【精品课件】蛋白质共价结构
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第二章-蛋白质的共价结构PPT课件
（一） 蛋白质的化学组成与分类 1 元素组成
C H O N S P Fe C：50% H：7% O：23% N：16% S： 0－3% 其他：微量 P：牛奶中的酪蛋白含磷 Fe:血中的血红蛋白含铁。 I：甲状腺中甲状腺球蛋白含碘。
-
2
2．蛋白质的平均含N量16%
凯氏定氮的基础
蛋 白 质 含 量 ＝ 蛋 白 N×1/16%= 蛋 白 N×6.25
-
7
表3－2 结合蛋白质的分类
1． 核蛋白（nucleoprotain）：辅基是核酸，如脱 氧核糖核蛋白、核糖体、烟草花叶病毒等。
2． 脂蛋白（lipoprotain）:与脂质结合的蛋白质。 脂质成分有磷脂、固醇和中性脂等。如血中的 β1－脂蛋白。卵黄球蛋白（lipovitellin）等。
3 ． 糖 蛋 白 （ glycoprotein ） 和 粘 蛋 白 （mucoprotein）:辅基成分为半乳糖、甘露糖、 己糖胺、己糖醛酸、唾液酸、硫酸或磷酸等。 如卵清蛋白、γ－球蛋白，血清类粘蛋白 （seromucoid）等。
6． 黄素蛋白（flavoprotein）:辅基为黄素嘌呤二 核苷酸。如琥珀酸脱氢、D－氨基酸氧化酶等。
7． 金属蛋白（metalloprotein）:与金属直接结合 的蛋白质。如铁蛋白（ferritin）含铁，乙醇脱 氢酶含锌，黄嘌呤氧化酶含钼和铁等。
-
9
②根据分子的形状
• 球状蛋白质――分子对称性佳，外形接近 球状或椭球状，溶解度较好，能结晶。Eg. 血红蛋白、血清球蛋白。
-
6
6． 鱼精蛋白（protamine）:溶于水及稀酸，不溶 于氨水。分子呈碱性。如鲑精蛋白（salmin） 等。
7． 硬蛋白（scleroprotain）:不溶于水、盐、稀酸 或稀碱。这类蛋白是动物体内作为结缔及保护 功能的蛋白质。例如，角蛋白（keratin）、胶 原（collagen）、网硬蛋白（reticulin）和弹性 蛋白（elastin）等。
2023-生物化学课件 第五章蛋白质的共价结构
二硫键的断裂：几条多肽链通过二硫键交 联在一起。可在可用8mol/L尿素或 6mol/L盐酸胍存在下，用过量的 -巯基 乙醇处理，使二硫键复原为巯基，然后 用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止 它重新被氧化。可以通过参加盐酸胍方 法解离多肽链之间的非共价力；应用过 甲酸氧化法或巯基复原法拆分多肽链间 的二硫键。
一蛋级 白结质构一测 级定结策构略测定步骤
蛋白质一级结构测定的步骤
1、蛋白质的别离纯化
2、测定蛋白质分子中多肽链的数目
3、亚基别离
4、二硫键的拆分与保护
5、分析每一多肽链的氨基酸组成
6、鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基
7 、多种方法的局部水解
8、测序
9、重叠
10 、二硫键位置确实定
N端的测定方法
SEO
• PS
WTOU
• EOVE
VERL
• RLA
APS
• HOWT
HO
• 借助重叠肽确定肽段次序：
• 末端残基 H
S
• 末端肽段HOWT
APS 或
•
OUS
• 第一套肽段：HOWT OUS EOVE RLA PS
• 第二套肽段：HO WTOU SEO VERL APS
• 推断全序列: HOWTOUSEOVERLAPS
多种方法确定
酶解法末端测序
酶解法末端测序
利用外切蛋白水解酶 (exo-peptidase) 将肽链的氨基酸从N端 (aminopeptidase) 或C端 (carboxypeptidase) 一个接一个游 离出来， 在不同时间取样进行分析，根 据所游离的氨基酸的摩尔数的多少来判
断氨基酸的排列顺序。
quanternary structure 四级结构： 蛋白质多聚体
蛋白质的共价结构优秀课件
定义 蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列
顺序。
主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。
一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学 功能的基础。
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
(二) 蛋白质的二级结构
