血浆核酸提取实验常见问题解析
血清血浆核酸提取实验常见问题解析
血清血浆核酸提取实验常见问题解析很多人在做血清DNA提取、血浆DNA提取时会对样本类型概念不清楚，什么是全血，什么是血清，什么是血浆，概念不清楚，在做核酸提取、核酸检测类的实验时，对提取试剂的选择也比较随意，导致实验结果往往不尽如人意。
那么全血、血浆、血清有什么区别，如何选择相应的核酸提取试剂呢？一、什么是外周血，什么是全血，什么是血清，什么是血浆？新鲜的血液（也叫全血，医学上称为外周血）加入抗凝剂（如柠檬酸钠，EDTA 等，一般医院采血都是用抗凝管采集），静置一段时间，会出现分层的现象。
上面淡黄色的半透明液体是血浆，约占55%，下面暗红色不透明的是红细胞，约占45%。
中间薄薄的一层白色物质是白细胞和血小板，不到1%。
红细胞、白细胞、血小板共同组成了血细胞。
血液不加抗凝剂会很快凝固，在凝血块周围出现的淡黄色的透明液体是血清，血清中不含纤维蛋白原。
简单来说，全血包括血浆和血细胞（红细胞、白细胞、血小板），血浆包括血清和纤维蛋白原。
如果要提取血细胞中的核酸，需要选择血细胞核酸提取试剂或全血核酸提取试剂；如果要从血清或血浆中提取游离核酸或游离肿瘤核酸则要选择血浆或血清核酸提取试剂；如果需要检测外周血中有无病毒或细菌感染，一般也是选择血浆或血清核酸提取试剂。
如果要提取DNA，需要选择DNA提取试剂，要提取RNA，则要选择RNA提取试剂。
如果目标基因丰度较低，需要较多的血浆或血清进行富集提取，则需要选择专门的血浆DNA、血清DNA富集提取试剂。
还有，如果核酸检测的结果要面向临床出具检验报告，选择的提取试剂盒要通过药监局审查，应有药监局备案号，这一点非常重要。
在进行核酸提取实验时，切不可选错了试剂盒，否则会影响实验效果和实验进度。
目前，国内应用较多的血液系列核酸提取试剂主要有Qiagen、Biog等，其血液系列核酸提取试剂均比较全面，包括血液DNA提取、血清DNA提取、血浆DNA提取、血液RNA提取、血浆RNA提取、血清RNA提取、小量提取试剂、中量富集提取试剂等，研究者可根据实验需要进行选择。
核酸抽提的一些基础知识解答
核酸抽提的基础近期撰写了一个对于核酸抽提的基础现状的底稿；没有去找参照书润饰，所以会有点纷乱。
第一申明的是：这篇东西只为有必定核酸抽提基础知识的人准备，同时也将会实时改正。
那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思想有点跳跃，二则是没有必需糟践自己的时间。
写这篇东西的此外一个原由是，我向来在思虑怎样简化经典的无介质的核酸抽提程序。
最经典的是裂解一步，去蛋白质一步，核酸积淀一步； DNAzol 将这三步并成了一步，按道理已经简化到了极致。
事实是， DNAzol 并无被大家认同，其原由大体仍是质量不太靠谱吧。
此刻也有使用 Proteinase K 消化后直接积淀核酸的方法，三步简化成了两步，可我总感觉醇的积淀不行能完全去除Proteinase K。
明年大体还没有生物学的诺贝尔奖会花落中国的，那么先求得一个核酸抽提最简单的非介质方法世界当先怎样？一笑！也必定。
1、核酸抽提原理简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。
裂解是使样品中的核酸游离在裂解系统中的过程，纯化则是使核酸与裂解系统中的其余成分，如蛋白质、盐及其余杂质完全分其他过程。
经典的裂解液几乎都含有去污剂（如SDS、Triton X-100 、NP-40、Tween 20 等）和盐（如 Tris 、EDTA 、 NaCl 等）。
盐的作用，除了供给一个适合的裂解环境（如 Tris），还包含克制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的损坏（如EDTA ）、保持核酸构造的稳固（如 NaCl）等。
去污剂则是经过使蛋白质变性，损坏膜构造及解开与核酸相连结的蛋白质，进而实现核酸游离在裂解系统中。
裂解系统中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促使核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后边的纯化操作以及获取更纯的核酸。
