微生物的分类和鉴定
数值分类法微生物分类鉴定的方法菌种鉴定工作的步骤
（二）细胞化学成分的鉴定
1.细胞壁的化学成分：主要是肽聚糖的基本结构
2.全细胞水解液的糖型
Байду номын сангаас
3.磷酸类脂成分的分析
4.枝菌酸的分析 5.醌类的分析 6.气相色谱技术的应用
三、数值分类法
• 数值分类法：依据数值分析的原理，借助现代电子计算机技术对拟分
类的微生物对象按大量表型性状的相似程度进行统计、归类的方法。
• 步骤： ①确定分类单元和选择分类特征； ②进行特征测定或从文献中收集有关OUT（操作分类单位）的各项特 征资料； ③根据所编制的计算机程序要求，将特征资料进行编码、标准化并输 入计算机； ④由计算机计算各OUT之间的相似性，并根据相似性的数值进行聚类 分析、分群归类； ⑤输出分类结果、常用树状谱图法表示。
4.在液体培养基中观察生长特征，液体是否混浊及混浊的程度
；液面有无菌膜；管底有无沉淀以及沉淀的形状；管中有无气泡； 培养液中有无颜色变化等。
(二) 生理生化特性
1.营养要求：可根据微生物对营养的不同利用能力来区别微生物。
试验多种营养能否被微生物作为碳源和能源利用，以及微生物对一定有 机化合物或CO2的利用能力。对于氮源来讲，看其是取自蛋白质、蛋白
数值分类法是根据生物表型特征总的相似性分类， 其分类结构的表示是一种表型关系，并不直接表示生物 的系统发育。其分类结果可作为建立或修改传统分类单 元的依据。该分类方法使生物分类从传统分类的定性描 述发展到了进行定量分析的水平，其主要目的是建立一 种客观的分类方法，并实现分类过程的自动化。
胨、氨基酸或铵盐、硝酸盐，还是大气中的游离氮。
2.代谢产物：不同的微生物，因生理特性的不同而产生不同的代谢 产物。因此，检查微生物的代谢产物，可以用来鉴别不同的微生物。在
环境微生物菌种鉴定
环境微生物菌种鉴定微生物是地球上数量最多的生物，它们在我们的生活和环境中无处不在。
为了更好地利用和保护这些微生物资源，我们需要对它们进行鉴定和分类。
本文将介绍环境微生物菌种鉴定的基本方法和应用领域。
一、微生物菌种鉴定的基本方法1、形态学鉴定形态学鉴定是根据微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征对其进行分类和鉴定的一种方法。
通过观察菌落的形状、大小、质地、颜色、边缘特征等，可以初步判断微生物的种类。
2、生理生化鉴定生理生化鉴定是通过测试微生物对各种底物的发酵反应和代谢产物的性质，判断其生理生化特性，从而对其进行分类和鉴定的一种方法。
常见的生理生化试验包括糖发酵试验、柠檬酸盐试验、吲哚试验等。
3、分子生物学鉴定分子生物学鉴定是基于微生物基因组序列差异对其进行分类和鉴定的方法。
该方法通过提取微生物基因组DNA，进行PCR扩增，然后进行序列比对，判断微生物的种类和亲缘关系。
二、环境微生物菌种鉴定的应用领域1、环境保护环境微生物菌种鉴定在环境保护方面具有广泛的应用。
例如，在污水处理中，通过鉴定微生物的种类和数量，可以优化污水处理工艺，提高处理效率。
在土壤污染治理中，通过鉴定能够降解特定污染物的微生物种类，可以针对性地设计生物治理方案。
2、生物多样性研究环境微生物菌种鉴定在生物多样性研究中具有重要意义。
通过对不同生态环境中的微生物进行鉴定，可以揭示不同地区和不同气候条件下的生物多样性特征，为保护生物多样性和生态平衡提供科学依据。
3、生物技术应用环境微生物菌种鉴定在生物技术领域具有广泛的应用。
例如，在生物制药中，通过鉴定微生物的种类和代谢产物，可以发现新的药物资源和开发新的药物。
在农业微生物肥料开发中，通过鉴定微生物的种类和生理生化特性，可以研制出具有特定功能的微生物肥料。
三、总结环境微生物菌种鉴定是微生物资源保护和利用的重要手段。
