【医学课件】蛋白质含量测定
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《蛋白质的测定》PPT课件
选择蒸馏时间四—五分钟，自 动完成蒸馏；
滴定，计算氮及蛋白含量。
计算公式
WcV0.014F100 m
W—蛋白质的质量分数，%； c—盐酸规范液的浓度，mol/L； V—试剂滴定耗费规范液量，mL； m—样质量量，g； 0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol； F—蛋白质系数，6.25。
三、微量凯氏定氮法
原理与常量凯氏定氮法一样
设备安装
步骤
采样〔固体采样、液体采样〕 样品预处置 样品分析 样品数据处置 撰写分析报告
2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O
2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
2、仪器和试剂
① 500ml凯氏烧瓶
② 定氮蒸馏安装
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
硫酸铜 ；
硫酸钾；
硫酸；
40g∕L硼酸溶液：
混合指示剂：〔国标〕1g∕L甲基红乙醇溶液与1g∕L 甲基蓝乙醇溶液，临用时按2：1的比例混合。
或者1g∕L甲基红乙醇溶液与1g∕L溴
甲酚绿乙醇溶液，临用时按1：5的比例混合；
400g∕L氢氧化钠；
蛋白质的测定
一、测定食品中蛋白质含量的意义 二、常量凯氏定氮法 三、微量凯氏定氮法 四、自动凯氏定氮仪
一、概述
〔一〕测定意义 1、蛋白质作为三大供能物质，是食品的重要
营养目的。 2、人体组织的构成成分。 3、构成体内各种重要物质 4、蛋白质不是越多越好〔添加肾负担，骨质
滴定，计算氮及蛋白含量。
计算公式
WcV0.014F100 m
W—蛋白质的质量分数，%； c—盐酸规范液的浓度，mol/L； V—试剂滴定耗费规范液量，mL； m—样质量量，g； 0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol； F—蛋白质系数，6.25。
三、微量凯氏定氮法
原理与常量凯氏定氮法一样
设备安装
步骤
采样〔固体采样、液体采样〕 样品预处置 样品分析 样品数据处置 撰写分析报告
2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O
2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
2、仪器和试剂
① 500ml凯氏烧瓶
② 定氮蒸馏安装
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
硫酸铜 ；
硫酸钾；
硫酸；
40g∕L硼酸溶液：
混合指示剂：〔国标〕1g∕L甲基红乙醇溶液与1g∕L 甲基蓝乙醇溶液，临用时按2：1的比例混合。
或者1g∕L甲基红乙醇溶液与1g∕L溴
甲酚绿乙醇溶液，临用时按1：5的比例混合；
400g∕L氢氧化钠；
蛋白质的测定
一、测定食品中蛋白质含量的意义 二、常量凯氏定氮法 三、微量凯氏定氮法 四、自动凯氏定氮仪
一、概述
〔一〕测定意义 1、蛋白质作为三大供能物质，是食品的重要
营养目的。 2、人体组织的构成成分。 3、构成体内各种重要物质 4、蛋白质不是越多越好〔添加肾负担，骨质
血清蛋白质含量的测定ppt课件
4.在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。
蛋白质规范液浓度
血清总蛋白含量=浓度X稀释倍数
得
血清总蛋白含量=〔A测/A标〕X蛋白质规范液浓度X稀释倍 数
临床意义
19
1.清总蛋白增高： ①血液浓缩：腹泻、呕吐等。 ②合成添加：如多发性骨髓瘤等。 2.清总蛋白降低： ①血液稀释：过多注射低渗溶液，各种缘由 引起的水钠潴留。 ②摄入量缺乏和耗费添加：营养不良、慢性 肠胃炎、严重结核病等。 ③合成妨碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丧失：严重烧伤时大量血浆渗出， 肾综合症等。
No.3 血清总蛋白含量的测1 定
by:煜.明.奇.婷.远
2
实验目的
1. 熟习血清总蛋白的测定方法〔双缩脲法〕
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义
血清总蛋白
3
血清蛋白
球蛋白 白蛋白
35~50g/L 20~40g/L
4
蛋白质含量测定的几种方法
5
6
凯氏定氮法〔图〕
凯氏定氮法
浓硫酸
样品中的有机氮
可求得蛋白质的量。
留意！
13
1.双缩脲反响并非是蛋白质特有的颜色 反响！
2.凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨 基〔-CONH2-〕 均可呈双缩脲反响。
