绿原酸对视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用的实验探究
绿原酸对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用
绿原酸对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用林茂;王敏;刘芳;罗小金;高仕琴;王春梅【摘要】目的探讨绿原酸(CGA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法采用Aβ25-35诱导PC12细胞构建细胞损伤模型,并用3个不同浓度的CGA分组干预.CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;比色法检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;Western blot检测细胞核转录因子κB(NF-κB)和白细胞介素1β(IL-1β)表达;ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度.结果与Control组比较,Model组细胞存活率下降、凋亡率升高,SOD和GSH-Px活力降低、MDA水平升高,NF-κB、IL-1β和TNF-α表达水平升高(P<0.05).与Model组比较,CGA各组细胞存活率升高、凋亡率下降,SOD和GSH-Px活力升高、MDA 水平降低,NF-κB、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平下降(P<0.05).结论 CGA对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有保护作用.其机制可能与CGA提高细胞抗氧化能力,抑制NF-κB介导的炎症通路有关.%Objective To observe the protective effect of chlorogenic acid (CGA) on the death of rat pheochromocytoma (PC12) cells induced by β-amyloid protein 25-35 (Aβ25-35),and explore its possible mechanisms.Me thods Aβ25-35 was used to induce PC12 cell death.Cells were interfered with three different concentrations ofK-8 kit was used to detect cell viability.Cell apoptosis rate was detected by flow cytometry.Photocolorimetric method was applied to detect the MDA content and GSH-Px and SOD activity.Western blot assay was used to detect the intracellular expression of nuclear factor kappa B (NF-κB) and interleukin-1β (IL-1β).The intracellular concentration of tumornecrosis factor-α (TNF-α) was measured by e nzyme immunoassay assay (ELISA).Results Compared with the control group,PC12 cells viability of the model group were significantly reduced.The apoptosis rate of the model group was increased.The levels of intracellular SOD and GSH-Px were decreased and the MDA level was increased.The expressions of NF-κB,IL-1β and TNF-α were pared with the model group,the PC12 cells viability of CGA groups were significantly increased.The apoptosis rate of CGA groups were reduced.The levels of intracellular SOD and GSH-Px were increased and the MDA level was decreased.The expressions of NF-κB,IL-1β and TNF-α were declined.Conclusion CGA has a protective effect on Aβ25-35-induced PC12 cells death.The mechanisms may be related to the improvement of the antioxidant ability and the inhibition of NF-κB signaling pathway activation.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2017(040)002【总页数】5页(P161-165)【关键词】绿原酸;β淀粉样蛋白;PC12细胞;阿尔茨海默病【作者】林茂;王敏;刘芳;罗小金;高仕琴;王春梅【作者单位】遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区珠海市重点实验室暨中药基础及应用研究实验室,广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R741阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年人常见的一种以渐进性认知功能减退为特征的中枢神经系统退行性疾病[1-3]。
