免疫组化与免疫荧光的区别
免疫组化或免疫荧光封闭血清的作用
免疫组化或免疫荧光封闭血清的作用
封闭血清用于免疫组化（IHC）或者免疫荧光（IF）实验中样本的封闭，降低背景，减少假阳性。
Abbkine提供多种属封闭血清，液体形式产品（原液），无需溶解，用PBS直接稀释即可使用，低防腐剂含量，对细胞和蛋白的毒性/影响更小。
什么是封闭血清（Blocking Serum=Normal Serum）？
封闭血清就是将养殖的非免疫的正常动物采血，然后不加抗凝剂，血液凝固，血块收缩，析出的淡黄色液体。
经过特殊工艺处理后的血清，特别适在各类免疫学实验中用于封闭处理，比如：IHC、IF/ICC、ELISA等。
血清与血浆的区别？
血浆是指血液中除去细胞成分后剩下的淡黄色或无色半透明液体，一般需要经过抗凝处理。
血清与血浆的区别在于血清中不含某些在凝血过程中被消耗的凝血因子如纤维蛋白原，增添了在血液凝固过程中由血管内皮细胞和血小板所释放的化学物质。
特点：
用于免疫组化（IHC）或者免疫荧光（IF）实验中样本的封闭，降低背景，减少假阳性。
液体形式产品（原液），无需溶解，用PBS直接稀释即可使用，低防腐剂含量，对细胞和蛋白的毒性/影响更小。
为什么需要封闭？
封闭步骤可减少一抗和二抗与非靶标位点进行非特异性结合时所产生的本底信号。
理想情况是，封闭剂将占据样本中的“黏性”位点，比如暴露的带电性或疏水性蛋白表面，同时不会干扰一抗/二抗识别靶表位，从而尽可能提高信噪比(S/N)。
人气产品：。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测机体免疫系统产生的抗体或抗原来诊断疾病的方法。
它基于免疫反应的原理，利用特定的抗体和抗原之间的相互作用来检测人体内的免疫反应物质。
目前，免疫学检验已经成为临床诊断和科研领域中不可或缺的重要手段之一1.免疫层析：免疫层析是一种将待检测物质（抗体或抗原）移动到特定层析纸或凝胶柱上，通过与特异抗体或抗原的结合来检测它们的方法。
这种方法操作简单，成本较低，适用于检测体液中的抗体或抗原。
2.酶联免疫吸附实验（ELISA）：ELISA是一种利用酶的催化作用检测抗体或抗原的方法。
它包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式。
ELISA具有高灵敏度、高特异性、操作简便和成本低廉等优点，广泛应用于临床诊断和科研领域。
3.放射免疫分析（RIA）：RIA是一种利用放射性标记物来检测抗体或抗原的方法。
它的原理是将放射性同位素标记在待测抗体或抗原上，通过测量标记物的放射活性来确定待测物质的含量。
RIA具有高灵敏度和高特异性的优势，但由于放射性标记物的使用，操作相对复杂且安全性要求较高。
4.免疫荧光：免疫荧光是一种利用荧光标记的抗体或抗原来检测待检测物质的方法。
它通过检测标记物的荧光强度或光谱来确定待测物质的存在。
免疫荧光具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优势，广泛应用于病原微生物、肿瘤标志物等的检测。
5.流式细胞术：流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面或细胞内的免疫分子的方法。
它通过将目标细胞与标记有特定抗体的荧光染料反应，再用流式细胞仪对标记的细胞进行激光照射并收集荧光信号来测定免疫分子的表达水平。
流式细胞术具有高灵敏度、多参数分析等优势，广泛应用于细胞免疫学研究和临床诊断。
6.免疫组化：免疫组化是一种利用特异抗体与待检测抗原结合，再通过染色等方法来检测组织或细胞中特定抗原的方法。
免疫组化具有高特异性、高灵敏度、可定量等优势，广泛应用于病理学研究和临床诊断。
检验科免疫组化常见检测与分析方法
检验科免疫组化常见检测与分析方法免疫组化技术是一种利用免疫学原理，通过检测和定位特定蛋白质在组织或细胞中的表达水平和位置的方法。
在医学检验科中，免疫组化技术被广泛应用于疾病的诊断、治疗及预后评估。
本文将介绍一些常见的免疫组化检测与分析方法。
一、免疫组化染色法免疫组化染色法是免疫组化技术中最常用的方法之一。
它通过采用免疫荧光、酶标记、金标记或放射性标记等技术，将特定抗原与特异性抗体结合，并通过染色或荧光的方式来显示其位置和表达水平。
免疫组化染色法广泛应用于各种疾病的诊断，如肿瘤标记物的检测、感染性疾病的诊断等。
二、免疫组织化学法免疫组织化学法是一种在组织切片上进行免疫组化染色的方法。
它通过对切片进行蛋白质抗原的恢复处理和抗体的特异性结合，来检测和显示抗原在组织中的位置和表达水平。
免疫组织化学法主要应用于病理学领域，帮助医生确定疾病的类型和分级。
三、免疫荧光法免疫荧光法是利用特异性抗体与抗原结合后，在显微镜下观察抗原在组织或细胞中的分布情况和表达水平的技术。
免疫荧光法具有高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于自身免疫性疾病、感染性疾病等的诊断。
四、免疫电镜法免疫电镜法是一种在电镜下观察和检测抗体与抗原结合的方法。
它通过在样品上标记抗体或抗原，然后利用电镜来观察并获得高分辨率的图像。
免疫电镜法主要用于对超微结构进行研究和观察，是研究细胞和组织的重要手段。
五、免疫组化信号放大技术免疫组化信号放大技术是一种能够放大免疫染色信号并提高染色效果的方法。
常见的免疫组化信号放大技术包括多聚酶法、银增强法、酶蛋白复合物法等。
这些技术在免疫组化检测中可以提高检测的灵敏度和准确性。
免疫组化技术因其高度敏感、高特异性和定量分析的优势，成为了疾病诊断与治疗中不可或缺的重要方法。
随着技术的发展和创新，免疫组化技术将在临床医学中发挥越来越重要的作用。
综上所述，本文介绍了免疫组化检测与分析的常见方法，包括免疫组化染色法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫电镜法以及免疫组化信号放大技术。
免疫组化染色和免疫荧光染色
免疫组化染色和免疫荧光染色英文回答：Immunohistochemistry (IHC) vs. Immunofluorescence (IF)。