如： 3HCCONH
NHCOCH3
14
实验试剂
1.生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水
2.双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏 水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全 溶解后，参与24%NaOH100ml，用蒸馏水 稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保管。
无机铵盐 +OH-
催化剂
7
NH3
《血清蛋白质测定》课件
血清蛋白质按功能可分为载体蛋白、凝血蛋白、补体系 统成分、免疫球蛋白和酶等。
血清蛋白质的功能
维持血浆渗透压
血清蛋白质能够维持血浆 渗透压，保持血液的正常 循环。
参与物质运输
血清蛋白质能够结合并运 输脂类、离子、药物等物 质，维持体内代谢平衡。
参与免疫调节
血清蛋白质如免疫球蛋白 ，能够参与机体免疫应答 ，抵御病原体入侵。
发展前景广阔，血清蛋白质测定将在临床实践中发挥更加重要的作用，为患者带来更好的诊 疗体验和治疗效果。同时，随着生物技术的不断发展，血清蛋白质组学的研究也将得到更加 深入的开展，有望为疾病的诊断和治疗提供更多的线索和思路。
THANKS
感谢观看
通过金属表面增强效应，提高拉曼散 射信号，实现对蛋白质的快速、高灵 敏度检测。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行定性和定量 分析，具有高灵敏度、高特异性的优 点。
血清蛋白质组学的研究进展
血清蛋白质组学是研究血清中蛋白质组成、表达 01 和功能的一门科学，对于疾病诊断和治疗具有重
要意义。
血清蛋白质组学研究涉及蛋白质分离、鉴定、定 02 量和功能分析等多个方面，需要综合运用多种技
肝病患者由于肝功能受损，蛋白质合成能力下降，导致 血清蛋白质水平降低。通过测定血清蛋白质水平，可以 评估肝病患者的病情严重程度和预后。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝病患者常伴有血清白蛋白 、前白蛋白等指标的降低，这些指标的变化有助于指导 临床治疗和评估治疗效果。
肾病患者的血清蛋白质测定
肾病患者由于肾脏滤过功能受损，蛋白质从尿中 丢失，导致血清蛋白质水平降低。通过测定血清 蛋白质水平，可以评估肾病患者的病情严重程度 和预后。
02 血清蛋白质测定在临床实践中广泛应用于多种疾 病，如感染、肿瘤、心血管疾病等，为医生提供 重要的参考信息。
血清蛋白质的功能
维持血浆渗透压
血清蛋白质能够维持血浆 渗透压，保持血液的正常 循环。
参与物质运输
血清蛋白质能够结合并运 输脂类、离子、药物等物 质，维持体内代谢平衡。
参与免疫调节
血清蛋白质如免疫球蛋白 ，能够参与机体免疫应答 ，抵御病原体入侵。
发展前景广阔，血清蛋白质测定将在临床实践中发挥更加重要的作用，为患者带来更好的诊 疗体验和治疗效果。同时，随着生物技术的不断发展，血清蛋白质组学的研究也将得到更加 深入的开展，有望为疾病的诊断和治疗提供更多的线索和思路。
THANKS
感谢观看
通过金属表面增强效应，提高拉曼散 射信号，实现对蛋白质的快速、高灵 敏度检测。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行定性和定量 分析，具有高灵敏度、高特异性的优 点。
血清蛋白质组学的研究进展
血清蛋白质组学是研究血清中蛋白质组成、表达 01 和功能的一门科学，对于疾病诊断和治疗具有重
要意义。
血清蛋白质组学研究涉及蛋白质分离、鉴定、定 02 量和功能分析等多个方面，需要综合运用多种技
肝病患者由于肝功能受损，蛋白质合成能力下降，导致 血清蛋白质水平降低。通过测定血清蛋白质水平，可以 评估肝病患者的病情严重程度和预后。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝病患者常伴有血清白蛋白 、前白蛋白等指标的降低，这些指标的变化有助于指导 临床治疗和评估治疗效果。
肾病患者的血清蛋白质测定
肾病患者由于肾脏滤过功能受损，蛋白质从尿中 丢失，导致血清蛋白质水平降低。通过测定血清 蛋白质水平，可以评估肾病患者的病情严重程度 和预后。
02 血清蛋白质测定在临床实践中广泛应用于多种疾 病，如感染、肿瘤、心血管疾病等，为医生提供 重要的参考信息。
蛋白质的测定课件参考.ppt
1.装水至 2/3 容积 处，加甲 基橙数滴 及硫酸数 毫升以保 持酸性
4.NaOH 溶液
4.5.6 5.水洗漏 步操 斗数次 作要 6.夹好漏斗 迅速 夹，水封。
2.管下端 插入液面 下(瓶内先 装硼酸液 及混合指 示剂2滴)
7.水蒸气蒸馏至指示剂变绿色 开始计时，蒸馏10min，将管
