生物实验常用溶液的配制(整理版)

生物实验常用溶液的配制

一、DNA电泳相关：

1、DNA电泳缓冲液：

（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。

① TAE使用液：

1×：40mmol/L Tris-乙酸

1mmol/L EDTA

② TAE贮存液（每L）：

50×：242g Tris碱

57.1ml 冰乙酸

100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：

① TBE使用液：

0.5×：0.045mol/L Tris-硼酸

1mmol/L EDTA

② TBE贮存液（每L）：

5×：54g Tris碱

27.5ml 硼酸

20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：

① TPE使用液：

1×：90mmol/L Tris-磷酸

2mmol/L EDTA

② TPE贮存液（每L）：

10×：108g Tris碱

15.5ml 85%磷酸

40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：

①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴

或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；

②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；

③迅速倒入备好的胶模中；

④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；

⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；

⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；

⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min 左右）；

⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。

二、12％SDS-PAGE 的相关溶液

1、5×加样缓冲液：

10% w/v SDS，10 mM DTT或β-巯基乙醇，20% v/v甘油，0.2M Tris-HCl pH 6.8，0.05% w/v 溴酚蓝。（注意：将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/L DTT储液中添加到上述缓冲液中。）

5×Sample Buffer：

10% w/v SDS

10 mmol/L Dithiothreitol,or beta-mercapto-ethanol

20% v/v Glycerol

0.2 mol/L Tris-HCl pH 6.8

0.05% w/v Bromophenolblue

另：2×SDS 上样液缓冲液:

100mL溶液中含0.5mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 20mL , SDS 4 g ,甘油20 mL , 溴酚蓝0.2 g ,DTT3g;

2、1×电泳缓冲液：

25 mM Tris-HCl pH 8.8，200 mM 甘氨酸，0.1% w/vSDS。

1×Running Buffer

25mmol/L Tris-HCl pH 8.8

200～250mmol/L Glycine（电泳级）（pH 8.3）

0.1% w/v SDS

可以配成5×贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml 10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。

3、分离胶配方：

H2O 10.5，1.5 M Tris-HCl pH8.8 7.5，20% w/v SDS 0.15，30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰

胺(/w/v) 12.0，10% w/v 过硫酸铵15，TEMED 0.02（单位：mL，总体积25 mL）。注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4℃保存。

Running Gel Solution (mL) ：

H2O 10.2

1.5 mol/L Tris-HCl pH8.8 7.5

20% SDS (w/v) 0.15

Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 12.0

10% ammonium persulfate (w/v) 0.15

TEMED 0.02

4、积层胶配方(4% 丙烯酰胺)：

H2O 3.05，0.5 M Tris-HCl pH6.8 1.25，20% w/v SDS 0.025，30% 丙烯酰胺/ 0.8% 亚甲双丙烯酰胺(/w/v) 0.65，10% w/v过硫酸铵0.025，TEMED 0.005（单位：mL，总体积5 mL）。

Stacking Gel Solution (4% Acrylamide) (mL)：

H2O 3.075

0.5 mol/L Tris-HCl pH6.8 1.25

20% SDS (w/v) 0.025

Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 0.67

10% ammonium persulfate (w/v) 0.025

TEMED 0.005

5、考马斯亮蓝染色液：

0.25 g考马斯亮蓝R250溶解于90 mL甲醇：水（1:1 v/v）和10 mL冰乙酸的混合液中，过滤除去颗粒状物质。（或考马斯亮蓝R-250 0.5g ,乙醇250mL ,乙酸110mL ,水740mL ,混匀;）

另：0.2％考马斯亮兰R-250染液：

甲醇46.5ml

醋酸7.0ml

考马斯亮兰0.2g

蒸馏水加至100ml

6、脱色液：

170 mL甲醇,加70 mL冰乙酸，加蒸馏水定容至1000 mL。

三、蛋白质纯化的相关溶液

1、超声破菌缓冲液：

20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