薄层层析中展开剂的选择new
浅析TLC中新型展开剂的选择和替代方法 (1)

(本文校对:张文娟收稿日期:2010-12.15)
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例如将原展开剂为①氯仿:正己烷:冰乙酸(5:3:2) ②苯:丙酮(3:2)进行改进。首先得出氯仿是第1II类冰 醋酸和丙酮是第1类物质,、可从其相近的组别中选择物
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第9卷第0l期・总第105期 2011年01月・上半月刊
避免院内交叉感染。 综上所述,我们认为,由于临床上对第3、4代头孢 菌素的广泛应用,导致细菌对新一代卢一内酰胺类抗菌 药物的耐药,并出现多重耐药,和泛耐药,造成临床抗 感染治疗困难,因此,限制和合理使用第3、4代头孢菌 素,是控制医院感染和遏制耐药菌株蔓延和传播的重要 措施。及时对产卢一ESBLs菌株进行检测及耐药性分析,
划项目资助[No:2010—403】
作者单位:湖南省长沙医学院(410219)
串通讯作者
万方数据
第9卷第们期・总第105期 2011年01月・上半月刊
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展开剂中底剂主要是溶解物质和基本分离,则底剂与被 分离物质的介电常数应该接近。根据被分离物质的化学 结构,在表一中找出该结构的强度因子毛。值,然后在表 二中找到相近的毛。值的溶剂作为底剂。选择时注意以下 几点:a羟基和卤素取代芳香族化合物毛。值的改变不超 过原来的±0.05。b典型的脂肪族化合物R=C6H13,化 合物中R--2~20碳的化合物毛。值不超过典型化合物毛。 值的±0.05。C物质母核相同,分子中极性基团越多,则 分子极性较大【41。②调节剂:选择与被分离组分具有相 同或相似的官能团,被分离物质若有多种官能团,则加 入的调节剂与极性最强的官能团相同或相似。③拖尾剂: 根据已选出来的底剂和调节剂进行实验,若实验效果不 佳,产生拖尾效应,可加入少量弱酸或若碱进行调节。 展开剂组分的比例:根据选择的物质作为底剂和调 节剂,再根据不同的配比用点滴法得到最佳比例。
薄层色谱展开剂选择仅供

薄层色谱展开剂选择选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性,以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性。
关于溶剂混溶性,一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差大的不混溶,比如正己烷与甲醇。
多元展开剂,主体的两种溶剂不能混溶,就需要通过第三种溶剂来调和。
比如:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。
一般正相色谱,固定相为极性,被分析物质的极性越大,需要极性更大的展开剂。
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得,很难获得它的极性指数。
物质分子化学结构中,通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分,随着极性基团部分的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了。
,依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为:正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。
(由于薄层板、比移值不同的原因,展开剂极性比较是相对的,并非绝对的后者大于前者)。
现在最重要的问题是,不同化合物,怎么定它的极性,又用什么标准来定它对应的展开剂呢?以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。
首先是极性较小的挥发性物质。
比如:冰片:石油醚(30~60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚:苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮:苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚:环己烷-醋酸乙酯(3:1),这类化合物,以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂,通常起溶解和分离化合物的作用,而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂。
为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响,适当加入添加剂,如有机酸或者有机碱。
极性较小的不挥发性物质。
比如:β -谷甾醇:环己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者环己烷-丙酮(5:2) 、熊果酸:甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸:氯仿-甲醇(40:1)、猪去氧胆酸:氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素:苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、丹参酮ⅡA:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心莲内酯:氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)。
薄层色谱展开剂选择(仅供参考)

薄层色谱展开剂选择选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性,以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性。
关于溶剂混溶性,一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差大的不混溶,比如正己烷与甲醇。
多元展开剂,主体的两种溶剂不能混溶,就需要通过第三种溶剂来调和。
比如:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。
一般正相色谱,固定相为极性,被分析物质的极性越大,需要极性更大的展开剂。
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得,很难获得它的极性指数。
物质分子化学结构中,通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分,随着极性基团部分的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了。