绿原酸对H2O2致小鼠RGC-5细胞损伤的保护作用
绿原酸对H2O2致小鼠RGC-5细胞损伤的保护作用姜逸;胡娜;袁琳;林敏;钟霄毓;陆敏;陆雄【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2022(44)8【摘要】目的探究绿原酸是否通过调控自噬相关蛋白LC3、p62恢复H_(2)O_(2)致小鼠RGC⁃5细胞损伤所抑制的细胞自噬的保护作用。
方法体外培养小鼠视网膜神经节细胞系RGC⁃5,采用H_(2)O_(2)间接模拟高血糖代谢状态导致的氧化应激,给予不同浓度绿原酸处理,随后采用MTT法检测细胞活性,Hochest染色观察细胞数,透射电子显微镜观察细胞超微结构,Western blot法检测自噬关键蛋白LC3、p62表达。
结果与正常组比较,模型组RGC⁃5细胞活性降低(P<0.01),细胞数减少(P<0.01),线粒体和内质网肿胀变性,LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值降低(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,绿原酸给药浓度在25~100μmol/L范围内呈剂量依赖性地增加细胞活性和细胞数,且100μmol/L浓度效果最佳(P<0.01),细胞内形成自噬泡,LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值升高(P<0.01),p62蛋白表达降低(P<0.01)。
结论绿原酸可以通过上调LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值,促进p62蛋白消耗,促进自噬泡形成,降解H_(2)O_(2)破坏的细胞器从而恢复RGC⁃5细胞活性。
【总页数】5页(P2672-2676)【作者】姜逸;胡娜;袁琳;林敏;钟霄毓;陆敏;陆雄【作者单位】上海中医药大学科技实验中心【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.异绿原酸B对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用2.参葵通脉颗粒含药血清对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用3.睡莲酚对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用4.烟花苷对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用5.硫酸化党参多糖对H2O2致RAW264.7细胞损伤和小鼠急性酒精损伤的保护作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用
绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用赵静滨;何熹微;姚素艳;刘建生;郑德宇【摘要】目的探讨绿原酸(CHA)对体外培养人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞株HXO-RB44的作用及机制.方法应用CCK-8体外抑制实验,筛选CHA对体外培养传6代的人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度.Western blot检测人Rb细胞株HXO-RB44中抑癌基因Rb1和P16及细胞周期蛋白(Cyclin D2)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK 4)的表达变化;ELISA检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果CCK-8体外抑制实验结果显示,CHA对人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度为80 μmol/L.经80μmol/L CHA处理5d的HXO-RB44细胞株中,抑癌基因Rb1和P16均有少量表达,而在阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞几乎没有表达.CHA处理5d的HXO-RB44细胞株的Cyclin D2和CDK4的表达明显低于阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞(P＜0.01).CHA 处理5d的HXO-RB44的培养基中LDH的含量为(226.75±42.74)U/L,明显低于正常培养的细胞培养基(425.84±31.67)U/L(P＜0.01).结论80 μmol/L CHA可能通过增加HXO-RB44抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达及LDH水平,而抑制HXO-RB44细胞株的增殖.