牛奶总抗生素检测试剂盒试用方法
TTC法
3TTC法(1)TTC试验原理TTC是取作为指示剂用的2、3、5-Triphenyte-trazoliumchloride(氯化三苯基四氮唑)的头一个字母的缩写，其原理是如果乳中有抗生素存在，则在向试样中加入菌种(嗜热链球菌)培养时细菌不增殖。
此时，由于作为指示剂加入其中的TTC不还原，所以，仍呈无色状态。
相反，如果没有抗生素存在，则加入的试验菌即行增殖，TTC还原变成红色，试样也随之染成红色。
也就是说试样呈奶的原色时为阳性，染成红色时阴性。
(2)设备和材料水浴箱、温箱、1ml与10ml灭菌试管各2支、灭菌巧15x15mm试管3支，100℃温度计、蜡笔、试管架。
(3)培养基和试剂菌种嗜热乳链球菌、经113℃温度灭菌20min的脱脂乳。
TTC试剂；称取2，3，5一氯化三苯基四氮唑1g，溶于25ml灭菌蒸馏水中，装人褐色瓶在7℃以下冰箱暗处保存。
临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。
(4)菌液制备将菌种移种脱脂乳，经36士1℃的温度培养15h后，以灭菌脱脂乳1:1的比例稀释待用。
(5)操作顺序注:每份检样作2份，另外再作阴性和阳性对照各1份，阳性对照常用无抗生素的乳8ml，加抗生素及菌液和TTC，阴性对照常用无抗生素乳8ml加菌液和TTC。
微生物检测法的缺点是时间相对较长，状态判断通过肉眼辨别易产生误差，灵敏度低，操作相对复杂。
其优点是费用低，一般实验室都能操作。
2.1氯化三苯四氮唑法(TTC试验)本法是往检样中先加人菌液和TTC指示剂(2，3，5一氯化三苯四氮哇)，如检样中有抗生素存在，则会抑制细菌繁殖，TTC指示剂不被还原，不显色;如检样中无抗生素残留，则细菌大量繁殖，指示剂被还原而呈红色。
具体操作为:2.2.1菌液制备。
将嗜热乳酸链球菌接种人灭菌脱脂乳，置36℃士1℃培养箱中保温15h，再用灭菌脱脂乳以1:1比例稀释备用。
2.1.2操作步骤。
取乳样9ml放人试管中→置80℃水浴中保温5min→冷却至37℃以下→加人菌液lml→置36℃士1℃水浴中保温2h→加入4%TTC指示剂0.3ml→置36℃土1℃水浴中保温30min→观察牛乳颜色变化。
进出口乳及乳制品中大环内酯类药物残留检测方法(一)
进出口乳及乳制品中大环内酯类药物残留检测方法（一）1 范围本标准规定了进出口乳及乳制品中类抗生素残留测定的制样和发射受体分析办法。
本标准适用于鲜奶、奶粉、乳清粉中、、、和药物残留的筛选检测。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后全部的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓舞按照本标准达成协议的各方讨论是否可用法这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析试验室用水规格和实验办法 3 试样制备和保存 3.1 试样制备从混合原始样品中取出部分代表性样品，奶粉不少于500 g，鲜奶不少于500 mL，均分两份，装入洁净容器内作为试样，加封并标明标志。
制样过程中应防止样品受到微生物或化学物的污染或发生残留物含量的变幻。
3.2 试样保存干粉样品室温密封保存，液体样品于0℃～4℃冷藏可保存5d，-15℃以下冷冻可保存2个月。
4 检测办法 4.1 办法提要检测的基础是竞争性受体免疫反应。
当样品中含有大环内酷类抗生素时，样品中大环内酯类抗生素残留物与受体试剂中相应受体的结合位点结合，从而阻挡了[14C]标志的红霉素与受体试剂位点结合。
样品中含大环内酯类药物含量越高，竞争的结合位点越多，[14C]标志的结合的则越少，用液体闪耀计数仪测定样品中的[14C]含量的cpm值(count per minute，即每分钟脉冲数)越低。
样品中的大环内酯类抗生素残留量与cprn值成反比。
4.2 试剂与材料除非另有解释，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.2.1 牛奶中大环内酯类抗生素Charm Ⅱ发射免疫试剂盒(MRLs Sequential Assay)：药片标识为E。
4.2.1.1 受体试剂药片：于-15℃以下冷冻保存。
4.2.1.2[14C]标志的红霉素药物片剂：于-15℃以下冷冻保存。
实训指导材料-牛乳中抗生素的检测
冷却至37℃以下
加菌液，36±1℃水浴2h
加TTC指示剂，36±1℃水浴30min
不显色
红色
显色者 抗生素阴性
36±1℃水浴30min
不显色者 抗生素阳性
抗生素阴性
报告
报告
（四）操作步骤
1.菌液制备
将菌种移种脱脂乳，经(36±1)℃培养15h后，
以灭菌脱脂乳1：1稀释待用。