定义 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间
结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空 间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。
• 1. 催化功能-酶 • 2. 调节功能-激素、基因调控因子 • 3. 转运功能-膜转运蛋白、血红/血清蛋白 • 4. 贮存功能-乳、蛋、谷蛋白 • 5. 运动功能-鞭毛、肌肉蛋白 • 6. 结构成分-皮、毛、骨、牙、细胞骨架 • 7. 支架作用-接头蛋白 • 8. 防御功能-免疫球蛋白 • 9. 异常功能
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
蛋白质的分子结构包括
一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure)
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
(一)、蛋白质的一级结构(Primary structure）
Ser
Val
T yr
Asp
Gln
H
H
H
H
H
O
O
O
O
H3N+ C C N C C N C C N C C N C COO-
N-端 CH2
H CH
H CH2
H CH2
H CH2 C-端
OH
CH3CH3
CO2H
CH2
肽键 OH
CONH2
• 多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序 • 含游离-氨基的一端：氨基端或N-端
顺序。
主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。
一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学 功能的基础。
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
(二) 蛋白质的二级结构
定义 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间
结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空 间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。
• 1. 催化功能-酶 • 2. 调节功能-激素、基因调控因子 • 3. 转运功能-膜转运蛋白、血红/血清蛋白 • 4. 贮存功能-乳、蛋、谷蛋白 • 5. 运动功能-鞭毛、肌肉蛋白 • 6. 结构成分-皮、毛、骨、牙、细胞骨架 • 7. 支架作用-接头蛋白 • 8. 防御功能-免疫球蛋白 • 9. 异常功能
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
蛋白质的分子结构包括
一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure)
（三）蛋白质构象和结构的组织层次
(一)、蛋白质的一级结构(Primary structure）
Ser
Val
T yr
Asp
Gln
H
H
H
H
H
O
O
O
O
H3N+ C C N C C N C C N C C N C COO-
N-端 CH2
H CH
H CH2
H CH2
H CH2 C-端
OH
CH3CH3
CO2H
CH2
肽键 OH
CONH2
• 多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序 • 含游离-氨基的一端：氨基端或N-端
蛋白质的共价结构课件
5.分析多肽链的N-末端和C-末端 多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基 酸和C-端氨基酸。 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是 N-端氨基酸分析法。
（二）N-末端和C-末端氨基酸的鉴定
N-端 C-端
Sanger法（二硝基氟苯反应） DNS法（丹磺酰氯反应） Edman法（苯异硫氰酸脂反应） 氨肽酶法 肼解法 还原法 羧肽酶法
要
三级结构
Tertiary structure
层
次
四级结构
quariernary structure