通过形态学、生理生化和分子生物学等方法对微生物进行分类和鉴定，可以更好地了解和利用这些资源。
微生物的分类方法
微生物的分类方法微生物是指肉眼无法看到的微小生物，主要包括原核生物和真核生物两大类。
原核生物主要包括细菌和蓝藻，真核生物则包括真菌、原生动物和微藻等。
对于微生物的分类，科学家们采用了多种方法，其中最常用的是基于形态学、生理学、生态学和分子生物学的分类方法。
下面将介绍这些分类方法的主要内容。
1.形态学分类：这是最早也是最基础的分类方法，主要根据微生物的形态特征进行分类。
例如，根据细菌的形状，可以将其分为球形细菌（如链球菌）、杆状细菌（如大肠杆菌）和螺旋细菌（如梅毒螺旋体）等。
此外，还可以根据真核微生物的细胞结构和生殖特征进行分类。
3.生态学分类：这种分类方法是根据微生物在自然界中的生活习性和分布情况进行分类。
例如，根据微生物生活的环境，可以将其分为土壤微生物（如放线菌）、水体微生物（如蓝藻）和肠道微生物（如乳酸菌）等。
此外，还可以根据微生物在生态系统中的作用，将其分为分解者、产生者和共生微生物等。
4.分子生物学分类：这种分类方法是根据微生物的基因组序列和分子结构进行分类。
利用分子生物学技术，可以通过测定微生物的DNA序列，比较不同微生物之间的遗传关系和相似性，从而将其分类到不同的系统发生树分支上。
此外，还可以利用分子标记的方法，如PCR和基因测序，快速鉴定微生物的种类。
除了以上分类方法外，还有一些更细致和专业的分类方法，比如对特定微生物群体进行研究的分类方法。
例如，对细菌进行分类可以使用质谱分析技术，对真菌进行分类可以使用菌株的生长特性和生殖结构等特征。
总的来说，微生物的分类方法是一个不断发展和完善的过程。
随着技术的进步和对微生物世界的深入了解，我们对微生物的分类将更加准确和精细，为微生物相关领域的研究和应用提供更好的支持。
对未知微生物分类鉴定的一般方法和步骤
对未知微生物分类鉴定的一般方法和步骤
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一、动物系统分类法
1.鉴定未知微生物的分类类别：在进行分类鉴定时，首先要根据宏观形态和生理特性判断未知微生物的分类类别，一般形态特征和生理特征包括形态（大小、色泽）、营养和繁殖方式、体腔结构、细菌孢子形态等。
2.确定动物分类纲：根据未知微生物的分类类别，确定其分类系统纲名，包括属到了什么种，这个种归属于什么属，以及属属于什么科，然后可以将未知微生物很好的放到动物系统分类纲系统中。
3.准确鉴定未知物种：最后，根据未知微生物的形态特征、生理特性以及分类系统纲等信息，准确地鉴定未知物种，这也是实际的分类鉴定的最后过程。
二、分子生物学法
1.收集样本：首先，收集未知微生物样本，将其进行必要的实验检验。
2.提取DNA：通过基因工程技术，从未知微生物样本中提取出DNA 片段，以便进行分子鉴定。
3.PCR扩增：使用引物对DNA片段进行PCR扩增，以得到足够的片段区域。
4.测序：使用合成荧光标记技术，对PCR扩增出来的目的片段进行测序。
5.核酸分析：对测序出来的序列进行分析，以便判断未知微生物的种系归属。
6.结果确认：根据核酸分析结果，将得到的种系归属结果，结合实验室分析，以及实际应用环境等，最终确认鉴定结果。
任务一微生物的概念和主要类群任务二微生物的分类与鉴定
具细胞结构
自然界的微生物种类繁多 ， 形态结构和生活特性也各有不同 。 为更好地利用 、 控制和 改造微生物 ， 人们在对大量微生物进行观察 、 分 析 和 描 述 的 基 础 上， 按照生物的亲缘关系 把它们分群归类 ， 有规则地编排成系统 。 根据 分 类 系 统 ， 可 以 将 生 物 的 特 性 进 行 归 纳， 找 出一种或一套特征制定检索表 ， 以便于迅速而简单地识别某种微生物 。 微生物的分类依据主要有形态结构 、 生理生化特征 、 培养特征 、 生态表现 、 生活史和血