,依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为:正己烷—乙醚—冰醋酸 (5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。
(由于薄层板、比移值不同的原因,展开剂极性比较是相对的,并非绝对的后者大于前者)。
现在最重要的问题是,不同化合物,怎么定它的极性,又用什么标准来定它对应的展开剂呢?以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。
首先是极性较小的挥发性物质。
比如:冰片:石油醚 (30~60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚:苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮:苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚:环己烷-醋酸乙酯(3:1),这类化合物,以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂,通常起溶解和分离化合物的作用,而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂。
为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响,适当加入添加剂,如有机酸或者有机碱。
极性较小的不挥发性物质。
比如:β-谷甾醇:环己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者环己烷-丙酮(5:2) 、熊果酸:甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸:氯仿-甲醇(40:1)、猪去氧胆酸:氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素:苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇 (8:1)、丹参酮ⅡA:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心莲内酯:氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)。
展开剂的选择

展开剂的选择最近刚进实验室,用TLC对反应进行检测,但是关于展开剂的资料不多,我们实验室大多就是两个体系:石油醚/乙酸乙酯,氯仿/甲醇,其他的就很少了,所以我下决心把这个实验室比较常用的技术搞清楚。
一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇。
使用单一溶剂,往往不能达到很好的分离效果。
使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂,高极性的溶剂还有增加区分度的作用,常用的溶剂组合有:Petroleum ether/Ethyl acetate,petroleume ther/Acetone,Petroleum ether/Ether,Petroleum ether/CH2Cl2, ethyl acetate/MeOH,CHCl3/ethyl acetate.展开剂的比例要靠尝试。
一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间,定量测定在0.3~0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中,黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”),最好是换溶剂。
对于在硅胶这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
(选择所添加的碱性物质,还必须考虑容易从产品中除去,氨水无疑是较好的选择。
)分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系:不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度,酸性强弱不同,从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好,但在另一个厂家的就不行。
薄层色谱展开剂选择

谈薄层色谱展开剂选择\展开剂薄层色谱, 选择进行薄层分析基本可以根据母核、基团根据本人的几年薄层层析经验参考药典等国家药品标准和有关文献将2000版药典一部里部分有代表性的对照品的薄层层实例按展开剂极性排序,并对其规律做一些分析以下的分析和介绍是总体描述性的目的是快速、简便地选择展开剂如果想了解展开剂选择的各种理论请参考其他专著选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性以及被分析物的结构这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性列出溶剂极性参数表方便以下比较展开剂环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类30~60℃)、石油醚(Ⅱ类60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2关于溶剂混溶性一般根据相似相溶原则,需要注意极性相差大的不混溶比如正己烷与甲醇多元展开剂主体的两种溶剂不能混溶就需要通过第三种溶剂来调和比如:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的一般正相色谱固定相为极性,被分析物质的极性越大,需要极性更大的展开剂了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得很难获得它的极性指数物质分子化学结构中通常由较极性部分和非极性部分两部分例如下面以苯丙烷为极性小部分随着极性基团部分的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸相应展开剂分别为:正己烷-乙醚-冰醋酸(5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1:0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6:1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)(由于薄层板、比移值不同的原因,展开剂极性比较是相对的并非绝对的后者大于前者)现在最重要的问题是不同化合物,怎么定它的极性又用什么标准来定它对应的展开剂呢?