蛋白血症。
（4）组织损伤（外科手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。
（5）白蛋白异常丢失：如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。
（6）白蛋白分布异常：如门脉高压时，大量蛋白质从血管内渗入腹腔。
目前已发现20种以上白蛋白的遗传性变异，这些个体可以不表现病症，在电泳分析时其白蛋白区带可以出现1条或2条宽带，有人称之为双白蛋白血症。
当某些药物大量应用（如青霉素大量注射使血浓度增高时）而与白蛋白结合时，也可使白蛋白出现异常区带。
二、α1区带球蛋白1、α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin,α1AT或AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为5.5万，等电点4.8，半寿期4天，电泳中位与α1区带，是这一区带的主要组分。
正常参考值：成人780～2000mg/L、新生儿1450～2700mg/L。
低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。
2、α1-酸性糖蛋白（α1-acid glycoprotein,AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等电点2.7～3.5，半寿期5天，电泳位于α1区带，成人正常参考值：500～1500mg/L。
AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。
人体血浆蛋白组学
人体血浆蛋白组学人体血浆蛋白组学是研究人体血浆中蛋白质组成和功能的学科。
血浆蛋白是血液中最丰富的蛋白质类别，不仅起着运输、免疫、凝血等重要功能，还与多种疾病的发生和发展密切相关。
蛋白质组学通过对人体血浆中蛋白质的分析，可以揭示疾病的发生机制、疾病标志物的筛选和治疗靶点的发现，为临床诊断和治疗提供重要依据。
血浆蛋白组学的研究方法主要包括两大类：一类是定性分析，用于鉴定血浆中存在的蛋白质种类和含量；另一类是定量分析，用于比较不同样本中蛋白质的表达差异，寻找与特定疾病相关的标志物。
在定性分析中，常用的方法有质谱分析和凝胶电泳。
质谱分析通过测量蛋白质分子的质量和荷质比，可以快速鉴定出血浆中的蛋白质种类，包括已知的蛋白质和未知的蛋白质。
凝胶电泳则是通过将血浆样品在凝胶上进行分离，根据蛋白质的大小、电荷等特性，可以将蛋白质分离成不同的带状，从而鉴定出血浆中的蛋白质组成。
在定量分析中，常用的方法有同位素标记和多反应监测。
同位素标记是通过给样品中加入同位素标记物，然后通过质谱分析测量同位素标记物的含量，从而比较不同样品中蛋白质的表达差异。
多反应监测则是通过质谱分析测量特定蛋白质的多个肽段的含量，从而确定该蛋白质在不同样品中的表达差异。
血浆蛋白组学的研究已经在许多领域取得了重要进展。
例如，在肿瘤学中，通过比较癌症患者和健康人血浆中蛋白质的表达差异，可以发现与肿瘤相关的标志物，为早期诊断和治疗提供依据。
在药物研发中，通过比较药物在体内和体外的作用差异，可以筛选出与药物敏感性相关的蛋白质，为个体化用药提供指导。
在免疫学中，通过比较不同疾病患者和健康人血浆中蛋白质的表达差异，可以揭示疾病的发生机制，为疾病治疗提供新的靶点。
人体血浆蛋白组学是一门重要的研究领域，通过对人体血浆中蛋白质的分析，可以揭示疾病的发生机制和治疗靶点，为临床诊断和治疗提供重要依据。
随着技术的发展和研究的深入，相信血浆蛋白组学将在未来发挥更大的作用，为人类健康事业做出更大贡献。
蛋白质代谢功能检查血清总蛋白和白蛋白球蛋白测定
蛋白质代谢功能检查血清总蛋白和白蛋白球蛋白测定蛋白质是构成我们身体组织和细胞的重要组分，参与许多生理过程，如维持正常免疫功能、携带氧气、运输营养物质、参与代谢反应等。
蛋白质代谢功能检查可以通过测定血清总蛋白和白蛋白球蛋白的水平来评估。
以下是对这两项检查的详细解释。
1.血清总蛋白测定血清总蛋白是指血清中所有蛋白质的总量，包括白蛋白和球蛋白。
测定血清总蛋白的水平可以提供关于全身蛋白质代谢的信息。
正常成年人的血清总蛋白水平通常在6.0-8.3g/dL之间。
高蛋白血症可能与一些情况有关，如饮食蛋白质过多摄入、脱水、肾功能不全、慢性炎症、恶性肿瘤、骨髓增生异常等。
低蛋白血症则可能与饮食蛋白质摄取不足、肝病（肝脏合成蛋白质减少）、肾病（尿蛋白丢失）、营养不良等因素有关。
2.白蛋白测定白蛋白是血清中最丰富的蛋白质，占总蛋白的绝大部分。
它在体内扮演着多种重要角色，如维持胶体渗透压、运输药物和激素、抗体生成等。
正常成年人的血清白蛋白水平通常在3.4-5.4g/dL之间。