8.吸收液用0.01000mol/L HCl标准溶液滴定至
总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值
精选课件
2
5、蛋白质的测定方法
利用蛋白质共性的方法
凯氏定氮法 杜马斯法
福林酚法
利用特定氨基酸残基法
染色法
精选课件
3
第二节 蛋白质的定性测定
一、蛋白质的一般显色反应
电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并 变色。书中列举了 5 种染料。
二、复合蛋白质的显色反应
第一节 概述
1.蛋白质的元素组成（The elements of protein）
▪ C：50-55% N：15-18% O：20-23%
▪ H：6-8% S：0-4%
▪ 微量元素：P、Fe、Zn、Cu
2、基本结构单位：氨基酸
3、蛋白质的变性作用。
精选课件
1
4、蛋白质分析的重要性
▪ 生物活性测定 ▪ 功能性质调查 ▪ 营养标签
精选课件
17
操作方法
▪ 1、制作标准曲线 取10支干试管分成两组，按下表平行操作：
0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1
2
3
4
标准蛋白液/ml
0.2 0.4 0.6 0.8
蛋白浓度 /(mg/ml)
2.0 4.0 6.0 8.0
蒸馏水/ml
4.NaOH 溶液
4.5.6 5.水洗漏 步操 斗数次 作要 6.夹好漏斗 迅速 夹，水封。
2.管下端 插入液面 下(瓶内先 装硼酸液 及混合指 示剂2滴)
7.水蒸气蒸馏至指示剂变绿色 开始计时，蒸馏10min，将管
8.吸收液用0.01000mol/L HCl标准溶液滴定至
总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值
精选课件
2
5、蛋白质的测定方法
利用蛋白质共性的方法
凯氏定氮法 杜马斯法
福林酚法
利用特定氨基酸残基法
染色法
精选课件
3
第二节 蛋白质的定性测定
一、蛋白质的一般显色反应
电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并 变色。书中列举了 5 种染料。
二、复合蛋白质的显色反应
第一节 概述
1.蛋白质的元素组成（The elements of protein）
▪ C：50-55% N：15-18% O：20-23%
▪ H：6-8% S：0-4%
▪ 微量元素：P、Fe、Zn、Cu
2、基本结构单位：氨基酸
3、蛋白质的变性作用。
精选课件
1
4、蛋白质分析的重要性
▪ 生物活性测定 ▪ 功能性质调查 ▪ 营养标签
精选课件
17
操作方法
▪ 1、制作标准曲线 取10支干试管分成两组，按下表平行操作：
0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1
2
3
4
标准蛋白液/ml
0.2 0.4 0.6 0.8
蛋白浓度 /(mg/ml)
2.0 4.0 6.0 8.0
蒸馏水/ml
【医学课件】蛋白质含量测定
❖
（1）27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液
❖
（2）双缩脲试剂：
❖
（3）标准血清：
❖ 【实验方法】
❖ 1．取中试管4支，分别标以1、 2 、3、 4，吸取27.8％硫酸钠 -亚硫酸钠1 ml，置1管中备用。
❖ 2．吸取血清0.2 ml于另一试管中，加27.8％硫酸钠-亚硫酸钠 4.8 ml，用拇指压住管口倒转混合5～6次，放置约15 s，用1 ml刻度吸管吸取1 ml置于管4中（总蛋白测定管）。
蛋白质含量测定
引言：蛋白质的定量分析是生物化学和其他生命学科
最常涉及的分析内容，是临床上诊断疾病及检查康复情况的 重要指标，也是许多生物制品，药物、食品质量检测的重要 指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定 量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作。
❖ 目前测定蛋白质含量的方法有很多种， 下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋 白质测定方法：
nm的波长下进行比色，分别记录2、 3、 4管的吸光度读数。
❖ 【计算】 ❖ 血清总蛋白含量（g/100 ml）＝ D测 × C
D标
❖ 血清白蛋白含量（g/100 ml）＝
D测 D标
×C
❖ 血清球蛋白含量（g/100 ml）＝总蛋白含量 ﹣白蛋白含量
❖ 白/球比值＝白蛋白含量/球蛋白含量。
❖ 【注意事项】
❖ 3．将剩余的血清混悬液过滤（如滤液不清，可重复过滤，直 至澄清为止），用另一支1 ml刻度吸管取此液1 ml，置于管3 （白蛋白测定管）。
