细胞培养技术原理及应用

合集下载

细胞培养技术的原理及其在组织工程中的应用

细胞培养技术的原理及其在组织工程中的应用

细胞培养技术的原理及其在组织工程中的应用细胞培养技术是现代生物学和医学的一项重要技术,它可以用来研究细胞的生理、代谢和发育等特性,也可以用来制造医疗、工业和科研用途的细胞或组织。

本文将介绍细胞培养技术的原理和在组织工程中的应用。

一、细胞培养技术的原理细胞培养技术是指在体外环境中维持和繁殖细胞群体的一种方法。

细胞培养需要提供培养基、细胞和适宜的环境条件。

培养基是一种含有各种营养物质和生长因子的液体或固体介质,它提供了细胞生长所需的能量、碳源、氮源等。

细胞则是从组织或器官中分离出来的一群细胞,这些细胞原本只能在体内生长和分裂,但在培养基的帮助下,它们可以在体外繁殖。

环境条件包括温度、湿度、氧气浓度、pH值等,这些条件对于细胞的生长和分化都有重要影响。

细胞的培养方式分为原代培养和继代培养两种。

原代培养是指从组织或器官中提取细胞,经过处理和分离得到一群新的细胞,然后将其放入培养基中进行生长,这些细胞被称为原代细胞。

继代培养是指将原代细胞分离得到的细胞再次分离,得到一群新的细胞,然后将其继续放入培养基中进行生长。

这样的过程可以多次进行,每次分离得到的细胞就是继代细胞。

细胞培养技术的发展经历了多个阶段,从最初的原代培养到现在的三维培养、生物打印等高级技术。

这些新技术都是在细胞培养技术的基础上发展而来的,它们拓宽了细胞培养技术的应用范围,为组织工程和再生医学等领域提供了更多的可能性。

二、细胞培养技术在组织工程中的应用组织工程是指利用生物材料、细胞和生物因子等成分来构建新的组织或器官的一种技术。

细胞是组织工程中的关键要素,因为只有细胞才能够生产组织,构建组织的质量和功效也与细胞的品质有着密切的关系。

利用细胞培养技术可以得到高品质的细胞,从而用于组织工程研究中。

组织工程中最常用的细胞类型包括成纤维细胞、干细胞和造血干细胞等。

成纤维细胞是体内常见的一种细胞,它们在组织修复中扮演着重要的角色。

干细胞是一类特殊的细胞,它们具有自我增殖和分化的能力,可以分化成任何类型的细胞,包括神经细胞、骨胶原细胞、肝脏细胞等。

细胞培养技术的研究及应用

细胞培养技术的研究及应用

细胞培养技术的研究及应用细胞培养技术是一项重要的生物学研究和应用技术,通过对细胞培养技术的研究和应用,可以解决很多人类健康和环境问题。

本文将介绍细胞培养技术的基本原理和技术路线,以及其在生物学研究和应用中的实际应用。

一、细胞培养技术的基本原理和技术路线细胞培养技术是通过对细胞体外培养,使其在适当的环境中持续生长和繁殖。

细胞培养技术有两种类型,分别为原代细胞培养和细胞系培养。

其中原代细胞培养指的是直接从动植物组织中分离出来的细胞培养,具有更加原始和稳定的基因型;而细胞系培养则是一种细胞自身在无数代细胞的演变过程中形成的具有特定表型和基因型的细胞种系。

