木聚糖酶作用机理及区分木聚糖内外切酶测定方法探讨
木聚糖酶是一种最主要的木聚糖降解酶类
木聚糖酶是一种最主要的木聚糖降解酶类。
它主要通过内切方式降解木聚糖中β-1,4木糖苷键，水解产物以木寡糖为主，并伴有少量的木糖和阿拉伯糖。
产品规格型号酶活剂型包装规格FE504A10000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504B20000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504C30000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504D50000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504AL10000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE504BL20000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE504CL30000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶产品特点●采用新型国际专利菌种生产，产品性能优良，使用效果得以保证；●先进的全自动液体深层发酵技术，领先的后处理加工工艺，保障了产品的高纯度、高稳定性和良好的均匀度；●采用基因工程技术改良发酵菌种，使内切酶活性大幅度提高，是普通木聚糖酶的2.5～3.5倍；●对不溶性木聚糖的降解能力显著提高，是普通木聚糖酶的3～6倍；●有良好的对高温高湿的耐受能力，在饲料制粒条件下，制粒后的酶活可以保持80％以上，保证了其在颗粒饲料中的使用效果；●有良好的对动物胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶和高浓度金属离子的耐受能力，保证了其在动物生产中的使用效果；●对饲料原料中木聚糖酶抑制因子有很好的耐受能力，保证了其对饲料中木聚糖的良好降解效果。
产品功能●有效降解植物饲料中的抗营养因子——木聚糖，消除其抗营养作用，降低食糜粘度，提高饲料养分的消化率和吸收利用率；●与纤维素酶一起作用，有效摧毁植物细胞壁结构，促进植物细胞内其它营养物质释放，提高原料中营养物质的利用率；●降解木聚糖产生的木寡糖，可以有效促进动物肠道有益菌的生长而抑制有害菌的繁殖，提高动物免疫力、成活率及生产性能；●提高饲料中消化能、代谢能的利用率，降低配方成本，促进钙、磷吸收，减少环境污染。
木聚糖酶
的来源
木聚糖酶在自然界分布广泛，可从动物、植物和微生物中获得。例如，海洋及陆地细菌、海洋藻类、真菌、 酵母菌、瘤胃和反刍动物细菌、蜗牛、甲壳动物、陆地植物组织和各种无脊椎动物中都有木聚糖酶存在。微生物 来源的木聚糖酶普遍存在于自然界中，且种类繁多，应用领域广泛，因此对微生物木聚糖酶的研究报道很多。日 前研究和应用得最多的是细菌和真菌来源的木聚糖酶，其中，细菌可以产生碱性和酸性木聚糖酶，而真菌只可产 生碱性木聚糖酶。真菌中以丝状真菌分泌的胞外酶最高。目前，木聚糖酶主要利用真菌和细菌等微生物进行发酵 生产 。
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木聚糖酶
存在于植物细胞壁中的异质多糖
01 产品特性
03 的组成
目录
02 产品活力 04 的来源
05 产品应用
07 贮存要求
目录
06 注意事项
木聚糖(xylan)是一种存在于植物细胞壁中的异质多糖，约占植物细胞干重的15%~35%，是植物半纤维素 (hemicellose)的主要成分。大多数木聚糖是一种结构复杂的、具有高度分枝的异质多糖，含有许多不同的取代 基。木聚糖的生物降解也因此需要一个复杂的酶系统，通过其中各种组分的相互协同作用来降解木聚糖。因此， 木聚糖酶是一组酶，而非一种酶。
每次开袋或开桶后，若未使用完，应扎紧袋口或拧紧桶盖，以免受潮或污染。对于酶粉尘敏感的人来说，吸 入酶粉尘可能会产生过敏反应。因此，建议使用固体酶制剂时，操作人员应穿工作服，带防尘面罩和手套，不要 让本品粉末溅入眼睛、口、鼻之中。