蛋 一级结构 primary structure
白
质
二级结构
结 secondary structure
构 超二级结构 supersecondary structure
的
结构域
主
Structure doman
中含氮的克数 6.25 （凯氏定氮法）
蛋白质的分类
1. 蛋白质形状
球状蛋白 纤维状蛋白
蛋白质的分类
根据分子 形状分类
球状蛋白质 膜蛋白
纤维状蛋白质
根据组 简单蛋白质 成分类
缀合蛋白质
溶解度分类 营养价值分类
2. 分子组成
简单蛋白 （按溶解度）
清蛋白 球蛋白 醇溶蛋白 谷蛋白 精蛋白 组蛋白 硬蛋白
要
三级结构
Tertiary structure
层
次
四级结构
quariernary structure
蛋
-螺旋体
白
质
分
子
的
构 三级结构 象
示
意
图
四级结构
-折叠片
松散肽段 亚基
Levels of structure in proteins
（二）N-末端和C-末端氨基酸的鉴定
N-端 C-端
Sanger法（二硝基氟苯反应） DNS法（丹磺酰氯反应） Edman法（苯异硫氰酸脂反应） 氨肽酶法 肼解法 还原法 羧肽酶法
要
三级结构
Tertiary structure
层
次
四级结构
quariernary structure
蛋 一级结构 primary structure
白
质
二级结构
结 secondary structure
构 超二级结构 supersecondary structure
的
结构域
主
Structure doman
中含氮的克数 6.25 （凯氏定氮法）
蛋白质的分类
1. 蛋白质形状
球状蛋白 纤维状蛋白
蛋白质的分类
根据分子 形状分类
球状蛋白质 膜蛋白
纤维状蛋白质
根据组 简单蛋白质 成分类
缀合蛋白质
溶解度分类 营养价值分类
2. 分子组成
简单蛋白 （按溶解度）
清蛋白 球蛋白 醇溶蛋白 谷蛋白 精蛋白 组蛋白 硬蛋白
要
三级结构
Tertiary structure
层
次
四级结构
quariernary structure
蛋
-螺旋体
白
质
分
子
的
构 三级结构 象
示
意
图
四级结构
-折叠片
松散肽段 亚基
Levels of structure in proteins
蛋白质的共价结构 PPT课件
根据溶解性的不同
可将简单蛋白分为7类： 清蛋白（溶于水）、
球蛋白（溶于稀盐溶液）、
谷蛋白（溶于稀酸或稀碱）、 醇溶蛋白（溶于70%-80%的乙醇）、 组蛋白（溶于水或稀酸，可用稀氨水沉淀）、 精蛋白（溶于水或稀酸，不溶于氨水）和硬蛋白
（只能溶于强酸）。
结合蛋白
根据辅基的不同，可将结合蛋白分为以下7类：
Erythrocytes(红血球) contain large amounts of the oxygen-transporting protein hemoglobin（血红蛋白）
第一节 蛋 白 质 的 分 子 组 成
The Molecular Component of Protein
组成蛋白质的元素
分布广：所有器官、组织都含有蛋白质； 细胞的各个部分都含有蛋白质。 含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分 子，占人体固体的 45 ％，细胞干重的 70% ，某 些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达 80％。
2. 蛋白质具有重要的生物学功能
1）作为生物催化剂（酶）
2）代谢调节作用 3）免疫保护作用 4）物质的转运和存储 5）运动与支持作用 6）参与细胞间信息传递
一平面上的6个原子构成了所谓
的肽单元 (peptide unit) 。
•肽键中的C-N键长0.133nm，比相邻的N-C单键
(0.145nm)短，而较一般C=N双键(0.128nm)长，
可见，肽键中-C-N-键的性质介于单、双键之
间，具有部分双键的性质，因而不能旋转，这 就将固定在一个平面之内。
一、蛋白质的一级结构
定义 蛋白质的一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸
的排列顺序，即氨基酸序列。
主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。
蛋白质共价结构生物化学优秀课件
蛋白质一级结构测定的基本策略
1、测定蛋白质中多肽链的数目； 2、拆分蛋白质分子的多肽链，分离纯化各肽链； 3、拆开多肽链内的二硫键； 4、分析各肽链的氨基酸组成； 5、鉴定多肽链的氨基末端残基和羧基末端残基； 6、用两种不同的裂解方式裂解多肽链成较小的片段； 7、测定各片段的氨基酸顺序； 8、用片段重叠法重建完整多肽链的一级结构； 9、确定二硫键的形成方式。