细胞培养技术的基本技术路线包括以下三个步骤:(1)组织分离和细胞分离:青蛙卵母细胞、小鼠卵子、小鼠骨髓细胞、小鼠脾细胞等都可以用细胞培养技术处理。

通常采用胰酶、胆汁酸等消化酶对组织进行消化,从中提取出未分化的细胞。

(2)细胞培养条件调节:对于细胞培养技术,不同的细胞类型对培养基成分和培养条件是有所不同的。

例如配制适当的培养基、控制温度、保湿等重要条件是确定其生长特性的重要神经成分。

(3)细胞生长和繁殖:细胞在培养基中的生长特点和体内略有不同,其主要关注点是增殖、转染、药物筛选、毒性测试、体外血管重建、组织重建、再生医学等。

二、细胞培养技术的实际应用细胞培养技术在生物技术和医学领域中有广泛的应用。

以下将具体介绍细胞培养技术在这方面的应用。

(1)药物筛选:细胞培养技术可以在前期从上万的化合物中筛选出可以治疗癌症、心脏病等疾病的重要药物。

(2)肝脏毒素性病理反应预测:基于体外肝细胞培养技术,主要是通过细胞毒性试验、细胞输出项目等方法对毒性评估进行定性和定量分析极其的迅速和准确。

(3)组织工程:现已凭借细胞培养技术创造出了弯曲的软骨和人工血管等组织,日益成为支持组织工程的新技术手段。

(4)真核细胞的转染:细胞培养技术可以将外源DNA导入到真核细胞中,可以有偏向的决定细胞的DNA合成和功能实现。

3d细胞培养技术的原理和应用

3d细胞培养技术的原理和应用

3D细胞培养技术的原理和应用1. 概论3D细胞培养技术是一种模拟体内细胞生长环境的方法,通过在三维空间中培养细胞,使其形成更接近真实生理环境的结构和功能。

相比传统的二维细胞培养,3D细胞培养技术能够更好地模拟细胞在体内的生长和相互作用过程,因此具有广泛的应用前景。

2. 原理3D细胞培养技术利用生物材料或微纳米技术搭建细胞的三维结构,使细胞能够在立体环境中生长和相互作用。

主要原理包括以下几点:2.1 材料选择选择适合培养细胞的生物材料,例如生物胶、纤维蛋白、聚合物等,以提供细胞生长所需的支撑结构、生理环境和信号传导。

2.2 细胞悬浮培养将细胞悬浮在生物材料中,形成细胞-基质复合体,使细胞能够在三维空间中自由生长和传播。

2.3 细胞-细胞相互作用细胞在三维结构中更容易进行细胞-细胞相互作用,形成更加真实的组织结构和功能表现。

2.4 支持细胞生长的微环境通过调控生物材料的物理、化学性质,以及培养条件(如氧气、营养物质、温度等),提供适合细胞生长和分化的微环境。

3. 应用3D细胞培养技术广泛应用于以下领域:3.1 肿瘤研究通过建立三维肿瘤模型,可以更好地模拟肿瘤的生长和转移过程,研究肿瘤细胞的生长规律、药物敏感性等。

3.2 组织工程利用3D细胞培养技术可以构建各种组织和器官的模型,诸如心脏、肝脏、肾脏,用于疾病治疗和药物筛选。

3.3 药物开发3D细胞培养技术可以更好地模拟药物在体内的作用过程,提高药物筛选的准确性和效率,并减少对动物的使用。

3.4 功能性食品研发通过3D细胞培养技术,可以研究和开发具有特定功能的食品,如抗氧化、抗炎、调节免疫等功能性食品。

3.5 医学诊断利用3D细胞培养技术可以建立更准确的疾病模型,用于疾病的早期诊断和治疗监测。

4. 优势和挑战3D细胞培养技术相比传统的二维细胞培养具有以下优势: - 更接近体内的生理环境,模拟细胞在体内的行为更准确; - 更真实的细胞-细胞相互作用,能够更好地研究细胞间的相互影响; - 更好的预测药物的疗效和毒副作用。