贮存要求
保质期 ：在规定的贮存条件下，固态酶为12个月，液态酶为6个月。建议密封储藏于干燥、低温的环境中 （≤20℃），最好在冷藏条件下（4-8℃）储藏。应置于干燥、通风、阴凉处，避免高温或阳光直射防曝晒、雨 淋，禁止与有毒有害物质混运、混存。
木聚糖酶是一种最主要的木聚糖降解酶类
木聚糖酶是一种最主要的木聚糖降解酶类。
它主要通过内切方式降解木聚糖中β-1,4木糖苷键，水解产物以木寡糖为主，并伴有少量的木糖和阿拉伯糖。
产品规格型号酶活剂型包装规格FE504A10000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504B20000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504C30000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504D50000 IU/g粉状20 kg/袋或桶FE504AL10000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE504BL20000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE504CL30000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶产品特点●采用新型国际专利菌种生产，产品性能优良，使用效果得以保证；●先进的全自动液体深层发酵技术，领先的后处理加工工艺，保障了产品的高纯度、高稳定性和良好的均匀度；●采用基因工程技术改良发酵菌种，使内切酶活性大幅度提高，是普通木聚糖酶的2.5～3.5倍；●对不溶性木聚糖的降解能力显著提高，是普通木聚糖酶的3～6倍；●有良好的对高温高湿的耐受能力，在饲料制粒条件下，制粒后的酶活可以保持80％以上，保证了其在颗粒饲料中的使用效果；●有良好的对动物胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶和高浓度金属离子的耐受能力，保证了其在动物生产中的使用效果；●对饲料原料中木聚糖酶抑制因子有很好的耐受能力，保证了其对饲料中木聚糖的良好降解效果。
产品功能●有效降解植物饲料中的抗营养因子——木聚糖，消除其抗营养作用，降低食糜粘度，提高饲料养分的消化率和吸收利用率；●与纤维素酶一起作用，有效摧毁植物细胞壁结构，促进植物细胞内其它营养物质释放，提高原料中营养物质的利用率；●降解木聚糖产生的木寡糖，可以有效促进动物肠道有益菌的生长而抑制有害菌的繁殖，提高动物免疫力、成活率及生产性能；●提高饲料中消化能、代谢能的利用率，降低配方成本，促进钙、磷吸收，减少环境污染。
木聚糖酶和CMC活力的测定方法
木聚糖酶活力的测定方法1. 方法：3，5—二硝基水杨酸比色法，简称DNS法。
2.原理：还原糖能将3，5—二硝基水杨酸分子中的硝基还原成橙黄色的3—胺基5—硝基水杨酸。
溶液橙黄色强度与还原糖量成正比。
3. 主要仪器和设备天平（感量1mg和0.1mg两种），离心机，恒温水浴锅，磁力搅拌器,分光光度计（722型，符合GB9721的有关规定）。
4. 试剂和溶液4.1 所用水除特别要求外,均为符合GB/6682—1992规定的三级水, 化学药品除特别要求外,均为分析纯。
4.2 DNS试剂称取3，5—二硝基水杨酸10g加入500 ml水中，分多次加入氢氧化钠16g，搅拌溶解(温度＜45℃)，再分多次加入酒石酸钾钠300g，搅拌至全溶，冷却后用水定容至1000ml。
室温下棕色瓶储存暗处放置，一周后使用(如有沉淀过滤后使用)。
4.3 0.1mol/L，pH5.0醋酸—醋酸钠缓冲液吸取冰醋酸1.8ml,加适量水，加醋酸钠5.78g，溶解, 定容至1000ml,调节PH 至5.00±0.01后使用。
室温下存放2个月有效。
4.4 0.1%即1mg/ml木糖标准溶液无水木糖于80℃烘至恒重，称取0.1000g于烧杯中,加适量水溶解,转入容量瓶中并定容至100ml。
