二步培养和AN3对甘蓝型油菜gO子叶和下胚轴芽再生的影响

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甘蓝型黄籽油菜的再生能力研究

ｄｆｒｎｅｈｏｒｇｎｒｔｎｆｑｅｃＳＩｅｅｒｔｅｔＯｔｅｆａｅｅｄａｄｂｔｅｎｈｐｅｔｓｎｏｌｏｓｏｔｅｅｌ — ｉｅｅｃｓｉｓｏｔｅｅｅａｏｅｕｎｙ《Ｒ，ｔｅｐｓｐｓｅｎｅｅｙｏｏｌａｄｃｔｅｎｆｈｌｗｎｉｒ ’ ｗｌｈＷｙｏｒ）ｂｗｙｙｄｙｏ
油菜子叶的芽再生频率（平均８．９）９４％极显著地高于下胚轴（平均１．５）但其差异随品系而异，别是品系Ｄ５９％，特Ｈ３。３部分处理子叶芽再生频率为１（，０）而下胚轴芽再生频率却为０％关键词：甘蓝型黄籽油菜；下胚轴；子叶；芽再生频率
ｓｅｅｉｅｒｎｅｔａｅ．ＤｉｅｃｓｉＲｆｈｐｃｔｌｅｗｅｈｅｌｗ— ｎｌｃ —ｅｄｄｌｅｒｏｏｖｏｓＲＦｏｙｅｄｄｌｓｗｅｅｉｖｓｉｔｄｎｇｆｍｎｅｎＳＦｏｙｏｏｙｓｂｔｅｎｔｅｙｌｆｏａｄｂａｋｓｅｅｉｓｗｅｅｎｔｈｉｕ．Ｓｆｈ — ｎ
文献标识码：Ａ中图分类号：３．Ｓ６４３
ＳＵＹＯＥＥＥＡ１ＮＡＢＩＴＦＲＰＳＥ（ＲＳＩＡＮＰＳＬ）ＴＤＮＲＧＮＲＴ０ｌＩＹＯＡＥＥＤＢＡＳＣＡＵ．
ＧＵＹＡＮＧ —ｙｎ。ＬｉｉｇＴＡＮＧａｇ—ｌ－Ｚｈｎｉｎ’
。
ＹＩＪａ—ｍｉｇ。ＣＨＥＮ。ＩＪａ—ｎＮｉｎ ‘ ＬｉＬｉａ，

甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究

（ｙＬａｏａｏｙｏｌｎｎｔｃｎｏｅｕａｅｄｎ，ｈｕｏｒｌＫｅｂｒｔｒｆＰａｔＧｅｅｉｓａｄＭｌｃｌｒＢｒｅｉｇＺｏｋｕＮｏｍａｉｅｓｔ，ｈｕｏ６００，ｉａＵｎｖｒｉｙＺｏｋｕ４６０Ｃｈｎ）
（口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室，南周口４６０）周河６００
摘要：为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系，成高含油量双低油菜杂交种，２个不同甘蓝型育以
黄籽油菜高油双低品系（ＧＹ１ＧＹ２下胚轴为外植体，用正交设计，究了预培养基中２４一Ｄ、）采研，
初步建立了甘蓝型油菜高油品系的下胚轴再生体系，高含油量油菜遗传转化奠定了基础。为关键词：蓝型油菜；籽油菜；高含油量；下胚轴；芽再生频率；生体系甘黄再
中图分类号：５５４￥６．
文献标志码：Ａ
河４ —８
ＪｕｎｌｏｎｎＡｇｉｕｒｌＳｉｎｅｏｒａｆＨｅａｒｃｈｕａｃｅｃｓ
甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究
王俊生，小芳，光轩，成伟范谭李
ｆｃｉｇｓｏｏｅｎｒｔｏｒｑｕｎｙｗｅｅｉｖｅｔｇａｅｉｒｈｏｏｎｌｄｓｇｎｔｅｐｂｔｅｅｅｔｎｈｔｒｇｅｅａｉｎｆｅｅｃｒｎｓｉｔｄｕｓｎｇｏｔｇａｅｉｏｓｔｕｅｔｒｒ — ｇｎｅａｉｎｓｓｅｏｆｒｐｅｅｄｓｏｓａｌｓｉｏｅｒｔｏｙｔｍａｓｅｆｒｅｔｂｉｈｎｇｆｕｎｄｔｏｂａｎｎｇｒｎｓｎｉｒｓｏｒｒａｄａｉｎｏｆｏｔｉｉｔａｇｅｃｅｔｅｎ

