器皿的洗涤包扎灭菌ppt课件
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实验二 玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌课件
高 压 蒸 汽 消 毒 器
（干热灭菌）
(1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸包好， 或装入特制的铁筒中。
(2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留有一 定的空隙以便流通空气。
(3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。 (4)待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，继续
加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定温度，在 160℃～165℃保持2小时即可。 (5)待自然降温冷却后(60℃以下)才能开门取出玻璃器皿。
通气塞：几层纱布（一般8层）相互重叠，或两 层纱布间均匀铺一层棉花而成
3、消毒与灭菌
消毒：一般是消灭病原菌和有害微生物的
营养体而言
灭菌：则是消灭一切微生物的营养体，芽
孢和孢子
分类： 加热法—干热灭菌，湿热灭菌 过滤除菌 辐射灭菌 化学药品灭菌
掌握各类灭菌原理
步骤：高压蒸汽灭菌
此法是将物品放在密闭的高压蒸汽锅内0.1MPa， 121℃保持15～30min进行灭菌。时间长短可根据 灭菌物品和数量的不同而有所不同，以达到彻底 灭菌为准。这种方法适用于工作服﹑橡胶物品﹑ 培养基的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。
实验二 玻璃器皿的清洗，包扎及灭菌
一、目的要求
1、学习并掌握玻璃器皿的清洗，包扎方法 2ห้องสมุดไป่ตู้学习并掌握玻璃器皿灭菌的方法。
二、实验原理及操作
玻璃器皿一般要求硬质玻璃，才能承受 高温和短暂灼烧而不致破裂； 玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影 响培养基的酸碱度； 玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止 污染杂菌为准； 洗涤玻璃器皿方法不当会影响实验结果
（3） 、试管和三角烧瓶的包装 洗净干燥后的试管和三角烧瓶，管口和
瓶口塞棉花塞。许多试管装入铁丝筐内， 再用大张报纸或牛皮纸捆扎，干热或湿热 灭菌。三角烧瓶再用报纸或牛皮纸包扎， 细线捆之
玻璃器皿的清洗包扎和高压蒸汽灭菌(2)课件
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约 1.5厘米的棉花，以拉直的 曲别针一端放在棉花的中 心，轻轻捅入管口，松紧 必须适中，松紧程度以吹 气时通气顺畅而不致下滑 为准，管口外露的棉花纤 维统一通过火焰烧去。然 后，将吸管尖端放在4-5厘 米宽的长条纸的一端约与 纸条成45°角，折叠纸条， 包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余 纸条折叠打结，待灭菌。
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（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞 ，以保证玻璃器皿于 灭菌后不被外界杂菌 所污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微 生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌 的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤， 即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速 彻底。对于接种环，接种针或其它金属用 具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行 灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角 瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的 。
器械器具清洗消毒ppt课件
二、分ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ：
❖ 1、按个人防护要求着装，与下收人员交接回 收的物品数量。
❖ 2、根据器械的不同材质、性状、精密程度、 污染状况进行分类。
三、清洗：
❖ 不同类型的器械、物品，采用不同的清 洗方法
❖ (包括手工清洗和机械清洗)。 ❖ 耐热、耐湿的器械、物品宜采用机械清
洗方法。 ❖ 精密、复杂的器械应先手工清洗、超声
11
疑惑：清洗不干净
精选ppt课件
12
血液，蛋白质，药物残留
❖ 手工清洗的原因：
1、污染物品再处理时间太长 间
2、使用不合适的器械清洁液 和消毒剂处理
3、 处理后冲洗不充分
器械清洗的原因
1、 使用和污染物品再处理时
太长 2、 第一清洗时进水温度过高
（大于45c) 3、 冲洗不充分（冲洗量、压
力不够） 4、铰链器械未张开 5、清洗负荷过载
加酶洗，再用机械清洗方法或手工精洗。
清洗的流程
❖ 清洗基本流程：预洗(自来水)—→清洗(手工或机械+酶)—→ 漂洗1(自来水)—→漂洗2(去离子水或蒸馏水)—→消毒(湿热 方法)—→润滑(水溶性油)—→干燥(烘干或擦干)：
❖ (1)预洗(3~5min)：用流水去除明显的污物(若污物变干，可 多浸泡几分钟)。
精选ppt课件
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清洗效果的验证
“肉眼观察”仍是最快, 最简单, 最方便的方法
精选ppt课件
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四、检查：
❖ 清洗质量的检查：目测或使用带光源的放大镜对干 燥后的每件器械、器具进行检查。器械表面及关节、 齿牙处应光洁无残留物质、血渍、水垢、锈斑，功 能完好无损毁。
❖ 清洗质量不和格的 ，应重新清洗处理。有锈迹，应 除锈；器械功能损毁或锈蚀严重，应及时维修或报 废。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
实验玻璃器皿的包扎及灭菌ppt课件PPT文档共18页
Central Laboratory of Biology
实验结果
• 记录自己制作的实验用品（含无菌水）名 称的规格与数量。
College of Life Sciences, Hubei Normal University
Central Laboratory of Biology
注意事项
1. 实验前，熟悉实验室平面布局图，了解实 验仪器用品摆放规律及用途。
Central Laboratory of Biology
上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用
1）打开电源与开关，检 查水位显示灯；
2）加灭菌物品； 3）盖紧； 4）设定温度和时间； 5）查看排气（水）阀旋
至排气处；
6）排气； 7）结束后取物。
College of Life Sciences, Hubei Normal University
器皿一般可以用去污粉、肥皂或洗洁净清 洗。
琼脂培养基的器皿应先将培养基刮去。
琼脂和固体物不能丢弃到水池中，以免堵 塞管ife Sciences, Hubei Normal University
Central Laboratory of Biology
Thank you
Central Laboratory of Biology
生 物 学
实 Thanks for your attention!
验 教 学 中 心
Central laboratory of Biology
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
