《发酵工程实验》教案(参考)

(试 用)

山东农业大学生命科学学院

实

验一 淀粉水解糖的制备

3 实验二 面包酵母液体深层通风发酵实验 6

实

验三 酱油酿造技术

15 实验四 米曲霉固态发酵生产中性蛋白酶 21

实

验五 啤酒生产工艺实验 31 生 物 工 艺 学 实 验 目 录 实验 讲义

实验六豆腐乳酿造技术37

实验七啤酒酵母最适生长条件的研究41

实验八离心喷雾干燥工艺45

实验九板框过滤和反渗透49

实验十微生物细胞破壁及破碎率的测定53

实验十一双水相萃取技术分离α-淀粉酶55

实验十二离子交换树脂的预处理及交换容量的测定59

实验十三淀粉酶的分离纯化（上）——浸提、盐析、透析、浓缩78

实验十四淀粉酶的分离纯化（下）——凝胶柱层析81

实验一淀粉水解糖的制备

一、实验目的

1、掌握用酶法水解淀粉制备水解糖的原理及方法。

2、掌握还原糖的化学测定和比色测定方法。

二、实验原理、过程和方法

1、主要过程：通过双酶法制糖，从玉米淀粉原料出发，经配料，糊化，液化和糖化，过滤，制备成淀粉水解糖。本实验所得到的糖液，可用于下一批酵母发酵实验。

2、配料：称重，按照20升有效体积，配制30%淀粉乳。取样烘干至恒重，测定淀粉中的水分含量。

3、糊化和液化

糊化原理：将淀粉乳加热，淀粉颗粒膨胀，由于颗粒的膨胀，晶体结构消失，变成糊状液体，淀粉不再沉淀，这种现象称为糊化。不同的淀粉的糊化温度不同。如玉米淀粉开始糊化的温度为62.0℃,中点温度为67℃，终结温度为72℃。糊化分为：预糊化（吸水），糊化（体积膨胀）。糊化过程中，要防止淀粉的老化（分子间氢键已断裂的糊化淀粉又重新排列形成新的氢键的过程）。

液化原理：液化是利用液化酶使糊化淀粉水解到一定的糊精和低聚糖程度，粘度大大降低，流动性增加。

液化方法分：酸法、酶酸法、酶法等。以生产工艺不同又分为间歇法，

半连续和连续式；液化设备有：管式、罐式、喷射式。加酶方法有：一次加酶、二次加酶、三次加酶。根据酶制剂的耐温性分为中温酶法、高温酶法、或中温酶和高温酶混合法。本实验采用：高温酶法，间歇式，罐式，二次加酶法。

间歇液化法：配制30%的淀粉乳，PH 值6.5，加入氯化钙（对固形物0.2%），加入液化酶(加酶量根据酶制剂厂商的要求)，在剧烈搅拌下，先加热至72℃，保温15min ，再加热至90℃，并维持30min ，以达到所需的液化程度（DE 值：15—18%）。碘反应呈棕红色：最好在液化后，再升温至120℃，保持5—8 min ，以凝聚蛋白质，改进过滤。

4、糖化

糖化理论：

糖化的理论收率：因为在糖化过程中，水参与反应，故糖化的理论收率为111.1%。

（C6H10O5）n+nH2O=nC6H12O6

淀粉 水

162 18 180

糖化实际收率：

实际收率=](C)(W)[%

100](C)%(V )[淀粉含量投入淀粉量糖液葡萄糖浓度糖液体积⨯⨯⨯

淀粉转化率：指100份淀粉中有多少份淀粉被转化为葡萄糖。

淀粉转化率的计算：

DE值：用DE值表示淀粉水解的程度或糖化程度。糖化液中还原性糖以葡萄糖计，占干物质的百分比称为DE值。

DE值计算：

还原糖用裴林氏法等法测定，浓度表示：葡萄糖g/100ml糖液；

干物质用阿贝折光仪测定，浓度表示：干物质g/100ml糖液。

影响DE值的因素：

糖化时间：最初糖化时，糖化速度快，DE值显著上升；但24h后，当DE值达到90%以上时，糖化速度显著放慢。

液化DE值与糖化DE值的关系：

液化程度应控制适当，太低或太高均不利。原因是液化程度低，则粘度大，难操作；同时，由于液化程度低，底物分子少，水解机会少，影响糖化速度；液化程度低，易发生老化；但液化超过一定程度，则不利于糖化酶与酶与糊精生成络合结构，影响催化效率，造成糖化液的最终DE值低。故应在碘试本色的前提下，液化DE值越低，则糖化液的最高DE值越高。一般液化DE值应控制在12—18%。

酶制剂用量与糖液DE值的关系：

糖化时间与糖化酶用量关系表：

为加快糖化速度，可以提高酶用量，缩短糖化时间。但酶用量太高，反而使复合反应严重，最终导致葡萄糖值降低，在实际生产中，应充分利用糖化罐的容量，尽量延长糖化时间，减少糖化酶用量。

糖化酶参考用量：液化DE值17%，淀粉乳33%，60℃，pH4.5，酶制剂（NoVo-150）用量：0.75-1ml/kg绝干淀粉，或150 u/g绝干淀粉。糖化时间36 h。

糖化工艺流程：

液化结束后，迅速将料液用酸将pH调至4.2-4.5，同时迅速降温至60℃，加入糖化酶，60℃保温数小时后，当用无水酒精检验无糊精存在时，将料液pH调至4.8—5.0，同时，将料液加热至80℃，保温20min，然后将料液温度降至，开始过滤。

2.5过滤

在发酵罐内将料液冷却至60—70℃；洗净板框过滤机，装好滤布；接好板框滤机的管道；泵料过滤；热水洗涤（60—70℃）；空气吹干；过滤结束后，洗净过滤机及有关设备。量取糖液体积；取样分析还原糖浓度。

3、组织形式：每班分为四组，每7-8个学生。四个罐分别由四组操

作，加酶量可互不相同，或分为两种，每两组选定一种酶的浓度，以便做出不同加酶量条件下还原糖动力曲线。

4、实验仪器、设备和材料

4.1设备

25升罐（可用本院25升发酵罐代替）；装料按20升计，采用小型板框过滤机压滤，烘箱；水桶，量筒。

4.2分析仪器

分光光度计，水浴锅，糖度计，滴定管，电炉，白瓷板，三角瓶，阿贝折光仪，比重瓶，pH计。

4.3实验主要原料：玉米淀粉，高温液化酶和糖化酶。

5、实验分析项目和方法

分析试剂：

测定液化反应终点（碘反应）；

总糖（裴林法）；还原糖（水杨酸比色法）的测定方法；原料淀粉含量的测定，原料含水量的测定（烘干称重法）；糖液透光率（分光光度计法）；糖化终点测定（无水乙醇检验）；糊化液和糖化液DE值；

用分光分度计对料液透光度的测定方法。

6、数据处理

在详细记录实验数据的基础上完成实验报告。

计算转化率：