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】5页(P734-738)【关键词】绿原酸;人视网膜母细胞瘤;抑癌基因;细胞周期蛋白2 (Cyclin D2);细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)【作者】赵静滨;何熹微;姚素艳;刘建生;郑德宇【作者单位】锦州医科大学解剖学教研室,辽宁锦州 121001;辽宁抚顺市眼病医院,辽宁抚顺113008;辽河油田总医院眼科,辽宁盘锦124010;锦州医科大学病理生理学教研室,辽宁锦州 121001;锦州医科大学解剖学教研室,辽宁锦州 121001;锦州医科大学解剖学教研室,辽宁锦州 121001【正文语种】中文【中图分类】R739.7◇中医药研究◇视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, Rb)发生于视网膜的内核层，即双极细胞层，早期就可以发生颅内转移或其他远隔部位转移，常危及患儿生命，是婴幼儿眼病中危害性最大的一种原发性恶性肿瘤，发病率约为1/20 000[1-3]。
绿原酸的提取实验报告
绿原酸的提取实验报告
绿原酸是一种具有抗氧化、抗炎和抗菌作用的天然成分，广泛应用于医药、化
妆品和食品等领域。
本实验旨在通过提取方法，从植物中获得高纯度的绿原酸，并对提取效果进行评估。
实验材料与方法。
1. 实验材料，新鲜植物叶片、无水乙醇、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、氢氧化钠、氯化钠、石油醚等。
2. 实验仪器，搅拌器、离心机、蒸馏设备、pH计等。
实验步骤。
1. 叶片处理，将新鲜植物叶片洗净并晾干，粉碎成粉末状。
2. 提取，取适量叶片粉末，加入无水乙醇浸泡，搅拌均匀后过滤，收集滤液。
3. 沉淀，将滤液与乙醚混合，振荡分离后，收集有机相。
4. 结晶，将有机相与乙酸乙酯混合，加入正丁醇和氢氧化钠溶液，振荡后分离
有机相，加入氯化钠结晶。
5. 分离，收集上清液，蒸馏回收溶剂，得到绿原酸。
实验结果与分析。
通过实验，成功从植物中提取得到了绿原酸，并进行了结晶分离，最终得到了
高纯度的绿原酸结晶体。
对绿原酸的提取率和纯度进行了分析，结果表明提取率较高，纯度较好，符合实验预期。
实验结论。
本实验通过提取方法成功从植物中获得了高纯度的绿原酸，为后续的绿原酸应用研究提供了可靠的实验基础。
同时，实验过程中还发现了一些问题，如提取过程中溶剂选择、提取时间等因素对提取效果有一定影响，需要进一步优化提取工艺，提高绿原酸的提取效率和纯度。
综上所述，本实验为绿原酸的提取提供了一种可行的方法，为绿原酸的应用研究提供了重要的实验数据和参考依据。
希望通过不断的实验探索和优化，能够更好地利用绿原酸这一天然成分，为医药、化妆品和食品等领域的发展做出贡献。
原花青素对急性高眼压后视网膜作用的实验研究的开题报告
原花青素对急性高眼压后视网膜作用的实验研究的开题报
告
一、研究背景和意义：
急性高眼压是指眼球内液体排出不畅，导致眼内压力迅速增高的一种疾病，严重的情况下会引起视网膜缺血、水肿与坏死，从而导致视力严重下降或失明。
目前，对
于急性高眼压的治疗方法主要是降低眼内压力，如使用药物或手术治疗。
然而，这些
治疗方法均存在着一定的局限性。
原花青素是一种天然产物，具有多种生理活性，其中“抗氧化”、“抗炎”、以及“促进血液循环”等活性是较为突出的特征，因此被广泛应用于预防心血管疾病、
中风、糖尿病等慢性疾病的治疗中。
同时，原花青素是否能抑制视网膜神经细胞的损
伤和视觉功能下降仍有待进一步的研究探讨。
因此，本研究以原花青素为研究对象，探究其对急性高眼压后视网膜作用的效果，并为进一步探究原花青素在其他视网膜疾病的防治中的应用提供了理论与实践基础。
二、研究内容：
本研究将采用小鼠模型，建立急性高眼压模型，将小鼠分为对照组和实验组。
在实验组中，给小鼠注射原花青素，观察视网膜神经元存活，视觉功能和视网膜病理学
变化。
通过HE染色、TUNEL染色、免疫组织化学方法和视觉重建等技术，评估原花
青素对急性高眼压后视网膜作用的效果和机制。
三、研究意义：
1. 探究原花青素对急性高眼压后视网膜损伤的防护作用及其机制，为苯丙氨酸酰化酶抑制剂治疗视网膜疾病提供了实验依据。
2. 增加对原花青素在防治视网膜疾病中的应用的认识，为临床应用提供理论和实践基础。
3. 对于研究视网膜的免疫细胞和视网膜疾病的预防和治疗提供了新思路。
枸杞提取物对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用
枸杞提取物对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用黄冰林;魏含蕾;黄琴;梁凌燕;唐秋雨;谢雨燕;袁灵梅【期刊名称】《江西中医药大学学报》【年(卷),期】2024(36)3【摘要】目的:体外通过过氧化氢(H2O2)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞造成氧化损伤,观察枸杞提取物对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞活性的影响,探讨枸杞提取物通过抗氧化对ARPE-19细胞的保护作用。
方法:采用不同浓度H2O2诱导体外ARPE-19细胞的氧化损伤,确定最佳浓度;采用MTT法检测枸杞含药血清对ARPE-19细胞活力的影响,确定安全有效的药物浓度;观察各组细胞的形态,划痕试验检测各组ARPE-19细胞的活力;Western Blot法检测各组细胞Nrf2/ARE信号通路相关因子Nrf2的质蛋白和核蛋白的表达水平;试剂盒检测氧化应激水平的相关指标活性氧(ROS)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)活力。