2.加检样 取检样9mL，置15×150mm试管内，80℃水 浴加热5min冷却37℃以下，加菌液lmL。 (36±1)℃水浴中培养2h，加TTC 0.3mL，
乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌
液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂
TTC不还原，不显色。
与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即
行增殖，TTC被还原而显红色。也就是说检样呈乳的
原色时为阳性，呈红色为阴性。
表12-1显色状态判断标准
显色状态 未显色者 微红色者 桃红色 红色
判断 阳性 可疑 阴性
（二）菌种、培养基和试剂
1. 菌种：嗜热乳酸链球菌。
2. 脱脂乳：经113℃灭菌20min。
3.4％2，3，5—氯化三苯四氮唑水溶液：称取1gTTC，溶 于5mL灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7℃冰箱保存，临 用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为玉色或淡
褐色，则不能再用。
（三）检验程序
检样
80℃，加热5min
氢可以和加在乳中的氧化型TTC结合而成为还原型TTC，
氧化型TTC是无色，还原型TTC是红色，所以可使乳变红色。 相反，如乳中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖， 没有氢释放，TTC也不被还原，仍为无色，乳汁也无色。
（一）设备和材料
乳品中抗生素的检测方法
乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法王庆忠蒲彪（四川农业大学信息与工程技术学院，四川省雅安市）摘要：本文对检测抗生素的种主要方法：微生物法、酶法和色谱法的设计原理和筛选策略进行了分析。
论述了、、、、、、等检测方法的研究历史。
比较和分析了多种方法的检测敏感性、特异性和影响检测的可能因素。
最后就如何提高我国乳品的抗生素检测水平，提出了建议措施。
关键词：抗生素检测原理筛选试剂盒经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。
但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。
而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。
因此，及早在年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，于年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。
近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（）的生产和消费已成为大势所趋。
但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。
本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。
检测原理传统检验方法是基于抗生素残留对微生物生长的抑制，以扩散过程或浑浊度为基础。
抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大，菌落越小。
法（当场棉拭检验）以枯草芽孢杆菌（）℃下培养小时测定抗生素；法（兽崽抗生素和磺胺制剂实验）则是接种巨大芽孢杆菌（）在℃下培养；而法（，嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘检验法）则采用嗜热脂肪芽孢杆菌。
免疫检验法是对抗抗生素抗体的检验。
基于抗生素刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。
通过抗原抗体的特异性结合，确定抗生素含量。
该方法的引申是通过细胞质表皮因子（，）对抗生素的特异结合，测定相应的酶活性或基质的电流变化，从而推算抗生素浓度，以实现自动化检测。
使用高效液相色谱（）和质谱（）对抗生素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。
乳中抗生素的残留的测定
乳中抗生素的残留的测定中图分类号：S816.73文献标识码：A 文章编号：近20年来，兽药（包括药物添加剂）在畜牧业中的应用日益广泛，其在降低家畜发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和改善产品品质方面的作用是十分显著的，已成为现代畜牧业不可或缺的物质基础。