任务一 微生物的概念和主要类群
微生物无处不在 。 地球上生活着上百万 种 生 物 ， 大 多 数 生 物 体 形 较 大， 肉 眼 可 见， 结 在我们周围 ， 还有无数“ 看 不 见 的 眼” 在 看 着 我 们， 它们体 构功能分化得比较清楚 。 然而 ， 形微小 、 数量庞大 、 肉眼难以看见 ， 但它们又无处不在 ， 这就是我们所要学习的微生物 。 微生物虽然微小 ， 绝大多数是看不见 、 摸不着的 ， 但它们与我们人类 、 与食品工业却有 着非常密切的关系 。 我们经常说 “ 病从口入 ” “ 勤洗手 ” 是因为食用被微生物污染的变质食 品会导致腹泻甚至危及生命健 康 ；利 用 酿 酒 酵 母 可 生 产 酒 类 饮 料 ；在 面 包 生 产 时 ， 使用 酵母发酵特性使面包蓬松 、 柔软 ， 这些无不与微生物紧密相关 。 微生物大多数为单细胞 ， 是自然界中个体 微 小 、 结 构 简 单、 必须借助光学显微镜或者 电子显微镜才能观察到的一类微小 、 低等生物的通称 。 从广义上讲 ， 它包括属于原核微生 物的真细菌 （ 各种常见的细菌 、 放线菌 、 立克 次 氏 体 、 支 原 体、 衣 原 体 等） 和 古 细 菌， 属于真 核微生物的藻类 、 酵母菌 、 霉菌 、 大型真菌和 原 生 生 物 ， 属 于 非 细 胞 型 微 生 物 的 病 毒、 朊病 毒等 。
第一章_微生物的分类与鉴定(2学时)
G菌 gram positives
古细菌 achaca
真核生物 cukarya
紫色硫细菌 purple bacteria 蓝细菌 cyanobacteria 黄杆菌属 flavobacteria themotogales
动物 animal 真菌 甲烷八叠球菌 粘菌类 fungi methanosarcina Slime entanoebae molds 甲烷杆菌属 植物 crenarcaeoya methanobacteria plants 嗜盐菌 halophiles 热变形菌属 甲烷球菌属 thermoproteus methanococcus 纤毛类 ciliates 热球菌属 thermococctus 鞭毛类 热网菌属 flagellates pyrodictum 三分体 korarchaeota trichononds 微担孢体 microsporidia 二分体 diplononods
2、核酸杂交
基本原理：不同菌种的同源序列之间互补结合 形成杂合双链；杂交率越高，其亲缘关系就越 近 具体方法：DNA-DND杂交，DNA-rRNA杂交 ，核酸探针 应用：杂交同源性在20~60%是同属不同种， 在60%以上为同一个种，超过70%为同一个亚 种
3、16SrRNA碱基测序
二、微生物的鉴定
（一）形态学特征测定 （二）生理生化特征测定 （三）血清学试验 （四）核酸的碱基测序与分子杂交 （五）蛋白质的氨基酸序列分析
（五）蛋白质的氨基酸序列分析
氨基酸测序：蛋白质的氨基酸序列直接反映 mRNA顺序，同源蛋白质氨基酸序列相似性越 高，其亲缘关系越近 肽指纹图谱测定：蛋白质的肽质量指纹图谱可 以作为种以下分类和鉴定的依据
微生物分类鉴定
第三节微生物的分类鉴定方法一、微生物鉴定的依据获得纯化的微生物分离菌株后，首先判定是原核微生物还是真核微生物，这实际上在分离过程中所使用的方法和选择性培养基已经决定了分离菌株的大类的归属，从平板菌落的特征和液体培养的性状都可加以判定。
然后，如是原核微生物，便可根据表14-3 所示的经典分类鉴定指标进行鉴定，如条件允许，可做碳源利用的BIOLOG-GN 分析和16S rDNA 序列分析。