以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂首先是极性较小的挥发性物质比如:冰片:石油醚(30~60℃)-醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚:苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮:苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚:环己烷-醋酸乙酯(3:1),这类化合物以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂通常起溶解和分离化合物的作用而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响适当加入添加剂如有机酸或者有机碱极性较小的不挥发性物质比如:β-谷甾醇:环己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者环己烷-丙酮(5:2)、熊果酸:甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸:氯仿-甲醇(40:1)、猪去氧胆酸:氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素:苯-醋酸乙酯-甲醇(15:2:0.2)或者苯-乙醇(8:1)、丹参酮ⅡA:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯:氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些,因为这类物质极性小的母核大而极性大的基团通常可以形成氢键比如羧酸、羟基以上物质,母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加(尤其是出现苯环)极性基团的增加都使极性增加展开剂极性也增大这个范围内的物质很多一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷-〉甲苯-〉二甲苯-〉苯-〉氯仿的顺序按照极性要求选择这里注意异丙醇、正丁醇极性指数也比较小在这范围的化合物很少用因为粘性大、展开慢,造成斑点扩散;另外羟基的氢键作用力也有不利调节Rf值的溶剂从醋酸乙酯-〉甲醇-〉丙酮-〉乙醇挥发性物质也有很多带羰基、羟基的但从它的挥发性就可以明白分子间作用力不强另外,母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小估计更容易脱离硅胶吸附,更快进入溶剂中而不需要通过提高展开剂的极性皂苷类人参皂苷:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液或正丁醇-醋酸乙酯-水(4:1:5)的上层溶液或氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液、芍药苷:氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)、黄芩苷:醋酸乙酯-丁酮-醋酸-水(10:7:5:3)、橙皮苷:苯-醋酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)的上层溶液、葛根素:氯仿-甲醇-水(14:5:0.5)、芦丁:醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)这类物质由于存在糖的多羟基结构,苷元的结构影响变小展开剂中使用极性大的有机溶剂(氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇)和水乙酸和甲酸的使用,一方面增大展开剂极性另外也可以抑制硅胶羟基的作用减少拖尾由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制,水和酸的使用是有限度的极性大的小分子有机酸没食子酸:氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸这类物质多数是苯乙烯母核的,这个结构的极性本身比较大另外有酚羟基和羧酸基团,个别有多羟基配基皂苷的展开剂差不多极性大注意甲酸通常指的是浓度85%左右的,含有水含氮有机物盐酸小檗碱:苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(12:6:3:3:0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱:氯仿-甲醇-浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇-冰醋酸-水(8:2:1)、甘草酸铵:醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)由于NH2硅醇基的作用很强,在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾对于极性化合物,使用正丁醇对斑点扩散影响较小,因为化合物和硅胶的作用强选择相似的化合物对号入座当然具体的条件优化则需要根据实际情况了遇到较困难的分离,需要使用到设计优化方法的,已经不属于本文讨论范围了。
薄层层析展开剂的选择

展开剂的选择2、(摘自于浙江理工大学实验教学网)一种简单的办法是根据你产物的溶解性选择一种极性最强的溶剂学(如醇类,乙氰等),再根据你实际展开的情况慢慢加入极性弱的溶剂(如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等)调节体系的极性。
(石油醚Petroleum ether,乙酸乙酯EtAc,Acoh醋酸)PE(60-90)EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH=1;5;1EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2;1:1直在用的是乙酸乙酯:环已烷,不断调节比例,有拖尾时可能要加酸或碱,我一般乙酸和三乙胺。
3、氨基酸专用的展开剂,常用丁醇和水,再加酸碱。
选择展开剂一般要用混合溶剂:一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂,视样品的极性,再选用相应的体系。
极性小的用乙酸乙酯:石油醚,系统极性较大的用甲醇:氯仿,系统极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸(应该交好)甲醇:氯仿对于胺类比较好。
4、环已烷/丙酮;甲醇/吡啶/水;等.EtOAc/Hexanes Ch2Cl2(EtOAc)/MeOH, 0-1% TEA or NH3实验时调整至Rf=0.3--------0.5我们做的氨基酸,丁醇:醋酸:水二氯甲烷:甲醇,用乙酸乙酯/正己烷,必要时加醋酸或三乙胺。
5、正己烷+乙酸乙酯;氯仿+甲醇(常为10:1);石油醚+丙酮。
