革兰氏染色液

革兰氏染色法是细菌学中最常用的一种鉴别染色法。

材料

1．葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。

2．结晶紫染色液。

3．革兰氏碘液。

4．95％酒精。

5．番红染液。

6．载玻片。

方法

一、涂片标本的制备（见实验一）

二、革兰氏染色法

1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 2．媒染：滴加革兰氏碘液，作用1—3分钟，水洗。

3．脱色：滴加 95％酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。

4．复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。

结果：视野中可以察见两种细菌：

葡萄球菌：紫色、球形、葡萄状排列。

大肠杆菌：红色、杆状、散在排列。

【附】革兰氏染色法各种染液的配制

一、结晶紫（Ｃｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔ）染液

结晶紫 2.0g

草酸铵 0.8g

95％酒精 20ml

蒸馏水 80ml

先将结晶紫溶于酒精，草酸铵溶于蒸馏水中，然后将两液混合，静置４８小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。

二、革兰氏碘液

碘 1.0g

碘化钾 2.0g

蒸馏水 300ml

先将碘与碘化钾混合，加水少许，略加摇动，待碘完全溶解后再加蒸馏水至定量。

三、脱色剂：95％酒精

四、复染剂：番红（沙黄ＳａｆｒａnｉｎｅＯ）染液

沙黄（ＳａｆｒａnｉｎｅＯ）０．２５ｇ

９５％乙醇１０ｍｌ

蒸馏水适量

将沙黄溶解于９５％乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