多项结果结合起来确定分离菌株的属和种。
表14-3 微生物经典分类鉴定方法的指标依据二、微生物鉴定的技术与方法根据目前微生物分类学中使用的技术和方法，可把它们分成四个不同的水平：①细胞形态和行为水平，②细胞组分水平，③蛋白质水平，④基因组水平；在微生物分类学发展的早期，主要的分类鉴定指标是以在细胞形态和习性为主，可称为经典的分类鉴定法。
其他三种实验技术主要是60 年代以后采用的，称为化学分类和遗传学分类法，这些方法再加上数值分类鉴定法，可称为现代的分类鉴定方法。
（一）、经典分类鉴定法经典分类法是一百多年来进行微生物分类的传统方法。
其特点是人为地选择几种形态生理生化特征进行分类，并在分类中将表型特征分为主、次。
一般在科以上分类单位以形态特征、科以下分类单位以形态结合生理生化特征加以区分。
最后，采用双歧法整理实验结果，排列一个个的分类单元，形成双歧检索表（图14-4 ）。
A. 能在60 o C 以上生长B. 细胞大，宽度1.3~1.8mm ……………………………………… 1. 热微菌属( Thermomicrobium )BB. 细胞小，宽度0.4~0.8mmC. 能以葡萄糖为碳源生长D. 能在pH4.5 生长…………………………………………… 2. 热酸菌属( Acidothermus )DD. 不能在pH4.5 生长………………………………………………… 3. 栖热菌属( Thermus )CC. 不能以葡萄糖为唯一碳源……………………… 4. 栖热嗜油菌属( 栖热嗜狮菌属Thermoleophilum )AA. 不能在60 o C 以上生长图14-4 双歧法检索表例样应用BIOLOG-GN 仪检测分离菌株对众多碳源的利用情况判断分离菌株的分类地位，近年来也时有应用。
微生物的分类和命名法
微生物的分类和命名法微生物是一类非常特殊的生物体，在自然界中广泛存在，对环境生态和人类健康具有重要影响。
微生物的分类和命名法是对其进行科学归纳和命名的方法，以便于研究和交流。
本文将介绍微生物的分类原则和命名规则，以及这些方法在微生物学研究中的应用。
一、微生物的分类原则微生物的分类是基于其形态、生理特征、生态特征和遗传特征等方面进行的。
下面将介绍三个常用的微生物分类方法。
1. 形态分类法形态分类法是根据微生物的形态特征进行分类的方法。
仅限于通过直接观察和测量微生物形态特征的方法，如细胞形态、胞壁结构等。
常见的形态分类方法有鉴定微生物的颜色、大小、形状等。
2. 生理分类法生理分类法是以微生物的生理过程和生物化学代谢为基础进行分类的方法。
根据微生物对环境中有机物的利用方式、产生特定产品的能力、对气体需求等特征进行分类。
例如，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，根据其细胞的染色结果和细胞壁结构。
3. 分子生物学分类法分子生物学分类法是通过研究微生物的基因组、核酸序列、拷贝数和基因型等遗传特征进行分类的方法。
这种分类方法可以更准确地判断微生物的亲缘关系。
常用的分子生物学分类方法有基因测序、DNA指纹图谱等。
二、微生物的命名法微生物的命名法是对微生物进行分类命名的规则，包括属名和种名的命名规则。
下面将介绍微生物的命名法的基本原则和命名规则。
1. 命名法的基本原则微生物的命名法遵循国际野生菌学和细菌学委员会（International Code of Nomenclature for Algae, Fungi, and Plants）制定的规则。
该委员会根据科学共识和实际需要，制定了一系列命名法的基本原则，以确保微生物的命名规范和稳定。
2. 种名的命名规则微生物的种名是由属名和种加词（trivial epithet）组成。