结果:当H2O2浓度为200μmol/L,作用2 h时,ARPE-19细胞出现明显的氧化损伤(P<0.01);不同浓度的枸杞含药血清对ARPE-19细胞的干预效果不同,在2.5%、5%、10%的浓度下对损伤的ARPE-19细胞具有明显的促进增殖的作用(P<0.05),故选择2.5%、5%、10%浓度的枸杞含药血清进行下一步实验,与模型组相比,枸杞含药血清组细胞形态良好,长势均匀;细胞内的ROS含量显著降低(P<0.01),GSH含量明显上升(P<0.05),CAT活力显著升高(P<0.01);Nrf2质蛋白表达增强(P<0.05),核蛋白表达减弱(P<0.05)。
结论:枸杞含药血清能够提高ARPE-19细胞自身的抗氧化能力,从而对ARPE-19细胞产生保护作用。
【总页数】6页(P88-93)【作者】黄冰林;魏含蕾;黄琴;梁凌燕;唐秋雨;谢雨燕;袁灵梅【作者单位】江西中医药大学;深圳市中医院;江西中医药大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.黄芪多糖对过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用2.人酸性成纤维细胞生长因子对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞坏死的保护作用3.α-倒捻子素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用4.地黄多糖对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用5.胄叶线蕨提取物对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
秦皮乙素对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用及其机制
中华实验眼科杂志2020年12月第38卷第12期Chin J Exp Ophthalmol,December2020,Vol.38,No.12-1025--实验研究-秦皮乙素对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用及其机制张英俊1白鸽2何向东3张东蕾3何伟41沈阳眼产业技术研究院110163；2辽宁中医药大学，沈阳110847；3辽宁何氏医学院，沈阳110163；4沈阳何氏眼科医院110034通信作者：张东蕾,Email:zhangdonglei@(何伟,Email:hewei@【摘要】目的研究秦皮乙素对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞氧化损伤的影响及其机制。
方法将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为空白对照组、模型对照组、20“mol/L秦皮乙素组、40“mol/L秦皮乙素组、80“mol/L秦皮乙素组和100“mol/L秦皮乙素组，空白对照组细胞采用正常培养液培养,模型对照组使用900“mol/L t-BHP单独作用细胞4h,后4个组分别使用900“moWL t-BHP+不同浓度的秦皮乙素共同作用细胞4h。
采用MTS法检测细胞存活率;采用荧光染色分析法检测细胞内活性氧簇(ROS)活性；采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Bx)活性，以及丙二醛(MDA)含量。
结果空白对照组、模型对照组、20“moWL秦皮乙素组、40“mol/L秦皮乙素组、80“moWL秦皮乙素组和100“moWL秦皮乙素组细胞存活率分别为(100.00±1.58) %、(49.19±1.06) %、(76.82±3.48)%、(103.90±1,60) %、(111.70±3.36) %和(113.40±3.08) %,组间总体比较差异有统计学意义(U=95.44,P<0.01),其中与空白对照组比较，模型对照组细胞存活率明显降低，差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较，各浓度秦皮乙素组细胞存活率明显升高，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
原花青素抗晶状体氧化损伤的实验研究的开题报告
原花青素抗晶状体氧化损伤的实验研究的开题报告
标题：原花青素抗晶状体氧化损伤的实验研究
研究背景和意义：
晶状体是人眼中的透明结构，具有透明度和弹性，是保持眼内视界清晰的重要组织。
晶状体损伤主要表现为晶状体蛋白的异常聚集和氧化损伤。
目前，氧化应激认为是晶
状体氧化损伤的主要原因之一。
晶状体氧化损伤是导致白内障形成的重要原因之一。
因此，防止晶状体氧化损伤对于预防和治疗白内障具有重要意义。
原花青素是一种天然存在的化合物，具有抗氧化，抗炎症和抗肿瘤等多种生物学活性。
以往的研究表明，原花青素可以从多个方面抵御细胞内和细胞外氧化损伤，因此具有
很好的抗氧化作用。
但是，目前对其在预防晶状体氧化损伤的作用尚不清楚。
本研究旨在探究原花青素对晶状体氧化损伤的保护作用，为开发预防和治疗白内障的
新药提供理论基础和实验参考。
研究内容和方法：
1. 通过体外模拟晶状体氧化损伤的方法，在培养的晶状体细胞上观察原花青素的保护
作用；
2. 确定合适的原花青素浓度和处理时间；
3. 通过细胞形态、凋亡率和细胞膜透性等指标评估原花青素的影响；