Immunohistochemistry (IHC) and immunofluorescence (IF) are both immunostaining techniques used to localizespecific proteins or other molecules within cells or tissues. While they share some similarities, there are also key differences between the two techniques.IHC.Uses antibodies conjugated to an enzyme (e.g., horseradish peroxidase) or a hapten (e.g., biotin)。
Detects proteins using enzymatic or chemical amplification.Produces a permanent, brown or red precipitate at thesite of antibody binding.Can be used on formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue sections or frozen tissue sections.Typically provides good spatial resolution but limited sensitivity.Can provide semi-quantitative or quantitative data (e.g., number of positive cells, intensity of staining)。
排雷攻略：一文教会你免疫组化、免疫荧光如何制片看片
排雷攻略：⼀⽂教会你免疫组化、免疫荧光如何制⽚看⽚最近带着新进门的研⼀师妹做实验，师妹问了三个问题：1、免疫组化和免疫荧光的区别？2、这两种实验该在什么情况下选择？3、组织是不是只能做免疫组化，细胞是不是只能做免疫荧光？4、免疫荧光为什么要做DAPI染⾊？我听完之后笑了，这种思考的态度是好的，但其实，师妹问的这⼏个问题就是⼀个问题。
归根结底，涉及到“免疫”⼆字总是离不开抗原抗体反应的，⼆者都属于免疫检测技术⼿段，⽽免疫组化和免疫荧光两项技术都可以应⽤在组织和细胞⽅⾯，前者采⽤的是化学发光的⽅法，后者是荧光。
因为我们在⽂献中看到的，很多⼈都会选择做组织的免疫组化、细胞的免疫荧光，所以这就给初⼊实验室的新⼿们带来了误区。
其实⽹上已经有很多详细的操作步骤，所以⼩六⼉今天想为各位新⼿朋友们总结⼀下我认为的免疫组化和免疫荧光制⽚看⽚的⼩技巧，帮助⼤家排雷区，同时也提出⾃⼰的⼀些疑问，希望能得到解答（因为本⼈只做过组织的免疫组化和细胞的免疫荧光，以下内容以这两⽅⾯为主，内容若有⽋缺，欢迎⼤家补充）。
免疫组化1、取材时要尽量去除⾎液的⼲扰：⼩⿏⿇醉后，从左⼼⽿插⼊针头，⼼尖处剪开⼀个⼩⼝，然后将PBS缓慢打⼊⼼脏中，缓慢跳动的⼼脏会将PBS运送⾄全⾝。
50ml的PBS⽤量对于Balb/c或昆明⼩⿏的体积⽽⾔就已⾜够，这⼀步骤对于像肺、肝和脾脏这样⾎管丰富的脏器取材极为重要。
2、取材时要尽量做到表⾯积⼤、厚度⼩：理想的取材厚度是2mm，这样的尺⼨可以让后续的固定、脱⽔等操作达到理想的效果。
器材选择上，⼿术⼑和超市购买的⼑⽚都可以，只要⼑⽚锋利即可，切勿反复切割揉搓组织。
因为脏器的表⾯都是弧形，并且质地很软，如果你直接取材，第⼀是不好切，第⼆是弧形的⼀⾯肯定是厚度超标，所以这⾥建议各位将组织置于碎冰上后，沿着长轴在横切⾯处再切⼀⼑取材（针对实质性器官，且不要求取材部位）。
3、取材后的组织需⽴即固定：固定不仅是要保留组织原有的形态，也是在保留组织中的抗原。
免疫组化、elisa 、western blot 、PT-PCR
免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB 可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。
免疫组织化学、免疫荧光染色
免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光染色（Immunofluorescence，简称IF）是两种常用的免疫细胞化学技术，用于在组织切片或细胞涂片上检测特定蛋白质或抗原的存在和分布。
这两种技术都依赖于抗体与抗原之间的特异性结合反应。
免疫组织化学是一种使用酶标记抗体来检测抗原的方法。
在这个过程中，首先将组织切片与特定的初级抗体（针对目标抗原的抗体）孵育，然后洗涤以去除未结合的抗体。
接下来，将切片与带有酶标记的次级抗体（针对初级抗体的抗体）孵育。
再次洗涤后，加入酶的底物，它会在酶的作用下产生颜色沉淀，使得抗原的位置在显微镜下可见。
常用的酶包括过氧化物酶和碱性磷酸酶。
这种方法的优点是可以产生永久性的记录，因为颜色沉淀是稳定的。
免疫荧光染色则涉及使用荧光染料标记的抗体来检测抗原。
在这个过程中，初级抗体和次级抗体都带有荧光标记。
当这些抗体与抗原结合时，它们发出的荧光可以在荧光显微镜下观察到。
这种方法的优点是可以同时使用多种颜色的荧光染料来检测多个不同的抗原，而且荧光信号通常比免疫组织化学的颜色反应更强。
两种技术都有其应用范围。
免疫组织化学常用于病理学诊断，因为它可以用于存档的组织样本，并且结果可以用常规显微镜观察。
而免疫荧光染色则更适合于研究目的，特别是在活细胞成像和多标记实验中，因为它可以提供更丰富的信息和更高的灵敏度。
总之，免疫组织化学和免疫荧光染色都是强大的工具，它们使得科学家能够在细胞和组织水平上可视化蛋白质的表达和定位。
选择哪种技术取决于实验的具体需求和可用的设备。
ELISA、western blot、免疫组化、RT-PCR实验方法原理及其在SCI论文材料方法、结果中的写作
• 多抗是单抗的混合物，群体 综合的性质。
• 更容易捕捉抗原。 • 特异性相对较差：交叉反应 • 抗体的纯化、标记难。
抗原和抗体
多克隆抗体制备
动物选择：
• 兔子（rabbit）：最常用于自制抗体，抗体量较多。（新西兰,大耳白） • 小鼠（mouse）：可用于自制抗体，但抗体量很少。（BALB/C,昆明鼠） • 大鼠（rat）：可用于自制抗体，免疫过程要麻醉动物。（Wistar大鼠） • 羊（sheep、goat）：常用于较大批量地生产抗体（商品）。 • 马（horse）：常用于大批量生产治疗用抗体（商品）。 • 豚鼠（guinea pig）：国外实验室常用。
