药物中特殊杂质的检查

药物中特殊杂质的检查

一、实验目的

1.掌握某些药物中特殊杂质的来源和检查原理。

2.掌握薄层色谱法用于特殊杂质检查的一般操作。

3.掌握旋光光度法用于特殊杂质检查的一般操作。 二、仪器与试药

1.仪器

Mettler AL204电子天平 WZZ-1型自动旋光仪 刻度移液管 规格：1mL 、5mL 、10mL 研钵

容量瓶 规格：50mL 、100mL 、1000mL 酸式滴定管 规格：50mL 2.试药

乙酰水杨酸 硫酸阿托品 盐酸普鲁卡因 规格：2mL/支

乙醇 硫酸铁铵 水杨酸 冰醋酸 对氨基苯甲酸 羧甲基纤维素钠 苯 硅胶H （薄层层析用） 冰醋酸 丙酮 甲醇 对二甲氨基苯甲醛 蒸馏水 三、实验原理

1.乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查

游离水杨酸为生产中未反应的原料或乙酰水杨酸贮存过程中的水解产物，由于结构中酚羟基在空气中逐渐被氧化，成为淡黄到红棕色的一系列醌型化合物，而使乙酰水杨酸变色。

2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查

盐酸普鲁卡因分子中含酯键，因此盐酸普鲁卡因注射液在贮藏期间，普鲁卡因易水解。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液pH 值、光线等因素影响，可发生水解反应生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基乙醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热，可进一步脱羧转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色物，使注射液变黄。已变黄的注射液不仅疗效下降，而且毒性增加。故药典规定检查对氨基苯甲酸。

-二甲氨基苯甲醛溶液，在冰醋酸存在下与对氨基苯甲酸缩合形成Schiff 碱呈有色斑点，并同时与对照品溶液的主斑点进行比较。

COOH OCOCH 3

+H 2O

COOH

OH +CH 3COOH 6

COOH

OH

+

4 Fe

3+

Fe(

COO

O --)23

Fe

++

12H

+

N

C H 3C

H 3N

H 2COOH

CH=N N C

H 3C

H 3COOH

N

C NH C H 3H 3COOH

+

+

H +

（三）硫酸阿托品中莨菪碱的检查

利用药物和杂质有无旋光性的差异可进行药物中特殊杂质的检查。硫酸阿托品是由莨菪碱外消旋后制得，所以硫酸阿托品为消旋体，无旋光性，而莨菪碱为左旋体。我国药典采用测定供试品溶液（50mg/mL）的旋光度，不得过-0.40º，以控制莨菪碱的限量，从而保证硫酸阿托品的纯度。

四、实验内容

1.乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查

取本品0.10g，加乙醇1mL溶解后，加冷水适量使成50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液1mL，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1mL，摇匀，再加水使成1000mL，摇匀；精密量取1mL，加乙醇1mL，水48mL与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1mL，摇匀）比较，不得更深（0.1%）。

稀硫酸铁铵溶液：取盐酸溶液（9→100）1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL。

2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查

精密量取本品，加乙醇稀释使成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸，加乙醇制成1mL中含30μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加入冰醋酸5mL制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深（1.2%）。

3.硫酸阿托品中莨菪碱的检查

取本品，按干燥品计算，加水制成每1mL中含50mg的溶液，依法测定，旋光度不得过-0.40º。

五、注意事项

1.乙酰水杨酸中检查游离水杨酸，比色管应尽量干燥，不得带过多水分，否则样品加醇后不易溶解。

2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查采用薄层色谱法，应用含羧甲基纤维素钠的硅胶H薄层板，具体制备方法如下：将1份硅胶H和3份羧甲基纤维素钠水溶液（0.5～0.7%）在研钵中向一个方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入薄层铺板器中，在玻板上平稳地移动铺板器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好的玻板，于室温下置水平台上晾干，在110℃活化30分钟，置于干燥器中备用。

3.硫酸阿托品中莨菪碱的检查采用旋光法，测定前应先检查旋光计，用蔗糖作为基准物进行。具体方法为：取经105℃干燥2小时的蔗糖，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1mL中含0.2g 的溶液，依法测定，结果应如下表：

温度15℃20℃25℃30℃

比旋度+66.68°+66.60°+66.53°+66.45°

六、思考题

1.试计算乙酰水杨酸中游离水杨酸的杂质限量。

2.设计药物中特殊杂质检查方法的依据是什么？

3.特殊杂质检查的常用方法有哪些？

七、参考文献

1.《中国药典》2010年版二部，283，化学工业出版社。

2.《中国药典》2010年版二部，580，化学工业出版社。

3.《中国药典》2010年版二部，735，化学工业出版社。