hIL-15-SA双功能融合蛋白的制备

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新型融合蛋白hIL15M-TNFαM表达质粒的构建

新型融合蛋白hIL15M-TNFαM表达质粒的构建
刘芳;丁蕾;毛晓华
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】2004(025)002
【摘要】目的构建hIL15M-TNFαM融合毒素的表达质粒,为该融合毒素的功能研究及临床应用前景的分析评价奠定基础.方法通过PCR删除hIL15 5′端前8个氨基酸残基的编码序列获得人白介素15突变体(hIL15M),将hIL15M基因片段与人工改造的TNFα基因按正确的阅读框架融合,定向克隆于表达载体pET16b.结果经酶切分析,所构建的质粒均插入hIL15M-TNFαM融合基因.结论利用pET16b表达载体成功构建融合毒素hIL15M-TNFαM的表达质粒.
【总页数】4页(P73-76)
【作者】刘芳;丁蕾;毛晓华
【作者单位】青海医学院生化教研室;东南大学基础医学院生化教研室;东南大学基础医学院生化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.MIC3-EGFP融合蛋白真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达 [J], 张琼;谭逵;蒋立平;谢荣华;范久波;舒衡平;吴翔
2.一种新型双重靶向性抗乳腺癌融合蛋白原核表达质粒的构建 [J], 顾丽;张君;丁海
麦;李晓晶;苏燕
3.新型融合蛋白hEPO/TNFαM表达质粒的构建 [J], 刘芳
4.脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达 [J], 石秦东;张蓬勃;田玉梅;张军峰;陈新林;刘勇
5.pET15b-YARA-EGFP原核表达质粒的构建及融合蛋白YARA-EGFP的表达与纯化 [J], 陈思思;王家宁;黄永章;郭凌郧;郑飞
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SAh I--TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定的开题报告

SAh I--TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定的开题报告题目：SAh I-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定研究背景和意义：随着生命科学的发展，蛋白质工程技术的不断发展，已经成为了研究生物学和生物医学领域的重要手段。

蛋白质工程技术通过改变蛋白质的结构和功能，对其进行精确定制，对生物学和药物研发等领域都有着重要的应用价值。

在近年来研究中，研究者们发现，蛋白质通过与其他蛋白质相互作用，能够发挥出更加丰富的生物学功能。

SAh I-TAC双功能融合蛋白是一种具有双重功能的蛋白质，它的制备和应用已经成为一个重要的研究方向。

SAh I-TAC双功能融合蛋白具有端粒酶活性和调节免疫反应的作用，可以用于治疗多种疾病，如癌症、自身免疫性疾病等。

因此，进一步研究SAh I-TAC双功能融合蛋白的制备与其生物学功能鉴定，对于开发更加有效的药物，对于人类的健康有着重要的意义。

研究内容：1. SAh I-TAC双功能融合蛋白的制备：根据已有的研究，我们将采用原核表达系统对SAh I-TAC双功能融合蛋白进行制备。

首先，利用PCR扩增SAh I和TAC基因，并将其融合构成SAh I-TAC双功能融合蛋白基因。

接着，利用原核表达系统对其进行表达，并通过His-Tag结构对其进行纯化。

2. SAh I-TAC双功能融合蛋白的生物学功能鉴定：在获得SAh I-TAC双功能融合蛋白后，我们将利用体外实验、体内实验来对其进行生物学功能鉴定。

在体外实验中，将观察其对端粒酶和免疫反应的调节作用，包括抑制癌细胞生长等；在体内实验中，将观察其对小鼠免疫系统的调节作用。

研究计划：时间研究内容第1-2周环境、实验器材的准备和调试及文献调研第3-4周 SAh I-TAC双功能融合蛋白的基因扩增第5-6周 SAh I-TAC双功能融合蛋白的原核表达第7-8周 SAh I-TAC双功能融合蛋白的纯化第9-10周 SAh I-TAC双功能融合蛋白的体外实验第11-12周 SAh I-TAC双功能融合蛋白的体内实验第13周结论撰写预期成果：1.成功制备SAh I-TAC双功能融合蛋白；2.对SAh I-TAC双功能融合蛋白的生物学功能进行鉴定；3.探讨SAh I-TAC双功能融合蛋白在治疗癌症和自身免疫性疾病中的潜在应用价值。