种加词是用来描述微生物特征的词汇，通常用拉丁文或其它国际科学语言表示。
种名应尽量与已有的命名规则保持一致，既要具有描述特征的准确性，又要易于记忆和使用。
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微生物的分类和鉴定第十章微生物的分类和鉴定一、名词解释：01.系统学（systematics）：是研究生物多样性及其分类和演化关系的科学。
分子系统学是检测、描述并揭示生物在分子水平上的多样性及其演化规律的科学。
研究内容包括了群体遗传结构、分类学、系统发育和分子进化等领域。
02.系统树：在研究生物进化和系统分类中，常用一种树状分支的图型来概括各种（类）生物之间的亲缘关系，这种树状分支的图型也称为发育树（phylogenetic tree）。
03.分子系统树：通过比较生物大分子序列差异的数值构建的系统树称为分子系统树。
04.微生物分类学（microbial taxonomy）：是一门按微生物的亲缘关系把它们安排成条例清楚的各种分类单元或分类群的科学，其具体任务有三，即分类、鉴定和命名。
05.分类（classification）：根据文献资料，经过科学的归纳和理性的思考，整理成一个科学的分类系统。
即解决从个别到一般或从具体到抽象的问题。
06.鉴定（identification）：通过详细观察和描述一个未知名称纯种微生物的各种性状特征，然后查找现成的分类系统，以达到对其知类、辨名的目的。
即解决从一般到特殊或从抽象到具体的问题07.命名（nomenclature）：为一个新发现的微生物确定一个新学名的过程。
08.培养物（culture）：是指一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。
如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。
如果某一培养物是由单一微生物细胞繁殖产生的，就称之为该微生物的纯培养物（pure culture)。
09.菌株（strain）：从自然界分离得到的任何一种微生物的纯培养物，都可以称为微生物的一个菌株；用实验方法（如通过诱变）所获得的某一菌株的变异型，也可以称为一个新的菌株，以便与原来的菌株相区别。
菌株是微生物分类和研究工作中最基础的操作实体。
10.标准菌株：指能代表这个种的各典型性状的一个被指定的菌株。
11.种群（population）：也有人译为群体、居群或群丛等，是指一定空间中同种个体的组合。
每一个物种在自然界中的存在，都有一定的空间结构，在其分散的、不连续的居住场所或分布区域内，形成不同的群体单元，这些群体单元就称为居群。
12.种（species）：是生物分类中基本的分类单元和分类等级。
它是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近、与同属的其他物种有明显差异的一大群菌株的总称。
13.型（form / type）：常指亚种以下的细分，当同种或同亚种不同菌株之间的性状差异，不足以分为心的亚种时，可以细分为不同的型。
例如，按抗原特征的差异分为不同的血清型；按对噬菌体裂解反应的不同分为不同的噬菌型等等。
14.亚种/变种（subspecies / variety）：当某一个种内的不同菌株存在少数明显而稳定的变异特征或遗传性而又不足以区分成新种时，可以将这些菌株细分成两个或更多的小的分类单元—亚种。
亚种是正式分类单元中地位最低的分类等级。
变种是亚种的同义词。
15.真菌（fungi）：是不含叶绿体、化能有机营养、具有真正的cell核，含有线粒体、以孢子进行繁殖、不运动的典型的真核微生物。