4.5 1.0%木聚糖溶液称取木聚糖1.00g于烧杯中，用2ml 0.5mol/L氢氧化钠润湿成糊状，加40ml 缓冲液，于60～70℃水浴中加热溶解，冷凉后用0.5mol/L醋酸（约2ml）调pH5.0，转入容量瓶中,加缓冲液(4.3)定容至100ml。
如果冰箱中放置时间长了出现沉淀，使用前应在热水浴中热溶。
4.6 木糖标准曲线的绘制吸取1mg/ml木糖溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于试管中，补水至2ml，加DNS试剂3ml，混合后于沸水中煮10min,冷却后定容至15ml,于分光光度计540nm波长下测吸光度（A）。
以吸光度为纵坐标，木糖量为横坐标,绘制标准曲线,三次重复试验的均值用最小二乘法拟合一元线性方程y＝ax﹢b,求出吸光度与木糖量的关系。
木聚糖酶基因
木聚糖酶基因木聚糖酶基因是一种在植物细胞中发挥重要作用的基因。
它编码的酶能够催化木聚糖的降解，释放出葡萄糖，为植物提供能量和碳源。
同时，木聚糖酶基因也在生物燃料和纤维素降解等工业领域有着广泛的应用。
我们知道，植物的细胞壁主要由纤维素组成，而纤维素的主要成分则是木聚糖。
然而，植物细胞壁的纤维素对于植物本身而言是难以降解的。
这就是木聚糖酶基因发挥作用的重要原因之一。
通过产生木聚糖酶这一特殊的酶，植物能够将难以降解的木聚糖转化为能够被利用的葡萄糖。
木聚糖酶基因在植物生理发育过程中也起到关键的调控作用。
研究发现，木聚糖酶基因的表达水平会随着细胞壁生长和修复的需要而变化。
比如，在植物生长过程中，木聚糖酶基因的表达水平会随着细胞壁的合成而上调，以提供足够的酶来催化纤维素的合成。
而在细胞壁受损后的修复过程中，木聚糖酶基因的表达水平也会上调，以加速纤维素的降解和重新合成。
除了在植物中的作用外，木聚糖酶基因在生物燃料和纤维素降解等工业领域也有着重要的应用。
随着对可再生能源的需求增加，生物质能源的利用逐渐受到重视。
而木聚糖作为生物质的主要成分之一，其降解和利用成为了生物能源开发的瓶颈。
通过利用木聚糖酶基因的作用，科学家们可以加速木聚糖的降解过程，从而提高生物质转化率和生物燃料的产量。
此外，在纤维素降解中的应用也是木聚糖酶基因的重要领域之一。
纤维素是一种常见的天然聚合物，广泛存在于植物的细胞壁中。
然而，由于纤维素的结构复杂，其降解一直是一个具有挑战性的问题。
通过利用木聚糖酶基因的特殊催化活性，科学家们可以开发出高效的纤维素降解酶，从而在纺织、造纸、食品加工等领域实现纤维素的高效利用。
总结而言，木聚糖酶基因在植物生理发育、生物燃料和纤维素降解等领域都具有重要的作用。
通过深入研究木聚糖酶基因的功能机制，我们不仅能够更好地理解植物细胞壁的合成和修复过程，还能够为生物质能源的开发和可持续发展提供指导意义。
未来，随着对可再生能源和环境保护的需求不断增加，木聚糖酶基因的研究和应用将变得更加重要，为人类创造更加绿色可持续的生活环境。
饲料用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究
饲料用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究目前国内外关于木聚糖酶的生产条件及其生产菌株的特性报道较多。
为了掌握常用饲用酶制剂中木聚糖酶的酶学性质，我们对某商品复合酶制剂中所含的木聚糖酶进行了热稳定性、最适pH值、最适反应温度、底物针对性、不同金属离子对其酶活的影响、反应进程曲线及其酶反应的未氏常数Km值等的测定，以期对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有一定的指导意义。
1 材料与方法1．l 实验仪器精密pH计：±0.01pH；电子天平：d＝1mg；紫外分光光度计UV－1601；恒温水浴锅；蠕动泵；紫外检测器；分布收集器；ф2．6 cm×100 m色谱柱。
1．2 实验材料某商品酶制剂1．3 酶活测定酶活力测定：采用DNS法酶活单位定义：在50℃、PH值为5．0条件下，每分钟产生 1μmol还原糖所需酶量定义为1个酶活单位。