二步培养和AgNO_3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响_杨晓凤

将 4 ～ 10d龄幼苗的下胚轴切成 0.5cm左右的小段 , 并接种到含不同浓度 2, 4 -D(0.5、1.0、1.5
mg/L)MS培养基中 , 每 9 cm直径培养皿接种 10个外植体 , 每处理至少 3个重复。培养 3d或 7d后 , 再将下胚轴转接到含有 3mg/LBA和 0.15mg/LNAA 或另外添加 2.5mg/LAgNO3 的分化培养基上 , 培养 30d后统计芽苗的再生频率及外植体芽苗数。 1.5 不定芽生根和移栽
2009年 6月 2009, 31(2):137 -142
中国油料作物学报 Chinesejournalofoilcropsciences
二步培养和 AgNO3 对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响
杨晓凤 , 秦叶波 , 周伟军 , 唐桂香＊
(浙江大学农业与生物技术学院作物科学研究所 , 浙江杭州 310029)
Keywords:Oilseedrape(BrassicanapusL.);Cotyledonexplant;Hypocotylexplant;Two-stepprocedure;AgNO3 ;Shootregeneration
甘蓝型油菜 (BrassicanapusL.)属十字花科 (Cruciferae)芸薹属 (Brassica)是世界上重要的油料作物之一 , 越来越多的科学家致力于对其进行遗传改良。随着分子生物技术的发展 , 利用植物基因工
收稿日期 :2008-11-12 基金项目 :浙江省留学回国人员择优资助项目(G50801)
作者简介 :杨晓凤 (1986 -), 女 , 山东威海人 , 硕士研究生 , 主要从事转基因育种研究＊通讯作者 :唐桂香 , 副教授 , 博士 , E-mail:tanggx@

油菜下胚轴培养实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 了解油菜下胚轴的生物学特性及生长规律。

2. 掌握油菜下胚轴的诱导培养方法。

3. 探究不同激素配比对油菜下胚轴生长的影响。

二、实验材料1. 植物材料：油菜种子（甘蓝型油菜）2. 试剂与仪器：NAA、细胞分裂素、琼脂、无菌水、超净工作台、高压灭菌锅、解剖镜、剪刀、镊子、培养皿、移液器等。

三、实验方法1. 种子消毒与萌发（1）将油菜种子用75%酒精浸泡消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次。

（2）将消毒后的种子置于培养皿中，加入适量无菌水，置于25℃恒温培养箱中萌发。

2. 下胚轴的采集与培养（1）待油菜种子萌发至第2天，用解剖镜观察，选取生长状态良好的下胚轴。

（2）将下胚轴剪下，放入含有适量无菌水的培养皿中，置于超净工作台进行无菌操作。

（3）将下胚轴切成约1cm长的段，放入含有不同激素配比的培养基中。

3. 培养基配比设计（1）对照培养基：NAA 0.5mg/L，细胞分裂素 0.5mg/L。

（2）实验组培养基：NAA浓度分别为0、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L，细胞分裂素浓度分别为0、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L。

