从酵液中分离纯化蛋白质等胞内产物的一般流程
蛋白质纯化实验流程
蛋白质纯化实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 蛋白质样品，含有目标蛋白质的溶液，例如细胞裂解液、组织提取物或发酵液。
一种基因工程菌胞外酶发酵及分离纯化方法
一种基因工程菌胞外酶发酵及分离纯化胞外酶指的是细胞内合成而在细胞外起作用的酶，包括位于细胞外表面或细胞外质空间的酶，也指释放入培养基的酶。
发酵法是大量获得发酵酶的方法之一。
主要通过微生物发酵来获得人们所需要的酶。
发酵法一般包括固体发酵、液体深层发酵、固定化细胞发酵和原生质体发酵等多种方式我们可以利用基因工程的原理，把生产某种胞外菌的一段基因插入到如“酵母细胞”等可以快速生长繁殖的微生物中对细胞本体影响不大的基因序列中，使其表达。
即可大量得到这种胞外菌。
这个过程需要考虑以下问题：1、酶制剂的来源：有微生物、动物和植物，但是，主要的来源是微生物。
由于微生物比动植物具有更多优点，因此，—般选用优良的产酶菌株，通过发酵来产生酶。
为了提高发酵液中的酶浓度，选育优良菌株、研制基因工程菌、优化发酵条件；2、酶的分离提纯技术是当前生物技术“后处理工艺”的核心。
采用各种分离提纯技术，从微生物细胞及其发酵液，或动、植物细胞及其培养液中分离提纯酶，制成高活性的不同纯度的酶制剂，为了使酶制剂更广泛地应用于国民经济各个方面，必须提高酶制剂的活性、纯度和收率，需要研究新的分离提纯技术；主要的发酵及分离纯化流程如下：发酵过程：1、找到生产蛋白酶的关键基因，以及目标菌种，并把生产蛋白酶的基因植入到菌种中不影响菌种正常表达的基因上；2、待菌种培育成功后，将已经植入目的基因的菌种放在培养基上进行培养，分离纯化菌种产物，并测定其分子量以及酶活力。
分离纯化过程：1、通过稀碱性溶液（要注意碱性要适当，防止过高的pH值使酶失活）把细胞裂解，进行酸中和。
通过离心获得沉淀（蛋白质、脂类物质等），弃上清液（主要为DNA,RNA等）。
2、将1所得的沉淀加水溶解，调节pH值到目标酶产物的等电点，大部分蛋白质、脂类物质析出、除去可能存在的无机盐等杂质。
3、离心，得酪蛋白粗品，先后加入水、乙醇和石油醚等物质，进行离心操作，除去蛋白质中的磷脂类物质和脂肪类物质，得到纯净的酶产物。
简述重组蛋白分离纯化的基本流程
简述重组蛋白分离纯化的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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发酵工程试题及答案
、名词解释1、分批发酵：在发酵中，营养物和菌种一次加入进行培养，直到结束放出，中间除了空气进入和尾气排出外，与外部没有物料交换。
2、补料分批发酵：又称半连续发酵，是指在微生物分批发酵中，以某种方式向培养系统不加一定物料的培养技术。
3、絮凝：在某些高分子絮凝剂的作用下，溶液中的较小胶粒聚合形成较大絮凝团的过程。
二、填空1、生物发酵工艺多种多样，但基本上包括菌种制备、种子培养、发酵和提取精制等下游处理几个过程。
2、根据过滤介质截留的物质颗粒大小的不同，过滤可分为粗滤、微滤、超滤和反渗透四大类。
3、微生物的育种方法主要有三类：诱变法，细胞融合法，基因工程法。
4、发酵培养基主要由碳源，氮源，无机盐，生长因子组成。
5、青霉素发酵生产中，发酵后的处理包括：过滤、提炼，脱色，结晶。
6、利用专门的灭菌设备进行连续灭菌称为连消，用高压蒸汽进行空罐灭菌称为空消。
