(完整word版)免疫组化和免疫荧光的区别
免疫组化与免疫荧光的区别2页
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免疫组化和免疫荧光的区别是免疫荧光属于免疫组化，是免疫组化中的一种技术方法。
免疫组化检查指应用免疫学抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，确定组织或细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对的定量检查。
按标记物质的种类分类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
按染色步骤分类，可分为直接法和间接法，间接法的灵敏度提高了许多。
综上，免疫荧光法是免疫组化检查的一种技术方法。
免疫组化与免疫荧光都是经过免疫原，两者原理相似，仅是显色剂不同。
免疫组化使用酶进行显色，而免疫荧光一般不使用酶进行显色。
另外，免疫组化通常在明视野进行观看，而免疫荧光则是在暗视野观看。
患者进行治疗首先需明确诊断疾病，若无精准诊断则无精准治疗。
免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。
免疫组化是应用免疫学的基本原理，也就是抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，来确定组织
细胞内的抗原，对其进行定位、定性和相对定量的研究。
进行免疫组化的时候，经常使用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或者是同位素。
免疫荧光就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素，标记在抗体或者抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫组化,免疫荧光
免疫组化,免疫荧光
摘要：
I.免疫组化
A.定义
B.应用
C.优点
D.缺点
II.免疫荧光
A.定义
B.应用
C.优点
D.缺点
III.两者比较
A.共同点
B.不同点
C.选择方法的因素
正文：
免疫组化是一种免疫学技术，通过使用特定抗体来检测组织切片中特定抗原的存在。
这种技术通常用于诊断和治疗疾病，研究基因表达和细胞信号通路。
免疫组化可以提供有关分子在细胞和组织中的定位信息，以及它们在疾病中的作用。
免疫荧光是一种类似的免疫学技术，它使用荧光标记的抗体来检测特定抗原的存在。
与免疫组化不同，免疫荧光可以在活细胞和组织中进行。
这使得免疫荧光成为研究细胞功能和分子动态的理想方法。
免疫组化和免疫荧光之间的主要区别在于它们的应用和检测方法。
免疫组化通常用于检测组织切片中特定抗原的存在，而免疫荧光可以在活细胞和组织中进行。
此外，免疫组化使用化学方法来检测抗原，而免疫荧光使用荧光标记的抗体来检测抗原。
选择免疫组化或免疫荧光方法的因素包括研究目的、样本类型和实验设计。
例如，如果研究目的是检测特定抗原在组织中的定位，则免疫组化可能是更好的选择。
如果研究目的是研究活细胞中的分子动态，则免疫荧光可能是更好的选择。
总之，免疫组化和免疫荧光是两种常用的免疫学技术，它们都可以用于检测特定抗原的存在。
免疫组化和荧光
①防止标本从玻片上脱落；
②除去妨碍抗原-抗体结合的类脂，使抗
注意事项 原抗体结合物脱易水于用获梯得度良乙好醇的（染由色低结到果高；）充分脱
标 脱 脱 抗 细 灭 血 一 抗 切本水蜡原胞活清抗体片固、和修通内封和稀清定石水复透源闭二释洗防蜡化性抗液染溶目目止包过浓组。液造一中的标荧一生织织苏的成来有埋氧度是蛋光般气上浅D切木新背异后源交形白素和化和用泡滴A为染数3注②③④均片素旧景性续的叉成进提Bm中，一由过作得制物孵了色）意温冲P可使脂核上复、的染显用结，反为织不的原1抗抗钠i细行前n抗B性方滴于程用细0防 ， 尤 ： 柔 洗以抗质内有染目深色色一*T果血应了中全多抗体体防片酶育S0胞定衰3抗体树 法 封组中，胞r可③般时的止所为①冲的由体而，剩时标次浅较i时致的清的后抗易而次体稀稀腐t轮位退体稀o和时胶是片织，从内以固用即一以重单洗时PD能使故余间抗，和强间。n假中位面原出产回反释释剂廓，。就释H等直液中发而抗A溶定4可生间X抗适要独，间够抗在的要原而特而不一阳动点的等现生收应液液、和，经B%能液-封接，部生失原解的冲1、当，冲防要充体细位看的一孵异本是般性物发抗结局非利不用中B物多离从常0顺的片在然分了去决细标洗S二地一洗止足分及胞点当定0抗育性底固室；自生体合灶特用佳一除聚子而用利PA素、，载后抗蛋抗定胞本.抗加般，切够要一温地大免可时位孵一条染着定温封身结等反性异较，H而般P稳其甲强更苏水要进蛋避玻一原白原族测膜易B值等强在防片，，抗度进分疫以的等育抗件色色的1闭的合试应反性好终4定P中醛度好木、干入S白0免片手在之性重率4℃、于B可试清一止的才包孵、入子组与室情后孵决的较，血抗；剂。