也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂（如 GIT 、GuHCl 等）裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是 DNA 抽提的主流。
血液样本核酸提取注意事项
BeijingTel ：86-10-59822688 Fax ：86-10-59822788 Shanghai Tel ：86-21-38653846Technical ：86-10-59822661/2665 Consult ：800-990-6057 Fax ：86-21-64074836 E-mail ：people@ E-mail ：sh@ 血液基因组提取注意事项（DP319）样本保存及预处理：1. 血液样本通常保存在-20℃或-80℃低温保存，如果放置4℃建议不超过一个星期。
哺乳动物的红细胞里是没有细胞核的，所以首先要把红细胞裂解掉，然后再裂解白细胞提取基因组DNA ，一般采用100ul 以上的血液进行提取。
2. 血液的抗凝剂的选择：如果是用来做分子生物学实验的血液最好采用EDTA 、枸橼酸钠（也叫柠檬酸钠），尽量不要采用肝素。
3. 冷冻的血液取出后37度速溶能有效避免DNA 在血液融化过程中的降解。
DNA 提取过程1. 细胞裂解时要注意样本量和裂解溶液的量想匹配，确保样本充分裂解。
如需两次CL 裂解，则最好第一次加入的CL 的量多一些。
例如600ul 血液一共加入1.5ml 的裂解液CL ，分两次建议第一次800ul 裂解液CL ，第二次700ul 裂解液CL 。
2. 加入裂解液CL 后要保证充分混匀。
离心后沉淀应为淡粉色或白色沉淀。
如果沉淀颜色较红，则需再加入裂解液CL 进行裂解。
3. FG 和蛋白酶K 的混合液最好现用现配，样本加入该混合液后立即涡旋至无团块。
4. 水浴时期间适当混匀样本，以助于裂解。
5. DNA 使用异丙醇进行沉淀，常温的异丙醇即可，但冰冷的异丙醇更有助于DNA 的沉淀。
6. 溶液法的洗涤方式是使用70%的乙醇对沉淀洗涤，这里要注意加入乙醇后不是简单晃晃就行，要让那个DNA 沉淀片漂浮在70%乙醇中，然后轻柔颠倒，这样才能充分对DNA 沉淀进行洗涤。
洗涤后离心去除乙醇，然后晾干 DNA ，这里所说的晾干是指将乙醇挥发干净，而不是将水也弄干。
血液dna提取注意事项
血液dna提取注意事项血液DNA提取是遗传学和分子生物学研究中常见的实验步骤之一，在医学诊断、药物研发、人类进化等领域都有重要应用。
下面将详细介绍血液DNA提取的注意事项。
1. 样本采集：- 血液样本应在无菌条件下采集，避免外源性DNA的污染。
- 血液样本采集至少2ml以上，以确保提取到足够的DNA量。
- 尽量避免血样接触金属，以防止铁离子的存在对DNA样本的影响。
- 对于某些应用，如单个核苷酸多态性（SNP）分析，应采集多个血液样本以保证结果的准确性。
- 样本应尽可能及时处理，以防止DNA的降解。
2. 样本处理：- 血液样本在提取前应进行离心分离，分离血浆/血清和红细胞，以避免红细胞的核酸对DNA提取的干扰。
- 分离的血浆/血清可以用于其他分子生物学研究的目的，如RNA提取。
- 如果需要提取白细胞DNA，需要使用红细胞裂解缓冲液将红细胞破裂并释放白细胞，然后进行后续的DNA提取步骤。
3. DNA提取试剂和设备：- 选择适合的DNA提取试剂盒，根据实验需要选择不同原理的试剂盒，如有机溶剂法、硅胶基质法、离子交换法等。
- 至关重要的是严格按照试剂盒说明书进行操作，以保证DNA的高质量提取。
- 进行DNA提取的实验室应具备基本的无菌条件和基因实验室设备，包括离心机、热平台、洗涤机、显微镜等。
4. DNA提取步骤：- 在进行DNA提取前，应先进行样本记录和标记，确保后续实验数据的准确性。
- 样本处理过程中应避免DNA接触皮肤和吸入，戴手套并佩戴口罩和护目镜。
- 在DNA提取操作中应用干燥DNA纯化试剂盒时，要注意防止粉尘的吸入和尘埃污染。
- 振荡或旋转过程中，避免样品外泄或误操作导致的交叉污染。
- 严格控制实验条件，如操作时间、温度、离心速度和时间等，以确保实验结果的一致性。
- 使用质控样品进行DNA提取的效果验证，确保提取出的DNA质量和纯度达到要求。
5. DNA样本保存：- 提取到的DNA样本应立即在低温冰箱或液氮中保存，以防止样本的降解。
血液提取核酸实验报告
血液提取核酸实验报告核酸提取是分子生物学实验中最基础的步骤之一，它是从细胞或组织中提取核酸的过程。