生物制药技术中的细胞培养技术原理与应用

生物制药技术中的细胞培养技术原理与应用

生物制药技术中的细胞培养技术原理与应用细胞培养是生物制药技术中不可或缺的一项核心技术。

通过细胞培养技术,可以大量生产各类生物药物,例如重组蛋白、抗体、疫苗等。

本文将介绍细胞培养技术的原理及其在生物制药领域的应用。

细胞培养技术原理的核心是利用生物细胞的自我复制和再生能力。

正常情况下,细胞会根据身体的需要进行分裂和再生,从而维持身体的正常功能。

而在细胞培养中,细胞会被转移到含有适宜营养物质的培养基中,提供了一个理想的生长环境,使得细胞可以不断地分裂和生长。

在细胞培养中,选择合适的细胞株是至关重要的。

一般来说,选择的细胞应该具有以下特点:能够快速生长和分裂、易于培养、能够稳定产生目标蛋白等。

常用的细胞株包括人类胚胎肾细胞293、小鼠骨髓细胞NS0和CHO细胞等。

细胞培养中的培养基也是非常重要的。

培养基需要提供细胞所需的营养物质,例如氨基酸、葡萄糖、维生素等。

同时,培养基还需要维持适宜的温度、湿度和pH值等环境条件。

常用的培养基有DMEM、RPMI-1640、F12等。

此外,为了加快细胞生长速度和增加产物产量,还可以通过添加血清、生长因子和抗生素等物质来优化培养基的组成。

在细胞培养中,维持细胞的健康状态是至关重要的。

细胞的健康状态与培养条件密切相关,包括营养供应、温度、湿度和气体条件等。

细胞的寿命一般较短,因此需要定期传代细胞,以确保培养的细胞的健康和生长。

在细胞培养技术的应用方面,生物制药是其中的重要领域之一。

利用细胞培养技术,可以大规模生产各种生物药物。

以重组蛋白的生产为例,通过将目标基因导入细胞中,使细胞可以表达该基因编码蛋白的能力。

通过对培养条件的优化,可以提高产量和纯度,并且可以通过细胞文化的方式生产多种重组蛋白。

抗体也是生物制药领域的热门研究方向之一。

通过细胞培养技术,可以大规模生产单克隆抗体。

单克隆抗体是针对特定目标抗原的抗体,具有较高的特异性和亲和力。

通过选择适合的细胞株和优化培养条件,可以获得高效的单克隆抗体产量。

细胞培养技术及其在医学研究中的应用

细胞培养技术及其在医学研究中的应用

细胞培养技术及其在医学研究中的应用细胞培养技术是指将来自人类或动植物体内的细胞在实验室中进行体外培养的方法。

这种技术的出现标志着生命科学的一个重要里程碑。

近年来,随着生命科学的不断发展和深入研究,细胞培养技术在医学研究、药物开发等方面的应用越来越广泛。

本文主要介绍细胞培养技术的原理、基本方法及其在医学研究中的应用。

一、细胞培养技术的原理和基本方法1. 原理细胞培养技术的基本原理是利用体细胞生存和增殖所需的基础条件,包括合适的培养基、精细的温度控制、气体控制、营养物质和细胞因子等,来维持和促进人体或动植物体内的细胞生长。

细胞培养容器内提供适当的环境和养分,使细胞得以在体外进行生长和分裂。

而培养基的成分对于不同种类的细胞有很大影响,因此配方应该根据不同细胞的营养成分要求制定,以符合细胞生长的需要。

2. 基本方法细胞培养技术的基本方法分为两种:原代细胞培养和细胞系培养。

原代细胞培养指的是将组织中的细胞分离、培养,多次传代后达到规模才被称为细胞系。

而细胞系培养则是在已有的细胞系上进行传代,使其规模扩大。

细胞培养需要准备培养基、培养器具和酶解剂等。

实验操作中,通常采用胰蛋白酶对细胞进行消化,去除外在的细胞外基质以保证细胞发挥生理功能的正常性。

此外,为保证细胞在新的环境中正常生长,应注意以下因素:(1)培养条件控制:控制好实验室中的温度、湿度、 CO2 浓度等条件,以使细胞生长处于合适的环境中。

(2)培养前细胞处理:培养前的细胞处理包括细胞的分离、接种和培养基处理等,以保证细胞生长的顺利进行。

(3)细胞鉴定:细胞是人体的基本单元,不同细胞种类的形态和特性不同,根据形态学、免疫学及分子生物学等方法进行细胞鉴定,以确保实验的实施和结果的可靠性。

二、在医学研究中的应用细胞培养技术在医学研究中应用广泛,主要包括以下方面:1. 用于疾病诊断细胞培养技术可应用于细胞学诊断和生物化学诊断。

细胞学诊断依靠细胞形态学变化进行分类和诊断。

动物细胞培养技术的进展及应用

动物细胞培养技术的进展及应用

动物细胞培养技术的进展及应用动物细胞培养技术是一种生物医学研究中极为重要的技术,主要用于生产药品、细胞学、分子生物学和免疫学等领域的研究。

自从细胞培养技术的出现,它的应用范围越来越广泛,也越来越深入,本文将为您介绍动物细胞培养技术的进展及应用。

一、动物细胞培养技术的研究进展1. 细胞培养的基本原理细胞培养的基本原理是利用体外条件来模拟体内环境,为细胞提供适宜的营养物和生理调节因子,使细胞在体外生长、分化、增殖。

