个人总结用clontech的磷酸钙转染试剂包装慢病毒方法
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个人总结用clontech的磷酸钙转染试剂包装慢病毒方法
1.转染24小时前，在10cm培养板接种1.5-3×106个293T细胞，添加10ml的
条件下过夜。保证在加入转染复合物培养基(DMEM+10%FBS)。在37℃，5%CO
2
前培养板有50-80%的覆盖率。
2.转染前3小时换液为新鲜培养基并加入终浓度为15ul 50mM的
Choloroquine。
3.Vortex转染所需试剂，每个10cm培养板转染样品需准备两个50ml离心管（马
振毅等用15ml离心管），按顺序添加如下试剂
4.一边轻轻vortex solution A（调节转速确保液体不会溅出）或者一边用1ml
一次性移液管往solution A中吹泡泡。逐滴轻轻加入solution B。完成后溶液由于沉淀形成应呈不透明状(promega加入顺序与clontech相反是边混匀B液逐滴加入A液)。
5.室温孵育15min(promega说明书室温22-25℃30min较适合转染复合物形成)。
6.将转染复合加入细胞之前再次vortex混匀。逐滴并多位置轻轻滴加入培养
板，完全加入后前后来回摇晃培养板以以便沉淀均匀地吸附在细胞表面。
7.在37℃，5％CO2培养箱中孵育。转染8h后换液(或8-12h)。
8.如果包装的慢病毒质粒携带荧光基团，24-48h后可观察到荧光。
9.转染30h后再换新鲜培养基。
10.收集转染48h后的病毒上清（也可再收集72h的病毒）。
11. option：浓缩病毒。
12.分装病毒保存于-80℃。