在许多研究领域，如基因测序、基因表达分析和遗传疾病诊断中，核酸提取都是必不可少的步骤。
血液作为一种常见的样本来源，血液提取核酸实验也是常见的实验之一。
血液提取核酸实验的首要目标是获取足够的DNA或RNA用于后续实验。
血液中含有丰富的核酸，但同时也含有大量的蛋白质、细胞碎片和其他杂质。
因此，在进行核酸提取实验之前，需要对血液样本进行前处理，以去除这些干扰物质。
一般而言，血液提取核酸的步骤包括血液样本采集、裂解细胞膜、裂解细胞核、去除蛋白质和其他杂质、沉淀核酸、洗涤和溶解核酸。
下面将对这些步骤进行详细介绍。
血液样本采集是整个实验的第一步。
通常使用针头和注射器从静脉或指尖采集血液样本。
采集的血液样本应该尽快进行处理，以防止核酸降解。
接下来是裂解细胞膜的步骤。
这个步骤的目标是破坏细胞膜，释放出细胞内的核酸。
常用的方法包括加入裂解缓冲液和酶解细胞膜。
裂解细胞核是血液提取核酸的关键步骤之一。
细胞核内含有大量的DNA和RNA，但它们被核膜所包围，需要被破坏才能释放出来。
一种常用的方法是加入裂解缓冲液和蛋白酶K来裂解核膜。
去除蛋白质和其他杂质是为了净化核酸溶液。
在这一步骤中，可以使用酚/氯仿方法或商用的核酸纯化试剂盒来去除蛋白质和其他杂质。
酚/氯仿方法是一种经典的核酸提取方法，通过酚醇和氯仿的双相分离来去除蛋白质。
沉淀核酸是为了将核酸从溶液中提取出来。
沉淀可以使用酒精沉淀或盐沉淀的方法。
酒精沉淀是通过加入酒精和盐使核酸沉淀下来，而盐沉淀是通过加入高盐溶液使核酸沉淀下来。
洗涤和溶解核酸是为了去除沉淀中的盐和其他杂质，并使核酸溶解在适当的溶液中。
洗涤可以使用乙醇洗涤或盐洗涤的方法，溶解可以使用盐溶液或去离子水。
在进行血液提取核酸实验时，需要注意一些关键的技术细节。
首先是实验室操作的无菌和无污染。
在核酸提取实验中，任何外源性的核酸污染都可能导致实验结果的错误。
核酸的提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉核酸提取的基本原理和实验操作步骤。
2. 掌握从动物组织中提取核酸的方法。
3. 了解核酸提取过程中需要注意的问题。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。
本实验采用动物组织作为材料，通过破碎细胞膜和核膜，提取其中的核酸。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物肝脏、生理盐水、无水乙醇、氯仿、异丙醇、氯化钠、EDTA、Tris-HCl缓冲液、DNA酶、RNA酶等。
2. 实验仪器：研钵、研杵、移液枪、离心机、电热炉、紫外分光光度计、恒温水浴锅、玻璃棒等。
四、实验步骤1. 取新鲜动物肝脏，用生理盐水清洗，去尽血液，切成小块。
2. 将肝脏块放入研钵中，加入适量EDTA和Tris-HCl缓冲液，用研杵充分研磨，制成匀浆。
3. 将匀浆转移到离心管中，加入氯仿，剧烈振荡，使蛋白质和脂质与核酸分离。
4. 4℃、12,000 rpm离心15分钟，取上清液。
5. 将上清液加入等体积的异丙醇，静置2小时，使DNA沉淀。
6. 4℃、12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液，用75%乙醇洗涤DNA沉淀。
7. 将DNA沉淀干燥，用适量Tris-HCl缓冲液溶解。
8. 通过紫外分光光度计测定DNA浓度。
9. 重复步骤2-8，提取RNA。
五、实验结果与分析1. 通过紫外分光光度计测定，DNA浓度为2.0 μg/μl，RNA浓度为1.5 μg/μl。
2. 从实验结果可以看出，DNA和RNA的提取成功，且提取效率较高。
六、实验讨论1. 在实验过程中，选择合适的动物组织是保证实验成功的关键。
本实验选用动物肝脏作为材料，因为肝脏中DNA和RNA含量较高，易于提取。
2. 在提取过程中，要尽量减少蛋白质和脂质的干扰。
本实验通过加入氯仿和异丙醇，使蛋白质和脂质与核酸分离。
3. 在实验过程中，要注意温度、pH值和离心速度等条件，以保证核酸的稳定性和提取效率。
问题核酸标本出现的原因分析与预防措施
问题核酸标本出现的原因分析与预防措施摘要：目的：医护人员在了解患者病症时，首先需要对患者进行抽血，通过对患者血液标本进行检测，从而更好的了解到患者身体状况。