七、蛋白质氨基酸顺序的遗传编码
三个连续的碱基顺序为一个密码单位即密码 子或密码三联体，每个三联体代表一个氨基 酸。 每条多肽链的氨基酸顺序由RNA的碱基顺序决 定，而RNA的碱基顺序决定于DNA，因此一条 多肽链的氨基酸顺序最终由DNA分子中的一段 碱基顺序所决定。
§4-2 蛋白质的共价结构 -肽（peptide）
寡肽：由2-10个氨基酸组成的肽。
一个氨基酸的羧基与另一个 氨基酸的氨基之间失水形成 的酰胺键称为肽键，所形成 的化合物称为肽。
由两个氨基酸组成的肽称为二肽， 由多个氨基酸组成的肽则称为多 肽。组成多肽的氨基酸单元称为 氨基酸残基。
二、肽键（peptide bond）
-C-N-比大多数C-N 键短，具有部分双 键性质，不能自由 旋转。
一、蛋白质的一
级结构
A链
二、肽键的性质
三、肽平面
B链
四、肽链的方向 性
五、天然存在的 活性肽
A链21个aa残基
B链30个aa残基
一个链内二硫键 两个链间二硫键 分子量5700
一、蛋白质的一级结构
1969年，国际纯化学与应用化学 委员会（IUPAC）规定：蛋白质的 一级结构指蛋白质多肽连中AA的 排列顺序，包括二硫键的位置。 多肽链即为蛋白质一级结构的主 体。-NCCNCC-
48第04章 蛋白质的共价结构PPT课件
19
N-末端和C-末端氨基酸残基的鉴定(1)
1、 N-末端分析
（1） 二硝基氟苯（DNFB 或FDNB）
弱碱
DNFB + NH2Aa1Aa2Aa3……Aan
pH 8~9
DNP-NHAa1Aa2Aa3……Aan
H+
DNP-Aa1 + Aa2 + Aa3 + …… + Aan
水解
待分析的DNP-氨基酸可用纸层析、薄层层析或HPLC进行分离鉴定和定量测定
肽键的特性
肽键虽是单键却具有局部双键性质
肽键周边六个原子在同一平面上
前后两个氨基酸的α-碳在对角 (trans)
NC
sp2
sp2
CN
H
O
C
C
14
肽键以共振杂化形式存在
肽键共振杂化意义：
限制绕肽键自由旋转 肽键具有部分双键性 形成肽平面肽键存在 永久偶极
肽的C-N键略短： 共振杂化
以单键表示肽键 以共振杂化形式表示肽键(反式)
一级结构决定高级结构，高级结构决定蛋白质的功能
7
A
α-螺旋
B
β-折叠股
C
A. α-螺旋和β-折叠股 B.核糖核酸酶 C.血红蛋白 8
蛋白质功能的多样性
蛋白质生物学功能：
催化、调节、转运、贮存、运动、结构成分、支架作用、 防御和进攻、异常功能
一级结构
二级结构
三级结构
四级结构
氨基酸顺序 α螺旋
多肽链
17
天然存在的活性肽(2)
CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH
γ CH2
CH2
β CH2
SH
α CHNH2
N-末端和C-末端氨基酸残基的鉴定(1)
1、 N-末端分析
（1） 二硝基氟苯（DNFB 或FDNB）
弱碱
DNFB + NH2Aa1Aa2Aa3……Aan
pH 8~9
DNP-NHAa1Aa2Aa3……Aan
H+
DNP-Aa1 + Aa2 + Aa3 + …… + Aan
水解
待分析的DNP-氨基酸可用纸层析、薄层层析或HPLC进行分离鉴定和定量测定
肽键的特性
肽键虽是单键却具有局部双键性质
肽键周边六个原子在同一平面上
前后两个氨基酸的α-碳在对角 (trans)
NC
sp2
sp2
CN
H
O
C
C
14
肽键以共振杂化形式存在
肽键共振杂化意义：
限制绕肽键自由旋转 肽键具有部分双键性 形成肽平面肽键存在 永久偶极
肽的C-N键略短： 共振杂化
以单键表示肽键 以共振杂化形式表示肽键(反式)
一级结构决定高级结构，高级结构决定蛋白质的功能
7
A
α-螺旋
B
β-折叠股
C
A. α-螺旋和β-折叠股 B.核糖核酸酶 C.血红蛋白 8
蛋白质功能的多样性
蛋白质生物学功能：
催化、调节、转运、贮存、运动、结构成分、支架作用、 防御和进攻、异常功能
一级结构
二级结构
三级结构
四级结构
氨基酸顺序 α螺旋
多肽链
17
天然存在的活性肽(2)
CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH
γ CH2
CH2
β CH2
SH
α CHNH2
第3章蛋白质的共价结构PPT课件
3.多肽链的部分裂解和肽段混合物 的分离纯化
（
• 酶解法:
1
）