4. 培养与观察（1）将培养基置于高压灭菌锅中灭菌30分钟。

（2）将灭菌后的培养基倒入培养皿中，凝固后接种下胚轴。

（3）将培养皿置于25℃恒温培养箱中培养，每3天更换一次培养基。

（4）观察不同激素配比对下胚轴生长的影响，包括下胚轴长度、粗度、颜色等。

四、实验结果与分析1. 下胚轴生长情况（1）对照组：下胚轴生长速度较慢，长度约2cm，粗度约0.2mm，颜色浅绿。

（2）实验组：随着NAA浓度的增加，下胚轴长度和粗度逐渐增大；细胞分裂素浓度增加时，下胚轴长度和粗度减小。

2. 激素配比对下胚轴生长的影响（1）NAA浓度对下胚轴生长的影响：NAA浓度越高，下胚轴生长速度越快，长度和粗度越大。

（2）细胞分裂素浓度对下胚轴生长的影响：细胞分裂素浓度越高，下胚轴生长速度越慢，长度和粗度越小。

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究孙慧慧;闫晓红;叶永忠;魏文辉【摘要】以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株.结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30 μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根.研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2010(000)006【总页数】5页(P35-39)【关键词】甘蓝型油菜;子叶原生质体;原生质体培养;植株再生【作者】孙慧慧;闫晓红;叶永忠;魏文辉【作者单位】河南农业大学,生命科学学院,河南,郑州,450002;中国农业科学院,油料作物研究所,基因组学与分子生物学研究室/农业部油料作物生物学重点开放实验室,湖北,武汉,430062;中国农业科学院,油料作物研究所,基因组学与分子生物学研究室/农业部油料作物生物学重点开放实验室,湖北,武汉,430062;河南农业大学,生命科学学院,河南,郑州,450002;中国农业科学院,油料作物研究所,基因组学与分子生物学研究室/农业部油料作物生物学重点开放实验室,湖北,武汉,430062【正文语种】中文【中图分类】S565.4利用原生质体进行转基因及体细胞杂交试验获得再生植株是作物育种与遗传改良的有效途径之一[1]。

体细胞杂交避免了有性杂交过程中的不亲和障碍,在获得种间、属间甚至科间杂种方面均发挥着重要作用。

甘蓝型油菜是我国主要油料作物之一,尽管其原生质体培养与植株再生已有很多成功的报道[2-7],涉及甘蓝型油菜体细胞杂交再生植株亦有较多成功的范例[8-10],但该项技术在实际应用中仍存在许多问题,如对基因型依赖性大、试验结果重演性小、部分试剂昂贵等,从而限制了原生质体培养与融合技术在油菜遗传改良中的应用。

油菜子叶和下胚轴再生体系研究进展_欧阳丽莹

中国农学通报第 19 卷第 4 期 2003 年 8 月 http: zntb .cn
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照培养 , 发现不带柄的子叶仅能够膨大和于切口处形成愈伤组织 , 不能分化出芽 ;万萌等[ 16] 通过试验也得出结论 , 子叶柄短于 1.5 mm 的材料 , 不能诱导出苗 , 子叶柄长度大于 2.5 mm 的外植体 , 诱导情况也不理想。唐桂香等[ 17] 采用带柄子叶沿主脉剖开后接种 , 王长海等[ 18] 仅以芥菜型油菜子叶柄为外植体 , 最后都由再生芽获得了健康植株。但赵云[ 12] 和胡玉欣等[ 19] 在试验中将子叶切成 2 ～ 3 mm 见方的子叶块 , 未保留子叶柄 , 也获得了再生苗 , 这一点与石淑稳和万萌的结论有所不同。采用下胚轴作为外植体时 , 佘小玲等[ 15] 研究表明 , 甘蓝型油菜下胚轴上段和下段的愈伤组织比中段发生早 , 形成快 , 达到高峰期早 , 愈伤组织芽苗分化频率也较高。下段愈伤组织分化频率为 39 %, 上段为 40 %, 中段为 30.68 %。下胚轴切段长度则以 0.3 ～ 0.5 cm 为宜。王景雪等[ 20] 也采用 0.5 cm 长度切段 , 但石淑稳[ 6 , 21] 多采用 1 cm 长度切段。胡玉欣采用的切段长度只有 0.2 ～ 0.3 cm 。从遗传变异和微生物感染的角度来说 , 外植体越小 , 再生植株的变异性越小 , 感菌率越低。在不影响再生频率的前提下 , 外植体越小越好。考虑到不同基因型及不同激素配比所要求的外植体大小有差
苗分化率比对照高出一倍以上。AgNO3也能显著促进芸薹属其它种的芽苗分化率[ 26] 。但 Radke[ 27] 认为 AgNO3只是对再生能力差的基因型起作用。

甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用_廖志强

自 Kartha 等(1974)首次从甘蓝型油菜的茎切段诱导出不定芽以来，国内外研究机构已经相继从甘蓝型油菜的叶片、子叶、下胚轴、茎段、花序轴、根和薄层细胞等部位获得了再生植株。其中，下胚轴由于具有分化频率较高、取材方便、不受季节限制和易被农杆菌感染等优点而成为再生和遗传转化首选的外植体。经过多年的研究，国内外已有大量关于甘蓝型油菜下胚轴再生体系的报道，一般来说是先将除去子
主要分为甘蓝型、白菜型和芥菜型三种，目前中国栽并将其应用于油菜的遗传转化工作中，为缩短油菜
种的油菜品种主要为甘蓝型油菜。随着现代分子生转化周期及提高油菜转化效率创造条件。物学技术的发展，利用转基因等生物技术加速油菜育
种及其基因功能的研究具有重要意义(官春云, 2002)。 1 结果与分析
植物遗传转化方法主要有农杆菌介导法、花粉管通道法、基因枪法、显微注射法、PEG 介导法、激光微刺穿孔法等方法，其中农杆菌介导法为最普遍使用的方法。尽管利用根癌农杆菌将外源基因导入甘蓝型油菜中已有一定报道，但除极少数品种如春油菜品
以下胚轴为外植体的遗传转化，均采用二步培养再
生方法(林呐等, 2012; Liu et al., 2012)。由于二步再生
培养操作较繁琐，且芽再生频率不高(王艳等, 2005; 白延红等, 2008)，使得目前油菜转化工作量较大，转化效率较低。尤其是二步再生培养芽诱导周期较长，一般需要 2~3 周时间(王艳等, 2005; 白延红等, 2008)，而经过农杆菌侵染后的愈伤组织抗性芽的诱导筛选更是需要长达 3 个月时间(林呐等, 2012)。因此，建立快速简便的甘蓝型油菜再生技术体系，并在此基础上建立油菜遗传转化体系，简化转化过程，缩短转化周期，提高转化效率，显得非常必要。

6-BA和AgNO3对芥菜型油菜下胚轴芽再生的影响

（ＡｇＮＯ）组合的分化培养基中，研究６一ＢＡ和ＡｇＮＯ对芥菜型油菜下胚轴芽再生的影响。结果表明分化培养基
中含３ｍｇ／Ｌ６一ＢＡ＋５ｍｇ／ＬＡｇＮＯ时出芽率最高，出芽率达到５８．３３％，芽丛数平均为１．７３。
关键词：芥菜型油菜；下胚轴；芽再生；６一ＢＡ；ＡｇＮＯ
中图分类号：￥５６５．４文献标识码：Ａ
文章编号：１００１－５２８０（２０１３）０２￣１２１一Ｄ４
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２８０．２０１３．０２．０５
统是农杆菌介导的遗传转化系统，该系统有赖于受体的高效再生。油菜转基因常用受体之一是下胚
过程中常用到６一ＢＡ和ＡｇＮＯ。本研究以芥菜型油菜品种Ｂｒｏｗｎｍｕｓｔａｒｄ的下
轴，由下胚轴诱导产生再生苗一般要经历诱导愈伤
组织形成、愈伤组织分化成芽、诱导生根等步骤，其
Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ６一ＢＡａｎｄＡｇＮＯ３ｏｎＳｈｏｏｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａ（Ｌ．）Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ
ＹＵＡＮＹｕ — ｈｕｉ，ＹＡＮＧＬｉｕ，ＬＩＵＸｉａｎ－ｊｕｎ，ＬｕＹｉｎｇ，ＬＩＵＺｈｏｎｇ－ｓｏｎｇ

盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析

盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析张蕊;邓文亚;杨柳;王亚萍;肖芳枝;禾健;卢坤【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2017(050)001【摘要】[目的]解析甘蓝型油菜发芽期根和下胚轴发育及耐盐性的调控位点,筛选油菜耐盐性相关的候选基因,可为油菜耐盐性改良提供依据.[方法]以317份具有代表性的甘蓝型油菜自交系为材料,在正常生长和盐胁迫条件下进行沙培鉴定,利用芸薹属60K SNP芯片和全基因组关联分析鉴定正常生长与盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期根和下胚轴长度显著关联的SNP,并确定其连锁不平衡区间.通过区间内基因的功能注释及盐胁迫下油菜幼苗根和叶片转录组差异表达基因筛选连锁不平衡区间内的重要候选基因,并以实时荧光定量PCR分析候选基因的组织特异性和盐胁迫诱导表达模式,提高候选基因筛选的准确性.[结果]正常生长和盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长在不同材料间变异较大,频次分布表明目标性状均为数量性状,受多基因调控.全基因组关联分析模型比较表明,MLM+P+K模型为最优模型.以此模型对目标性状进行全基因组关联分析,检测到45个显著关联SNP,其中40个与下胚轴长度显著关联,5个与根长显著关联,单个SNP解释的表型变异分别为9.12%—14.46%和7.67%—8.93%.重复检测的显著相关SNP中,值得注意的是C04染色体的rs8970,同时与4个性状显著关联,表型贡献率为7.67%—12.35%,是唯一在下胚轴长和根长间重复检测到的显著关联SNP.11个重要关联SNP中有6个位于10—442 kb的连锁不平衡区块中.转录组分析表明,11个连锁不平衡区间共包含447个基因,其中15个受盐胁迫诱导表达.转录组和基因功能注释综合分析表明,BnaSRO1、BnaPAGR2、BnaNPH3、BnaMYB124、BnaSAM-Mtase、BnaBIN2、BnaUMAMIT11、BnaEXPA7、BnaRPT3、BnaEF-hand和BnaF3H 很可能为各自区间的候选基因.实时荧光定量PCR结果证实除BnaNPH3外,其他基因均在根或下胚轴中受盐胁迫诱导上调表达.组织特异性分析还发现BnaUMAMIT11、BnaPAGR2和BnaEXPA7主要在萌发的根和下胚轴中特异表达,BnaRPT3、BnaBIN2和BnaMYB124虽然呈组成型表达,但在萌发阶段的下胚轴中表达量最高,证实这些基因很可能参与油菜发芽期根和下胚轴生长发育及耐盐性的调节.[结论]全基因组关联分析共鉴定出45个控制油菜发芽期根和下胚轴发育及耐盐性的显著关联SNP.连锁不平衡、转录组和基因功能注释综合分析初步鉴定出11个重要候选基因.【总页数】13页(P15-27)【作者】张蕊;邓文亚;杨柳;王亚萍;肖芳枝;禾健;卢坤【作者单位】西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715;西南大学神农班,重庆 400715;西南大学神农班,重庆400715;西南大学农学与生物科技学院,重庆 400715【正文语种】中文【相关文献】1.砷胁迫下甘蓝型油菜苗期根、下胚轴和鲜重的全基因组关联分析 [J], 曲存民;李加纳;王瑞;马国强;朱美晨;黄小虎;贾乐东;王书贤;赵会彦;徐新福;卢坤2.甘蓝型油菜苗期下胚轴长、根长与成熟期主要农艺性状及品质性状的相关性分析[J], 鲁丹丹; 李保全; 安素妨; 侯锦娜3.锌胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴长的全基因组关联分析 [J], 魏丽娟;唐章林;卢坤;李加纳;曲存民;申树林;黄小虎;马国强;王曦彤;杨怡玲;李洹东;王书贤;朱美晨4.PEG 6000模拟干旱胁迫下甘蓝型油菜芽期及苗期抗旱指标筛选 [J], 刘翔;李浩东;王茸茸;黄镇;徐爱遐;左凯峰;许伟;郭娜;秦梦凡;徐宇;马宁;李青青;张淼5.绿豆下胚轴正反插条件下无机盐和蔗糖对下胚轴不定根发生的影响 [J], 胡江琴;王利琳;庞基良;梁海曼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用

ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ａｓｅｘｐｌａｎｔｓ，ｎｄａａｄｊｕｓｔｅｄｓｏｍｅｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆｒａｐｅｓｅｅｄｓｕｃｈａｓｈｏｒｍｏｎｅ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆ６－ＢＡｎｄａＮＡＡ，ＡｇＮＯ３ａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇａｇｅ，ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｏｎｅ－ｓｔｅｐｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ
Ｏｎｅ — ｓｔｅｐＳｈｏｏｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＣｕｌｔｕｒｅＥｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｒｏｍＨｙｐｏｃｏｔｙｌｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ａｎｄＡｐｐｌｉｅｄｔｏＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｇｕａａｃｙ２Ｏ１Ｉ＠ａｌｉｙｔｍ．ｃｏｎｒＤＯＩ：１０．１３２７１／ｊ．ｍｐｂ．０１３．０００７９３
பைடு நூலகம்
ＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｏｎｅ — ｓｔｅｐｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒｎｓａｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｕｓｉｎｇｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ

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［１］
型油菜比较易于农杆菌介导的遗传转化，目前所得
２］３］的转化植株采用的外植体有子叶［、下胚轴［、原４］５］和孢子［等，但农杆菌介导转化的效率生质体［
还是很低且受基因型的限制。农杆菌介导的转化效率主要和二个因素有关，与农杆菌有关的效率和外植体芽再生频率，而外植体芽再生频率是农杆菌介
１材料和方法
１．１试验材料本试验以甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）品种浙双７５８为材料，以其无菌实生苗的子叶和下胚轴为外植体。试验中所用的植物生长激素均为Ｓｉｇｍａ公司生产的化学试剂。１．２无菌苗培养供试种子在７０％的酒精中浸泡３０ｓ，再用１．０％的次氯酸钠溶液浸泡１５ｍｉｎ，随后用无菌水冲洗５～
（浙江大学农业与生物技术学院作物科学研究所，浙江杭州３１００２９）
摘要：以甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）品种浙双７５８为材料，研究二步培养及添加ＡｇＮＯ３对甘蓝型油菜子叶
和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含０．５～１．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上预培养３ｄ或７ｄ诱导愈ｇ／ＬＢＡ和０．１５ｍｇ／ＬＮＡＡ及添加或不添加２．５ｍｇ／ＬＡｇＮＯ伤组织的产生，再转到含有３ｍ３的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明，外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与２，４－Ｄ浓度、预培养时间和ＡｇＮＯ３密切相关；分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率；二步培养及添加ＡｇＮＯ完整子叶和下胚轴外植体芽３可使半子叶、再生频率分别达到了９６．１％，９６．７％和９６．７％。关键词：甘蓝型油菜；子叶外植体；下胚轴外植体；二步培养；ＡｇＮＯ；芽再生３中图分类号：Ｓ５６５．４０３．５文献标识码：Ａ文章编号：１００７－９０８４（２００９）０２－０１３７－０６
［１７］６次。将消毒好的种子接种在含１／２ＭＳ无机盐、
２结果和分析
２．１二步培养对完整子叶外植体芽再生的影响在诱导愈伤组织培养基上，子叶在接种后第二天就开始膨大，并开始在切口处产生愈伤组织，到预培养３ｄ、分化培养７ｄ后，切口被坚实、致密的愈伤组织所包围，部分外植体产生不定根（图１）。分化５ｄ即可见芽的再生（图２）。培养２
ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｗｏｓｔｅｐｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＡｇＮＯｎｔｈｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍ３ｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｅｘｐｌａｎｔｓｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ
１３８
中国油料作物学报２００９，３１（２）
）ＭＳ培养基中，每９ｃｍ直径培养皿接种１０个ｍｇ／Ｌ外植体，每处理至少３个重复。培养３ｄ或７ｄ后，再将下胚轴转接到含有３ｍｇ／ＬＢＡ和０．１５ｍｇ／ＬＮＡＡ或另外添加２．５ｍｇ／ＬＡｇＮＯ培养３的分化培养基上，３０ｄ后统计芽苗的再生频率及外植体芽苗数。１．５不定芽生根和移栽在外植体接种后约４周，分化的不定芽长至１．５～２．５ｃｍ时，自芽基部切下插入１／２ＭＳ生根培养基中诱导生根。经２～３周的培养再生芽长根后，开瓶锻炼２４～４８ｈ，小心洗去小苗根部的培养基后栽入０％的培养土（泥炭土 ∶ 珍珠岩＝３ ∶ １）含水量为６中，用塑料薄膜覆盖保湿１～２ｄ，然后揭开，生长２周后移入大田进行正常管理。１．６芽再生频率的计算芽再生率＝长芽的外植体（切段）数／接种的外１００％。植体（切段）数×
