细胞生长曲线的绘制及注意事项
细胞培养生长曲线
细胞培养生长曲线细胞培养生长曲线是描述细胞数量随时间变化的关系曲线，是研究细胞生长规律和评估细胞活力的重要手段。
通过生长曲线，我们可以了解细胞的生长速率、倍增时间、细胞周期等相关参数，进而揭示细胞的生长规律。
一、细胞培养生长曲线的绘制绘制细胞培养生长曲线需要记录不同时间点细胞数量的变化。
通常采用以下步骤：细胞种板：将一定数量的细胞接种到培养板中，确保细胞密度适宜，能够满足后续实验需求。
细胞培养：按照设定的时间间隔（如24小时、48小时、72小时等）对细胞进行计数，记录每个时间点的细胞数量。
细胞计数：采用细胞计数器或显微镜对细胞进行计数，注意选择合适的计数方法，避免误差。
数据记录：将每个时间点的细胞数量记录在表格中，并绘制成细胞培养生长曲线。
二、细胞培养生长曲线的解析根据绘制的生长曲线，我们可以从以下几个方面解析细胞的生长规律：细胞增殖速率：通过观察生长曲线，可以了解细胞的增殖速率。
在生长曲线上，会出现一个明显的指数增长期，这个时期的细胞增殖速率较快，通常出现在细胞接种后的初期。
随着时间的推移，增殖速率会逐渐降低，这是由于营养物质和空间限制等因素的影响。
倍增时间：倍增时间是细胞培养过程中一个重要的指标，它表示细胞数量需要经过多少时间才能增加一倍。
通过生长曲线，可以计算每个时间点的倍增时间，从而了解细胞的生长速度。
细胞周期：细胞周期是指一个细胞从分裂开始到下一次分裂结束所经历的时间。
在生长曲线上，可以观察到细胞的周期性增殖现象，通过计算不同时间点的细胞数量和倍增时间，可以估算细胞的周期长度。
细胞死亡率：在细胞培养过程中，可能会出现细胞死亡的情况。
在生长曲线上，可以观察到细胞的死亡率变化情况。
如果死亡率较高，可能意味着培养条件不适宜或者细胞质量存在问题。
三、细胞培养生长曲线的影响因素细胞培养生长曲线受到多种因素的影响，包括以下几个方面：培养条件：培养条件对细胞的生长具有重要影响。
例如，培养液的成分、pH值、氧气浓度、温度等条件都会影响细胞的生长。
细胞生长曲线实验步骤
细胞生长曲线实验步骤一、准备细胞与培养基1.选择适宜于实验的细胞系，并确保细胞状态良好，无污染。
2.准备所需的培养基，按照说明书进行配制，并在使用前进行无菌过滤处理。
3.准备所需的无菌器械、吸管、离心管等。
二、接种细胞至培养板1.在无菌操作台上，用无菌吸管吸取适量的细胞悬液。
2.将细胞悬液均匀接种至培养板中，每个孔内的细胞数量应保持一致。
3.将接种好的培养板放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
三、定时观察与计数1.在接种后的不同时间点（如每天或每24小时）观察细胞的生长情况。
2.使用倒置显微镜观察细胞的贴壁生长和形态变化，以及细胞数量的变化。
3.在特定时间点，使用血细胞计数板或自动细胞计数器对细胞进行计数。
四、记录数据1.将每次观察和计数的结果详细记录下来，包括细胞数量、形态变化等。
2.记录实验过程中的温度、湿度、二氧化碳浓度等环境参数。
五、绘制生长曲线1.根据记录的数据，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，绘制细胞生长曲线图。
2.生长曲线应反映出细胞数量随时间的变化趋势。
六、数据分析1.分析生长曲线，计算细胞的倍增时间、生长速率等参数。
2.比较不同条件下的细胞生长情况，分析影响细胞生长的因素。
七、清洗与消毒1.实验结束后，将使用过的器械、培养板等进行清洗和消毒处理。
2.清洗可使用去离子水或清洗剂，消毒可使用75%酒精或紫外线照射等方法。
八、实验总结1.总结实验过程中的经验教训，分析可能存在的误差来源。
2.根据实验结果，提出改进实验方法的建议或对未来研究方向的展望。
请注意，以上步骤仅为一般性的细胞生长曲线实验步骤，具体实验过程可能因细胞类型、实验条件等因素而有所不同。
在实际操作中，请遵循实验室的安全规定和操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞生长曲线绘制
细胞生长曲线绘制
细胞生长曲线是描述细胞增殖数随时间变化的曲线，也是细胞生长动力学研究的基础。
细胞生长曲线可以帮助我们更好地了解细胞生长的规律，同时也可以为细胞培养和生长调
控提供重要参考。
本文将简单介绍细胞生长曲线的绘制方法。
细胞生长曲线的绘制方法可以分为以下几个步骤：
1. 细胞培养
绘制细胞生长曲线前，首先需要进行细胞培养。
细胞培养条件包括培养基、温度、湿度、二氧化碳浓度等。
需要注意的是，不同的细胞会对培养条件有不同的要求，因此需要
根据不同类型的细胞选择不同的培养条件。
2. 细胞计数
在培养细胞的过程中，需要定期检测细胞数。
可以使用显微镜进行手动计数，也可以
利用细胞计数器进行自动计数。
手动计数的精度较低，而自动计数器则能更加准确地确定
细胞数。
在细胞计数完成后，将得到一系列不同时间点的细胞数数据。
然后可以将这些数据用
图表的形式展示出来，绘制成细胞生长曲线图。
这个过程可以使用计算机软件进行，如Excel等。
在绘制细胞生长曲线时，可以用细胞数目作为Y轴，时间作为X轴。
根据细胞生长曲
线的特点，可以将其分为四个阶段：潜伏期、指数增长期、平稳期和衰亡期。
其中，指数
增长期是细胞生长最快的阶段，而平稳期则是指细胞数增长缓慢、趋于稳定的阶段。