• 检查抗体方面：用ELISA间接法检查抗体，已获得对多种传染病和寄生虫 病的血清学诊断，亦开始广泛用于现场流行病学调查。在寄生虫病方面， 它用于对疟原虫、阿米巴、利日曼原虫、锥虫、血吸虫、囊虫、弓浆虫、 肺吸虫、肝吸虫、血丝虫、旋毛虫病等血清学诊断；在免疫性疾病方面有 试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断，例如检测各种过敏原的抗体、 DNA抗体及甲状腺球蛋白抗体，红斑性痕疮抗体等等；在卫生学方面， 可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。
ELISA
方法种类
间接法——检测Ab
用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标二抗，加底物显色。 优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分 析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。 缺点：交互反应发生的机率较高。
ELISA
方法种类
双抗体夹心法——检测Ag
将已知抗体连接在固相载体上，待测抗原与抗体结合后再与酶 标二抗结合，形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物，复合物 的形成量与待测抗原成正比。适用于某些大分子的具有至少双 表位的抗原，而不能用于小分子半抗原的检测。 优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。 缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。
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免疫组化与免疫荧光
一、两者都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）。
二、区别是：
1、概念和基本原理
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过
抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，
在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫
组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组织（细胞）化学技术、亲
和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。
免疫荧光组织（细胞）化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检
测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧
光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨
出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对
抗原物质定位、定性、定量测定的目的。
2、标本制作：
免疫荧光一般用冰冻切片，减少杂质干扰；而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均
可以。
3、实验步骤：免疫荧光染色步骤简单，而酶免疫组化方法较为复杂，多了DAB显色过程。
4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退；而酶
免疫组化染色标本可以长期保存。
5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还可以用软件做相对定量
精品
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分析。
6、免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些，可以发高档次文章。
免疫学三大工具：免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定
性和定量。
免疫组化：
是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织
的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗
体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）
内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，
要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
Elisa（酶联免疫吸附试验）：
用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、
尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，
这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固
相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体
上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因为所检测的样品
不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度
非常高。
western bolt：
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先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到
固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定
性和半定量。