牛乳与人们的生活息息相关，因此牛乳中的抗生素残留问题一直是各国政府和食品安全机构关心的重点，中国近年来对牛乳中的抗生素残留问题也逐渐予以关注。
1.1 牛乳中抗生素残留的原因青霉素、阿莫西林、氨苄西林等抗生素在奶牛养殖业中常用于治疗奶牛乳房炎和子宫内膜炎，由于其廉价和广谱的抗菌性而被大量且频繁地超剂量使用，因此导致了牛乳中高浓度抗生素残留。
牛乳中抗生素残留的原因主要是：非治疗目的用药、治疗目的用药和非法人为掺杂非治疗目用药的主要指在牛饲料中添加含有一定比例的抗生素的饲料添加剂，在饲料中添加抗生素的主要作用是：杀灭或抑制畜体内(特别是消化道内)的有害微生物，调节畜体胃肠道微生态平衡，从而改善动物健康，促进动物生长，达到预防奶牛疾病和使其生产力提高的目的。
这也是造成牛乳中抗生素残留的一个非常重要的一个原因如果在治疗后停止用奶时间不够，可能导致牛乳中抗生素残留超标美国食品和药品管理局（FDA）调查表明，用药不当是导致牛乳中抗生素残留的主要原因。
1.2 牛乳中抗生素残留的危害对于食品中药物残留是否引起严重后果仍有争议，特别是对药物残留的长期影响还不清楚，但是对于牛乳中抗生素残留引起的以下几点危害目前还是可以肯定的。
1.2.1 对人类健康的危害如果含有致敏抗生素的牛乳被敏感人群饮用，可引起食用者过敏反应，表现的症状轻则是皮疹、发热、关节疼痛，严重时可发生过敏性休克甚至危及生命。
曾报道，英国一对青霉素高度敏感的病人，使用约10IU/mL的青霉素的商品牛乳后，发生了变态反应。
链霉素可引起肾损害和听觉神经受损，四环素引起肝损害，其与骨骼、牙齿中的钙质结合，产生骨及牙齿感染，还可影响儿童的生长发育。
乳品中抗生素的检测方法
乳品中抗生素的检测方法引言：乳制品是广大人群日常生活中必不可少的食品之一、为保证乳制品的质量安全，检测乳制品中的抗生素成分显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的乳品中抗生素的检测方法。
一、抗生素的简介抗生素是指一类可以抑制或杀灭细菌的化学物质，广泛应用于药物治疗、动物饲料和农业生产当中。
但当抗生素滥用或者超量使用时，会对人体健康带来一定的风险。
二、检测乳品中抗生素的方法1.高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前最常用的乳品中抗生素的检测方法之一、它以色谱为基础，通过流动相和固定相之间的相互作用来分离样品中的化学成分。
该方法检测灵敏度高，测量结果可靠，因此被广泛应用于抗生素的检测领域。
不过，高效液相色谱法的缺点是需要进行复杂的样品准备和操作步骤，且检测过程耗时较长。
2.液质联用技术液质联用技术（LC-MS/MS）是目前应用较广的一种检测方法。
它将液相色谱法和质谱法结合起来，通过质谱仪对液相色谱分离出的化合物进行定性和定量分析。
液质联用技术的优点是准确、灵敏度高、分析速度快，并且能够同时检测多个抗生素成分，适用于同时检测多种抗生素的复杂样品。
3.酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常用的抗生素快速检测方法，其原理是利用酶和抗体之间具有高度特异性的结合反应来检测抗生素的存在。
该方法操作简便、迅速，且不需要复杂的设备，可以在实验室和现场快速检测乳制品中的抗生素。
但是，酶联免疫吸附试验在灵敏度上相对较低，不能满足一些特殊要求。
4.快速液相色谱法（RPLC）快速液相色谱法是传统液相色谱法的改进。
该方法通过改善液相色谱柱的设计和技术参数的优化，使得样品分离更快速、更高效、更稳定。
快速液相色谱法在抗生素的检测中具有一定的优势，能够满足高通量和快速分析的需求，但其设备和耗材价格较高。
结论：综上所述，乳品中抗生素的检测方法有很多种，不同的方法在灵敏度、准确性、操作复杂度、分析速度和设备成本等方面存在差异。
戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中的应用
戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中
的应用
崔晨光
【期刊名称】《中国乳业》
【年(卷),期】2018(000)005
【摘要】为进一步从源头控制生鲜乳安全隐患,切实提高生鲜乳质量安全,农业农村部已经在全国范围内开展生鲜乳抗生素残留专项整治行动,同时生鲜乳中抗生素残留检测也是当前生鲜乳收购站及乳品企业在收奶过程中质量控制的重中之重.将戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒运用到生鲜乳抗生素残留检测试验中,验证其对青霉素G、磺胺嘧啶两种抗生素的检测效果及灵敏度,同时对该试剂使用方法及注意事项进行介绍.