一种融合蛋白、其制备方法及其应用[发明专利]

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201410229034.8(22)申请日 2014.05.27C07K 19/00(2006.01)C12N 15/62(2006.01)C12N 1/19(2006.01)C12P 21/02(2006.01)A61K 38/20(2006.01)A61K 47/48(2006.01)A61P 35/00(2006.01)A61P 7/00(2006.01)(71)申请人上海生物制品研究所有限责任公司地址200052 上海市长宁区延安西路1262号(72)发明人付美兰徐帆洪王海明孔超(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司 31266代理人马莉华崔佳佳(54)发明名称一种融合蛋白、其制备方法及其应用(57)摘要本发明提供了一种融合蛋白将HSA 和IL21融合表达，制备的融合蛋白，不仅仍具有IL21活性，且IL21的半衰期显著延长，稳定性有很大的改善。

本发明还提供了编码该融合蛋白的核酸序列以及该融合蛋白的制备方法。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书18页序列表5页附图11页CN 105198999 A 2015.12.30C N 105198999A1/1页1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有式Ia 或式Ib 所述结构：A-B-C (Ia)，或C-B-A (Ib)其中，A 为包括白介素-21的多肽元件；B 为连接肽；C 为包括血清白蛋白的多肽元件；“-”表示连接上述各元件的肽键。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述元件A 包含SEQ ID NO:1中第30-162位所示的氨基酸序列并且长度为133-170个氨基酸。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述的元件C 包含SEQ ID NO:2中第25-609位所示的氨基酸序列，并且长度为585-650个氨基酸序列。