• 胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶
多 肽
• 裂解后通过凝胶过滤、凝胶电泳和高效液相色谱分离纯化。
• (6)多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多 种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或 多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
第24页/共46页
(4)二硫键的断裂
• 由几条多肽链构成的蛋白质分子存在两种形式： • 1.几条多肽链借助非共价键连接在一起，可用
8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分 开多肽链(亚基). • 2.几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在 8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过 量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基， 然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它 重新被氧化。
2.肽的命名
H3N+ N-端
Ser H
O
CC
Val H
O
NCC
CH2
H CH
OH
CH3 CH3
肽键
Tyr H
O NCC H CH2
OH
Asp H
NCC
H CH2 CO2H
Gln H
N C COOH CH2 C-端
CH2
CONH2
• 根据参与其组成的氨基酸残基从N-末端开始命 名。
• 如上述五肽可称为丝氨酰缬氨酰酪氨酰天门冬 氨酰谷氨酰氨，N-末端氨基酸残基在左，C末端氨基酸残基在右。
第19页/共46页
1. 测序的一般策略
• (2)多肽链的拆分。
• 由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进 行拆分。
• 可以通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的 非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法 拆分多肽链间的二硫键。
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短杆菌肽S(环十肽)
由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和 一些非蛋白氨基酸。如鸟氨酸（Ornithine, 缩 写为 Orn）。
③ 脑啡肽
+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COOMet-脑啡肽
+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-
Leu-脑啡肽
④ 鹅膏蕈碱
用分光光度计测定蛋白质含量。
2.3 天然存在的活性肽
❖ 活性肽（active peptide）: 有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在，
通常都具有特殊的生理功能。
① 多肽激素
② 多肽抗菌素
L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val
L-Orn
L-Orn
L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu
Sanger于1953年第一个测定氨基酸序列 ---牛胰岛素（insulin）
(获1958年诺贝尔化学奖)
•DNFB(2,4-二硝基氟苯)—— N末端
21
30
3.1 测定蛋白质分子中多肽链数目
蛋白质的N-末端或C-末端残基的摩尔数和蛋白 质的相对分子质量
3.2 拆分蛋白质的多肽链和断开多肽 链内的二硫桥
二级结构 （2°） （secondary structure）
超二级结构 （supersecondary structure）
结构域
（structural domain）
三级结构 （3°） （tertiary structure）
四级结构 （4°） （quarternary structure）
•各个结构层次之间的关系可以作下列表示：
荧光素酶
血红蛋白（氧转运蛋白）
角蛋白