16.粘菌（slime molds）：又称粘质霉菌，是非光合营养的真核微生物，不含叶绿素，吞噬方式摄食，产孢子和子实体等表型特征使它们介于真菌和原生动物之间。
17.热原体（Thermoplasma）：在古生菌中，有一类无细胞壁的原核生物很像支原体，由于他们无细胞壁、嗜热、嗜酸、行好氧化能有机营养，所以称为热原体。
二、填空：01.细菌分类鉴定的主要文献是《伯杰氏细菌学鉴定手册》。
02.对生物系统发育进行研究，最合适的揭示各类生物亲缘关系的大分子物质是rRNA，特别是16SrRNA。
03.rRNA序列测定和分析方法有：寡核苷酸编目法和全序列分析法。
04.对于序列目录资料进行分析比较，常采用相似性系数和序列印迹法来比较各微生物之间的亲缘关系。
05.系统树分为无根树和有根树两种形式06.在系统树图型中分枝的末端和分枝的连接点，称为结（nod），代表生物类群；分枝末端的结代表仍生存的种类。
07.构建分子系统树，最常用的是最节省分析法或称简约法。
这种推断谱系的原则是：在所有可能的谱系关系中，涉及进化改变的序列特征数最少的谱系是最可信的。
08.20世纪70年代，Woese根据16SrRNA（18SrRNA）序列分析，将生物界分为三界（后改称三个域）：古细菌、真细菌、真核生物。
1990年他又把它们改成为Bacteria（细菌）、Archaea（古生菌）和Eukarya （真核生物），并构建了三界（域）生物的系统树。
09.分类单元（taxon，复数taxa）是指具体的分类群。
它有七个基本的分类等级（或分类阶元）即：界、门、纲、目、科、属、种。
在微生物分类中，还有一些非正式的类群术语，如种以上的有群、组系；亚种以下的有培养物、菌株、居群、型。
10.根据国际命名法规，证实分类单元的学名，必须用拉丁词或其他词源经拉丁化的词命名，种名的命名是用双名法（binominal nomenclature）。
命名，即种的学名由属名加种名加词两部分组合而成。
11.微生物数据存储、检索和分析中心是世界微生物数据中心（WDC）。
我国微生物资源数据库（MRDC）包括微生物的性状库、产品市场信息库、名称库、名词库、国际交流用RKC代码库和一个微生物数值分析软件包MINTS。
12.微生物多样性是生物多样性的一个重要组成部分，生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样性等。
13.产甲烷古生菌进行自养生长时，CO2是碳源，利用H2作为CO2的还原剂以合成有机物，利用甲烷发酵或乙酸盐呼吸来获取能量，乙酸可以刺激生长。
14.所有的产甲烷古生菌都能利用NH4＋作为氮源，少数种可以固定分子态的氮。
15.绝大多数的超嗜热古生菌专性厌氧，以硫作为电子受体，进行化能有机营养或化能无机营养的厌氧呼吸产能代谢。
16.超嗜热古生菌种的热网菌属（Pyrodictium）的细胞最高能在110℃生长，产生占细胞总量80%的一种蛋白质，这种蛋白质有两种酶活性，一种是催化ATP合成的酶活性；另一种活性是作为一种分子伴侣（Molecular chaperon）。
17.目前已知最古老的真核生物是双滴虫（Diplomonads）和微孢子虫（Microsporidia），他们具有细胞核，但没有线粒体。
18.根据核糖体RNA序列分析，藻类的系统发育是离散性很明显的异质类群。
三、问答题：1. 16SrRNA公认为谱系分析的“分子尺”的原因是什么？答：（1）rRNA参与生物蛋白质的合成过程，其功能是任何生物都必不可少，而且在生物进化史中，其功能保持不变。
（2）在16SrRNA分子中既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。
（3）16SrRNA相对分子量大小适中（约1540个核苷酸），便于序列分析。