拖尾的话常滴加两三滴三乙胺了事。
过柱最好不用三乙胺,可以添加1%的二乙胺,这样有利于馏分收集后的浓缩和送谱。
如果用三乙胺,在油泵上抽数个小时,送nmr仍可见三乙胺的残留。
同理,可能的情况下最好用甲酸代替乙酸。
我们这里都是用石油醚和乙酸乙酯,然后不断的调比例,效果不错。
我们通常用石油醚,二氯甲烷,乙酸乙酯。
不断的点板看,但夏天蒸出来后极性有些小。
拖尾不要紧,改溶剂过柱子就可以。
首先,选一种易溶你产品的一种不溶的;接着,按照溶:不溶=1:2的比例配比,看一下其展开的情况; 再次,太高就减少溶的比例,太低就减少不溶的比例!这样正常情况下时可行的!祝大家好运!6、我一般用氯仿打底,根据化合物的极性、第二溶剂的极性、RF值等来考察配比及溶剂种类.当然是最便宜,最安全,最环保的了。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择2007-04-05 02:03(一)有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事,展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂,往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂,高极性的溶剂还有增加区分度的作用,展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间,定量测定在0.3~0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中,黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说,弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性,以达到好的分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于蒽醌、香豆素,以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂,由正丁醇和水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效分离,曾经尝试了很多种的溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH(5.5:3.5:0.1)混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”),最好是换溶剂。
薄层色谱展开剂选择(仅供参考)
之宇文皓月创作薄层色谱展开剂选择选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性,以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性。
关于溶剂混溶性,一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差大的不混溶,比方正己烷与甲醇。
多元展开剂,主体的两种溶剂不克不及混溶,就需要通过第三种溶剂来调和。
比方:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。
一般正相色谱,固定相为极性,被分析物质的极性越大,需要极性更大的展开剂。
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得,很难获得它的极性指数。
物质分子化学结构中,通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分,随着极性基团部分的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了。
,依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为:正己烷—乙醚—冰醋酸 (5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。
(由于薄层板、比移值分歧的原因,展开剂极性比较是相对的,并不是绝对的后者大于前者)。
现在最重要的问题是,分歧化合物,怎么定它的极性,又用什么尺度来定它对应的展开剂呢?以下分开讨论分歧化合物极性情况及其对应的展开剂。
首先是极性较小的挥发性物质。
比方:龙脑:石油醚(30~60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚:苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮:苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚:环己烷-醋酸乙酯(3:1),这类化合物,以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂,通常起溶解和分离化合物的作用,而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂。
为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响,适当加入添加剂,如有机酸或者有机碱。
极性较小的不挥发性物质。
比方:β -谷甾醇:环己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者环己烷-丙酮(5:2) 、熊果酸:甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸:氯仿-甲醇(40:1)、猪去氧胆酸:氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素:苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇 (8:1)、丹参酮ⅡA:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心莲内酯:氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)。
薄层层析展开剂的选择