一种融合蛋白及其制备方法和用途

一种融合蛋白及其制备方法和用途融合蛋白（Fusion Protein）是由两个或多个不同的蛋白质序列合成的复合蛋白，具有两种或多种蛋白质的功能特性。

融合蛋白的制备方法主要有基因重组技术和化学合成法，其应用范围广泛，包括药物研发、细胞工程、生物检测等领域。

融合蛋白的制备方法之一是基因重组技术。

基因重组技术是通过改变生物体的遗传物质来制备融合蛋白。

首先，将感兴趣的蛋白质基因与载体DNA连接，形成重组DNA。

然后，将重组DNA导入宿主细胞中，利用细胞的生物合成机制合成融合蛋白。

最后，通过纯化方法提取纯度较高的融合蛋白。

这种方法制备的融合蛋白可以具有两种或多种蛋白质的功能特性，具有广泛的应用前景。

另一种制备融合蛋白的方法是化学合成法。

化学合成法是通过化学手段将两个或多个蛋白质序列连接起来制备融合蛋白。

这种方法可以通过调节合成条件和合成反应来控制蛋白质的连接方式和连接位置，从而得到具有特定功能的融合蛋白。

化学合成法制备的融合蛋白通常具有较高的纯度和稳定性，适用于一些对纯度要求较高的应用领域。

融合蛋白具有多种应用。

首先，在药物研发领域，融合蛋白可以用于制备重组蛋白药物。

通过将药物的靶点蛋白与药物分子连接起来，可以增加药物的稳定性和生物利用度，提高治疗效果。

其次，在细胞工程领域，融合蛋白可以用于改善细胞的表达和分泌能力。

通过将蛋白质表达系统中的信号肽序列与目标蛋白连接起来，可以增加目标蛋白的分泌效率和稳定性。

此外，融合蛋白还可以用于生物检测和诊断领域。

通过将荧光蛋白或酶标记蛋白与感兴趣的蛋白连接起来，可以实现对特定分子的高灵敏度检测和定量分析。

融合蛋白是由两个或多个不同蛋白质序列合成的复合蛋白，通过基因重组技术和化学合成法可以制备融合蛋白。

融合蛋白具有多种应用，包括药物研发、细胞工程、生物检测等领域。

随着科学技术的不断进步，融合蛋白的制备方法和应用将会得到进一步的改进和拓展，为生物医学领域的研究和应用提供更多可能性。

SA／hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定

ＴｈｅＳＡ／ｈｌＬ２４ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓａｎｄｐｕｒｉｉｆｅｄｂｙＮｉ — ＮＩＬ２４融合蛋白的制备为ｈＩＬ一２４表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础。
［关键词］白细胞介素２４；链亲和素；融合蛋白；原核表达［中图分类号］Ｑ８１６［文献标志码］Ａ［文章编号］１０００－２１３８（２０１３）０２－００７８－０６
生物学活性的鉴定
陈惜倩，高基民
（温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室，浙江温州３２５０３５）
［摘
要］目的：制备链亲和素标记的人白细胞介素２４融合蛋白（ＳＡ／ｈＩＬ２４），并鉴定其生物学活性。方
法：通过ＲＴ — ＲＣＲ扩增ｈＩＬ－２４基因序列，构建ｐＥＴ２４ａ — ＳＡ — ｈＩＬ２４和ｐＥＴ２１ａ－ｈＩＬ２４一ＳＡ重组表达质粒，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导表达，对表达的融合蛋白采用镍金属螯合（Ｎｉ — ＮＴＡ）层析和凝胶过滤层析
上。ＳＡ／ｈＩＬ２４融合蛋白可高效结合至已生物素化的ＭＢ４９肿瘤细胞表面（表面锚定修饰率大于９０％），ｈＩＬ２４一