7、可用于生产酶的微生物有细菌、真菌、酵母菌。
常用的发酵液的预处理方法有酸化、加热、加絮凝剂。
8、根据搅拌方式的不同，好氧发酵设备可分为机械搅拌式发酵罐和通风搅拌式发酵罐两种。
9、依据培养基在生产中的用途，可将其分成孢子培养基、种子培养基、发酵培养基三种。
10、现代发酵工程不仅包括菌体生产和代谢产物的发酵生产，还包括微生物机能的利用。
11、发酵工程的主要内容包括生产菌种的选育、发酵条件的优化与控制、反应器的设计及产物的分离、提取与精制。
12、发酵类型有微生物菌体的发酵、微生物酶的发酵、微生物代谢产物的发酵、微生物转化发酵、生物工程细胞的发酵。
13、发酵工业生产上常用的微生物主要有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。
14、当前发酵工业所用的菌种总趋势是从野生菌转向变异菌，从自然选育转向代谢调控育种，从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。
15、根据操作方式的不同，液体深层发酵主要有分批发酵、连续发酵、补料分批发酵。
16、分批发酵全过程包括空罐灭菌、加入灭过菌的培养基、接种、发酵过程、放罐和洗罐，所需的时间总和为一个发酵周期。
简述生物分离的一般流程
简述生物分离的一般流程
1.原料的选取和预处理：根据所需分离的生物物质来源，选择适当的原料，如微
生物发酵液、动植物细胞培养物等。
预处理通常包括加热、调节pH值、沉降等操作，以去除杂质或调整物质状态，为后续分离步骤做准备。
2.固-液分离：此步骤主要目的是去除不溶物，提高产物浓度和质量。
常用的方法
包括离心、过滤、细胞破碎等。
3.初步纯化：通过一系列操作如沉淀、吸附、萃取、超滤等，进一步去除杂质，
使目标产物得到初步纯化。
4.高度纯化：采用更为精细的技术，如层析、离子交换、亲和、疏水、吸附、电
泳等，对目标产物进行高度纯化，以去除残余的杂质。
5.精制与成品制作：通过结晶、干燥等步骤，使目标产物达到所需的纯度和形态，
最终制成符合质量标准的生物药物或生物制品。
蛋白质分离纯化的一般步骤及主要技术
蛋白质分离纯化的一般步骤及主要技术嘿，咱今儿个就来聊聊蛋白质分离纯化这档子事儿！你可别小瞧了它，这可是个大学问呢！首先呢，得准备好咱的原料，就像大厨做菜得先有食材一样。
这原料里就藏着咱要的蛋白质，就等着咱去把它给揪出来。
然后就是破碎细胞啦！这就好比是拆房子，得把那包裹着蛋白质的“墙壁”给打破，让蛋白质能跑出来。
这可是个技术活，不能太轻也不能太重，得恰到好处才行。
接下来就是离心啦！这就像是个大力士，把那些不要的杂质给甩出去，留下咱要的蛋白质。
再说说过滤，这就像是个筛子，把大的杂质筛掉，让蛋白质能顺利通过。
然后就是提取啦！这可是关键的一步，就像从一堆沙子里找出金子一样，得有耐心，还得有技巧。
这其中的主要技术呢，有电泳技术。
你想想，蛋白质就像一群小人儿，在电场里跑啊跑，根据它们的特点，就能分出来啦！还有层析技术，这就像走迷宫，不同的蛋白质走不同的路，咱就能把它们给分开咯。
超滤技术也很厉害呢！它就像个超级筛子，能把小分子筛掉，留下咱要的蛋白质大分子。
沉淀技术呢，就像是下一场雪，把蛋白质给“冻”出来。
哎呀，你说这蛋白质分离纯化是不是很神奇？就这么一步步地，把那些小小的蛋白质给弄出来，还能让它们各归各位。
这要是没有这些技术，那好多研究和应用不就没法进行啦？咱得好好感谢那些研究这些技术的科学家们，是他们让我们能更好地了解蛋白质，利用蛋白质。