❖ 4．另用一支1 ml刻度吸管吸取标准血清1 ml，置管2中（标准 管）。
❖ 5．于上述4支试管中分别加入双缩脲试剂4 ml，混匀。 ❖ 6．在室温下放置10 min后，以管1（空白管）调零，在540
蛋白质的定量测定方法PPT课件
以光密度为纵座标，标准蛋白溶液浓度为横座标，绘 制出标准曲线。
2.测定未知样品
取样品溶液4毫升,加蒸馏水4mL混匀，在280nm下 测定其光密度值。
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中 查出样品溶液的蛋白质含量。
第8页/共24页
【实验目的】
三、微量凯氏定氮法
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
蛋白质染料复合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白质测定 的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质结合迅速，大约为2 分钟，结合物的颜色在1小时内稳定。所以本法操作简便，快速，灵敏 度 高 ， 稳 定 性 好 ， 是 一 种 测 定 蛋第白20质页/含共量24页的 常 用 方 法 。
【实验材料】
2. 测定未知样品：取2支试管，分别准确吸取1毫升样品溶液，各加
5毫升Fo1in酚试剂甲，摇匀，室温放置10分钟后，再各加1毫升 Fo1in酚试剂乙，立即摇匀，放置30分钟，在500nm处测定光密度值 。
【实验结果】
根据未知样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品
溶液中的蛋白质含量。
第5页/共24页
Folin酚试剂法操作简便，灵敏度高，样品中蛋白
质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最
பைடு நூலகம்
广泛的方法之一。
第2页/共24页
【实验材料】
1.实验器材
100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。
2.实验试剂
(1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于／L氢氧化钠溶液中，再把 硫酸铜(CuSO4∙5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后 将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。
2.测定未知样品
取样品溶液4毫升,加蒸馏水4mL混匀，在280nm下 测定其光密度值。
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中 查出样品溶液的蛋白质含量。
第8页/共24页
【实验目的】
三、微量凯氏定氮法
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
蛋白质染料复合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白质测定 的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质结合迅速，大约为2 分钟，结合物的颜色在1小时内稳定。所以本法操作简便，快速，灵敏 度 高 ， 稳 定 性 好 ， 是 一 种 测 定 蛋第白20质页/含共量24页的 常 用 方 法 。
【实验材料】
2. 测定未知样品：取2支试管，分别准确吸取1毫升样品溶液，各加
5毫升Fo1in酚试剂甲，摇匀，室温放置10分钟后，再各加1毫升 Fo1in酚试剂乙，立即摇匀，放置30分钟，在500nm处测定光密度值 。
【实验结果】
根据未知样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品
溶液中的蛋白质含量。
第5页/共24页
Folin酚试剂法操作简便，灵敏度高，样品中蛋白
质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最
பைடு நூலகம்
广泛的方法之一。
第2页/共24页
【实验材料】
1.实验器材
100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。
2.实验试剂
(1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于／L氢氧化钠溶液中，再把 硫酸铜(CuSO4∙5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后 将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。
蛋白质含量测定法PPT课件
.