细胞生长曲线的形态会受到多种因素的影响，如细胞类型、培养条件等。
因此，绘制
细胞生长曲线时需要对细胞类型和培养条件进行详细的记录和分析，以更好地了解细胞生
长的规律。
细胞生长曲线的测定
细胞生长曲线的测定细胞生长曲线的测定一：背景与原理生长曲线是测定细胞生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后渡过长短不同的潜伏期，即进入快速生长的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，需连续对细胞进行计数。
通常计数6天。
为精确起见，一般每次实验设3个平行重复。
【晶莱生物】二：材料、试剂与仪器1. 实验材料Hela细胞系。
2. 实验试剂DMEM培养基（青霉素，链霉素，10%血清），0.25%胰蛋白酶溶液，台酚蓝染液。
3. 实验仪器超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，微量移液器，血细胞计数板，培养瓶，离心管，移液管，废液缸，盖玻片，24孔板。
三：方法与步骤1.取生长良好的细胞，用培养基制成细胞悬液后计数。
根据细胞计数结果按5×104/mL作传代培养接种于24孔板中，共接种21孔细胞。
1 ml/孔。
余下三孔可设传代培养的对照。
2.24h后每天记录细胞数目，每次取3孔细胞，分别进行计数。
计算平均值。
连续计数7d。
细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基，混匀制成细胞悬液。
取少量悬液与台酚蓝1:1混合。
取一干净的血细胞计数板，盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。
注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。
3.低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。
找出计数板上的方格，计算四角大格内总细胞数，压大格线者只计左侧和上方，不计右侧和下方细胞悬液中细胞密度计算公式为：细胞数/mL=（四角大格内细胞数/4）×104×24.根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/mL）为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
MTT法观察细胞生长曲线
MTT法绘制生长曲线一细胞生长曲线：A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。
B、背景知识细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。
只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。
因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。
原理（选填项目）：细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
C、材料（一）仪器1. 净化工作台2. 离心机3. 恒温水浴箱4. 冰箱（4℃、-20℃）5. 倒置相差显微镜6. 培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度）（二）玻璃器皿1. 吸管（弯头）2. 培养瓶3. 玻璃瓶（250ml、100ml）4. 废液缸（三）塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 24培养板4. 胶塞（四）其他物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板（五）试剂1. D-Hanks液2. 小牛血清3. RPMI16404. 双抗（青霉素、链霉素）5. 0.08%胰酶（四）、操作步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液；2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。
3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。
培养3～5d常要给未计数的细胞换液。
4. 以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲线后即成该细胞的生长曲线。
9（五）、注意事项1．细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。
2．现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。
3．标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。
4．在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。
细胞生长曲线的测定
