花青素测定

花青素的测定

目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。本实验学习花青素的提取及测定方法。

一、实验原理

花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×104，故可用分光光度法测定其含量。但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。

二、材料、设备及试剂

1.材料茶叶

2.2. 设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。

3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸乙醇溶液（8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L）。

三、操作方法

1. 花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。

2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。

四、实验结果

实验结果如下表

依据公式

1．计算花青素的光密度值

ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620)

2.计算花青素含量

=ODλ

ε

×

V

×1000000

m

花青素含量（nmol/g）

ODλ:花青素在530nm波长下的光密度

ε：花青素摩尔消光系数4.62×106

v:提取液总体积（ml）

m:取样质量（g）

1000000: 计算结果换算成nmol的倍数

由一串红测得结果则有：ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341

所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继木测得结果则有：ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337

五、结果分析与讨论

从实验实验可以看出，一串红的花青素含量比红花继木的花青素含量高很多。一串红为红色，而红花继木为蓝色，这表明花青素含量的多少在极大程度上反应了花的红色程度。说明，花青素含量越多，花呈现的红色就越深。

本实验严格按照实验要求操作，在提取过程中谨慎小心，未造成液滴溅出的现象，且用盐酸乙醇反复清洗三角瓶并转移至容量瓶中，保证了实验的准确性。使用分光光度计时，也提前半小时开启预热，排气，提高实验结果的准确性。

本实验让我们学习和掌握花青素的提取和测定方法，进一步巩固了分光光度计的使用方法。但由于材料只做了单一的比较，不能说明一串红的花青素含量一定高于红花继木，若要对其进行全面分析，还需大量收集材料，进一步深入研究。