《清洗消毒灭菌操作》PPT课件
滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒 素、抗生素、药液、空气等除菌。但是比细菌还小的 病毒仍然能留在液体培养基内，有时会给实验带来一 定的麻烦。
滤菌器的种类很多，目前常用的有蔡氏滤菌器、 玻璃滤器、薄膜滤器。
〔二〕化学消毒法
化学药物根据其抑菌或杀死微生物的效应分为 杀菌剂、消毒剂、防腐剂三类。 1.凡杀死一切微生物及其孢子的药剂称杀菌剂； 2.只杀死感染性病原微生物的药剂称消毒剂； 3. 只能抑制微生物生长和繁殖的药剂称为防腐剂。
的效果。
2.辐射
利用辐射进展灭菌消毒，可以防止高温灭菌 或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广 。
1.紫外线：紫外线波长为200～300nm时具有杀菌作 用，其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是 作用于细菌DNA，使同一条DNA 链上相邻的两个 胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变 DNA的分子构型，干扰细菌DNA的复制与转录， 导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适 用于空气及不耐热物品的外表消毒。
在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空 气已经排空，否那么表上的蒸汽压与蒸汽温度 之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。
定期对灭菌效果进展监测和验证，可采用：
物理监测法〔留点温度计法、热电偶法〕；
化学指示剂法〔化学指示胶带、指示卡等〕；
生物指示法〔孢子悬液、孢子条带等〕监控 高压灭菌
〔一〕物理消毒灭菌法
1.热力灭菌法 热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两
大类。在同一温度下， 后者效力比前者为 大，这是因为： 〔1〕湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； 〔2〕湿热的穿透力比干热大； 〔3〕湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变 为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭 菌物体的温度。
加热灭菌和加热消毒的方法
滤菌器的种类很多，目前常用的有蔡氏滤菌器、 玻璃滤器、薄膜滤器。
〔二〕化学消毒法
化学药物根据其抑菌或杀死微生物的效应分为 杀菌剂、消毒剂、防腐剂三类。 1.凡杀死一切微生物及其孢子的药剂称杀菌剂； 2.只杀死感染性病原微生物的药剂称消毒剂； 3. 只能抑制微生物生长和繁殖的药剂称为防腐剂。
的效果。
2.辐射
利用辐射进展灭菌消毒，可以防止高温灭菌 或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广 。
1.紫外线：紫外线波长为200～300nm时具有杀菌作 用，其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是 作用于细菌DNA，使同一条DNA 链上相邻的两个 胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变 DNA的分子构型，干扰细菌DNA的复制与转录， 导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适 用于空气及不耐热物品的外表消毒。
在高压蒸汽灭菌前要确保高压锅中的所有冷空 气已经排空，否那么表上的蒸汽压与蒸汽温度 之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。
定期对灭菌效果进展监测和验证，可采用：
物理监测法〔留点温度计法、热电偶法〕；
化学指示剂法〔化学指示胶带、指示卡等〕；
生物指示法〔孢子悬液、孢子条带等〕监控 高压灭菌
〔一〕物理消毒灭菌法
1.热力灭菌法 热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两
大类。在同一温度下， 后者效力比前者为 大，这是因为： 〔1〕湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； 〔2〕湿热的穿透力比干热大； 〔3〕湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变 为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭 菌物体的温度。
加热灭菌和加热消毒的方法
实验二玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌
响培养基的酸碱度；
玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止
污染杂菌为准； 洗涤玻璃器皿方法不当会影响实验结果
第三页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
1、玻璃器皿的清洗方法
(1)、新购的玻璃器皿 首先浸泡于１～２％的盐酸或洗涤液中数 小时，最后用流水冲净。
第四页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
（2）、使用过的玻璃器皿的清洗方法 试管、培养皿、等 可用瓶刷及去污粉刷 洗然后自来水冲洗干净。 若内壁水均匀分布成一薄层而不出现水珠， 为油污完全洗净。否则，再浸泡数小时。
实验二 玻璃器皿的清洗，包扎及灭菌
第一页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
一、目的要求
1、学习并掌握玻璃器皿的清洗，包扎方法
2、学习并掌握玻璃器皿灭菌的方法。
第二页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
二、实验原理及操作
玻璃器皿一般要求硬质玻璃，才能承受 高温和短暂灼烧而不致破裂； 玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影
此法是将物品放在密闭的高压蒸汽锅内0.1MPa，121℃
保持15～30min进行灭菌。时间长短可根据灭菌物品和数
量的不同而有所不同，以达到彻底灭菌为准。这种方法
适用于工作服﹑橡胶物品﹑培养基的灭菌，也可用于玻璃 器皿的灭菌。
第十八页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
高 压
蒸 汽
消 毒
器
第十九页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
第十三页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
第十四页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
棉塞：加塞时，1／3在试管口外，2／3在试管 口内。如图2-2所示。做棉塞的棉花要选 纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞
通气塞：几层纱布（一般8层）相互重叠，或两 层纱布间均匀铺一层棉花而成
玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止
污染杂菌为准； 洗涤玻璃器皿方法不当会影响实验结果
第三页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
1、玻璃器皿的清洗方法
(1)、新购的玻璃器皿 首先浸泡于１～２％的盐酸或洗涤液中数 小时，最后用流水冲净。
第四页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