4. 分析原花青素对氧化应激和抗氧化酶的影响；
5. 比较不同浓度的原花青素对晶状体氧化损伤的保护作用。
研究意义：
本研究将有助于探究原花青素在预防晶状体氧化损伤中的作用机制，为白内障预防和
治疗提供理论与实验依据，为生物活性物质开发提供新思路。
吲哚青绿对人视网膜色素上皮细胞的影响和其作用机制的实验研究
颀±论文吲哚青绿对人视网膜色素上皮细胞的影响及其作用机制的实验研究研究生：朱雪菲导师：孙京华副教授张晓农教授摘要【目的】探讨吲哚青绿（ｉｎｄｏｃｙａｎｉⅡｅｇｒｅｅｎ，ＩＣＧ）对培养的人视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥ）的影响及其作用机制，以探讨ＩＣＧ着染视网膜内界膜（ｉｎｎｅｒｌｉｍｉｔｉｎｇｍｅｍｂｒａｎｅ，ＩＬＭ）对视网膜是否有毒副作用，并寻求合适的浓度和作用时间。
【方法】浓度分别为２．０、１．０、０．５、０．２５ｍｇ／ｍｌＩＣＧ分别作用于培养的入视网膜色素上皮细胞５、１０、２０、４０ｍｉｎ后，采用光镜和电镜技术从形态学观察ＲＰＥ细胞的改变，采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）及免疫组织化学方法观察ＲＰＥ细胞器功能的损伤。
采用生物化学方法测定细胞膜上ＡＴＰ酶活性。
【结果ｌ（１）光镜观察ＩＣＧ作用后ＲＰＥ细胞形态无明显改变。
电镜观察以上浓度ＩＣＧ对ＲＰＥ细胞形态均有不同程度的损伤，以变性为主，表现为细胞器肿胀，且与ＩＣＧ浓度呈正相关。
（２）ＭＴｒ检测ＩＣＧ对ＲＰＥ细胞活性的抑制与时间无关（Ｆ＝１．９６，Ｐ＝０．１７３３），与浓度有明显相关性（艮８０．９６，Ｐ＝０．Ｏ００１）・ＩＣＧ浓度小于或等于０．５ｍｇ／ｍｌ时，ＲＰＥ细胞活性与阴性对照组比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。
（３）以上四种浓度ＩＣＧ作用ＲＰＥ细胞后，各组细胞增殖核抗原（ＰｃＮＡ）表达与阴性对照组比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。
（４）ＩＣＧ抑制细胞膜上ＡＴＰ酶活性。
【结论敲度小于等于０．５ｍｇ／ｍｌｌＣＧ着染视网膜内界膜时短时间Ｉ为（＜１０ｍｉｎ）硕士论文没有观察到明显的毒副作用，残余的ＩＣＧ可能通过抑制ＲＰＥ细胞膜上ＡＴＰ酶活性而逐步损伤ＲＰＥ细胞，正确使用ＩＣＧ是非常重要的。
但其长期存在对ＲＰＥ的毒副作用还有待于进一步研究。
【关键词】吲哚青绿，视网膜色素上皮细胞，视网膜内界膜，毒性作用华中科技大学鞫济医学硫硬士论文ＥｆｆｅｃｔｏｆｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅｇｒｅｅｎｏｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍＰｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：ＺｈｕＸｕｅｆｅｉＴｕｔｏｒｓ：ＳｕｎＪｉｎｇｈｎａ，ＺｈａｎｇＸｉａｏｎｏｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｉＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔＯＴｏｎ舀ｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａＺｈｏｎｇＳｃｉｅｎｃｅ壮ｄ１－ｅｃｌｌＩｌｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｂｓｔ珊ｃｔ［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅｇｒｅｅｎ（ＩＣＧ）ｏｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｃｅｌｌｓ（ＲＰＥ）ａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｆｏｒｆｉｎｄｉｎｇａｓａｆｅｄｙｅｔｏｒｅｍｏｖｅｒｅｔｉｎａｌｉｎｎｅｒｌｉｍｉｔｉｎｇｍｅｍｂｒａｎｅｄｕｒｉｎｇｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｃｕｌａｒｈｏｌｅ・［Ｍｅｔｈｏｄｓ］ＩＣＧｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ∞ｎｃｅｎ删ｏｎｓｗａｓａｄｄｅｄｔＯｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎＲＰＥｓ－Ｍｉｅｒｏｇｒａｐｈｉｃ，ｅｌｅｃｔｒｏｍｉｅｒｏｇｒａｐｈｉｅ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄＭｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ（ＭＴＴ）ｍｅｔｈｏｄｓｗｃｒｃｕｓｅｄｔＯｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｍｏＩｐｈ０１０百ｃａｌｌｄｆｕｎｃｔｉｏｎｅｄｃｈａｎｇｅｓｏｆＲＰＥ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］（１）ＳｗｅｌｌｉｎｇｃｅｌｌｓＷｅｌ＇ｅｏｂｓｅｒｖｅｄｗｉｔｈａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＩＣＧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．