（一）细胞生长曲线的测定（细胞计数法）1．取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数(见四、细胞传代培养的实验步骤)。
如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。
3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。
计算平均值。
连续计数7 d。
4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
(细胞计数方法请参照实验三)(二)细胞生长曲线测定(MTT法) 1．制备1 mL细胞悬液。
空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。
加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h。
使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
2．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。
3．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。
4．每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。
（二）细胞蛋白电泳一.细胞总蛋白抽提细胞裂解液三去污裂解液:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)，150 mmol/L NaCl，0.2 g/L叠氮钠，1 g/LSDS，100 mg/L Aprotin，10 g/L NP-40，5 g/L去氧胆酸钠，100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3 次2.加入裂解缓冲液（1.5x10 6 个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），冰上放置20min3.收集裂解液4.离心，12000转，2~10min5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-78度备用。
试剂：1. 30% 聚丙烯酰胺：29g 丙烯酰胺，1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺，100ml 水，0.45um 滤膜过滤，棕色瓶，室温保存2. 10% 过硫酸铵：1g 过硫酸铵，10ml 水，4℃保存3. 10% SDS：100g SDS，1000ml 水，68℃助溶，pH 7.24. TEMED：lml TEMED，99ml 水，棕色瓶，4℃保存5. 5X Tirs-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tirs碱，94g 甘氨酸，50ml 10%SDS，1000ml 水，使用时配制成1X【操作步骤】l.将电泳槽玻璃板洗净，吹干，安装好；2.用1％的琼脂糖电泳缓冲液（1g琼脂糖溶于100ml电泳缓冲液）封严玻璃板的边和底（保证不漏胶）；3.配分离胶，将配好的分离胶立即倒入凝胶槽内，至凝胶槽高三分之二处，加入蒸馏水密封。
细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇
细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇An experimental report on the drawing of cell growth c urve编订：JinTai College细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。
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本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1：细胞生长曲线的测定文档2、篇章2：MTT法绘制生长曲线文档篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的学习了解微生物生长量测定的方法学习了解细菌生长曲线的绘制方法学习掌握血细胞计数板的使用方法（一）微生物生长量的测定计数法重量法生理指标法1、显微镜直接计数法（1）利用血细胞计数板计数（二）细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growth curve）篇章1:细胞生长曲线的测定文档一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。
2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。
为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。