所以啊，蛋白质分离纯化可不是随便玩玩的，那是得认真对待，仔细研究的。
这每一步都不能马虎，每一个技术都有它的用处。
咱可得好好记住这些步骤和技术，说不定哪天咱自己也能动手试试呢！你说是不是？。
生物工程下游纯化的一般工艺流程
总流程大体包括4个阶段：发酵液预处理和固液分离→提取（初步分离）→精制（高度纯化）→成品制作。
1. 发酵液的预处理和固液分离（或称不溶物的去除）发酵液的预处理可采用的方法及原理：1)加热：把悬浮液加热到所需温度并保温适当时间。
可降低悬浮液的黏度，而且能够加速聚集作用以去除某些杂蛋白等物质，操作比较简单。
对产品的要求较高，热稳定性要好；温度不宜过高，时间不宜过长。
此方法应用较少。
2)调PH：加入草酸、无机酸或碱。
PH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质。
如蛋白质、氨基酸——等电点沉淀法，膜过滤——改变易吸附分子的电荷性质。
3)凝聚和絮凝：将化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使它们聚集成可分离的块状体，再进行分离。
4)使用惰性助滤剂：惰性助滤剂是一种颗粒均匀、质地坚硬、不可压缩的粒状物质，用于扩大过滤表面的适用范围，使非常稀薄或非常细小的悬浮液在过滤时发生的快速挤压和介质堵塞现象得到减轻，易于过滤。
固液分离可采用的方法及原理：1)过滤法：迫使液体通过固体支承物或过滤介质，把固体截留，从而达到固液分离的目的。
①传统过滤真空过滤，利用空气和真空之间的压力差进行过滤；压滤，用泵产生的液压或气压作为过滤推动力。
②错流过滤过滤时，料液给过滤介质表面一个平行的大流量冲刷，过滤介质表面积累的滤饼就减少到可以忽略的程度。
离心法：利用惯性离心力和物质的沉降系数或浮力密度的不同而进行分离、浓缩或提炼。
包括离心沉降、离心过滤、离心分离和超离心。
2)膜分离：利用具有一定选择性透过的过滤介质进行物质分离。
有些操作还涉及到细胞的破碎，细胞破碎的方法如下：1)机械法①研磨和匀浆②超声波：超声波法是一种液相剪切破碎法，频率超过15—20kHx(千赫)的超声波是人耳难以听到的一种声音，它可破碎微生物细胞。
③高压匀浆：机理一：通过针形阀时，压力下降的速度和大小是细胞破碎的原因；机理二：细胞破碎是来自涡流的旋涡使液体细胞颤振的结果；机理三：悬浮细胞在平坦表面上的高速喷射撞击是细胞破碎的主要原因。
酵母蛋白纯化工艺流程
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1. 酵母细胞破碎。
使用玻璃珠磨碎或超声波破碎来破碎酵母细胞壁。
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从酵液中分离纯化蛋白质等胞内产物的一般流程包括以下步骤：
1. 预处理：采用加热、调整pH、絮凝等措施和单元操作改变发酵液的理化性质，为固液分离作准备。
2. 固液分离：采用珠磨、匀浆、酶溶、过滤、离心等单元操作除去固相，获得包含目的产物的液相，供进一步分离纯化用。
3. 初步纯化：采用萃取、吸附、沉淀、离心等单元操作，将目的成分与大部分杂质分离开来。
4. 精细纯化：采用层析、电泳、分子蒸馏等单元操作，将目的成分与杂质进一步分离，使产物达到预期标准。
5. 成品加工：采用结晶、浓缩、干燥等单元操作，将目的产物加工成适应市场需要的商品。
以上流程仅供参考，具体操作可能会因实际情况而有所不同。