（2）、使用过的玻璃器皿的清洗方法 试管、培养皿、等 可用瓶刷及去污粉刷 洗然后自来水冲洗干净。 若内壁水均匀分布成一薄层而不出现水珠， 为油污完全洗净。否则，再浸泡数小时。
实验二 玻璃器皿的清洗，包扎及灭菌
第一页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
一、目的要求
1、学习并掌握玻璃器皿的清洗，包扎方法
2、学习并掌握玻璃器皿灭菌的方法。
第二页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
二、实验原理及操作
玻璃器皿一般要求硬质玻璃，才能承受 高温和短暂灼烧而不致破裂； 玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影
此法是将物品放在密闭的高压蒸汽锅内0.1MPa，121℃
保持15～30min进行灭菌。时间长短可根据灭菌物品和数
量的不同而有所不同，以达到彻底灭菌为准。这种方法
适用于工作服﹑橡胶物品﹑培养基的灭菌，也可用于玻璃 器皿的灭菌。
第十八页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
高 压
蒸 汽
消 毒
器
第十九页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
第十三页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
第十四页，编辑于星期六：十二点 五十四分。
棉塞：加塞时，1／3在试管口外，2／3在试管 口内。如图2-2所示。做棉塞的棉花要选 纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞
通气塞：几层纱布（一般8层）相互重叠，或两 层纱布间均匀铺一层棉花而成
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌 18页PPT文档
玻璃器皿的清洗包扎 培养基的配制及灭菌
基本原理
（一）实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一 定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高 温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否 则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的 要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也 会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿 （如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃 器皿仍是重要的实验室用具。
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
培养基的成分和pH
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、 氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求 不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的 （嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时， 都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适 的范围。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线 灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％ 的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘 埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室 内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再 开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目 的。
基本原理
（一）实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一 定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高 温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否 则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的 要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也 会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿 （如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃 器皿仍是重要的实验室用具。
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
培养基的成分和pH
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、 氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求 不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的 （嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时， 都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适 的范围。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线 灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％ 的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘 埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室 内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再 开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目 的。
玻璃器皿的清洗包扎,培养基的配制及灭菌(共13张PPT)
分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进行 一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存 在，然后使其长成一个个纯种单菌落。上述工作又离不开接种， 即将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程。
第3页，共13页。
Hale Waihona Puke 分离纯化常用的方法有：（1）简易单细胞挑取法
（2）平板分离法
选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、 温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制
马丁、高氏培养基板于28 ℃倒置培养5d，肉汤 培养基于37 ℃倒置培养28h后观察
第11页，共13页。
第12页，共13页。
作业：
1.在三种不同的平板上你分离得到哪些类群的微生物？
简述它们的菌落特征。