10
SDS干扰数据和图
表3 考马斯亮兰SDS干扰实验表格
管号123456标准蛋白质（1.03mg/ml） 0.10.10.10.10.10.1SDS (1mg/ml)00.10.20.40.60.8蒸馏水 0.90.80.70.50.30.1考马斯亮兰G-250试 剂3.03.03.03.03.03.0对应的吸光度 A5950.4230.3360.2750.2000.2130.198
（一）紫外280nm吸收法数据和图
表4 紫外280nm光吸收法
管号123456BSA (1.03mg/ml)体积 01.02.03.04.05.0H2O5.04.03.02.01.00BSA 浓度（mg/ml） 00.2060.4120.6180.8241.03A28000.1580. 2700.3790.5140.645
根据表3，以A595为纵坐标，SDS浓度为 横坐标，作图3。
.
11
图3 考马斯亮兰SDS干扰实验
A595
考马斯亮兰SDS干扰实验图
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
SDS浓度
.
12
由上图可以看出，十二烷基硫酸钠(SDS)对 考马斯亮兰法测蛋白质含量有干扰，同是 0.103mg/ml的标准蛋白与3.0ml考马斯亮兰， 但随着SDS浓度的增加，其混合液的595nm 处的吸收峰逐渐降低，而后有一小段回升， 最后趋于渐近线。
蛋白质含量测定法
.
1
考马斯亮兰法（Bradford法）
实验原理 考马斯亮蓝G-250染料+碱性芳香族氨基酸 在磷酸的作用下，最大吸收为595nm(兰色）
BCA法测定蛋白质含量ppt课件
C测=A测/ A标×C标
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
2.利用标准曲线法进行换算测定物浓度（标准曲线法）
❖ 配制一系列的
A
标准管，然后
绘出标准曲线。
A待测
❖ 再测出测定管 的吸光度，在 标准曲线上查 找到对应浓度。
二.实验原理
A562∝M蛋白质
紫蓝色
562nm
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
二.实验原理
采用标准曲线法计算待测液含量
作图人：
仪器型号：722型分光光度计
时间：
A待测
波长：562nm
45°
二.实验原理
在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， Cu+与两分子 BCA（二辛可酸）反应形成紫蓝色的络合物，测定其在 562nm处的吸光度值，并与标准曲线对比，即可计算待测
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
5 测定管
m(ug)
0 15 30 45 60 75
吸光度 (A)
仪器名称、型号编号： 波长： 测定日期： 测定人：
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
四.注意事项
1、实验分组，两人一组 2、试剂盘的摆放：专管专用，防止污染 3、准确量取试剂，正确使用吸量管 4、正确操作722型分光光度计，此次由于 溶液体积较少，比色皿不需要待测溶液润洗 5、正确绘制标准曲线，标明名称、仪器、 作图人、时间等 6、实验原始数据书写规范，三线表 7、待测液(小牛血清)已经稀释了500倍，
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
2.利用标准曲线法进行换算测定物浓度（标准曲线法）
❖ 配制一系列的
A
标准管，然后
绘出标准曲线。
A待测
❖ 再测出测定管 的吸光度，在 标准曲线上查 找到对应浓度。
二.实验原理
A562∝M蛋白质
紫蓝色
562nm
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
二.实验原理
采用标准曲线法计算待测液含量
作图人：
仪器型号：722型分光光度计
时间：
A待测
波长：562nm
45°
二.实验原理
在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， Cu+与两分子 BCA（二辛可酸）反应形成紫蓝色的络合物，测定其在 562nm处的吸光度值，并与标准曲线对比，即可计算待测
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
5 测定管
m(ug)
0 15 30 45 60 75
吸光度 (A)
仪器名称、型号编号： 波长： 测定日期： 测定人：
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
四.注意事项
1、实验分组，两人一组 2、试剂盘的摆放：专管专用，防止污染 3、准确量取试剂，正确使用吸量管 4、正确操作722型分光光度计，此次由于 溶液体积较少，比色皿不需要待测溶液润洗 5、正确绘制标准曲线，标明名称、仪器、 作图人、时间等 6、实验原始数据书写规范，三线表 7、待测液(小牛血清)已经稀释了500倍，
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性溶液发生双缩脲反应？