2. 培养基的制备培养基的制备是动物细胞培养技术中的关键步骤,它能够为细胞提供必需的营养物和生长因子,如氨基酸、维生素、激素等。

目前,常用培养基包括麦克尼五十五培养基、迈格林五十三号培养基等。

3. 细胞培养的技术方法细胞培养的技术方法主要有悬浮培养和附着培养两种方式。

其中,悬浮培养常用于细胞生长阶段的初步生长,主要是用于细胞的扩增;附着培养主要用于细胞的育种。

4. 细胞分离技术细胞分离技术将组织或器官中的细胞分离出来并对其进行分级培养。

常用的细胞分离技术主要包括胰酶、碎草酸和牛血清等。

5. 细胞传代技术细胞传代技术是指将已经生长到一定程度的细胞离心,将细胞培养上清液丢弃并重悬细胞,再一次培养出与上一代相同的数量和质量的细胞。

其目的是为了维持细胞的正常生理状态和扩大培养规模。

二、动物细胞培养技术的应用方向1. 生产药品细胞培养技术的重要应用之一就是生产药品。

细胞培养可以生产多种药品,如激素、抗体、血液制品等,与传统药品相比,细胞培养药品具有高纯度、低污染的优点。

2. 动物学研究细胞培养技术在动物学研究中也起着重要的作用。

细胞培养可以用于体外模拟动物器官的建立,从而研究生物功能和对病原体的免疫反应等。

3. 生物技术领域的应用细胞培养技术在生物技术领域也广泛应用。

例如细胞间相互作用的研究、生物反应器的建立、基因工程的研究等。

4. 医学领域的应用细胞培养技术在医学领域也有广泛的应用,如癌症的研究、干细胞和组织工程的应用等,这些领域都离不开细胞培养技术。

细胞培养技术与应用

细胞培养技术与应用

细胞培养技术与应用细胞培养技术是生物科技领域的重要组成部分,其应用范围广泛,涉及医学、农业、食品工业、环境保护等多个领域。

本文将简单介绍细胞培养技术的基本原理、分类、常见技术及应用。

一、细胞培养技术的基本原理细胞是生物体内组成单位,是生物学研究的基本对象。

细胞培养技术是指将生物体内的细胞从组织或器官中分离出来,放入含有必需营养物质和适当环境的培养基中,进行生长、增殖和分化的一种技术。

培养基是一种液态或固态的生物学培养用基质,其中含有细胞生长所需的各种营养物质、维生素、微量元素和生长因子等,而无菌的操作条件、适当的pH值和氧气浓度以及温度和湿度的控制,也是细胞培养过程中必须关心的问题。

细胞培养技术的基本原理就是通过对培养基中培养的细胞进行试验和分析,研究细胞生长、增殖、分化和功能等方面的问题。

二、细胞培养技术的分类细胞培养技术的分类主要依据种类、来源、形态等特性,可分为以下几类:1.原代细胞培养(Primary cell culture)此类培养为第一次从组织或器官中分离的细胞,具有原代细胞特征,具有细胞衰老限制,常能增殖到35-60倍,适于生物学仿真实验的研究;2.细胞株培养(Cell line culture)细胞株是长期经连续传代而获得的细胞世代,可分为稳定细胞株和不稳定细胞株。

稳定细胞株经多次传代后,还能保持原始形态和功能,代表性细胞株有HeLa、CHO、Vero等,常用于药理学、生物学及生物工程等领域中进行研究;3.二次扩增或转染细胞培养(Secondary cell culture)此类培养为从原代细胞或细胞株中分离后通过扩增或转染处理的细胞。

常用于细胞毒性实验、用于表达蛋白质、病毒、植物和昆虫细胞的重组蛋白等;4.三维细胞培养(3D Cell culture)此类培养方式为采用特殊的培养基和培养方法,使细胞形成三维组织结构。

其应用领域涉及人体组织再生医学、肝内药代动力学等。

5.定量检测型细胞培养(qPCR and ELISA)此类培养突出利用优化的细胞培养条件,量化检测细胞中与特定指标相关的分子量、酶活性、基因表达等,是常用于诊断、监测疾病和药效评估的技术。