低白蛋白血症可能与肝脏合成白蛋白减少（如肝病、肝功能失常）、肾重金属中毒（如自身免疫性肾炎、肾小球肾炎）、消化道吸收障碍（如吸收不良综合征）等因素有关。
高白蛋白血症可能与因为脱水或其他原因而导致的体液浓缩有关。
球蛋白是除白蛋白外的其他成分，主要包括免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、补体、凝血因子等。
测定球蛋白的水平可以提供关于机体免疫功能和炎症反应的信息。
球蛋白水平的正常范围因年龄和性别而异。
常用的方法是将总蛋白和白蛋白测定结果相减，计算球蛋白的浓度。
高球蛋白血症可能与多发性骨髓瘤、慢性炎症、肝病等疾病相关。
低球蛋白血症可能与免疫缺陷病、肾病、胃肠道蛋白质大量丢失等因素有关。
总结：血清总蛋白和白蛋白球蛋白是检查蛋白质代谢功能的重要指标。
通过测定其水平，可以评估全身蛋白质代谢的状态，并发现一些与蛋白质代谢异常相关的疾病。
然而，需要注意的是，蛋白质代谢异常并不一定与蛋白质摄入量的变化相关，常常需要结合其他检查结果和临床病史来综合判断。
血清总蛋白测定标准操作规程
1. 检测目的用于定量测定人体血清或血浆中总蛋白的含量2. 检测原理双缩脲法：在碱性溶液中，血清蛋白与二价铜离子反应生成紫色络合物(双缩脲反应），颜色深浅与总蛋白的浓度成正比例关系，通过测定546nm 吸光度，计算总蛋白含量。
碱性蛋白质 + 铜离子 ------------ 紫红色络合物3．适用范围血清，或用肝素抗凝的血浆4．试剂及仪器1.试剂品迈瑞公司TP 试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：2.校准品由迈瑞公司提供的校准液，在更换试剂批号或出现质控漂移；仪器进行保养；仪器重要零件更换后进行校准；3.质控品由迈瑞公司提供的两个不同水平定值质控血清，在每一批标本测定前做两个水平的质控血清各一次，采用Westgard 多规则质控规则，如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，在确认重新恢复控制状态后开始标本检测。
4.仪器迈瑞BS-800型号仪器5．操作步骤装载试剂—→进行校准—→进行质控—→输入标本检测项目—→加载标本—→标本测定—→结果复核—→报告6．注意事项1. 不能测试严重溶血、脂浊、黄疸的标本, 血浆标本可用肝素抗凝,待测样品室温放置不超过24小时，可于2℃-8℃保存72小时，胸腹水经抗凝取上清液。
2. 不能使用过期的试剂，2℃-8℃保存。
3.定标液，质控液应冰冻保存。
7.结果计算 c ＝ Χ C O 式中：c —— 测定样本总蛋白浓度，g/L ；A 测定—— 样本管吸光度；A 标准—— 标准管吸光度；C O —— 校准血清总蛋白浓度，g/L ；8.操作性能1 精密度：批内CV ≤ 3.0%，批间CV ≤ 4.5%。
2 准确度：以参考方法定值的血清作为校准品时，本法测定结果与参考方法基本一致。
3 灵敏度：白蛋白浓度为：浓度为70g/L 时，吸光度为>0.09A 。
试剂空白吸光度：试剂以水为空白在37℃±1℃，吸光度<0.3A 。
4 可报告范围：血清与试剂用量之比为1:50时，测定上限为120g/L 。
血清成分鉴定实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握血清成分鉴定的基本原理和方法。
2. 通过实验操作，了解血清中主要蛋白质的组成及其功能。
3. 培养实验操作技能，提高对实验数据的分析和处理能力。
二、实验原理血清是血液凝固后，血细胞与血浆分离得到的液体。
它主要由水、蛋白质、电解质、激素、营养物质等组成。
本实验通过醋酸纤维薄膜电泳、双缩脲比色法等方法，对血清中的主要成分进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜血清样本- 巴比妥-巴比妥钠缓冲液- 双缩脲试剂- 蛋白质标准品- 醋酸纤维薄膜- 电磁搅拌器- 电泳槽- 直流稳压电泳仪- 分光光度计- 移液器- 移液管2. 实验仪器：- 离心机- 恒温水浴锅- 显微镜四、实验步骤1. 血清样品处理：- 将血清样本离心，取上清液备用。
2. 醋酸纤维薄膜电泳：- 将醋酸纤维薄膜浸泡在pH 8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中，使其充分润湿。
- 将处理好的血清样品点样于醋酸纤维薄膜上。
- 将醋酸纤维薄膜放入电泳槽中，加入pH 8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液。
- 开启直流稳压电泳仪，进行电泳分离。
- 电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，用染色液染色，然后用漂洗液漂洗。