3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。
MRC-5体外培养细胞生长曲线测定 - 详细
MRC-5体外培养细胞生长曲线测定一．实验目的认识细胞接种和传代培养中细胞生长增殖规律。
二．实验原理在培养接种或每一次传代培养过程中，培养物都要经历相似的恢复和生长过程。
细胞生长曲线反映的是培养细胞从接种到传代之前的生长状况，也是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，紧接着进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平台期及退化衰亡4个部分。
以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标绘制细胞的生长曲线坐标图。
三．实验准备3.1实验人员用品工作服、帽子、口罩、手套、肥皂、医用手臂消毒桶、0.1%新洁尔灭消毒液；3.2消毒和灭菌用品电炉、高压蒸汽灭菌锅、铝盒、24孔细胞培养板、移液管、枪头、洗耳球、离心管（规格：1.5mL/5mL/10mL）；3.3药品和试剂DMEM细胞培养液（10%血清）、0.25%胰蛋白酶-0.53Mm EDTA、PBS(-)；3.4 细胞MRC-5人二倍体细胞；3.5设备与器材CO2培养箱、离心机、移液枪（规格：1000uL、200uL）、二级生物安全柜、血细胞计数板、显微镜、记号笔、废液瓶；四．实验步骤4.1细胞接种4.1.1选择生长良好的MRC-5人二倍体细胞，移液管移除原细胞培养液至废液瓶中；4.1.2 DPBS润洗三次，每次5mL；4.1.3 吸管吸取1mL胰蛋白酶溶液浸润培养层细胞，37℃恒温消化2～10min；4.1.4用含10%血清的DMEM培养液4mL终止消化；4.1.5将终止消化后的细胞悬液用移液管转移至离心管中，1000r/min离心8min，弃上清；4.1.6吸管吸取2mL DMEM细胞培养液悬浮细胞；4.1.7对细胞悬浮液进行细胞计数；4.1.8调整悬浮液的细胞浓度分别为5×103个/mL(A) 、2×104个/mL(B)、 5×104个/mL(C)3种不同的细胞浓度（细胞理论数：1.575×104个）；4.2 细胞培养4.2.1依次将浓度为5×103个/mL(A) 、2×104个/mL(B)、 5×104个/mL(C)的细胞悬液分装于3个有盖的24孔细胞培养板，分别按每孔接种1mL，每种浓度各接21孔，进行细胞的悬浮培养；4.3 细胞换液细胞接种培养后，分别按照每间隔3d和5d换液一次。
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细胞生长曲线的绘制及注意事项
1.取对数生长期细胞，用胰酶消化收集，调整单细胞悬液密度为104~105个/mL视细胞贴壁后的大小，倍增时间等因素确定接种密度。
按200μl/孔（1×104个细胞）接种于96孔培养板内，每组细胞接种5个孔，取平均值，切记各孔的接种密度一致。
2.置37℃、5％CO2气相和饱和湿度的CO2培养箱中培养，
3.用PBS配制5mg/ml的MTT溶液，0.22微膜过滤除菌，4度保存。
(MTT溶剂需避光4度保存，配好的溶剂有效期两周，过期的不能再用于实验，须重配)
4.从第24 h开始，每隔24 h随机取1块96孔板，96孔板每孔加入20μl 5mg/mL MTT液，继续培养4 h后，吸出孔内培养液；向每孔加入150μl DMSO。
将培养板置于微孔板振荡器上振荡10 min，使结晶物溶解。
5.酶联免疫检测仪检测各孔OD值，检测波长570 nm, 以时间为横坐标，平均OD值为纵坐标，记录并绘制细胞生长曲线。
备注：
A.选择适当的细胞接种浓度。
因此，在进行MTT试验前，对每一种细胞都应测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，然后确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止时不致细胞过满。
这样，才能保证MTT结晶形成的量与细胞数呈良好的线性关系。
B.细胞生长曲线方法96孔板太小,接种细胞多时,用不了几天就长满,因一般要做5-7天);接种细胞少时,不易养活.
C.避免血清干扰。
用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高浓度的血清物质会影响试验孔的吸光值。
由于试验本底增加，会降低试验敏感性。
因此，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
D.操作过程中按常规换液.一般2-3天换液,如果不换液,则酸性产物等代谢产物积聚,一方面培养环境改变影响细胞生长,另一方面细胞营养消耗过多,生长变慢.做细胞生长曲线的目的是反映其生长特性,增殖能力,不换液则与我们平时细胞生长环境不一致.结果不科学.
E.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。
调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。
对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。