应背。而-剂外54的地素对净胞3S酶产组拿甲间；新。过m℃细保能剂洗抗交脱能括育抗胞结化一温况的育定深浅特0清体但能若和景正出等即，使对复组和内kim醛交通暴夜效胞n存偏残（孵叉落彻孵温体内构时抗、，清条。等一，不够脱浸着因现组可还用织锋氢较3i灭与一或联过露n和1果核。酸留延育反。底育度浓7进的尤非洗件通般预能充蜡洗色为假份，加。化和要利0则好活相℃般多及抗，从育最膜固m，而长前应可洗时有度行物为特均在透是先与分和不。这阴，但了氢要完。可。内应31聚醛原提i冰时佳片、定而引时的造用去n间：有结质推异为免0液0和能一与水全种性对专叠灭求全否以二源左抗m甲基修高~箱间；等细剂使起间清成浸结、关4合进荐性5疫。二和抗组化 ，原结抗用氮3活。浸则适抗i性右原℃次醛的复抗n拿过孵0。胞的抗非和洗污洗合温，反入使结组如抗组来因果-体的化时蜡，当m一P，结、1*固封，原出长育器选特增是染方的度一5应胞用合化ThO同织源，。i间、容延般n而合室mr。定闭使检后易时膜择D异多。式物和般；i。浆，，反t短切易长i室o0。温n一3引间上一性次；质抗3过一和这应n.。点73片裂封温、7般起：的℃%X。体氧般胞样中℃，时片闭或3-3过脱这复浓化最71%可刀和时℃-氧片与温2度氢重过以片脱间h，化。孵，氧，
排雷攻略：一文教会你免疫组化、免疫荧光如何制片看片
排雷攻略：⼀⽂教会你免疫组化、免疫荧光如何制⽚看⽚最近带着新进门的研⼀师妹做实验，师妹问了三个问题：1、免疫组化和免疫荧光的区别？2、这两种实验该在什么情况下选择？3、组织是不是只能做免疫组化，细胞是不是只能做免疫荧光？4、免疫荧光为什么要做DAPI染⾊？我听完之后笑了，这种思考的态度是好的，但其实，师妹问的这⼏个问题就是⼀个问题。
归根结底，涉及到“免疫”⼆字总是离不开抗原抗体反应的，⼆者都属于免疫检测技术⼿段，⽽免疫组化和免疫荧光两项技术都可以应⽤在组织和细胞⽅⾯，前者采⽤的是化学发光的⽅法，后者是荧光。
因为我们在⽂献中看到的，很多⼈都会选择做组织的免疫组化、细胞的免疫荧光，所以这就给初⼊实验室的新⼿们带来了误区。
其实⽹上已经有很多详细的操作步骤，所以⼩六⼉今天想为各位新⼿朋友们总结⼀下我认为的免疫组化和免疫荧光制⽚看⽚的⼩技巧，帮助⼤家排雷区，同时也提出⾃⼰的⼀些疑问，希望能得到解答（因为本⼈只做过组织的免疫组化和细胞的免疫荧光，以下内容以这两⽅⾯为主，内容若有⽋缺，欢迎⼤家补充）。
免疫组化1、取材时要尽量去除⾎液的⼲扰：⼩⿏⿇醉后，从左⼼⽿插⼊针头，⼼尖处剪开⼀个⼩⼝，然后将PBS缓慢打⼊⼼脏中，缓慢跳动的⼼脏会将PBS运送⾄全⾝。
50ml的PBS⽤量对于Balb/c或昆明⼩⿏的体积⽽⾔就已⾜够，这⼀步骤对于像肺、肝和脾脏这样⾎管丰富的脏器取材极为重要。
2、取材时要尽量做到表⾯积⼤、厚度⼩：理想的取材厚度是2mm，这样的尺⼨可以让后续的固定、脱⽔等操作达到理想的效果。
器材选择上，⼿术⼑和超市购买的⼑⽚都可以，只要⼑⽚锋利即可，切勿反复切割揉搓组织。
因为脏器的表⾯都是弧形，并且质地很软，如果你直接取材，第⼀是不好切，第⼆是弧形的⼀⾯肯定是厚度超标，所以这⾥建议各位将组织置于碎冰上后，沿着长轴在横切⾯处再切⼀⼑取材（针对实质性器官，且不要求取材部位）。
3、取材后的组织需⽴即固定：固定不仅是要保留组织原有的形态，也是在保留组织中的抗原。
免疫组化和免疫荧光的区别
请问你曾经被ＩＨＣ、ＩCＣ和IF所困扰过吗?作者：北京义翘神州在实验中,有没有一种感觉,就是对免疫组化(ＩHＣ),免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清,那么今天我们就来讨论一下这三者的区别,先贴图上来以便有个大致的区分。
从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同,可以分为组织和细胞检测技术。
因此，才会延伸出三个相近的概念。
为了更好的区分这三个概念,我们还可以根据他们的英文词根来分析一下,他们的英文名分别是免疫组织化学Ｉｍｍuｎｏhistoｃｈｅmistry (ＩHＣ)，免疫细胞化学Imｍunocyｔocheｍisｔry (ＩＣC），免疫荧光 Imｍｕnofluｏresｃｅnｃｅ (ＩＦ)。
词根分析:Immuno－指的是免疫技术(例如，抗体和抗原的结合）Histｏ-指的是组织(细胞以及它周围的细胞外基质)Cyｔo-指的是细胞(不包含细胞外的基质)Chｅmistry-在这里指的是化学检测方法（例如,颜色的变化)Fluｏrｅscence-对被激发的荧光团的检测通过对词根的解释，相信你在心中不再迷茫了吧。
这三个应用技术都属于免疫技术,都是将抗原与抗体的结合可视化,即通过一定的方法可以直接看到实验结果。
而常用的方法就是化学显色和荧光显色。
如果报告标签是酶促的,就是免疫化学,如果是荧光的，就是免疫荧光。