（２）ＴｈｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＧｔｏＲＰＥｈａｄａｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＩＣＧｃｏｎｃｅｎｔｔａｔｉｏｎｉｆ＝８０．９６，Ｐ＝Ｏ．０００１）ｂｕｔｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＩＣＧａｃｔｉｖｅｔｉｍｅ（Ｆ：１．９６，Ｐ－０．１７３３）．ＷｈｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＩＣＯｉｓｎｏｔｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ０．５ｍｇ／ｍｌ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＲＰＥｓｈｏｗｅｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｃｏｍｐａｒｉｓｍｎｗｉｔｈｃｏｎ曲１磐０ｕｐｐＯ。
基于Nrf2通道研究柚皮素磷脂复合物对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用
dismutase ( SOD), mal on dialdehyde ( MDA) and total antioxidant capacity ( T-AOC) were detected, intracellular level of reactive oxygen species ( ROS) was detected by
in the Nrf2 - siRNA + naringin group was not significantly different than that in the Nrf2 - siRNA group. Compared
with the Nrf2-siRNA group, the expression of 4 proteins in the Nrf2-siRNA+ NPC group was statistically signifiicant,
200p mol/L t - BHP after pretreatment with 200p mol/L
naringin medium), NPC group ( add 200p mol/L t - BHP after pretreatment with 200p mol/L NPC medium), Nrf2siRNA + nari ngin group ( after 200p mol/L naringin pretreatment, Nrf2 gene interferenee, then add 200p mol/L t- BHP) and Nrf2 - siRNA + NPC group ( after 200p mol/L NPC pretreatment, Nrf2 gene interference, then add 200pmol/L t-BHP). The intracellular levels of superoxide
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万方数据
Abstract
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Objective:To investigate the protection of chlorogenic acid (CGA) against hydrogen peroxide induced oxidative damage of Human Retinal Pigment Epithelial Cell line(ARPE-19) . Then we may provide an experimental basis for use of chlorogenic acid for age related macular degeneration (AMD) in clinical treatment in the future. Methods: Hydrogen peroxide(H2O2)effect on ARPE-19 cell in a concentration gradient and time gradient,then measure the cytoactive by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) mothed to establish the best model of oxidative stress.Take the methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) mothed to detect the proliferative effect and Toxicity of the ARPE-19 cells induced by chlorogenic acid(CGA).There were three groups：normal control group，H2O2 injured group，CGA treated group: CGA100 μmol/L and H2O2 500μmol/L.We through the The