❖ 3、简述蛋白质含量测定在科研及临床疾病诊 断上的应用。
❖ 本实验用27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液稀释血清， 取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余 部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离， 取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与 白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白 之比即所谓的白/球比值。
❖
【实验材料】
❖
1．分光光度计
❖
2．试剂
❖ 3．将剩余的血清混悬液过滤（如滤液不清，可重复过滤，直 至澄清为止），用另一支1 ml刻度吸管取此液1 ml，置于管3 （白蛋白测定管）。
❖ 4．另用一支1 ml刻度吸管吸取标准血清1 ml，置管2中（标准 管）。
❖ 5．于上述4支试管中分别加入双缩脲试剂4 ml，混匀。 ❖ 6．在室温下放置10 min后，以管1（空白管）调零，在540
❖
❖ 蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能 与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应）， 且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此 可用于蛋白质的定量测定。
❖
❖ 但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分 子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内 有H2N—CH＝NH -CH2-NH2等结构化合物，双 缩脲反应也呈阳性。
nm的波长下进行比色，分别记录2、 3、 4管的吸光度读数。
❖ 【计算】 ❖ 血清总蛋白含量（g/100 ml）＝ D测 × C
D标
❖ 血清白蛋白含量（g/100 ml）＝
D测 D标
×C
❖ 血清球蛋白含量（g/100 ml）＝总蛋白含量 ﹣白蛋白含量
❖ 白/球比值＝白蛋白含量/球蛋白含量。
❖ 【注意事项】
【医学课件】蛋白质含量测定
❖ 目前测定蛋白质含量的方法有很多种， 下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋 白质测定方法：
❖ 物理性质：紫外分光光度法。
❖ 化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法等。
❖ 染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。
❖ 其他性质：荧光法。
蛋白质含量测定——双缩脲法
❖ 实验目的 ❖ 1、复习蛋白质的理化性质。 ❖ 2、熟悉双缩法测定蛋白质含量的原理及
❖ 1．硫酸钠的溶解度与温度有关，温度低于 30℃易结晶析出，故室温较低时应在37℃水 浴或恒温箱进行保温。
❖ 2．血清样品必须新鲜，如有细菌污染或溶血， 则不能得到正确的结果。
❖ 3．含脂类较多的血清，可用乙醚3 ml抽提一 次后再进行测定。
❖ 【思考题】
❖ 1、干扰本实验的因素有哪些？ ❖ 2、是否所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱
方法。
❖ 【实验原理】
❖ 利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠-亚硫 酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清 白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开， 这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法 称为盐析法。盐析分离蛋白质的方法不仅用 于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研 究工作中，如一些特殊蛋白质-酶、蛋白激素 等的分离和纯化。
❖
（1）27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液
❖Байду номын сангаас
（2）双缩脲试剂：
❖
（3）标准血清：
❖ 【实验方法】
❖ 1．取中试管4支，分别标以1、 2 、3、 4，吸取27.8％硫酸钠 -亚硫酸钠1 ml，置1管中备用。
❖ 2．吸取血清0.2 ml于另一试管中，加27.8％硫酸钠-亚硫酸钠 4.8 ml，用拇指压住管口倒转混合5～6次，放置约15 s，用1 ml刻度吸管吸取1 ml置于管4中（总蛋白测定管）。
❖ 3、简述蛋白质含量测定在科研及临床疾病诊 断上的应用。