其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Iｍmunｏｆluoresｃｅｎce （IF),但若是写成免疫组织荧光(IHＦ)或是免疫细胞荧光(IＣF），那我们是不是就豁然开朗了。
虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛,但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。
可能文字描述还是有些晦涩难懂,那我们就直接上图吧。
先不看下面答案,仅从几张图片,你能明白哪张图代表哪种应用吗?A免疫组织化学：兔EGFR单克隆抗体（1００01-R043-50)—人胎盘B 免疫细胞化学:兔α微管蛋白单克隆抗体抗—MEF1细胞Ｃ免疫荧光组织：兔Cdk５单克隆抗体—鸡脑组织D免疫荧光细胞:兔ＪNK2/ＭAPK9（10745-R0０4-5０）单克隆抗体—人Hela细胞A图和B图是免疫化学（Ｉmmuｎｏcｈｅmｉstry），这种应用是抗体检测目标蛋白,发生了化学反应,然后显色，根据样本类型的不同,又可以分为免疫组织化学（A）和免疫细胞化学(B）。
免疫组化,免疫荧光
免疫组化,免疫荧光
免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光（Immunofluorescence，简称IF）是常用于研究细胞和组织中蛋白质分布和定位的实验技术。
免疫组化：免疫组化是通过使用特异性抗体来检测和定位组织切片中特定蛋白质的技术。
它包括将组织切片与特异性抗体结合，然后使用染色试剂使抗原-抗体复合物形成染色反应，从而可视化目标蛋白质的位置。
该技术常用于研究细胞分化、组织病理学和肿瘤学等领域。
免疫荧光：免疫荧光是利用荧光染料（荧光标记的二抗或直接标记的一抗）结合目标抗原的方法来检测和定位组织或细胞中的蛋白质。
通过特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后使用荧光标记的二抗或直接标记的一抗与抗原-抗体复合物结合，使目标蛋白质在显微镜下产生荧光信号，以观察其位置。
免疫荧光技术广泛应用于细胞生物学研究、免疫学和医学诊断领域。
这两种技术在原理上非常类似，但在应用上有一些区别。
免疫组化主要用于固定的组织切片，可用于定量和定位分析。
而免疫荧光通常用于固定的细胞，可以提供更高分辨率的蛋白质定位信息，并可以进行多色荧光共标记以研究多个蛋白质的相互作用和定位。
无论是免疫组化还是免疫荧光，都依赖于合适的抗体选择和样本处理步骤来确保结果的准确性。
技术的选择应根据研究
的目的和样本的性质进行评估和决策。
if免疫荧光和免疫组化
if免疫荧光和免疫组化免疫荧光和免疫组化是两种常见的生物学实验技术，它们在疾病诊断、生物学基础研究和临床医学中具有重要的应用。
if免疫荧光和免疫组化都是基于免疫反应的原理，可以用来检测和定位蛋白质、抗体、细胞等各种生物学分子或细胞。
if免疫荧光技术是指在细胞或组织标本中，利用特异性抗体与目标蛋白发生特异性结合，再使用与抗体结合的荧光标记物进行检测。
if免疫荧光技术可用于检测和定位目标蛋白在细胞或组织中的表达情况及其分布规律。
if免疫荧光技术的操作步骤一般包括标本处理、抗体染色、荧光物检测、显微镜观察及结果判断等，具体实验步骤如下：1. 标本处理：将待检测的组织标本制作成薄片，并通过石蜡切片等技术固定，去除脂肪和其他细胞成分，避免对结果的影响。
2. 抗体染色：选择与目标蛋白特异性结合的荧光抗体，并将其加入到标本液中，与目标蛋白结合。
3. 荧光物检测：通过荧光显微镜等特殊仪器，观察荧光抗体与目标蛋白的结合情况，荧光染色只在目标蛋白位置上发光。
4. 显微镜观察：经荧光显微镜观察，在目标蛋白位置显示出强烈的荧光信号，并根据信号的强度、分布等评价目标蛋白的表达情况。
5. 结果判断：根据观察到的荧光信号的强度和位置，判定目标蛋白是否存在以及在细胞或组织中的表达量和分布情况等。
免疫组化技术则是一种用于检测检测蛋白质在细胞、组织和器官中的分布及表达强度的方法。
其操作步骤与if免疫荧光技术基本相同，仅在荧光物检测环节不同，免疫组化技术使用的是酶标测技术。
下面给出免疫组化的具体步骤：1. 标本处理和抗原检测：同if免疫荧光技术，将标本固定在载玻片上，并加入特异性抗体并进行染色处理。
2. 二抗结合：加入与特异性抗体结合的二次抗体，二抗在结合特异性抗体时，又结合了一个辣根过氧化物酶标记物。
3. 底物显色：将含有底物的试剂涂在标本上，试剂中的底物会被辣根过氧化物酶催化，产生可见的显色反应，显示出蛋白质的位置。
4. 显微镜观察：同if免疫荧光技术，通过显微镜观察，评价标本中蛋白质的表达量和分布情况。
免疫组化法和免疫荧光染色法的区别
免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。
虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。
在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。
1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。
它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。
在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。
随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。
接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。
2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。
它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。
不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。
在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。
而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。
在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。
通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。
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请问你曾经被IHC、ICC和IF所困扰过吗?
作者：北京义翘神州
在实验中，有没有一种感觉，就是对免疫组化(IHC)，免疫细胞（ICC),以及免疫荧光(IF）傻傻分不清，那么今天我们就来讨论一下这三者的区别，先贴图上来以便有个大致的区分。
从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同,分为免疫化学和免疫荧光两类,而根据样品类型不同，可以分为组织和细胞检测技术。
因此，才会延伸出三个相近的概念。
为了更好的区分这三个概念，我们还可以根据他们的英文词根来分析一下，他们的英文名分别是免疫组织化学Immunohistochemistry (IHC），免疫细胞化学Immunocytochemistry （ICC)，免疫荧光Immunofluorescence (IF)。
词根分析：
Immuno-指的是免疫技术（例如，抗体和抗原的结合）
Histo-指的是组织(细胞以及它周围的细胞外基质)
Cyto—指的是细胞（不包含细胞外的基质）
Chemistry-在这里指的是化学检测方法(例如，颜色的变化)
Fluorescence-对被激发的荧光团的检测
通过对词根的解释,相信你在心中不再迷茫了吧。
这三个应用技术都属于免疫技术，都是将抗原与抗体的结合可视化，即通过一定的方法可以直接看到实验结果。
而常用的方法就是化学显色和荧光显色.如果报告标签是酶促的，就是免疫化学，如果是荧光的，就是免疫荧光。
其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Immunofluorescence (IF）,但若是写成免疫组织荧光(IHF)或是免疫细胞荧光(ICF），那我们是不是就豁然开朗了。
虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛，但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。
可能文字描述还是有些晦涩难懂,那我们就直接上图吧。
先不看下面答案，仅从几张图片，你能明白哪张图代表哪种应用吗?
A免疫组织化学：兔EGFR单克隆抗体（10001-R043-50）—人胎盘
B 免疫细胞化学:兔α微管蛋白单克隆抗体抗—MEF1细胞
C免疫荧光组织:兔Cdk5单克隆抗体—鸡脑组织
D免疫荧光细胞:兔JNK2/MAPK9(10745—R004-50）单克隆抗体—人Hela细胞
A图和B图是免疫化学（Immunochemistry），这种应用是抗体检测目标蛋白，发生了化学反应，然后显色,根据样本类型的不同，又可以分为免疫组织化学（A）和免疫细胞化学(B)。
C图和D图是免疫荧光（Immunofluorescence),这种应用根据抗体检测目标蛋白然后通过偶联荧光基团来显色。
根据样本类型的不同可以分为免疫荧光组织(C)和免疫荧光细胞（D）。