spectrophotometrically method to detect the viability of the antioxidant enzymes superoxide dismutase(SOD)，the amount of glutathione(GSH) and malondialdehyde (MDA).Measured the Apoptosis by theHoechst 33258kit and flow cytometry. Results: 1.ARPE-19 cell was induced apoptosis by H2O2 in a concentration and time dependent，the suitable conditions for the oxidative damagemodel was 500 μ mol/L H2O2 handle for 24h. 2.The ARPE-19 cells viability of the different concentration Chlorogenic acid groups compared with the blank control group was no significant difference;Compared to the H2O2 injured group，the viability of ARPE-19 cell cultured with CGA and H2O2 was increased．And The viability of ARPE-19 injured by H2O2 was greatly enhanced by 100 μ mol/LCGA pared with normal control group,the viability of the antioxidant enzymes superoxide dismutase(SOD)，the amount of glutathione(GSH) was significantly decreased, and the amount of malondial- dehyde(MDA)was markedly increased in the H2O2 injured group.While in the CGA -treated group the viability of the SOD,the amount of glutathione was increasing,and the amount of MDA was reducing,Compared with
学位论文独创性声明
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本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。
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I
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摘要
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要
目的： 研究绿原酸 （chlorogenic acid， CGA） 对过氧化氢 （Hydrogen peroxide） 处理的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）细胞抗氧化损伤的保护作用，为将 来临床上利用绿原酸治疗老年黄斑变性提供实验依据。 方法： 过氧化氢(H2O2)以浓度和时间梯度作用于 ARPE-19， 通过 MTT 法检 测细胞活性，建立 ARPE-19 细胞氧化损伤模型。采用 MTT 法检测 CGA 对 ARPE-19 细胞的增殖及毒性作用。实验分 3 组：正常对照组，H2O2 模型组， CGA+H2O2 干预组。应用紫外分光光度计法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD) 活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的变化；Hoechst33258 染色及流式 细胞术检测细胞凋亡情况。 结果：1．H2O2 以浓度和时间梯度诱导 ARPE-19 细胞凋亡，建立氧化损伤 模型适宜条件为 500μmol/L 的 H2O2 作用 HRPE 细胞 24h。2.绿原酸各浓度组 ARPE-19 细胞活性与空白对照组比较，差异无统计学意义；绿原酸各浓度干预 组细胞活性较 H2O2 模型组高，在 CGA 浓度为 100μmol/L,活性最高，选此浓度 进行后续实验。 3.与正常对照组相比，H2O2 模型组 SOD 活性、GSH 含量下 降， MDA 含量增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与 H2O2 模型组相比， CGA 干预组的 SOD 活性及 GSH 含量均升高，MDA 含量下降，差异有统计 学意义(P＜0.05)。4.与正常对照组比较，H2O2 模型组的凋亡率显著增加，差异 具有统计学意义；与 H2O2 模型组比较，CGA 干预组的凋亡率下降，差异有统 计学意义。 结论：H2O2 可以对 ARPE-19 细胞产生氧化损伤，引起细胞凋亡，CGA 对 ARPE-19 细胞无促增殖及毒性作用并对 ARPE-19 细胞的氧化损伤有保护作用， 可以降低 H2O2 诱导的 ARPE-19 细胞凋亡率； 关键词：绿原酸；视网膜色素上皮细胞；氧化损伤；凋亡