做有机合成时走板子是常有的事,展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂,往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂,高极性的溶剂还有增加区分度的作用,展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间,定量测定在0.3~0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中,黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说,弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性,以达到好的分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于蒽醌、香豆素,以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂,由正丁醇和水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效分离,曾经尝试了很多种的溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH(5.5:3.5:0.1)混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”),最好是换溶剂。
对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
展开剂选择
根据本人的几年薄层层析经验,参考药典等国家药品标准和有关文献,将2000版药典一部里部分有代表性的对照品的薄层层实例按展开剂极性排序,并对其规律做一些分析。
以下的分析和介绍是总体描述性的,目的是快速、简便地选择展开剂。
如果想了解展开剂选择的各种理论,请参考其他专著。
选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性,以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性。
列出溶剂极性参数表,方便以下比较展开剂。
环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类,30~60℃)、石油醚(Ⅱ类,60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2[1] 、关于溶剂混溶性,一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差大的不混溶,比如正己烷与甲醇。
多元展开剂,主体的两种溶剂不能混溶,就需要通过第三种溶剂来调和。
比如:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。
一般正相色谱,固定相为极性,被分析物质的极性越大,需要极性更大的展开剂。
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得,很难获得它的极性指数。
物质分子化学结构中,通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分,随着极性基团部分的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了,依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为:正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7: 2.5:2.5)。
(由于薄层板、比移值不同的原因,展开剂极性比较是相对的,并非绝对的后者大于前者)。
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薄层色谱( Thin-layer Chromatography,TLC)法
原理
吸附薄层色谱法是以吸附剂为固定相的薄层 色谱法,其作用原理是根据两组分在吸附剂 和展开剂中的吸附系数不同,在薄层板上进 行无数次的吸附、解吸附、再吸附、再解吸 附,吸附系数大的在板上移动速度慢,吸附 系数小的在板上移动速度快,在薄层板上产 生差速迁移而得到分离。
(2)根据样品的极性来选择展开剂 ①采用“相似相溶”原则来选择展开剂,极 性强的组分需用极性强的展开剂,极性弱组 分需用极性弱的展开剂。 ②若所选展开剂混合物的点都移到溶剂的前 沿,则说明溶剂的极性过强,如果所选的展 开剂几乎不能使混合物中的组分移动,则说 明溶剂极性过弱。 ③改变多元展开剂的组成和比例,使待测组 分的Rf 值在0.2~0.8 之间,定量测定应在 0.3~0.5 之间,能使各组分之间有效地分离
2 .点样应注意的问题 (1)点样量:一般为0. 5 ~ 10 μl,样品的 浓度通常为0. 5 ~ 2 mg,太浓时展开剂从原 点外围绕行,使斑点脱尾或重叠。点样量太 小,不能检出清晰的斑点影响判断。点样量 太多,展开剂不能全部负载,容易产生脱尾 现象。 (2)样品的溶剂:原则上应选择对被测成分 可以溶解但溶解度不是很大的溶剂。 (3)点样手法: 接触式点样直径通常控制在3 mm 以内,采用边点样边用吹风机吹干溶剂 的方式。多次点样圆心要重合。
4. 显色
展开后的薄层,可直接检视或显色后检视。 显色方式有喷雾显色、浸渍显色和蒸气显色。 由于都存在些缺点,而且操作也不简便。 酮等中等极性溶剂可使不相混溶 的溶剂混溶,降低展开剂的黏度,加速展开。 (6)a. 底剂为展开剂比例较大的溶剂其极性 应相对较弱,具有溶解物质和基本分离作用。 b. 展开剂中比例较小的溶剂极性应大, 对被分离的组分有较强的洗脱能力,帮助化 合物在薄层上移动,可增大Rf 值,可称之为 极性调节剂。
(3)展开剂的配制应严格控制其比例准确度, 如遇到比例很小的溶剂时,应尽量满足其精 确度要求。展开剂配好后如果浑浊不清,待 其静置分层取其上层( 或下层) 液进行展开。 (4)展开剂中加入少量酸或碱等拖尾抑制剂, 一般的酸有乙酸、乙二酸、磷酸、甲酸等, 碱包括三乙胺、二乙胺、吡啶、氨试液等, 这类溶剂可抑制某些酸碱性物质或其盐类解 离而产生斑点拖尾。
3. 展开
(1)展开剂的选择条件
①合适的纯度。至少要用AR 试剂,展开剂如有杂质, 则会直接影响分离效果。 ②适当的稳定性。一般不用三氯甲烷,因其中的乙 醇量不够则易生成光气。 ③低黏度。能使其迅速展开。 ④沸点和挥发性集中。展开后能快速地在薄层上挥 发样品,不影响显色和定量。 ⑤要尽可能的低毒性。 ⑥不与待测组分和吸附剂发生化学反应。
TLC 操作方法
TLC 操作方法包括薄层板的选用、点样、展开、 显色、检视与记录五个步骤。 1. 选用——常采用硅胶G 型板 硅胶表面的pH 值约为5,比较适合于酸性和 中性物质的分离,如有机酸、酚类、醛类等。 碱性物质能与硅胶作用,展开时易被吸附于 原点不动或出现斑点脱尾现象。在自制薄层 板时可用稀碱溶液制备薄层使其变为碱性, 或用碱性展开剂展开。
调节剂的选择 a. 加入的调节剂与被分离物质应有相同或相似的官 能团; b. 被分离物质具有两种或者两种以上的官能团时, 加入一种调节剂,调节剂的官能团与被分离物质中 一种官能团相同或相似,当加入第二种调节剂时, 调节剂官能团与被分离组分的各种官能团相同或相 似均可; c. 被分离物质具有多种官能团,如天然药物,一般 情况下选择极性最强的官能团,即加入调节剂的官 能团与物质极性最强的官能团相同或相似; d. 被分离物质具有强极性的官能团时,任选一种官 能团即可。