【总页数】3页(P72-74)
【作者】崔晨光
【作者单位】河北省石家庄市行唐县畜牧工作总站
【正文语种】中文
【相关文献】
1.胶体金免疫层析技术在牛奶抗生素残留检测中的应用 [J], 杜宗绪
2.色谱技术在牛奶中抗生素残留检测方面的应用 [J], 马鹏媛
3.多残留金标检测法在牛奶抗生素残留检测中的应用 [J], 王明利;张浩
4.戴尔沃牛奶抗生素检测试剂盒灵敏度验证及操作注意事项 [J], 贾洪川;魏华威;姚华
5.牛奶中抗生素残留检测试剂盒的优化 [J], 陈芊汝;朱昱兴;寇玲赟;李昀;陶文靖;王莹
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牛奶中抗生素残留的检测
牛奶中抗生素残留的检测摘要研究了链霉素与1.5%硫酸铁铵的0.25mol/L硫酸液的显色反应。
利用链霉素的特有性质（麦芽酚）反应[1]，链霉素在碱性溶液中，链霉糖经重排使环扩大形成麦芽酚，麦芽酚与硫酸链霉素溶液形成紫红色配位化合物[2]。
本实验据此分析得到在NaOH的溶液中，以硫酸铁铵为显色剂在525nm波长下用分光光度法测定硫酸链霉素的含量。
回归方程A=0.0882C+0.0003，相关系数r=0.9998，链霉素在0.5～3.0μg/mL的浓度范围具有良好线性关系。
该方法操作简便快捷，结果稳定可靠。
关键词分光光度；抗生素；残留；牛奶0 引言随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。
而硫酸链霉素是常用氨基糖苷类抗生素，主要对结核杆菌，多种革兰氏阴性杆菌有效，在较低浓度时抑菌，较高浓度时则杀菌，在兽药抗生素领域广泛应用[3]。
目前抗生素的残留检测方法多样，而笔者采用硫酸链霉素与硫酸铁铵发生显色反应，并采用分光光度法测定硫酸链霉素的含量，该方法操作简单，方便快捷，适合在实际工作中运用。
1 实验部分1.1主要仪器及试剂723型分光光度计台式电动离心机注射用硫酸链霉素山东鲁抗医药股份有限公司提供国家准字H37020187 产品批号：110715 1g（100万个单位）；1.5%硫酸铁铵的0.25mol/L硫酸液；冰醋酸；0.2mol/LNaOH。
1.2实验方法取样品50mL水浴加热至40℃，取1mL冰醋酸滴加于其中，边加边搅拌直到沉淀析出完全，冷却至室温，离心。
取3mL离心后的清液于试管中，并加入4mLNaOH，在60℃水浴加热10min，冷却后，移入25mL容量瓶中，加入3mL 显色剂，定容。
静置20分钟，于525nm下测定吸光度。
通过工作曲线，得到相应硫酸链霉素的浓度[4]。
2 结果与讨论2.1吸收曲线精密称取链霉素标准品0.0504g溶于水，置50ml容量瓶中定容，即得1mg/mL 链霉素标准液。
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牛奶及中性液态乳制品中抑菌素