（4）16SrRNA普遍存在于真核生物和原核生物中（真核生物中其同源分子是18SrRNA）。
因此，它可以作为测量各类生物进化的工具。
2.rRNA序列测定和分析的方法有哪些？答：（1）寡核苷酸编目分析法：将纯化的16SrRNA用核糖核酸酶处理，分离这些片段，并用同位素体外标记，然后用双向电泳层析法，分离这些片段，用放射自显影技术确定不同长度的寡核苷酸斑点在电泳图谱中的位置，小片段的寡核苷酸分子序列即可确定。
对于大的片段可进行二级或三级分析。
将所有要比较的微生物的序列目录编好后，即可对这些序列目录资料进行分析比较。
采用的比较方法有相似性系数法和序列印迹法。
相似性系数法：通过计算相似性系数N AB 值来确定微生物之间的关系S AB=2×N AB(N A+N B)。
如果S AB=1，说明两菌株rRNA序列相同，是同一进化时间的微生物，如果S AB<0.1，两菌株亲缘关系很远。
序列印迹法：是通过序列比较后，若发现某些序列仅为某种（群）微生物所特有，这些序列可作为其印迹序列，它可以作为该系统发育群的标志。
（2）全序列分析法：最常用的是直接序列分析法，用反转录酶和双脱氧序列分析，可以对未经纯化的rRNA抽提物进行直接的序列测定。
抽提总rRNA，用少量与16SrRNA某些高度保守区内的碱基序列互补的DNA寡核苷酸（15~20个）作引物与其混合，然后加入反转录酶和32P标记的双脱氧ATP 和其他三种未标记的双脱氧核苷酸混合，分成四等份，往每一份中加入少量四种不同的2,3-双脱氧核苷酸。
反转录酶以16SrRNA为模板并复制DNA，通过双脱氧核苷酸类似物的随机结合终止在不同位点上的反转录。
最后分别用电泳法分离所产生的DNA片段。
根据四个反应体系DNA片段在电泳凝胶上的排列，用放射自显影技术解读互补的DNA顺序，从而推断出16SrRNA 顺序。
更新的技术：用人工合成的与16SrRNA保守区内的序列互补的寡核苷酸作引物，用PCR技术来扩增16SrRNA的基因，再以类似的上述方法的双脱氧序列分析法进行直接的序列分析。
3.关于细菌新名称的发表有何规定？答：根据细菌命名法规的规定，新细菌名称的发表应在公开发行的刊物上进行。
若新名称是在国际系统细菌学杂志（IJSB）以外杂志上发表，还必须经过新名称的合格化发表，即将有效发表的英文附本送交IJSB审查，被认为合格后，在该杂志上定期发公布，命名日期即从公布之日算起，否则不算合格发表。
发表新名称时，应在新名称之后加上所属新分类等级的缩写词，如新目“ord. nov”、新属“gen. nov”、新种“sp. nov”等。
4.简要介绍《伯杰氏手册》及其第九版的特征。
答：（1）《伯杰氏鉴定细菌学手册》（Bergey’s Manual of DeterminativeBacteriology），最初是由美国宾夕法尼亚大学的细菌学教授D. Bergey及其同事为细菌的鉴定而编写的，该书于1923年问世，简称《伯杰氏手册》，今已有九版。
（2）《伯杰氏手册》（1994）第九版根据表型特征把细菌分成4个类别35群。
特点：①该书的目的只是为了鉴别那些已经被描述和培养的细菌，并不把系统分类和鉴定信息结合起来；②其内容的编排严格按照表型特征，所选择的排列是实用的，为了有利于细菌的鉴定，并不试图提供一个自然分类系统；③手册抽取了《伯杰氏系统细菌学手册》四卷的表型信息，并包括了尽可能多的新的分类单元，其有效发表的截止日期是1991年1月。
5.简介《伯杰氏系统细菌学手册》。
答：（1）在1984~1989年间，《伯杰氏手册》的出版者出版了《伯杰氏系统细菌学手册》（Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology），简称《系统手册》第一版。