测定底物：1.0％桦木木聚糖（SigmaX-0502）；酶液制备：准确称取1.000g该酶制剂，用0.2mol／L的醋酸－醋酸钠缓冲液（pH值为5．0）定容至500mL，摇匀，静署提取，过滤后取滤液并稀释至适当倍数备用。
标准曲线：分别吸取1．0mg／mL的木糖标准液0、0.2、0．3、0．4、0．5、0.6、0．7、0．8和1．0mL，依次加入试管中，以蒸馏水补加到2．0 mL。
加DNS 试剂3mL，于沸水中沸腾7min（样品放人重新沸腾时算起），取出后冷却，加入蒸馏水10mL混匀，于550nm处进行比色测定，用空白管调零点，记录光密度值，以木糖mg数为纵坐标，光密值为横坐标绘制出标准曲线。
酶活测定：取25mL具塞试管，加入1．0mL木聚糖底物，于50℃保温5min，然后精确加入1．0mL酶液，准确反应30min后测定酶活，空白管先加1mL酶液和3mL DNS试剂，沸水浴3 min，再加lmL木聚糖底物摇匀后沸水浴显色7 min，其余同前。
1．4 实验试剂0．2mol／L醋酸－醋酸钠缓冲液（pH值为5．0）、DNS试剂、10mg／mL木聚糖溶液。
木聚糖酶(产自米曲霉、孤独腐质霉、长柄木霉、枯草芽孢杆菌、绳
表１ 饲料 级木 聚糖 酶质 量标 准
【 Ｃ Ａ Ｓ 号】 ９ ０ ２ ５— ５ ７— ４
【 Ｅ Ｉ Ｎ Ｅ Ｃ Ｓ 号】 ２ ３ ２— ８ ０ ０— ２
【 性 状】 不同来源 的木 聚糖 酶， 相对分 子 质 量范 围 ８～１ ４ ５ ｋ Ｕ， ｐ Ｉ 范 围为 ３～１ ０ ， 大 多 数 酶
平为 ２ ０ ０ ０ Ｕ ／ ｋ ｇ 。郝 瑞 荣 等 报 导 ， 在低 磷 饲粮 中 添加 木 聚糖 酶 ， 能促 进 断 奶 仔 猪对 钙 、 磷 的消化 利用 及 骨 骼 生 长 。 பைடு நூலகம் 骏 等 报 导 ， 添 加 木 聚糖 酶
【 质量标准】 参照中华人 民共和 国国家标准 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ２ ３ ８ ７ ４— ２ ０ ０ ９提 出 如下要 求 （ 见表 １ ） 。
中的滞 留时间延 长 ， 改 变 肠 道微 生 物 菌 群 （ 部 分
【 制
法】 木聚糖水解酶是一种复杂 的复合
酶系统， 广 泛分 布于 自然 界 的细 菌 和 真 菌 中 ， 已 报 道 的木 聚糖 酶 的来 源 主要 有 细 菌 、 真菌 、 放 线
菌 和酵 母 。 国内研究 木 聚糖 酶最 多 的是木 霉 、 青
纤 维菌 和原 虫 以及厌 氧微 生 物要 高 ， 这些 微生 物 包括 Ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍａ ｈ ａ ｒ ｚ ｉ ａ ｎ ｕ ｍ、 Ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｒ ｅ ｅ ｓ ｉ 、
Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ ａ ｓ ｃ ｕ ｓ ａ ｕ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ａ ｃ ｕ ｓ和 Ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｃ ｅ ｒ ｅ ｖ ｉ —
木聚糖
四、微生物木聚糖酶的生产
微生物木聚糖酶生产关键： 选择适合的木聚糖酶高产菌株、适合的诱导底 物及最佳的培养基组成和培养条件。 细菌和真菌：诱导型木聚糖酶( 细菌和真菌：诱导型木聚糖酶(少量为组成型 木聚糖酶） 真菌所产木聚藏酶的活性通常要高于细菌产的 木聚糖酶。
青霉菌Paecilomyces 青霉菌Paecilomyces thermophila J18能以 J18能以 天然的农业废弃物小麦秸秆为碳源固体发 酵，得到了18580U/g 酵，得到了18580U/g （干基）碳源的木聚 糖酶，是国际上为数不多的报道产木聚糖 酶水平。 菌株Burkholderia 菌株Burkholderia sp. DMAX的固体发酵 DMAX的固体发酵 条件优化后，木聚糖酶活力最高达5600U/g 条件优化后，木聚糖酶活力最高达5600U/g 细菌Bacillus pumilus以麦麸为固体培养基碳 细菌Bacillus pumilus以麦麸为固体培养基碳 源，在最适条件下，木聚糖酶活力为 21431U/g。 21431U/g。