动物细胞培养技术与应用

动物细胞培养技术与应用

动物细胞培养技术与应用近年来,动物细胞培养技术越来越受到广泛关注和应用。

动物细胞培养技术能够提供一种高效、可重复、可控的生物制造平台,广泛应用于医药、生物科技、农业、食品和环境等领域。

本文将从基本原理、培养价值、应用领域等方面综述动物细胞培养技术的相关内容。

1.基本原理动物细胞培养技术是利用体外细胞培养技术使动物细胞在特定的培养基中繁殖和分化的过程。

在细胞培养中,必须提供足够的营养物质和适宜的环境条件,以维持细胞的正常生长、分裂和分化等生理功能,同时不断移除代谢废物,保持培养基内的成分和水平的动态平衡。

细胞培养的主要流程包括细胞的来源、细胞的分离、细胞的培养、细胞的检测和细胞的储存等环节。

2.培养价值细胞培养技术作为一种新型的生物制造系统,与传统的生物制造方法相比,有着明显的优势。

首先,细胞培养技术可以通过体外大规模培养已知功能和性状的细胞,实现单一和纯化产物的生产,避免了传统制备方法复杂、低效、昂贵等缺点。

其次,细胞培养技术还能使基因重组、修饰和表达更加方便和精准,避免了传统的生物试验与生产之间的差异。

最后,细胞培养技术还能提供量身定制的生物试验平台,用于研究动物细胞代谢、毒理学、病理学等方面的问题。

3.应用领域(1)制药业动物细胞培养技术已经成为现代制药业中生产重要药物的主要手段。

利用细胞培养技术可以制备大量高质量、高纯度的药物,避免了传统制备方法复杂、低效、成本高昂的情况。

细胞培养技术所得到的药物小分子毒性低、有效性高,已经成为现代药物开发的主要方向之一。

(2)生物医学研究细胞培养技术也是生物医学研究的重要手段之一。

利用细胞培养技术,可以研究细胞的生长、分化、代谢以及生理功能,有助于探索疾病形成的机制、评估新药的效果和安全性等问题。

(3)食品工业细胞培养技术可以使得肉类、奶制品和卵制品等食品的生产更加高效、环保、健康、可控,避免了动物残留药物、抗生素等问题。

同时,细胞培养技术还可以在最短时间内开发出一系列的新鲜和安全的食品产品,满足当前多样化、高品质的食品需求。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

细胞培养技术原理及应用研究进展姓名:赵鹏学号:158033038 专业:流行病与卫生统计学摘要:细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境,放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下,使其生长、繁殖,并维持其结构和功能的一种技术,已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。

文章对细胞培养技术的应用作一综述。

关键词:细胞培养;应用;研究进展细胞是构成机体的基本单位,是生命活动的基本单位。

一切有机体(除病毒)都是由细胞组成的。

细胞具有独立的、有序的自控代谢体系。

因此,对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、征服疾病的关键。

细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境,放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下,使其生长、繁殖,并维持其结构和功能的一种技术。

细胞培养技术的优点是可以直接观察活细胞的形态结构、生命活动及其变化;提供大量生物性状相似的试验对象,特别是研究大型动物(奶牛)时具有耗资少的优点。

但模拟体内环境仍与实际有很大的差异,因此利用细胞培养技术的试验结果不可以轻易做出与体内等同的结论。

动物组织(细胞)培养开始于20世纪初,现已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法[1 ]。

随着细胞培养技术的不断发展,现在也广泛应用于动物生产研究。

20 世纪 60 年代,该技术应用于水产动物的病毒分离和纯化,对于鱼类疾病的防治具有重要作用。

近年来研究发现单一种子细胞难以完成构建复杂组织的需要,因此产生了联合培养细胞技术。

联合培养下的细胞之间存在着精细的相互调控关系,因而更符合仿生学的原理且更有利于种子细胞的增殖与分化,为复杂的细胞诱导分化以及体外组织构建提供了新思路、新方法[2 ]。