3. 双缩脲比色法测定蛋白质含量：- 将处理好的血清样品与双缩脲试剂混合，放入恒温水浴锅中加热反应。
- 用分光光度计在540nm处测定吸光度值。
- 根据蛋白质标准品绘制标准曲线，计算样品中蛋白质含量。
4. 观察与记录：- 观察醋酸纤维薄膜电泳图谱，分析血清中蛋白质的组成。
- 记录双缩脲比色法测定的蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 醋酸纤维薄膜电泳图谱：- 观察到血清中存在清蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等蛋白质组分。
- 清蛋白位于电泳图谱的阳极侧，球蛋白位于中间，纤维蛋白原位于阴极侧。
2. 双缩脲比色法测定蛋白质含量：- 样品中蛋白质含量为X mg/L。
六、实验讨论1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种快速、简便的蛋白质分离方法，可以有效地将血清中的蛋白质组分分离。
血浆血清体液蛋白质组学
LC-ESI-MS/MS: 高效液相色谱-电喷雾串联质谱 9
基本缩略词
PMF： Peptide Mass Fingerprinting (肽质量指纹谱)， 是蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的 肽片段的质量图谱
IPG(EF)：Immoblized pH gradients isoelectric focusing (固相pH梯度等电聚焦)
Protein digests
Results
Auto MS/MS detection
BioWorks data base search
Tandem MS spectra
17
Shotgun:Advantages & Disadvantages
Advantages
Disadvantages
• Alleviate some limitations • Requires more handling for
蛋白质组学研究中，质谱测序一般采用两种方式： 一种是利用串联质谱 (MS/MS) 测序； 另一种是利用源后衰变 (PSD：post-source decay) 技术PepIdent: ProteinProspector: PepSea: 195.41.108.38
Protein extract 1 Label with fluor 1
Mix labeled extracts
Co-separate by 2D PAGE
Excitation wavelength 1
Image gel
Protein extract 2 Label with fluor 2
Excitation wavelength 2
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检测人体血清中的蛋白质组分
介绍
利用毛细管电泳法可检测人体血清中相对的白蛋白和球蛋白的含量。
测量方法
毛细管电泳法检测人体血清中白蛋白和球蛋白的含量是基于这些物质在电场中因电泳淌度的不同实现有差别的迁移和分离。
定性和定量分析蛋白质是通过直接测定该物质在215-220 nm区域内的紫外吸收。
血浆中蛋白质组分的参考值
毛细管电泳的优点
与其它方法相比，测定血清中蛋白质所使用的电泳和醋酸纤维素和琼脂糖凝胶，毛细管电泳有几个优点：
●没有特别的样品制备
●实时检测
●易于使用
●定量测定
●低的成本分析
设备与试剂
以下设备和试剂在测量中被使用：
●CAPEL®-105毛细管电泳仪
●蒸馏水
●白蛋白
●氢氧化钠，超级纯
●硫酸，超级纯
●四硼酸钠，超级纯
●十二烷基硫酸钠(SDS)，超级纯
在WINDOWS®98/ME/NT/2000/XP系统下安装采集和处理色谱数据的Chrom&Spec®软件包可实现对数据的采集、收集、处理和输出。
前处理步骤
前处理步骤包括：取样和样品准备，毛细管调试，辅助和校准溶液的准备，CAPEL®毛细管电泳仪的校正。
测量步骤
样品收集
样品(静脉血)的收集必需按照临床要求。
执行标准条例获得血清。
样品准备
分析前，血清必需用蒸馏水稀释(稀释比50:1)，彻底搅拌并离心。
毛细管的调试
每次清洗毛细管10分钟。
依次用浓硫酸，蒸馏水、氢氧化钠(1 mol/l)，蒸馏水，缓冲液冲洗。
测量
采用毛细管电泳法在CAPEL®-105毛细管电泳仪上使用日常惯例，分析预备溶液。
数据处理
Chrom&Spec®软件输出一份白蛋白和球蛋白的含量(%)报告。
实例分析
样品：人体血清(正常)
缓冲剂：10 mM硼酸，5 mM SDS,pH 9.2 毛细管：L EFF/L TOTAL 50/60 cm，ID 75 μm 注射量：150 mbar*S
电压：15kV
测量：215 nm，直接。