2 .如何确定平板上某个菌落是否为纯培养？请写出试验 的主要步骤。 3如果一项科学研究内容许从自然界中筛选到能产生 高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实 验方案。
培养后可观察有无孤立菌落生长，每一孤立菌落即为一纯种细菌。 一般病原菌的菌落数少于杂菌，故在分离培养时，应力求出现较多的 孤立菌落，以提高病原菌检出率。
第10页，共13页。
5.稀释混合倒平板
肉汤培养基融化备用；1ml无菌吸管加菌悬液于 空皿中；无菌操作将冷却至50℃左右的培养基倒入 上述平板内，旋转混合均匀。 6.恒温培养箱培养
第6页，共13页。
四.实验内容及方法
1.采集土样，制备土壤悬液：1g土稀释 到10-7；
倒平板→划线→培养→挑单菌落→接种移植→保存
第7页，共13页。
2.倒平板 : 右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻
轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在 火焰附近打开一缝，迅速倒人培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿， 使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平 板。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。
第3页，共13页。
Hale Waihona Puke 分离纯化常用的方法有：（1）简易单细胞挑取法
（2）平板分离法
选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、 温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制
马丁、高氏培养基板于28 ℃倒置培养5d，肉汤 培养基于37 ℃倒置培养28h后观察
第11页，共13页。
第12页，共13页。
作业：
1.在三种不同的平板上你分离得到哪些类群的微生物？
简述它们的菌落特征。
2 .如何确定平板上某个菌落是否为纯培养？请写出试验 的主要步骤。 3如果一项科学研究内容许从自然界中筛选到能产生 高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实 验方案。
培养后可观察有无孤立菌落生长，每一孤立菌落即为一纯种细菌。 一般病原菌的菌落数少于杂菌，故在分离培养时，应力求出现较多的 孤立菌落，以提高病原菌检出率。
第10页，共13页。
5.稀释混合倒平板
肉汤培养基融化备用；1ml无菌吸管加菌悬液于 空皿中；无菌操作将冷却至50℃左右的培养基倒入 上述平板内，旋转混合均匀。 6.恒温培养箱培养
第6页，共13页。
四.实验内容及方法
1.采集土样，制备土壤悬液：1g土稀释 到10-7；
倒平板→划线→培养→挑单菌落→接种移植→保存
第7页，共13页。
2.倒平板 : 右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻
轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在 火焰附近打开一缝，迅速倒人培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿， 使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平 板。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌培训课件
7．降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下 降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅 盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。
8注．长意无，事菌即项检可：查待使用将用。已灭灭菌菌锅培应养严基格于按3照7℃操培作养程2序4进h，行无，杂避菌免生发 生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
28
斜面划线法（a） 不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
29
穿刺接种 （a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
30
四、实验报告
列表比较各种接种方法及注意事项。
五、问题和讨论
1、斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在 无菌培养基上沾一下？
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
18
一、实验目的：
了解各种微生物接种方法。
二、实验材料和用具：
已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、 移液管、记号笔
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
19
三、实验步骤：
1、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量
菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法 。具体操作如下： (1)贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、
5
(3)操作步骤：
1）称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后 倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛 肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故 称量时要迅速。
2）加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并 用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配 制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加 热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后 补足所失的水分。
8注．长意无，事菌即项检可：查待使用将用。已灭灭菌菌锅培应养严基格于按3照7℃操培作养程2序4进h，行无，杂避菌免生发 生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
28
斜面划线法（a） 不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
29
穿刺接种 （a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
30
四、实验报告
列表比较各种接种方法及注意事项。
五、问题和讨论
1、斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在 无菌培养基上沾一下？
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
18
一、实验目的：
了解各种微生物接种方法。
二、实验材料和用具：
已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、 移液管、记号笔
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
19
三、实验步骤：
1、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量
菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法 。具体操作如下： (1)贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、
5
(3)操作步骤：
1）称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后 倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛 肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故 称量时要迅速。
2）加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并 用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配 制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加 热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后 补足所失的水分。
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1、培养皿的包扎 一般以5-8套培养皿做一包
2、吸管的包扎
准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜 放在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将 左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管 卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。
3、试管和三角瓶等的包扎
（6）开锅。当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降
到零时，打开锅盖，取出灭菌物品： （7）排水。最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 （8）观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25℃温箱 中，培养48小时观察灭菌效果。 48小时后不见杂
菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使
用。
器皿的洗涤包 扎灭菌
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法；
2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实
验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对
培养皿、吸管等进行包扎，
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
（一）、玻璃器皿的洗涤方法
1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 净（本次实验不要求）
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
Байду номын сангаас
（二）玻璃器皿的包扎
（3）通电加温，排冷空气
通常当压力表指针升至0.05MPa时，打开排气阀
放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再
关闭排气阀门。
（4）恒温灭菌 • 0.1MPa锅内温度相当于120℃～121℃此时开始计 算灭菌时间，保持20分钟。
（5）降温
自然降温或锅内压力低于0.05MPa时打开 打开排气阀降温。注意勿使排气过快，否 则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉 花塞。
试管口和三角瓶口用棉花塞（单用棉花或纱
布包棉花）
棉花塞与管口和瓶口的外面可以用报纸与 细线扎好。
三、高压蒸汽灭菌法
（1）加水
关好排水阀门，放入水至标度。注意水量一定要加足，否
则容易造成事故。
（2）旋紧灭菌锅
将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加
盖密封。先将每个螺旋旋转到一定程度（不要太 紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡 旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的 。
2、吸管的包扎
准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜 放在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将 左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管 卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。
3、试管和三角瓶等的包扎
（6）开锅。当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降
到零时，打开锅盖，取出灭菌物品： （7）排水。最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 （8）观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25℃温箱 中，培养48小时观察灭菌效果。 48小时后不见杂
菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使
用。
器皿的洗涤包 扎灭菌
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法；
2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实
验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对
培养皿、吸管等进行包扎，
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
（一）、玻璃器皿的洗涤方法
1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 净（本次实验不要求）
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
Байду номын сангаас
（二）玻璃器皿的包扎
（3）通电加温，排冷空气
通常当压力表指针升至0.05MPa时，打开排气阀
放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再
关闭排气阀门。
（4）恒温灭菌 • 0.1MPa锅内温度相当于120℃～121℃此时开始计 算灭菌时间，保持20分钟。
（5）降温
自然降温或锅内压力低于0.05MPa时打开 打开排气阀降温。注意勿使排气过快，否 则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉 花塞。
试管口和三角瓶口用棉花塞（单用棉花或纱
布包棉花）
棉花塞与管口和瓶口的外面可以用报纸与 细线扎好。
三、高压蒸汽灭菌法
（1）加水
关好排水阀门，放入水至标度。注意水量一定要加足，否
则容易造成事故。
（2）旋紧灭菌锅
将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加
盖密封。先将每个螺旋旋转到一定程度（不要太 紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡 旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的 。