方法：本文主要通过对2021年1月自2022年2月期间，前来我院门诊就诊的100例患者为分析研究对象，医护人员在样本采集过程中，需要加强防控，避免出现交叉感染的情况。
另外，医护人员不仅需要对样本采集严格把控，而且还需要对样本的标识、存储、运输过程，严格管理，避免在运输期间出现样本丢失、试管破损、试管无条形码、条形码损坏等等情况。
结果：医护人员在对核酸样本进行运输过程中，发现有1管核酸样本丢失、2管核酸样本外条形码模糊不清、2管核酸样本出现交叉感染情况。
由此可以看出，核酸样本在标识、存储、运输管理过程中存在一系列的问题，而这些问题若不及时解决，将会严重影响人们的正常出行。
结论：医护人员对患者进行核酸采集过程中，需要对样本试管进行标识，同时标识后需要确保样本运输、管理途中，核酸样本不会出现交叉感染情况，降低病毒感染概率，避免出现试管交叉感染情况。
关键词：核酸标本；原因分析；预防措施0、引言众所周知，核酸主要是由DNA和RNA组成，当大量的核苷酸聚合从而形成大分子化合物时，通过利用PCR技术就可以对大分子化合物进行检测，医护人员将检测结果与酶免疫检测数据相对比，从而可以有效的查看患者体内其他症状情况。
人体血液中具有大量的PCR抑制菌，而这些PCR抑制菌会干扰PCR技术正常运行，从而判断出患者体内抑制菌数量。
本文主要通过对2022年1月至2022年2月期间，我院门诊前后共接待100例患者，医护人员在为患者诊治过程中，需要通过对患者提取血样，而判断患者症状。
患者在医护人员的陪同下，前来采血现场，有专业采集医护人员提取血液样本。
医护人员提取血样前，需要在试管上粘贴患者姓名、检查项目；提取血液样本后，医护人员需要第一时间将患者采取离心措施，待一段时间后，放入冰箱存储；待一段时间后，安排专业运输人员将血液样本送往检验科进行检验、保存。
1生物的核酸提取及常见的问题
DNase的抑制剂 DNase的抑制剂
加入少量金属离子螯合剂， 加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L Na或柠檬酸钠 DNase基本可以全部 或柠檬酸钠， EDTA2 Na或柠檬酸钠，DNase基本可以全部 失活。 失活。 去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 DNase DNase失活。 DNase失活。 失活
Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； ）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； Na2EDTA螯合 2+或Mn2+离子，抑制 螯合Mg 离子，抑制DNase活性； 活性； 螯合 活性 NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解，存在于液相中； 提供一个高盐环境， 充分溶解，存在于液相中； 充分溶解 CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； 溶解细胞膜 β- 巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除 巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，
线粒体和叶绿体：生物体内的半自主性细 线粒体和叶绿体： 胞器，自身可编码蛋白。 胞器，自身可编码蛋白。它们的比重和大 小一定，同一离心场内有确定的沉降速度。 小一定，同一离心场内有确定的沉降速度。 故可采用密度梯度离心的方法分离， 故可采用密度梯度离心的方法分离，使用 均匀介质（蔗糖、氯化铯等）。 均匀介质（蔗糖、氯化铯等）。
溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出， 注：CTAB溶液在低于 ℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的植物 溶液在低于 材料之前必须预热，且离心时温度不要低于 ℃ 材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
CTAB抽提缓冲液的经典配方 CTAB抽提缓冲液的经典配方
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血浆核酸提取实验常见问题解析