1 细胞培养细胞培养是将活体组织或细胞从试验动物体内取出,放在模拟体内生存环境的体外环境(无菌、适温、营养丰富)中,使高体细胞生长、发育的一种方法。

按照培养的结构成分不同,将其分为组织培养、细胞培养及器官培养等。

根据细胞是否在支持物上生长,将其分为贴壁型和悬浮型。

一般来说,圆形细胞如淋巴细胞属于悬浮型,而胞体梭型(成纤维型细胞)、扁平不规则(上皮型细胞)等属于贴壁型,贴壁型细胞必需贴附在支持物表面生长。

细胞培养开始于 1906 年,Harrison 用蛙新鲜淋巴液培养蛙胚神经组织 4 周,首次成功地利用体外培养液培养神经元,标志着组织细胞的体外培养模式的基本建立。

随着细胞培养技术的不断发展和完善,20 世纪 50 年代进入繁盛阶段,细胞培养逐渐被基础研究与应用领域所应用,特别是在医学领域得到迅速的发展。

目前,细胞培养技术已经涉及到生物学、农业、环境保护等领域[ 3 ]。

目前,在细胞培养过程中,只能根据离体细胞的特点和培养条件,提供满足其生长和发育的一些基本生理条件。

必须在无菌条件下进行,细胞感染微生物后,会因被夺营养物质而导致细胞生长缓慢或停滞,甚至死亡。

需要提供适宜的温度和pH,一般哺乳动物细胞培养的温度控制在37 ℃,鱼类的温度要低一些。

温度过高或过低时,均不利于细胞生长甚至会导致细胞死亡。

动物细胞最适宜pH一般控制在 7.2~7.4,在此范围细胞生长活跃,增殖速度快,如果过低或过高性,细胞会因为细胞膜受损而死亡。

细胞离体培养技术的关键是细胞培养液的设计,理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物质、调节物质的全部需要。

细胞培养液中需含有细胞增殖、生长所需要的各种营养物质。

如提供能量的物质(N源、C源)、代谢调节控制的物质(无机盐、维生素、激素)。

另外,在细胞培养过程中需要提供一定量的气体(O2和CO2)。

CO2具有调节pH和缓冲的作用,一般提供 5% CO2。

2 细胞培养技术的应用研究2.1 在病毒学中的应用培养细胞为病毒的增殖提供了场所,细胞是分离病毒的基质,体外培养细胞无抗体及非特异颉颃物质的影响,而且对病毒的敏感性较体内细胞高,可采用离心感染法或提取病毒核酸进行感染,并以细胞打孔器协助感染扩大病毒感染的宿主范围,使病毒感染指标容易观察,光学显微镜下就可见到包涵体、细胞融合等现象,同时也便于用分子病毒学技术进行检测。

乙肝病毒(BV)的感染可引发急、慢性病毒性肝炎,还与肝硬化、肝细胞癌的发生和发展有密切关系。

肝源细胞模型对研究BV生物学特性、BV的致病机制、BV基因组的复制、表达和调控、体外抗病毒药物的筛选发挥了重要作用,大大促进了对 BV的研究[4]。

通过细胞培养技术,可了解猪轮状病毒的培养特性,建立其分离方法以及FQ-PCR检测方法,为研发诊断试剂盒和疫苗奠定基础。

使用细胞培养研究鱼类病毒可以减少隐性感染机率和个体差异引起的误差,使试验结果更加准确迅速,可建立细胞株(系)分离和鉴定鱼类病毒,进行生物学、病理学和流行病学研究,具有非常重要的意义[5-6]。

2.2 在肿瘤学中的应用肿瘤是机体在致癌因子的作用下,组织中的细胞失去对其生长的正常调控,导致其克隆性异常增生而形成的新生物。

目前对于各种癌症还没有有效的药物来治疗,肿瘤研究的首要任务是明确致癌机制。

细胞培养技术使研究人员能够清楚地认识正常细胞、癌前病变细胞、生命有限的肿瘤细胞以及完全转化或永生化的肿瘤细胞的生物学特征,这些逐级进化的细胞是体外研究多阶段致癌机制的基础。

体外血管模型主要研究血管的生理和病理以及药物的作用,根据培养方式不同可以分为二维和三维血管[7-8]。

徐燕等利用人卵巢癌(ODMCs)微血管内皮细胞的培养用抗CD31 的免疫磁珠与内皮细胞特异性结合的原理,分离获得了高纯度可传代并具有体外二维管腔样结构形成特性的 ODMCs,建立起简便快速的卵巢癌微血管内皮细胞体外培养体系,为后续研究卵巢癌抗血管生成提供了良好的试验材料[9]。