检测试剂盒
(总抗生素检测试剂盒)
产品编号：SW-5001
【简介】
华益精点牛奶及中性液态乳制品中抑菌素检测试剂盒是用来检测牛、羊的原奶和巴杀奶等中性液态奶中的抗生素。
试剂盒提供的微孔中有细菌培养基和pH 指示剂，向微孔中加入奶样，如果样品中没有抗生素，孵育一定时间后，细菌产酸，使指示剂从紫色变为黄色；如果样品中有抗生素，则细菌不产酸，指示剂没有颜色变化。
【检测对象】
本产品是一种使用灵活，操作方便的抑菌素定性检测试剂盒，用于牛、羊等生乳、经加工处理的中性液态乳制品及乳粉中抑菌素（如残留抗生素等）的定性检测。
【产品组成】
1.96孔微孔板2块；
2.粘性胶膜2张；
3.说明书1份。
【产品性能】
以下为对应的抗生素检出限：
青霉素-G：1-2ng/mL 阿莫西林：1-2ng/mL
氨苄西林：1-2ng/mL 哌拉西林：3-4ng/mL
苯唑西林：5ng/mL 头孢哌酮：20ng/mL
头孢氨苄：20ng/mL 盐酸四环素：75ng/mL
强力霉素：75ng/mL 土霉素：50ng/mL
林可霉素：100-150ng/mL 链霉素：500-1000ng/mL
庆大霉素：50ng/mL 卡那霉素：100ng/mL
【检测步骤】
1、根据所检测样品的数量，先用刀将铝箔分割线切开，再将所需的微孔切下。
注意不要将剩余微孔上的铝膜破坏，不然会导致培养基变干失去检测作用。
并将剩余的检测微孔放回4℃左右的冰箱保存；
2、将取下的微孔板的铝膜撕掉，向每个微孔中加入50微升的待测样品。
同时用其中一个微孔作为阴性对照，加入50微升不含抑菌素的阴性对照样品；
3、用粘性胶膜小心地将板孔封上，并置于64±0.5℃环境下孵育，如水浴锅或培养箱。
可在孵育2.5-3h之间观察，如阴性对照组未变黄则继续培养直到阴性对照组变黄停止培养。
水浴及培养箱的温度波动均会导致更长的检测时间，并会影响检测的灵敏度。
【判断标准】
1、黄色表示不含抗菌物质或抗菌物质的浓度在检出限以下，结果判为检测阴性；
2、蓝色或紫色表明所检测的待测样品中含有抗菌物质，结果判为检测阳性。
【储存条件及有效期】
1、4-8℃避光保存，防止冷冻；
2、有效期：1年。
【注意事项】
1、由于本试剂盒对抗菌物质及其敏感（抗生素及其他成分，如消毒剂，洗涤剂
等），在贮存及检测时都应避免任何该类物质的污染；
2、剧烈振动或低温冷冻都会使培养基变得松动，影响检测结果，请轻拿轻放本
试剂盒；
3、每次检测时最好设立不含抗生素的阴性对照样品，以确定最佳孵育时间；
4、每个样品所需的微量进样器吸头不可重复使用；
5、培养的温度过高或过低，以及温度波动都会影响检测时间及检测灵敏度；
6、本品为一次性产品，请勿重复使用；
7、本产品检测结果仅供参考，最终结果应以权威检测机构的结果为准。
【结果判读时的额外注意事项】
随着贮存时间的推移，所需的培养时间会逐渐增加，对于不同类型的乳制品，可能需要不同的检测时间。