很多人在做血液来源样本DNA提取时会对样本类型概念不清楚，所以在做核酸提取、核酸检测类的实验时，对提取试剂的选择比较随意，其实验结果也往往不尽如人意，那么不同血液来源的样本有什么区别，对核酸提取、核酸检测有什么影响呢？
一、[endif]什么是外周血，什么是全血，什么是血清，什么是血浆？
新鲜的血液（也叫全血，医学上称为外周血）加入抗凝剂（如柠檬酸钠，EDTA等，一般医院采血都是用抗凝管采集），静置一段时间，会出现分层的现象。
上面淡黄色的半透明液体是血浆，约占55%，下面暗红色不透明的是红细胞，约占45%。
中间薄薄的一层白色物质是白细胞和血小板，不到1%。
红细胞、白细胞、血小板共同组成了血细胞。
特别提示：不加抗凝剂的血液很快就会凝成血块，在凝血块周围出现的淡黄色的透明液体是血清，血清中不含纤维蛋白原。
简单来说，全血包括血浆和血细胞（红细胞、白细胞、血小板），血浆包括血清和纤维蛋白原。
在选择核酸提取试剂盒时，首先要考虑的是样本类型以及提取的核酸种类，选择针对性强，提取效率高的提取试剂盒。
如果要提取血细胞中的核酸，需要选择血细胞核酸提取试剂或全血核酸提取试剂；如果要从血清或血浆中提取游离核酸或游离肿瘤核酸则要选择血浆或血清核酸提取试剂；如果需要检测外周血中有无病毒或细菌感染，一般也是选择血浆或血清核酸提取试剂。
如果要提取DNA，需要选择DNA提取试剂，要提取RNA，则要选择RNA提取试剂。
如果目标基因丰度较低，需要较多的血浆或血清进行富集提取，则需要选择专门的血浆、血清核酸富集提取试剂。
还有，如果核酸检测的结果要面向临床出具检验报告，选择的提取试剂盒要通过药监局审查，应有药监局备案号，这一点非常重要。
在进行核酸提取实验时，切不可选错了试剂盒，否则会影响实验效果和实验进度。
目前，国内应用较多的血
液系列核酸提取试剂主要有Qiagen、Biog等，其血液系列核酸提取试剂均比较全面，包括血细胞、血清、血浆、DNA、RNA、小量提取、中量富集提取等，研究者可根据实验需要进行选择。
二、[endif]血清血浆游离DNA提取需要多少样本量？得率多少正常？
图1 Qiagen关于cfDNA得率的数据图
图2 Biog血浆DNA提取试剂盒做血浆样本DNA提取，Q-bit测浓度无读数，PCR检测结果靶基因（CT 25左右）以及内参（CT 21左右）扩增曲线
血清、血浆样本中游离核酸含量较低，根据Qiagen公司数据，1ml血浆样本DNA提取得率只有7.35ng左右（图1）。
这么低的核酸浓度，如果直接用紫外法检测，得出的数值并不准确，而且多次测量的结果会变异很大。
有些研究者提取血浆核酸后习惯于先用紫外检测浓度，发现紫外检测不出来或浓度很低时便认为提取失败，放弃后面进一步的实验，其实并不可取。
我们可以把紫外读数作为参考，但是不能作为判断得率的唯一标准，最好还是要做个PCR或荧光定量。
根据Qiagen公司的实验，血清血浆的量与提取的核酸量成正比。
因而，如果要提高核酸得率，可通过增加血清或血浆的量来实现。
一般地，做血浆或血清核酸提取，样本量最好在1ml以上。
如果1ml或更大量样本得不到满意的检测结果，则应及时考虑更换提取试剂盒。
目前国内常用的Qiagen、Biog血浆核酸提取试剂盒核酸提取的得率都很不错，基本上能够满足绝大多数实验的要求。
三、不同检测目标的实验选择什么类型的样本？
从核酸检测的角度讲，人的基因组更多的存在于白细胞中，而只有少量游离核酸存在于血清、血浆中，如果白细胞大量凋亡，血清血浆中的游离核酸量会有所增加。
如果机体患有恶性肿瘤，肿瘤组织坏死，坏死的肿瘤细胞释放出核酸片段或肿瘤细胞发生血液转移，血浆血清中的核酸量也会增加。
因而，如果是检测部分目标基因，如筛查地中海贫血症，筛查色盲基因等，应该以全血作为实验样本，因为血清和血浆中所含有的人的核酸数量远远少于全血，检测灵敏度会降低很多。
如果要检测肿瘤相关基因，则要选择血浆或血清样本。
如果以病原体核酸为检验目标，如检测乙肝感染情况，检测感冒病毒，检测有无败血症等，则以血清或血浆为实验样本，这会天然地剔除血细胞这种杂质，明显降低核酸提取过程中的难度，有利于提高核酸纯度，增加检测反应灵敏性和稳定性。
血清和血浆相比，一方面血清中含有更少的纤维蛋白原，另一方面血清中的DNA是循环DNA，主要来源
于病变组织，所以使用血清作为实验样本，可以更进一步提高样本纯净度，减少蛋白杂质，提高游离核酸的浓度，获得更为灵敏的检测结果。