马晓雯等建立一种有效培养人肺腺癌A549 Sphere细胞的方法,并在A549 Sphere 细胞中初步证明了人肺腺癌中可能存在肿瘤干细胞,这些Sphere细胞可富集干细胞样细胞,抗化疗药物的能力也增强。

不仅为分离A549细胞中的肿瘤干细胞提供一种可能的有效途径,也为理解临床肺腺癌治疗的耐药性提供了新思路[10]。

2.3 在药理学中的应用细胞培养在药理学中的应用比较广泛。

通过培养细胞的生长曲线可计数细胞增长的绝对指数,从而可以直观地了解细胞生长与死亡的动态变化,一般用于检测各种药物对细胞生长的影响。

利用培养细胞的放射自显技术,研究细胞的物质代谢、动态变化和细胞周期等,对于药物作用机制的研究有重要作用。

细胞培养可用于抗动脉粥样硬化、血糖等药物的研究等应用。

目前,体外培养活的心肌细胞已经广泛应用于药理学方面的研究。

此方法通过对心肌细胞的培养,可以观察各种药物对其直接作用和对活细胞影响的动态过程,深入研究药物对心肌细胞的离子转运的影响,建立各种心肌细胞损伤模型,利于探讨药物的作用机制。

此外,还具有简便、准确、快捷、节约动物和药品等特点,可大幅提高研究效率。

阳海鹰等利用试验建立的新生小鼠心肌细胞体外培养方法,结果表明,单细胞收获率和心肌细胞纯度高,心肌细胞搏动时间长;并应用此细胞模型观察了镰刀菌毒素丁烯酸内酯(BUT)对心肌的毒性作用,证明具有结果稳定,重复性好等优点[11]。

这不仅为毒理学,还为药理学研究提供了一个较好的实验模型。

2.4 在动物生产中的应用细胞培养作为细胞生物学乃至生物学研究的重要技术,在生物领域中占有重要地位。

动物组织(细胞)培养开始于20世纪初,发展至今已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法,目前这项技术也广泛应用于动物生产的研究。

球虫是一类寄生于鸡等动物肠道上皮细胞引起的一种原虫,广泛分布于世界各地,是目前危害养鸡业的重要疾病之一。

而细胞培养为球虫研究提供洁净无污染的环境,为研究抗球虫药物的作用机制、活性以及球虫的发育、行为、结构、免疫、遗传、细胞化学和生物化学等方面提供更有效的研究工具[12]。

在鱼类方面,利用细胞克隆技术可以培育出新品种,还可以通过细胞培养技术对于鱼类病毒的分离、鉴定和增殖,病毒抑制和复制途径的阻断等方面具有重要作用。

Nicolajsen 等证明,虹彩病毒在BF-2、EPC、CHSE-214、RTG-2、FHM 等5种细胞系均有较好的繁殖,这为研究宿主和病原之间的机理提供了帮助[13]。

郑凯等研究通过获得较高纯度的牦牛子宫肉阜上皮细胞并进行培养,可为牦牛胎儿与母体之间的相互调控及物质运输提供简捷的研究平台[14]。

2.5 在其他方面的应用细胞培养技术可用于有毒物质的毒性机理的研究。

可利用体外培养动物细胞来研究氟化物的毒性机制[15]。

木脂素类、黄酮等活性物质是植物的次生代谢产物,其具有抗肿瘤、抗氧化等多种功能,现在可以利用细胞培养技术从植物细胞获取。

利用连翘叶子的悬浮细胞可进行培养提取木脂素;可利用银杏液体悬浮细胞培养生产黄酮、药材金铁锁细胞培养生产皂苷等[16-21]。

除此之外,细胞培养在生产疫苗方面也做出了贡献。

法国巴斯德研究所和美国西奈山医学中心就在哺乳动物细胞中成功表达了乙肝表面抗原。

我国也成功研制了由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系表达的基因工程乙肝疫苗。

3 小结细胞培养技术经过不断的研究和完善,已经成为实验室常用的研究方法,广泛应用于农业、医药学等领域。

目前,动物细胞培养可以降低试验成本、避免浪费等优点也逐渐应用于在动物生产中。

但细胞培养只是在模拟机体内的生理环境,使细胞维持生长、繁殖的技术,相对于机体这个系统来讲,存在很大的差异,会导致细胞或组织的形态或功能发生不同程度的改变,因此试验的结果不能等同于在体内研究的结果。