❖ 本实验用27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液稀释血清， 取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余 部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离， 取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与 白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白 之比即所谓的白/球比值。
❖
【实验材料】
❖
1．分光光度计
❖
2．试剂
❖ 3．将剩余的血清混悬液过滤（如滤液不清，可重复过滤，直 至澄清为止），用另一支1 ml刻度吸管取此液1 ml，置于管3 （白蛋白测定管）。
❖ 4．另用一支1 ml刻度吸管吸取标准血清1 ml，置管2中（标准 管）。
❖ 5．于上述4支试管中分别加入双缩脲试剂4 ml，混匀。 ❖ 6．在室温下放置10 min后，以管1（空白管）调零，在540
❖
❖ 蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能 与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应）， 且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此 可用于蛋白质的定量测定。
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❖ 但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分 子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内 有H2N—CH＝NH -CH2-NH2等结构化合物，双 缩脲反应也呈阳性。
nm的波长下进行比色，分别记录2、 3、 4管的吸光度读数。
❖ 【计算】 ❖ 血清总蛋白含量（g/100 ml）＝ D测 × C
D标
❖ 血清白蛋白含量（g/100 ml）＝
D测 D标
×C
❖ 血清球蛋白含量（g/100 ml）＝总蛋白含量 ﹣白蛋白含量
❖ 白/球比值＝白蛋白含量/球蛋白含量。
❖ 【注意事项】
【医学课件】蛋白质含量测定
❖ 目前测定蛋白质含量的方法有很多种， 下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋 白质测定方法：
❖ 物理性质：紫外分光光度法。
❖ 化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法等。
❖ 染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。
❖ 其他性质：荧光法。
蛋白质含量测定——双缩脲法
❖ 实验目的 ❖ 1、复习蛋白质的理化性质。 ❖ 2、熟悉双缩法测定蛋白质含量的原理及
❖ 1．硫酸钠的溶解度与温度有关，温度低于 30℃易结晶析出，故室温较低时应在37℃水 浴或恒温箱进行保温。
❖ 2．血清样品必须新鲜，如有细菌污染或溶血， 则不能得到正确的结果。
❖ 3．含脂类较多的血清，可用乙醚3 ml抽提一 次后再进行测定。
❖ 【思考题】
❖ 1、干扰本实验的因素有哪些？ ❖ 2、是否所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱
方法。
❖ 【实验原理】
❖ 利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠-亚硫 酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清 白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开， 这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法 称为盐析法。盐析分离蛋白质的方法不仅用 于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研 究工作中，如一些特殊蛋白质-酶、蛋白激素 等的分离和纯化。
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（1）27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液
❖Байду номын сангаас
（2）双缩脲试剂：
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（3）标准血清：
❖ 【实验方法】
❖ 1．取中试管4支，分别标以1、 2 、3、 4，吸取27.8％硫酸钠 -亚硫酸钠1 ml，置1管中备用。
❖ 2．吸取血清0.2 ml于另一试管中，加27.8％硫酸钠-亚硫酸钠 4.8 ml，用拇指压住管口倒转混合5～6次，放置约15 s，用1 ml刻度吸管吸取1 ml置于管4中（总蛋白测定管）。