2 蛋白质的一级结构
❖ 一级结构 （primary structure): 多肽链的氨基酸的序列。
• 主要连接键：肽键
2.1 肽键和肽
肽健
肽链中的氨基酸由于形成肽键时脱水，已不是完整的氨基酸， 所以称为残基
肽键：反式构型
肽（peptide） ：由两个或两个以上的氨基酸通过肽键连接而
3.4 N末端和C末端氨基酸残基的 鉴定
(1) N末端
① 2，4-二硝基氟苯（DNFB)法*C)法***** ④ 氨肽酶法
① 2，4-二硝基氟苯（DNFB)法
DNFB（Sanger试剂） 弱碱性溶液中 （DNP-蛋白质） 与蛋白质氨基发生反应 黄色化合物
OH
CH3 CH CH2OH
CH O
O
O
HN CH C NH CH C NH CH2 C
CO
H
CH
HO
N
CH2
OS N O CH2 H
OH O
NH
CH3
CH CH
CH2CH3
CO
C CH2 NH C CH NH C CH2 NH O
鹅膏覃碱的化学结构
与真核生物的RNA聚合酶和牢固结合
⑤ 谷胱甘肽
❖ CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH
形成的化合物。
二肽 三肽 四肽
寡肽（oligopeptide） 12个以上，20个以下氨基酸缩合而成
多肽（Polypeptide） 20个以上氨基酸缩合而成
肽链：氨基酸通过肽键连接起来而形成的链。
R 1 O R 2 O R 3 O
H 2 N CC H HC N C H HC NC H
N端
氨基酸残基 氨基酸残基
一级结构→二级结构→超二级结构→ 结构域→三级结构→四级 结构
1.3 蛋白质功能的多样性
P161-162
❖ 催化 (酶) ❖ 调节 (激素、激活剂） ❖ 转运 （血红蛋白、膜转运蛋白） ❖ 贮存 （卵清蛋白） ❖ 运动 （肌动蛋白、肌球蛋白） ❖ 结构成分 （角蛋白、胶原蛋白） ❖ 防御和进攻 （免疫球蛋白、蛇毒的溶血蛋白）
第4章 蛋白质的共价结构
1 蛋白质通论 1.1 形状和大小
❖ 按形状和溶解度分类：
纤维状蛋白质：角蛋白、丝蛋白、胶原蛋白 不溶于水和稀盐溶液；结构作用。
球状蛋白质： 溶解性较好；功能多样。
❖ 相对分子质量：6000到1x106
1.2 构象和组织层次
❖ 构型：具有相同结构式的立体异构体中取代 基在空间的相对取向。
不同的构型间的转变需要共价键的断裂和重新形成。
❖ 构象：具有相同结构式和相同构型的分子在 空间里可能的多种状态。
不同的构象间转变不需要共价键的断裂和重新形成。
❖ 蛋白质的天然构象：每一种蛋白质至少有一
种构象在生理条件下是稳定的，并具有生物活性 的构象。
❖ 结构层次：
一级结构 （1°） （primary structure)
（游离的氨基）
肽健
肽健
RO n HC N C HO
C端
（游离的羧基）
肽链书写方式：从左到右，N端→C端 命名：根据氨基酸组成，由N端→C端命名为
某氨酰某氨酰…某氨基酸
肽单位
丙氨酰谷氨酰甘氨酰赖氨酸 Ala－Glu-Gly－Lys (or AEGK)
2.2 肽的化学性质
双缩脲反应：肽和蛋白质特有的。 含有两个或两个以上的肽键化合物与 CuSO4碱性溶液生成紫红色或蓝紫色的复 合物。
①非共价键： 血红蛋白（四聚体） 断裂：8mol/L尿素或6 mol/L盐酸胍
②二硫键：链内或链间 还原：过量的β- 巯基乙醇（pH8~9） 保护巯基：烷基化试剂（碘乙酸）
3.3 氨基酸组成的分析
水解破坏肽健 氨基酸混合物
（主要是酸水解， 同时辅以碱水解 ）
柱层析分离 测定氨基酸
氨基酸组成： 用每摩尔蛋白质中含有氨基酸残基的摩尔数， 或每100g蛋白质中含有氨基酸的克数来表示。
酸水解
肽健断开，
DNP-基不脱落
DNP-氨基酸能溶于 有机溶剂而与其他aa分离
层析鉴定DNP-氨基酸
DNFB DNP-蛋白质 DNP-氨基酸
② 丹磺酰氯法（DNS法）
CH2 CH2谷胱甘肽—存在与动、植物及
CH2 SH CHNH2
微生物中：
1.参与体内氧化还原反应 2.作为辅酶参与氧化还原反应
保护巯基酶或含Cys的蛋白质中
SH的还原性
COOH
防止氧化物积累
2GSH
GS-SG
3 蛋白质一级结构的测定
① 测定蛋白质分子中多肽链的数目 ② 拆分蛋白质的多肽链 ③ 断开多肽链内的二硫桥 ④ 分析每一多肽链的氨基酸组成 ⑤ 鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基 ⑥ 裂解多肽链成较小的片段 ⑦ 测定个肽段的氨基酸序列 ⑧ 重建完整多肽链的一级结构 ⑨ 确定半胱氨酸残基间形成的S-S交联桥位置