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３％的接种量，ｐＨ值为７２发酵可得到湿菌４ｇＬ１１／．７／，２．５ｇＬ包涵体。经纯化后目的蛋白纯度为９％７。
细胞增殖试验和细胞表面锚定修饰试验表明，经纯化复性的ｈＬ１一Ａ融合蛋白具有双重生物活性。结Ｉ一５ｓ
酵ｈＬ１一Ａ程茵，通过镍柱亲和层析及阴离子交换层析纯化目的蛋白。免疫印迹分析产物，巴细胞Ｉ一５Ｓ工淋
增殖试验以及细胞锚定试验检测双功能融合蛋白ｈＬ１－Ａ的生物学活性。结果：采用半合成培养基，以Ｉ一５Ｓ
７０４／ｅｅｌｎ１１／ｎｌｓｏｏｉｓｗｒｏｌｃｅ．Ｔｅｐｒｔｆｔｒｅｒｔｉｅｃｅ．，７ｇＬｗｔｃｌｓａｄ２．５ｇＬｉｃｕｉｎｂｄｅｅｅｃｌｅｔｄｈｕｉｙｏａｇｔｐｏｅｎｒａｈｄ
９％ａｔｒｕｉｉａｉｎ．ｅｌｐｏｌｆｒｉｎｄｅ－ｕｆｃｅｍｄｆｃｔＯｓｙｓｅｎｓｒｔｄｈｔｔｅ７ｆｅｐｒｆｃｔＯＣｌｒｉｅａｔＯｎａｃｌｓｒａ — ＯｉｉａｉｎａｓａｄｍＯｔａｅｔａｈｉ
ｐｏｔｎｒｅｉｈＩ一５ＳＬ１一Ａ．Ｍｅｈｄｓ：Ｔｔｒｇｐｔｎｔｏｈｅａｅｔｒｏｅｉｗａｏｆｉｔｒｏｈｈｅｐｓｒｉｅｄｈｕｇｔａｐｌｉａｔｉｎｆｃｏｏａｆｎｉｙｆｉｔ
ｃｒｍａ０ｒｐｈａｄｎｏｅｃａｅｈｏｍｔｒｐｙＳｉｇｉｈｄｎｓｔｅｒｅａｔＯｏＬ１一ＡｒｍｈｏｔｇａｙｎａｉｎｘｈｎｇｃｒａｏｇａｈＵｎｈｇ — ｅｉｙｆｍｎｔｉｎｆｈｌ一５Ｓｆｏ
ｐｔｎ．Ｒｕｔｓｒｏｅｉｅｓｌ：Ｕｓｎｇｈｅｅｓｎｅｃｉｔｓｍｉｙｔｈｔｉｍｅｄｕｔｅｐｉａｌｎｃｌｍｉｅｗ％ａｄｐａｕｗｇｉｍ．ｈｏｔｍｉｏｕｕｓｚａｓ３ｎＨｖｌｅａ
Ｅ．ｏｌｃｉ．ＩｍｕｏｂｏｔｉｇａａｌｓｉｗｓｓｄｏａａｌｚｈＩ一５ＳｍｎｌｔｎｎｙｓａｕｅｔｎｙｅｔｅｈＬ１－Ａ．Ｌｍｈｃｔｃｉｒｉｅａｏｓｓｙｙｐｏｙｅｅｌｐｏｌｆｒｔｉｎａａａｎｃｌｓｒｆｃ－ｄｉｃｔｏａｓｙｅｅｅｆｒｄｄｅｌ — ｕａｅｍｏｆｉａｉｎｓａｗｒｐｒｏｍｅｔｏｎｙｅｈｅａａｌｚｔｂｉｆｎｃｉｎｉｉｓｆｈｅｕｓｏ — ｕｔｏａｌｔｅｏｔｆｉｎ
余宏蛊，严耀明，茅奇峰，高基民
（．１温州医学院
广东深圳
浙江省模式生物技术与应用重点实验室，浙江
温州３５３；．２０５２深圳第三人民医院
５８２）１００
［摘
要］目的：对双功能融合蛋白ｈＬｌ一Ａ的发酵及纯化工艺进行研究。方法：采用发酵罐高密度发Ｉ —５ｓ
ＰｐｒｔｏｏｈｌＡｒｅａａｉｎｆＩｆｉｎｒｔｅｎＹ／Ｈｏｕｓｏｐｏｉ［ｎｇｓｎｈｅｇ，ｙＡＮＹａｍｉｇ．ＭＱｆｅｇ．ＧＪｉｎ１．ｏｎＡＯｉｎＡＯｍｉ
＊ｈｄａｇｒｖｎｉｌＫｙＬｂｒｔｒｏｏｅｒａｉｉＥｎｈｕＭｄｃｌＣｌｅｅＷｎｈｕ３５３ＺｅｉｎＰｏｉｃａｅａｏａｏｙｆｒＭｄｌＯｇｎｓｓｅｚｏｅｉａｏＩｇｅｚｏ２０５ｎＯｊｃｉｅＴｓｕｙｈｆｒｅｔｔｏａｄｕｉｉａｉｎｆｉｕｃｉｎｌｕｉｎｂｅｔｖ：ｏｔｄｔｅｅｍｎａｉｎｎｐｒｆｃｔｏｏｂｆｎｔｏａｆｓｏ
第４０卷第４期
温ห้องสมุดไป่ตู้
州
医
学
院
学
报
Ｖｏ．０ＮＯ４１４．Ｊ１２０ｕ．０ｌ
２ｌ００年７月
ＪｕｒａｆＷｅｈｅｉａｏｎｌｏｎｚｏｕＭｄｃｌＣｏｌｇｌｅｅ
鞠
ｈ１一Ａ双功能融合蛋白的制备一５ＳＩＬ
论：本研究获得了高产量、高纯度的ｈＬｌ一Ａ双功能融合蛋白，为后续的体内生物学功能研究奠定了基Ｉ —５ｓ
础。
［关键词］白细胞介素ｌ；链亲和素；融合蛋白；中试Ｙ艺５－
［中图分类号］Ｑ１［８６文献标识码］Ａ［文章编号］１０－１８（ｏｏ０一３６０００２３２ｌ）４ｏ２—４