4.木聚糖的多样性 4.木聚糖的多样性
由于木聚糖结构的复杂性及木聚糖酶来源的广泛性 , 故木聚糖酶的种类繁多。微生物来源的木聚糖酶的分子 量在 8～145 K D,它们只含一个亚基。 D,它们只含一个亚基。 一般来说 ： 分子量小于 30 K D的木聚糖酶为碱性木聚糖酶 ,它们 D的木聚糖酶为碱性木聚糖酶 通常含有 182～234个氨基酸残基; 182～234个氨基酸残基; 分子量大于 30 K D的木聚糖酶为酸性木聚糖酶 ,它们 D的木聚糖酶为酸性木聚糖酶 通常含有 269～809个氨基酸残基。 269～809个氨基酸残基。 细菌通常可以产生低分子量的碱性木聚糖酶和高分子 量的酸性木聚糖酶 ,而真菌则通常只产生低分子量的碱性 木聚糖酶。
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木聚糖酶作用机理及区分木聚糖内外切酶测定方法探讨
近年来，木聚糖酶以其特有降解阿拉伯木聚糖，消除阿拉伯木聚糖对动物的抗营养作用，已成为一种
在养殖业中广泛应用的酶制剂。特别是基因工程菌株性木聚糖酶以其稳定性好，降解效率高等特点引起了
人们的广泛关注。然而木聚糖酶是降解半纤维素木聚糖的一组酶的总称，要想很好的应用木聚糖酶制剂产
品，必须对木聚糖酶的作用机理有较深的了解。同时，在实际生产应用中木聚糖内切酶和外切酶的协同作
用对木聚糖降解至关重要，但对于如何应用检测方法去区分木聚糖内外切酶的性质却很少关注。由此，本
文首先从分子角度对木聚糖酶的作用机理进行了论述，然后对区分木聚糖酶系中内切酶和外切酶的检测方
法进行了探讨，意欲对木聚糖酶制剂产品在生产上更好的应用提供帮助。
1. 木聚糖酶作用机理
木聚糖是由β－1,4或β－1,3糖苷键连接的一种杂合多聚分子。主链由多个吡喃木糖基通过木糖苷
键相连，侧链上连着多种不同大小的短的取代基,主要有乙酰基、4-甲基-D-葡糖醛酸残基、L-阿拉伯糖残
基等。这些侧链与植物细胞中其它几种结构性多糖(如木质素、纤维素、果胶、葡聚糖等)以共价或非共价
键连接,组成植物细胞重要的结构——细胞壁。木聚糖主要存在于植物细胞的次生壁中,处于木质素及其它
多聚糖之间,起着连接作用。也正由于这些侧链的不同,使得木聚糖的结构变化范围很大,从仅由β-1,4-糖
苷键连接的多聚木糖线性分子到高度分枝的异质多糖。因此，要使木聚糖完全降解则需要多种水解酶的协
同作用，这其中包括主链水解酶β－D－1,4内切木聚糖酶、β－D－1,4外切木糖苷酶和侧链水解酶a－L
－阿拉伯呋喃糖苷酶、a－葡萄糖醛酸酶和乙酰木聚糖酯酶等。
木聚糖降解时，起主要作用的酶是β－D－1,4内切木聚糖酶和β－D－1,4外切木糖苷酶。β－D－1,
4内切木聚糖酶以内切方式作用于木聚糖主链内部的β- 1，4木糖苷键,其主要水解产物为低聚木糖、木
寡糖、木二糖等；β－D－1,4外切木糖苷酶通过水解低聚木糖、木寡糖等的非还原性末端来催化释放木糖
残基。另外, 参与彻底降解木聚糖的还有a－L－阿拉伯呋喃糖苷酶、α-葡萄糖醛酸苷酶、乙酰木聚糖酯
酶及能降解木聚糖上阿拉伯糖侧链残基与酚酸(如阿魏酸或香豆酸)形成的酯键酚酸酯酶等侧链水解酶，它
们作用于木糖与侧链取代基之间的糖苷键，协同主链水解酶的作用最终将木聚糖转化为它的组成单糖。
2. 区分木聚糖内外切酶测定方法
广义上的木聚糖酶是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称，因此常规木聚糖酶的检测方
法仅是以酶降解木聚糖产生还原糖的量为标准来确定酶活单位，还原糖一般都以木糖等量。而实际上还原
糖木糖是各种木聚糖水解酶协同作用的最终产物，这其中主要是内切木聚糖酶、外切木糖苷酶，但从常规
检测方法上很难判断木聚糖酶的性质是内切还是外切。所以要想应用检测方法去区别木聚糖酶的性质是内