[参考文献][1]李勇.细胞培养在水产养殖中的应用[J].才}}", 2011 (18):92-93.[2]刘流.联合细胞培养在组织工程中的研究进展fJl.昆明医学院学报,2010 (3):1-3.[3]张卓然.培养细胞学与细胞培养技术[M].上海:上海科学技术出版社,2004.[4]段彪,中元英.乙肝病毒肝源细胞培养模型的研究进展[J].中国病原生物学杂志,2011. 6 (8) : 618-620[5]魏锁成,巩转娣,宋昌军.猪轮状病毒的细胞培养特性} FQ-PCR检测力一法的建立[J].中国兽医学报,2011. 31 (3) : 373-377.[6]李文峰,麦康森,黄捷,等.鱼类细胞培养及其在病毒学研究中的应用[J].动物医学进展,2010, 31 (5): 107-110.[7] Ladakis S M. Ncrem R M. Endothelial cell monolayer formation: effect of substrate and fluid shear stress[J]. Endothelium, 2004, 11(1):29-44.[8] Opdcnhuijs J, Musters M, Verrips T, et al. Mathematical modeling of vascular endothelial layer maintenance: the role of endothelial cell division, progenitor cell homing, and telomere shortening[J]. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology,2004,287(6):2651-2658.[9]徐燕,王丹,谢尧,等.人卵巢癌微}(u.管内皮细胞的培养及体外管腔样结构形成的观察[J].第三军医大学学报2010,32(3):201-205.[10]马晓雯,刘彤,孙力超,等.人肺腺癌A549细胞系干细胞样细胞的培养检测及其抗顺铂能力的研究[J].广西医科大学学报,2011, 28 (2):187-191.[11]阳海鹰,丁巍,丁爱石,等.新生小鼠心肌细胞培养模型的建立及其在毒性评价研究中的应用[J].军事医学科学院院刊,2010, 34 (1):30-33.[12]姜连连,黄兵,林矫矫.细胞培养技术在鸡球虫研究中的应用[J].动物医学进展2011.32 (2) : 82-85.[13]Arid E, Nicolajsen N, Christophersen M B, et al. Propagation and isolation of ranaviruses in cell culture[J]. Aquaculture, 2009,294(3-4):159-164. [14]郑凯,刘弄,张涛杰,等.妊娠期耗牛子宫肉阜上皮细胞的培养[J].中国兽医科学,2011,41(8): 855-858.[15]张德新,王福元,王瑞绵.氟化钠对体外培养大鼠心肌细胞培养液中NO浓度影响[J].中国热带医学,2010,10(1): 73-74.[16] Kim H J, Ono E, Morimoto K, et al. Metabolic engineering of lignan biosynthesis in forsythia cell culture[J]. Plant Cell Physiology, 2009, 50 (12):2200-2209.[17]胡燕梅,韩晓红,周全,等.银杏液体悬浮细胞培养产生黄酮的研究[J].江西农业大学学报,2011,6(2): 360-363, 374.[18] 刘同祥,耿韶华,张宗申,等.苗药金铁锁药材和植物细胞培养产生的总皂苷含量比较[J].时珍国医国药,2011,22(9):2235-2236.[19] St J M, Crane J, Young L M, et al. Epizootic haematopoietic necrosis virus(EHNV):growth in fish cell lines at different temperatures[J]. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists, 2005,25(5):228-231. [20] Cullen B R, Owens L, Cullen O. Experimental challenge and clinical cases of Bohle irodovirus(BIV) in native Australian anurans[J]. Diseases of Aquatic Organisms, 2002, 49: 83-92.[21] Marsh I B, Whittington R J, O’Rourke B, et al. Rapid differentiation of Australian, European and American ranaviruses based on variation in major capsid protein gene sequence[J]. Molecular and Cellular Probes, 2002,16:137-151.。

相关文档
最新文档