２００９年６月２００９，３１（２）：１３７－１４２
中国油料作物学报Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｒｎａｌｏｆｏｉｌｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅｓ
二步培养和ＡｇＮＯ３对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响
杨晓凤，秦叶波，周伟军，唐桂香
ＹＡＮＧＸｉａｏ－ｆｅｎｇ，ＱＩＮＹｅ－ｂｏ，ＺＨＯＵＷｅｉ－ｊｕｎ，ＴＡＮＧＧｕｉ－ｘｉａｎｇ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００２９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｗｏｓｔｅｐｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＡｇＮＯｎｔｈｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｆｒｏｍｃｏｔｙｌｅｄｏｎ３ｏａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｅｘｐｌａｎｔｓｉｎｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）ｃｖ．Ｚｈｅｓｈｕａｎｇ７５８ｈａｄｂｅｅｎｓｔｕｄｉｅｄ．Ｅｘｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｐｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄ３ｏｒ７ｄａｙｓｉｎｔｈｅｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ２，４－Ｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（０．５～１．５ｍｇ／Ｌ）ｔｏｉｎｄｕｃｅ，ｔｈｅｅｘｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｔｏｓｈｏｏｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ３ｍｇ／ＬＢＡ，ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ０．１５ｍｇ／ＬＮＡＡ，ｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔ２．５ｍｇ／ＬＡｇＮＯｏｉｎｄｕｃｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃａｌｌｕｓ３ｔ，４－Ｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｐｒｅｃｕｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙａｎｄｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｅｒｅｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈ２ｔｉｖａｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄＡｇＮＯ．Ｔｈｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗａｓｇｒｅａｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙｔｗｏｓｔｅｐｃｕｌｔｕｒｅｐｒｏｃｅｄｕｒｅａｎｄ３ａｄｄｅｄＡｇＮＯ．Ｔｈｅｍａｘｉｍａｌｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗａｓ９６．１％，９６．７％ａｎｄ９６．７％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍｈａｌｆ３ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ，ｉｎｔａｃｔｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓｅｘｐｌａｎｔｓｉｎｒａｐｅｓｅｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｏｉｌｓｅｅｄｒａｐｅ（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）；Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｅｘｐｌａｎｔ；Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｅｘｐｌａｎｔ；Ｔｗｏｓｔｅｐｐｒｏｃｅｄｕｒｅ；ＡｇＮＯ；Ｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ３甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）属十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）芸薹属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）是世界上重要的油料作物之一，越来越多的科学家致力于对其进行遗传改良。随着分子生物技术的发展，利用植物基因工程技术加速油菜育种及基因功能的研究具有重要意义
。与禾谷类作物相比，作为双子叶作物的甘蓝
收稿日期：２００８１１１２基金项目：浙江省留学回国人员择优资助项目（Ｇ５０８０１）作者简介：杨晓凤（１９８６－），女，山东威海人，硕士研究生，主要从事转基因育种研究唐桂香，副教授，博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｇｘ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ通讯作者：