切还是外切必须从内切和外切性质本身入手寻找方法，根据木聚糖酶酶解的特性本文总结出以下几种方
法。
2.1 间接测定法
2.1.1 酶解产物薄层层析对照法（TLC法）
标准品：木糖、木二糖、木三糖、木四糖；薄层板：硅胶G薄板；展层剂：正丁醇:吡啶:蒸馏水= 6 :
4 : 3；显色剂：邻苯二甲酸苯胺溶液；酶解产物的制备：在一定温度和pH条件下，应用木聚糖酶将木
聚糖降解成寡糖或单糖。
实验方法分析：木聚糖类半纤维素酶解时一般由木聚糖酶从主链内部先作用于长链木聚糖的糖苷键
上，将木聚糖随机切成不同链长的低聚木糖，再由β-木糖苷酶作用于低聚木糖的末端水解木二糖及木二
糖以上的低聚木糖，将这些短链低聚木糖降解成木糖。而在薄层层析板上木糖的展距高于木二糖及二糖以
上的低聚糖。由此，若将酶解产物在薄层板上展开时，如果酶制剂是内切酶则展距最多只能展到和木二糖
标准品展距一样的高度，如果是外切酶则展距能达到木糖标准品展距的高度。
2.1.2 酶解产物高效液相色谱对照法（HPLC法）
标准品：木糖、木二糖、木三糖、木四糖、木五糖；酶解产物的制备：在一定温度和pH条件下，应
用木聚糖酶将木聚糖降解成寡糖或单糖。
实验方法分析：由“2.1.1”分析可知，若未知酶是内切木聚糖酶则酶解产物组分全部是低聚木糖,没
有木糖，若未知酶是外切木糖苷酶则组分酶解产物大部分是木糖（如图2）。
2.2 直接测定法
2.2.1 β－D－1,4内切木聚糖酶活力测定方法
测定原理：通过将染色的小麦阿拉伯木聚糖与内切-木聚糖酶一起孵化，底物被降解为低分子量的染
色片段，向反应液中加入甲基化酒精，低分子量的染色片段仍然保留在溶液中，通过离心可将高分子量底
物除去，将上清液比色。根据标准曲线计算内切-木聚糖酶活力。
测定步骤：取0.5ml底物溶液于玻璃试管中，在40℃平衡5min；取0.5ml预平衡的酶液加入到底物
溶液中，在用旋涡振荡器混合，在40℃水浴中孵化10min（从加入酶液开始精确计时）；加入2.5ml甲基
化酒精(95%v/v)在旋涡振荡器上搅拌10S，以终止反应并沉淀未降解的高分子量底物；将反应液冷却到室
温，再混合，然后在3000rpm离心10min；在590nm处测定上清液吸光度，根据标准曲线（以黑曲霉木聚
糖酶和Azo-小麦阿拉伯木聚糖(Lot50201)制作）计算酶活性。
反应空白：在0.5ml底物溶液中加入2.5ml甲基化酒精(95%v/v)，然后加入0.5ml预平衡的酶液。一
般空白在590nm处吸光度不超过0.05。
酶活计算：内切-木聚糖酶活力首先参照标准曲线将吸光度转化为mUnits/0.5ml，然后按下列公式计
算：
U/g=mUnits×2×50×（1/1000）×Dilution
式中：2 —— 从0.5 ml转化为1.0 ml；50 —— 酶提取时缓冲液体积；1/1000 —— 从mUnits转
化为Units；Dilution —— 稀释倍数。
酶活定义：在40℃，pH值4.7条件下，从小麦阿拉伯木聚糖中释放相当于1μmol木糖还原糖需要的
酶量。
2.2.2 β－D－1, 4外切木糖苷酶酶活力测定
在25m1刻度试管中加入O.1ml适当稀释的酶液和0.5ml用0.05mo1/L柠檬酸缓冲液配制的2.5mmo1/
1对硝基苯酚-β-木糖苷(p NPX)(Sigma公司制造)溶液。放人恒温水浴器中在50℃下保温30min后立即加
人4ml0.25mo1/l的Na2C03溶液终止反应，定容到25ml，充分摇匀后于410nm波长下测定释放的对硝基苯
酚的吸光度值A410(每次应做有底物无酶有酶无底物空白实验)。根据对硝基苯酚的标准曲线(用对硝基苯
酚的绝对量对A410作图)，找出反应所产生的对硝基苯酚量（扣除空白值)。
酶活定义：一个木糖苷酶活力单位为每分钟生成1μmol对硝基苯酚所需的酶量。
3. 小结
综上所述，只有在β－D－1,4内切木聚糖酶和β－D－1,4外切木糖苷酶以及一些木聚糖侧链水解酶
共同作用下，木聚糖才能得到充分降解。而对于区别木聚糖内外切酶的测定方法可分为间接测定和直接测
定，其中间接测定方法在方法上相对简单易行，直接测定方法虽然有点繁琐但测定结果相对更准确，应用
时可根据实际情况采取相应的方法。
2007-08-01